高中生物多聚酶链式反应课件

30多次
三、 PCR反应的实验操作
（1）按配方将所需试剂摆放在实验桌上（准备）
（2）用微量移液器按配方在微量离心管中依次 加入各组分（移液）
（3）盖严离心管口的盖子，用手指轻轻弹击管 壁（混合）
（4）将微量离心管放在离心机上（离心）
（5）将离心管放入PCR仪上，设置好PCR仪的 循环程序（反应）
四、结果分析与评价
PCR的反应过程总结
每个循环包括：变性 ——复性——延伸
从第二轮循环开始，上一次循环的产物 也可以作为模板参与反应，并且由引物 Ⅰ延伸而成的DNA单链会与引物Ⅱ结合， 进行DNA的延伸，这样，DNA聚合酶只能 特异性地复制处于两个引物之间的DNA 序列，使这段固定长度的序列呈指数扩 增。
体内DNA复制与PCR的技术区别：
课题2 多聚酶链式反应扩增DNA片段
一、PCR的原理 二、PCR的反应过程 三、 PCR反应的实验操作 四、结果分析与评价
一、PCR的原理（1、体内DNA的结构 ）
5/ 4/
3/
A
1/ 2/
T
5/
4/
1/
3/2/Biblioteka DNA分子的-OH端为3/ ; 磷 酸基团的末端为5/ 。
一、PCR的原理（2、DNA体内复制相关知识）
2、DNA的合成方向总是从子链的哪一 端向哪一端延伸？
3、PCR技术最突出的优点是
A 原理简单
B 原料易找
C TaqDNA聚合酶有耐热性
D 快速、高效、灵活、易于操作
4、做PCR使用的微量离心管、枪头、 缓冲液及蒸馏水使用前必须进行的关 键步骤是
A 反复洗涤 污染
B 不怕外源DNA
C 高压灭菌
D 在—20 ℃储存
50倍
蒸馏水 做对照
DNA 含量的测定：稀释→对照调零→ 测定→计算（公式见P63）
波长
260nm 处读数
注意事项：详见操作提示
练习巩固
1、关于PCR技术的应用，错误的一项是 A 古生物学、刑侦破案、DNA序列测定 B 诊断遗传疾病、基因克隆、古生物学 C DNA序列测定、基因克隆、刑侦破案‘ D 诊断遗传疾病、合成核苷酸、DNA序列 测定
项目 时间 场所
酶
模板 原料
引物
相关内容与作用
有丝分裂、减数分裂间期
细胞核 线粒体 叶绿体
DNA解旋酶 打开DNA双链
DNA聚合酶 催化合成DNA子链
DNA母链
提供复制模板
脱氧核苷酸 合成子链的原料
使DNA聚合酶能够从引物的3/端开 始连接脱氧核苷酸
DNA体内复制（示意）
一、PCR的原理（3、 PCR的技术原理） 温度（℃）
• 复制的方向：子链的5’ 端向 3’端延伸。
二、PCR的反应过程
5/ G—G
T—C 3/ 变性94oC
3/ A—G 5/ 引物Ⅰ
复性 55oC
3/ C—C
5/ G—G 3/ 引物Ⅱ
G—A 5/
延伸 72oC
5
模板DNA
5
引物1
5
5 引物2
第一次复制
5
5
5
5
第二次复制
5 5
5
5
5 5
5 5
25～30 次循环（复制）后，模板 DNA的含量可以扩大100万（220）倍以上。
解旋
体内复制
PCR技术
在解旋酶作用下， 加热到94oC,双链
细胞提供能量，部 全部解开，不需
分解开
解旋酶
引物
一小段RNA 一般用DNA片段
合成子链
在引物的基础上， 一条链连续合成， 一条链不连续合成
分别从两条链的 引物端开始，都 是连续合成，控 制温度72oC
TaqDNA聚合酶
不需要
需要
循环次数 受生物体自身控制
高温变性 94
72 适温延伸
55
低温复性
重复1~3步30轮
22
时间（min）
1
2
3
4
5
变性（加热80-100℃ ）
DNA双链
单链
复性（缓慢冷却）
PCR技术的原理总结
• 利用DNA分子的热变性原理，通过控 制温度来控制双链的解旋与结合，从而 完成体外DAN分子的扩增。
• 体外DNA复制的条件： 四种脱氧核 苷酸、耐高温的聚合酶、引物、 模板； 缓冲溶液和严格控制温度的温控设备。