纤维素酶测定试剂盒使用说明
纤维素酶活力的测定方法
纤维素酶活力的测定方法纤维素是一种多糖，由若干葡萄糖分子通过β-1，4-糖苷键连接形成，具有结构特殊，难于降解的特点。
纤维素酶是能够降解纤维素的酶，广泛存在于微生物、植物和动物体内。
测定纤维素酶活力的方法因纤维素酶的种类及应用领域不同而有所区别，常用的方法包括酚-硫酸法、精胱酸法、流变法、荧光法等。
下面将介绍其中几种常用的方法。
一、酚-硫酸法酚-硫酸法是用于测定纤维素酶活力的经典方法之一、其原理是：纤维素酶通过水解纤维素生成还原糖，而还原糖可以与试剂酚和硫酸反应产生可测定的颜色。
具体步骤如下：1.准备试剂：将1%酚（重量/体积）和10%硫酸（体积/体积）混合，剧烈振荡。
2.取一个容量瓶，加入待测纤维素酶样品、适量的底物纤维素和适量的缓冲液（常用pH5.0的酸性缓冲液）。
3.进行恒温反应：将试剂和底物溶液在适当的温度下进行恒温反应。
4.终止反应：在特定的时间点，取出反应溶液，加入刚刚准备好的酚-硫酸试剂，充分混匀。
5.酚-硫酸试剂与还原糖反应产生胶体，表现为紫褐色。
通过比色计或分光光度计测定产生的胶体的吸光度，根据标准曲线或已知纤维素酶活力的对照样品，计算出待测样品的纤维素酶活力。
二、精胱酸法精胱酸法是另一种常用的测定纤维素酶活力的方法。
其原理是：纤维素酶通过水解纤维素生成还原糖，而还原糖可以与精胱酸反应产生尿糖胺，尿糖胺与酚胺反应形成可测定的色素。
具体步骤如下：1.准备试剂：将精胱酸磷酸缓冲液（常用pH4.8）和4-氨基安替比林（ABTS）或3,3'-二氮杂联苯基过氧化物（DPPH）溶液混合，剧烈振荡。
2.取一个容量瓶，加入待测纤维素酶样品、适量的底物纤维素和适量的缓冲液。
3.进行恒温反应：将试剂和底物溶液在适当的温度下进行恒温反应。
4.终止反应：在特定的时间点，取出反应溶液，加入刚刚准备好的精胱酸试剂，充分混匀。
5.精胱酸试剂与还原糖反应产生色素，根据色素的吸光度，通过分光光度计测定产生的色素的吸光度，根据标准曲线或已知纤维素酶活力的对照样品，计算出待测样品的纤维素酶活力。
纤维素酶活力的测定
目的本检测方法是用来确定本公司纤维素酶类的催化活性。
本方法适用于各种固体和液体纤维素酶制剂。
说明本方法适合于纤维素类酶的质量分析和质量控制领域。
但不是本公司产品及其它公司产品的绝对活力的预测，而各种酶制剂的最终的酶活力在良好的实验操作下仍可发挥出更好的催化活力。
原理纤维素被纤维素酶水解最终降解生成β-葡萄糖。
鉴于纤维素结构的复杂性，没有任何一种酶能将纤维素彻底水解。
1950 年Reese提出了C1-Cx概念。
C1是一水解因子，作用于纤维素的结晶区（如棉花纤维即为高度结晶性纤维），使氢键破裂，呈无定形可溶态，成为长链纤维素分子。
再由Cx最终催化形成还原性单糖。
而Cx通常包括：（1）内切葡萄糖苷酶(endo-1,4-β-D-glucanase，EC3.2.1.4，简称EG)。
这类酶随机水解β-1,4-糖苷键，将长链纤维素分子（羧甲基纤维素钠（CMC）即为人工合成的一种线形纤维素钠盐）截短。
（2）外切葡萄糖苷酶（exo-1,4-β-D-glucanase，EC3.2.1.91），又称纤维二糖水解酶（cellobiohydrolase，简称CBH）。
这类酶作用于β-1,4-糖苷键，每次切下一个纤维二糖分子。
（3）β-葡萄糖苷酶（β-glucosidase，EC3.2.1.21，简称BG），这类酶将纤维二糖（水杨素即为葡萄糖苷键连接的纤维二糖）水解成葡萄糖分子。
据上述理论，分别设计以滤纸（filter paper）、棉球、CMC、水杨素为底物，分别衡量纤维素的总体酶活性（FPA）、C1、Cx、Cb酶活性。
将底物水解后释放还原性糖（以葡萄糖计）与3,5-二硝基水杨酸(DNS)反应产生颜色变化,这种颜色变化与葡萄糖的量成正比关系,即与酶样品中的酶活性成正比。
通过在550nm的光吸收值查对标准曲线(以葡萄糖为标准物)可以确定还原糖产生的量,从而确定出酶的活力单位。
纤维素酶类活性的定义Ⅰ 1g酶粉（1ml酶液）于50℃pH4.8条件下，每分钟水解1×6cm的滤纸（FPA）产生1μg还原糖（以葡萄糖计）的酶量定义为1个FPA酶活力单位。
纤维素酶活力的测定
β-糖苷酶活力的测定（CMC）一目的：掌握CMC酶活力测定纤维素酶的原理及测定方法。
原理：纤维素酶能从底物羧甲基纤维素钠（CMC-Na）中分解出还原糖，还原糖又同3，5-而硝基水杨酸发生反应，产生一种黄橙混合色，用分光光度计可测定其色度，计算酶活力。
二试剂：1．3，5-而硝基水杨酸显色剂（又称DNS试剂）：称取10g3,5-而硝基水杨酸，溶于蒸馏水中，加入20g分析纯NaOH，200g酒石酸钾钠，加税500ml,升温溶解后，加入重蒸酚2g,无水亚硫酸钠0.5g,加热搅拌，待全部溶解后，定容至1000ml。
贮存于棕色瓶中，室温保存，放置一周后使用。
2．0.1mol/L pH4.5醋酸-醋酸钠缓冲液：称取结晶醋酸钠（CH3COONa.3 H2O）13.61g，醋酸（CH3COOH）6.00g，用蒸馏水溶解，并定容至1000 ml，配好后用pH计矫正。
3．1mg/ml葡萄糖标准溶液：准确称取100mg分析纯葡萄糖（预先在70℃、600nm汞柱下干燥5h至恒重），用少量蒸馏水溶解并定容至100ml，冰箱中保存备用。
4．代测酶液：称取酶粉1.0g（或吸取酶液1.00ml），先用少量的0.05mol/L pH4.5醋酸-醋酸钠缓冲液溶解，并用玻璃棒捣研，然后将上清液小心倾入适当的容量瓶中，沉渣部分再加上述缓冲液溶解，如此反复捣研3-4次，最后全部移入容量瓶中，用缓冲液定容至刻度，40℃水浴锅中浸提1h，用四层纱布或脱脂棉过滤，滤液供测定用。
5．底物：0.5%羧甲基纤维素钠（CMC-Na）溶液，配制方法为城区0.5000g羧甲基纤维素钠（Sigma公司生产），准确至0.001g,用上述缓冲液溶解定容至100ml,冰箱中保存，有效期3d。
三仪器：分析天平、变温电炉、恒温水浴锅、分光光度计、秒表等。
四方法步骤：1．标准曲线的绘制分别吸取0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0, 1.2, 1.4ml的1mg/ml葡萄糖液于7支20ml的比色管中，分别用蒸馏水补充体积至2.oml,各加3，5-而硝基水杨酸1.5ml,在沸水浴中煮沸5min，冷却后分别用蒸馏水定容至20ml，摇匀。
纤维素酶活力的测定实验报告
生物化学实验报告题目：纤维素酶活力的测定-----3、5—二硝基水杨酸法姓名：余振洋学号：200900140156 系年级：09级生科3班同组者：张刚刚时间：2011/4/22一、【实验目的】学习和掌握3、5—二硝基水杨酸（DNS）法测定纤维素酶活力的原理和方法，了解纤维素酶的作用特性。
二、【试验原理】纤维素酶水解纤维素，产生纤维二糖、葡萄糖等还原糖，能将3、5-二销基水杨酸中销基还原成橙黄色的氨基化合物,在550nm波长处有最大光吸收，在一定范围内还原糖的量与反应液的颜色强度呈比例关系，利用比色法测定其还原糖生成的量就可测定纤维素酶的活力。
酶活力也称为酶活性，是指酶催化一定化学反应的能力。
酶活力的大小可用在一定条件下，酶催化某一化学反应的速度来表示，酶催化反应速度愈大，酶活力愈高，反之活力愈低。
测定酶活力实际就是测定酶促反应的速度。
酶促反应速度可用单位时间内、单位体积中底物的减少量或产物的增加量来表示。
在一般的酶促反应体系中，底物往往是过量的，测定初速度时，底物减少量占总量的极少部分，不易准确检测，而产物则是从无到有，只要测定方法灵敏，就可准确测定。
因此一般以测定产物的增量来表示酶促反应速度较为合适。
实验中定义：1mg酶每分钟水解生成1微克葡萄糖的量定义为1个酶活力单位。
N×OD值对应的葡萄糖量纤维素酶活力单位＝——————————————30×LN——酶液的稀释倍数30——糖化所用时间L——反应酶液毫升数三、【试验器材】比色管10支，5ml移液管，移液枪，500ml大烧杯，水浴锅，电炉，搅拌振荡器，722 型或其他型号的可见分光光度计。
四、【实验试剂】1．酶液：将0.05g酶溶解定容至50ml，从中取出1ml再定容至100ml，待测（用PH4.5乙酸—乙酸钠缓冲溶液配制）。
2．0.1mol/L PH4.5的乙酸-乙酸钠缓冲溶液。
3．3、5—二硝基水杨酸显色液：称取10克3、5-二硝基水杨酸，溶入蒸馏水中，加入20克分析纯氢氧化钠，200克酒石酸钾钠，加水500毫升，升温溶解后，加入重蒸酚2克，无水亚硫酸钠0.5克。
纤维素(CLL)含量检测试剂盒说明书 微量法
纤维素（CLL）含量检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC4285规格:100T/96S产品简介：纤维素是由β-D-葡萄糖单元以β-1,4-糖苷键连接而成的直链多聚体，通常与半纤维素、果胶及木质素结合在一起，是植物细胞壁的主要结构成分。
以纤维素为原料的产品广泛应用于食品、造纸、塑料、炸药、电工及科研器材等领域。
纤维素在酸性条件下加热能分解成β-D-葡萄糖。
在强酸作用条件下利用与蒽酮显色剂测定纤维素含量。
试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计/酶标仪、台式低温离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰盒、丙酮、浓硫酸、无水乙醇、蒸馏水和EP管。
产品内容：提取液一：80%乙醇400mL，即将320mL无水乙醇和80mL蒸馏水混合，自备。
提取液二：液体100mL×1瓶，4℃避光保存；试剂一：粉剂×1瓶，4℃避光保存；试剂二：液体10mL×1瓶，4℃避光保存；标准品：粉剂×1支，10mg无水葡萄糖。
临用前加入1mL蒸馏水溶解，配成10mg/mL葡萄糖溶液备用。
工作液的配制：在试剂一中加入5mL试剂二，充分混匀，如较难溶解，可充分震荡或加热搅拌；用不完的试剂，4℃可保存一周。
操作步骤：一、纤维素的提取：1、细胞壁物质（CWM）的提取：称取约0.3g（记为W1）样本，加入1mL提取液一，室温快速匀浆，90℃水浴20min，冷却至室温，6000g，25℃离心10min，弃上清。
沉淀先后用1.5mL提取液一和丙酮各洗两遍（涡旋振荡2min左右，6000g，25℃离心10min，弃上清即可），沉淀即为粗细胞壁，加入1mL 提取液二（去除淀粉）浸泡15小时，6000g，25℃离心10min，弃上清，将沉淀干燥，得到细胞壁物质（CWM），称重记为W2。
2、纤维素的提取：称取烘干的CWM约5mg（记为W3），加入0.5mL蒸馏水充分匀浆，匀浆液转移至EP管中，用蒸馏水定容至0.5mL，置于冰水混合物中，缓慢加入0.75mL浓硫酸，缓慢混匀，冰水浴中静置30min。
纤维素酶检测试剂盒(DNS 比色法)说明书
2、准备样品： 称取样品 10g(或 10ml)加入装有玻璃珠的三角瓶中，再加人一定体积的蒸馏水稀释，静置 20min，200r/min 振荡 30min，然后四层纱布过滤，滤液 3000r/min 离心 10min，上清液加 入 50ml 容量瓶中，补水定容，即为纤维素酶提取液，用于样品 CES 活力的检测。如样品酶 活力较高，应稀释至合适浓度再次检测。
产品组成：
名称 纤维素酶检测试剂盒(DNS 比色法) 试剂(A):Glu 标准(1mg/ml) 试剂(B):CESAssaybuffer 试剂(C):CMCSolution 试剂(D):DNS 试剂 使用说明书 有效期
规格 100T 10ml 50ml 100ml 100ml
保存条件 4℃ 4℃ RT RT
纤维素酶检测试剂盒(DNS 比色法)说明书
本产品仅供体外研究使用，不得用于临床诊断
产品简介： 纤维素酶(β-1,4-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶，Cellulase 简称 CES)是降解纤维素生成葡萄糖的一 组酶的总称，它不是单体酶，而是起协同作用的多组分酶系，是一种复合酶，主要由外切β -葡聚糖酶、内切β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶等组成，还有很高活力的木聚糖酶。在分解纤 维素时起生物催化作用，是可以将纤维素分解成寡糖或单糖的蛋白质。
纤维素酶检测试剂盒(DNS 比色法)检测原理是用羧甲基纤维素钠盐(CMC)作底物，经纤维素 酶水解后生成还原糖(葡萄糖)，还原糖在碱性加热条件下被氧化成糖酸，3,5-二硝基水杨酸 (DNS)被还原为棕红色的氨基化合物，在一定范围内还原糖的量与棕红色产物的颜色深浅程 度呈正比，在 540nm 处用分光光度计测定棕红色物质的吸光度，即可求得还原糖的含量， 进而求得纤维素酶活的大小。本产品仅用于科研领域，不用于临床诊断或其他用途。
纤维素酶活力的测定实验报告
纤维素酶活力的测定实验报告实验名称：纤维素酶活力的测定实验目的：1.掌握测定纤维素酶活力的方法；2.了解纤维素酶的作用机制；3.探究不同条件对纤维素酶活力的影响。
实验原理：纤维素是植物细胞壁的主要组成部分之一，其主要成分是纤维素聚合物。
纤维素酶是一种能够水解纤维素的酶，通过降解纤维素将其转化为可利用的单糖。
纤维素酶活力可以通过测定其在特定条件下降解纤维素的速度来评估。
实验步骤：1.准备纤维素酶的测定液：将一定浓度的纤维素酶和适量的底物溶液混合。
2.将测定液分装到各个试管中，同时设置对照组。
3.将各个试管放置在恒温水浴中，控制温度为37℃。
4.在一定的时间间隔内，取出各个试管，加入一定量的酶停止液，停止反应。
5.将反应液和纤维素酶残余液通过离心仪离心，分离清除残余纤维素。
6. 取出上清液，加入Fehling试剂，进行加热反应。
7. 记录Fehling试剂发生颜色变化的时间，并用同样的方法测定对照组。
8.根据对照组的结果进行归一化处理，计算每个试管中的纤维素酶活力。
实验数据处理与结果分析：将实验数据整理成表格或图表，根据不同条件下的纤维素酶活力进行比较分析。
探究不同因素对纤维素酶活力的影响，如温度、pH值、底物浓度等。
分析结果可以得出，当温度和pH值处于一定范围内时，纤维素酶的活力最高。
底物浓度对纤维素酶活力也有一定影响，但超过一定浓度时，酶的反应速率将达到饱和状态。
实验结论：通过测定纤维素酶在不同条件下的活力1.温度和pH值对纤维素酶活力有显著影响，适宜的温度和pH值可以提高纤维素酶的活力。
2.底物浓度对纤维素酶活力也有一定影响，但过高浓度会使酶的反应速率达到饱和状态。
3.该实验结果可以对纤维素酶的应用提供参考，有助于优化纤维素酶的工业生产过程。
实验总结：通过本次实验，我们成功测定了纤维素酶的活力，并得出了温度、pH 值和底物浓度对其活力的影响。
实验结果对于纤维素酶的应用具有重要意义，可以为其在生物制造、生物能源等领域的应用提供参考。
纤维素酶酶活性测定试剂盒说明书
纤维素酶（cellulase ，CL ）/羧甲基纤维素酶活性测定试剂盒说明书微量法100管/48样注 意 ：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定 测定意义：CL （EC 3.2.1.4）存在于细菌、真菌和动物体内，能够催化羧甲基纤维素降解，是一类可广泛应用于医药、食品、棉纺、环保及可再生资源利用等领域的酶制剂。
测定原理：采用蒽酮比色法测定CL 催化羧甲基纤维素钠降解产生的还原糖的含量。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、浓硫酸和蒸馏水。
试剂的组成和配制：提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存； 试剂一：液体6mL×1瓶，4℃保存； 试剂二：液体40mL×1瓶，4℃保存；试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存； 临用前加入5mL 蒸馏水和45mL 浓硫酸充分溶解待用。
样品测定的准备：1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL ）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W ，超声3s ，间隔10s ，重复30次）；8000g 4℃离心10min ，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g ）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。
8000g 4℃离心10min ，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。
加样表和测定步骤：37℃振荡反应1h 后，90℃水浴15min （盖紧，防止水分散失），冷却后试剂名称 对照管 测定管 样本 50 50 试剂一（μL ） 90 试剂二（μL ） 370 370 蒸馏水（μL ）180908000g 25℃离心10min，取上清，得糖化液糖化液(μL)140 140试剂三(μL)260 260 混匀，90℃水浴10min（盖紧，防止水分散失），冷却，取200μL至微量石英比色皿或96孔板中，测620nm下吸光值A，计算ΔA=A测定管-A对照管。
纤维素酶活力的测定实验报告
纤维素酶活力的测定实验报告1.实验目的本实验旨在通过测定纤维素酶的活力，了解其在不同条件下的活性及作用效果，为进一步研究纤维素酶的应用提供实验依据。
2.实验原理纤维素酶是一种能够分解纤维素为可溶性糖的酶，其活性高低直接影响着纤维素分解的效果。
本实验采用DNS法测定纤维素酶活力，该方法具有操作简便、准确性高等优点。
具体原理如下：在一定条件下，纤维素酶与底物反应产生可溶性糖，其含量可用DNS试剂进行显色反应，根据吸光度值计算可溶性糖的含量，进而求得纤维素酶活力。
3.实验步骤（1）实验准备：准备5mmol/LCMC-Na溶液、10mg/mLDNS溶液、100mmol/LNaOH溶液、纤维素酶溶液；取2mLDNS溶液、1mLCMC-Na溶液、1mL 酶液、2mLNaOH溶液，混合后摇匀。
（2）设置对照：取2mLDNS溶液、1mLCMC-Na溶液、2mLNaOH溶液混合后摇匀，作为对照溶液。
（3）反应：将酶液和对照液分别加入两支试管中，于50℃水浴中恒温20分钟。
（4）显色：取出试管，分别加入1mLDNS溶液，摇匀后再次置于50℃水浴中恒温20分钟。
（5）比色：取出试管，冷却至室温，分别以空白试剂为参比，于540nm波长处测定各管吸光度值。
4.实验结果根据实验数据可知，纤维素酶活力为20.33U/mL，对照液吸光度值为0.65。
5.实验分析通过实验结果可知，本实验条件下得到的纤维素酶活力为20.33U/mL，与文献报道值相符。
这说明本实验所选条件较为适宜，能够反映纤维素酶的实际活性水平。
同时，实验过程中采用了DNS法测定可溶性糖含量，该方法具有较高的准确性，因此实验结果可靠。
6.实验结论本实验通过DNS法测定纤维素酶活力，得到了较为准确的实验结果。
这说明本实验所选条件和方法均较为适宜，能够反映纤维素酶的实际活性水平。
同时，本实验也为进一步研究纤维素酶的应用提供了实验依据。
在实际应用中，可根据具体需求调整实验条件和方法，以获得更为准确的实验结果。
纤维素酶活力的测定
纤维素酶活力的测定1.纤维素酶活力单位定义在37℃,pH值为 5.5的条件下,每分钟从浓度为4mg/ml的羧甲基纤维素钠溶液中降解释放1umol还原糖所需要的酶量为一个酶活力单位u.2.测定原理纤维素酶能将羧甲基纤维素降解成寡糖和单糖.具有还原性末端的寡糖和有还原基团的单糖在沸水浴条件下可以与DNS试剂发生显色反应.反应液颜色的强度与酶解产生的还原糖量成正比,而还原糖的生成量又与反应液中纤维素酶的活力成正比.因此,通过分光比色测定反应液颜色的强度,可以计算反应液中纤维素酶的活力.3.试剂与溶液除特殊说明外,所用的试剂均为分析纯,水均为符合GB/T6682中规定的三级水.3.1葡糖糖溶液,c(C6H12O6)为10.0mg/ml:称取无水葡萄糖 1.000g,加水溶解,定容至100ml.3.2 乙酸溶液,c(CH3COOH)为0.1mol/L:吸取冰乙酸0.60ml.加水溶解,定容至100ml.3.3 乙酸钠溶液,c(CH3COONa)为0.1mol/L:称取三水乙酸钠 1.36g.加水溶解,定容至100ml.3.4 氢氧化钠溶液,c(NaOH)为200g/L:称取氢氧化钠20.0g.加水溶解,定容至100ml.3.5 乙酸——乙酸钠缓冲溶液,c(CH3COOH—CH3COONa)为0.1mol/L,pH值为 5.5:称取三水乙酸钠23.14g,加入冰乙酸 1.70ml.再加水溶解,定容至2000ml.测定溶液的pH值.如果pH值偏离 5.5,再用乙酸溶液(3.2)或乙酸钠溶液(3.3)调节至 5.5.3.6 羧甲基纤维素钠溶液:0.8%(w/v)称取羧甲基纤维素钠(Sigma C5678)0.80g,加入80ml乙酸—乙酸钠缓冲溶液(3.5).磁力搅拌,同时缓慢加热,直至羧甲基纤维素钠完全溶解(注:在搅拌加热的过程中可以补加适量的缓冲液,但是溶液的总体积不能超过100ml.).然后停止加热,继续搅拌30min,用乙酸—乙酸钠缓冲溶液(3.5)定容至100ml.羧甲基纤维素钠溶液能立即使用,使用前适当摇匀.4℃避光保存,有效期为3天.3.7 DNS试剂称取3,5-二硝基水杨酸 3.15g(化学纯),加水500ml,搅拌5s,水浴至45℃.然后逐步加入100ml氢氧化钠溶液(3.4),同时不断搅拌,直到溶液清澈透明(注意:在加入氢氧化钠过程中,溶液温度不要超过48℃.).再逐步加入四水酒石酸钾钠91.0g,苯酚 2.50g和无水亚硫酸钠2.50g.继续45℃水浴加热,同时补加水300ml,不断搅拌,直到加入的物质完全溶解.停止加热,冷却至室温后,用水定容至1000ml.用烧结玻璃过滤器过滤.取滤液,储存在棕色瓶中,避光保存.室温下存放7天后可以使用,有效期为6个月.4 仪器与设备4.1 实验室用样品粉碎机或碾钵.4.2 分样筛:孔径为0.25mm(60目).4.3 分析天平:感量0.001g.4.4 pH计:精确至0.01.4.5 磁力搅拌器:附加热功能.4.6 电磁振荡器.4.7 烧结玻璃过滤器:孔径为0.45m.4.8 离心机:2000g以上.4.9 恒温水浴锅:温度控制范围在30—60℃之间,精度为0.1℃.4.10 秒表:每小时误差不超过5s.4.11 分光光度计:能检测350—800nm的吸光度范围.4.12 移掖器;精度为1l.5 标准曲线的绘制吸取缓冲液(3.5)4.0ml,加入DNS试剂(3.7)5.0ml,沸水浴加热5min.用自来水冷却至室温,用水定容至25.0ml,制成标准空白样.分别吸取葡萄糖溶液(3.1)1.00,2.00,3.00,4.00,5.00,6.00和7.00ml,分别用缓冲液(3.5)定容至100ml,配制成浓度为0.10—0.70mg/ml葡萄糖标准溶液.分别吸取上述浓度系列的葡萄糖标准溶液各 2.00ml(做二个平行),分别加入到刻度试管中,再分别加入2ml水和5mlDNS试剂(3.7).电磁振荡3s,沸水浴加热5min.然后用自来水冷却到室温,再用水定容至25ml.以标准空白样为对照调零,在540nm处测定吸光度OD值.以葡萄糖浓度为Y轴,吸光度OD值为X轴,绘制标准曲线.每次新配制DNS试剂均需要重新绘制标准曲线.6 试样溶液的制备固体试样应粉碎或充分碾碎,然后过60目筛(孔径为0.25mm).称取试样两份,精确至0.001g.加入50ml乙酸—乙酸钠缓冲溶液(3.5).磁力搅拌30min,再用缓冲溶液(3.5)定容至100ml,在4℃条件下避光保存24h.摇匀,取出30-50ml,2000g离心3min.吸取 5.00ml上清液,再用缓冲溶液(3.5)做二次稀释(稀释后的待测酶液中纤维素酶活力最好能控制在0.04—0.08 u/ml之间).液体试样可以直接用乙酸—乙酸钠缓冲溶液(3.5)进行稀释,定容(稀释后的酶液中纤维素酶活力最好能控制在0.04—0.08 u/ml之间).如果稀释后酶液的pH值偏离 5.5,需要用乙酸溶液(3.2)或乙酸钠溶液(3.3)调节,校正至 5.5,然后再用缓冲溶液(3.5)做适当定容.7 测定步骤吸取10.0ml羧甲基纤维素钠溶液(3.6),37℃平衡10min.吸取10.0ml经过适当稀释的酶液,37℃平衡10min.吸取 2.00ml经过适当稀释的酶液(已经过37℃平衡),加入到刻度试管中,再加入5mlDNS试剂(3.7),电磁振荡3s.然后加入 2.0ml羧甲基纤维素钠溶液(3.6),37℃保温30min,沸水浴加热5min.用自来水冷却至室温,加水定容至25ml,电磁振荡3s.以标准空白样为空白对照,在540nm处测定吸光度AB.吸取 2.0ml经过适当稀释的酶液(已经过37℃平衡),加入到刻度试管中,再加入 2.0ml羧甲基纤维素钠(3.6)(已经过37℃平衡),电磁振荡3s,37℃精确保温30min.加入5.0mlDNS试剂(3.7),电磁振荡3s,酶解反应.沸水浴加热5min,用自来水冷却至室温,加水定容至25ml,电磁振荡3s.以标准空白样为空白对照,在540nm处测定吸光度AE.8.试样酶活力的计算[(AE - AB)×K + CO]XD = × 1000 (1)M×ｔ式(1)中:XD —试样稀释液中的纤维素酶活力,u/ml;AE —酶反应液的吸光度;AB —酶空白样的吸光度;K —标准曲线的斜率;CO —标准曲线的截距;M —葡萄糖的分子量(180.2);t —酶解反应时间,min;1000 —转化因子,1mmol = 1000 umol.XD值应在0.04—0.08 u/ml之间.如果不在这个范围内,应重新选择酶液的稀释度,再进行分析测定.X = XD?Df (2)式(2)中:X —试样纤维素酶的活力,u/g;Df —试样的总稀释倍数.酶活力的计算值保留三位有效数字.9 重复性同一样品两个平行测定值的相对误差不超过8.0%,二者的平均值为最终的酶活力测定值(保留三位有效数字)1.药品、试剂及仪器脂肪酶(Novezymes公司)，0.0667mol/L的KH2PO4-Na2HPO4缓冲溶液(pH值为7.38；)，脂肪酸显色剂(5%醋酸铜溶液，用吡啶调节pH=6.2)，正己烷，油酸，橄榄油，盐酸，无水乙醇，分光光度计，pH计，水/油浴恒温磁力搅拌器，离心机，分析天平等。
实验纤维素酶活力的测定
实验 纤维素酶活力的测定（3,5-二硝基水酸法）一、实验目的掌握还原糖的测定原理，学习用3,5-二硝基水酸法测定纤维素酶活力的法。
二、实验原理纤维素酶水解纤维素，产生纤维二糖、葡萄糖等还原糖，能将3,5-二硝基水酸中的硝基还原成橙黄色的氨基化合物，故可利用比色法测定其还原物生成量来表示纤维素酶的活力。
三、主要仪器与试剂(一)实验仪器1. 25mL 比色管2. 722型分光光度计3. 滴管4.水浴锅5.移液枪6.电炉 (二)、试剂1. 3,5-二硝基水酸显色液：称取10.0 g 3,5-二硝基水酸，溶入200mL 蒸馏水中，加入20g 分析纯氢氧化钠，200g 酒酸钾钠，加水至500mL ，升温溶解后，加入重蒸苯酚2.0g ，无水亚硫酸钠0.50g 。
加热搅拌，待全溶后冷却，定容至1000mL 。
存于棕色瓶中，放置一后使用。
2. 0.1mol/L pH4.5乙酸-乙酸钠缓冲溶液。
3. 0.5%羧甲基纤维素钠水溶液，溶解后成胶状液，静置过夜。
使用前摇匀。
4. 葡萄糖标准溶液：称取干燥至恒重的无水葡萄糖100mg ，溶解后定容至100mL ， 此溶液含葡萄糖1.00mg/mL 。
5. 纤维素酶液：将0.05g 酶溶解定容至50 mL ，从中取出1.0mL 再定容至100mL ，待检测用。
（用pH4.5乙酸-乙酸钠缓冲溶液配制） 四、实验步骤1.标准曲线的绘制：分别吸取0.0，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00m L 葡萄糖标准液于6支25mL 比色管中，均用蒸馏水稀释至1mL ，加3.5-二硝基水酸显色剂3mL ，在沸水浴中煮沸显色10min ，冷却，加蒸馏水21mL ，摇匀。
以空白管调零，在550nm 处比色。
以光密度为纵坐标，以葡萄糖μg 数为横坐标，绘出标准曲线。
序号 1 2 3 4 5 6 葡萄糖标液 0.0 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 蒸馏水 1.0 0.80 0.60 0.40 0.20 0.0 3,5-二硝基水酸 3.03.03.03.03.03.0实验操作 沸水浴加热10min ，冷却后，加水定容，摇匀，比色测定吸光度A 550nm0.02.空白管的测定： 在2支25mL 试管中各加入1.0mL 酶液，沸水浴5min ，冷却后加3.0mL 0.5%CMC-Na ，与样品管同时放入50℃水浴30min 。
纤维素（CLL）含量检测试剂盒说明书
纤维素（CLL）含量检测试剂盒说明书微量法货号: BC4285规格: 100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液一液体400 mL×1瓶（自备）4℃保存提取液二液体100 mL×1瓶4℃保存试剂一粉剂×1瓶4℃保存试剂二液体10 mL×1瓶4℃保存标准品粉剂×1支4℃保存溶液的配制：1、提取液一：80%乙醇400 mL，即将320 mL无水乙醇和80 mL蒸馏水混合，自备。
提供一个125 mL空瓶。
2、标准品：10 mg葡萄糖。
临用前加入1 mL蒸馏水溶解，配成10 mg/mL葡萄糖溶液备用。
3、工作液的配制：在试剂一中加入5 mL试剂二，充分混匀，如较难溶解，可充分震荡或加热搅拌；用不完的试剂，4℃可保存一周。
产品说明：纤维素是由β-D-葡萄糖单元以β-1,4-糖苷键连接而成的直链多聚体，通常与半纤维素、果胶及木质素结合在一起，是植物细胞壁的主要结构成分。
以纤维素为原料的产品广泛应用于食品、造纸、塑料、炸药、电工及科研器材等领域。
纤维素在酸性条件下加热能分解成β-D-葡萄糖。
在强酸作用条件下利用与蒽酮显色剂测定纤维素含量。
技术指标：最低检出限：0.0037 mg/mL线性范围：0.00391-0.3 mg/mL注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、台式低温离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰盒、丙酮、浓硫酸、无水乙醇、蒸馏水和EP管。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细胞壁物质（CWM）的提取：称取约0.3g（记为W1）样本，加入1mL提取液一，室温快速匀浆，90℃水浴20min，冷却至室温，6000g，25℃离心10min，弃上清。
纤维素酶测定方法
纤维素酶测定方法
1、纤维素酶活的测定采用DNS法，,即首先以葡萄糖的μmoL数为横坐标,OD值为纵坐标,绘制标准曲线。
2、然后取3支带有25 mL刻度的试管,一支管作空白对照,2支管作平行样品管,每支样品管中加1 mL酶溶液,置于50℃水浴锅中预热2 min;再加入4 mL已预热至50℃底物溶液(0.625 g CMC溶于100mL pH4.6的醋酸缓冲液中加热,溶解,混匀)精确反应5 min;
3、然后在3支试管中立即分别加入1 mL 2 mol/ L氢氧化钠溶液和2 mL DNS显色液,摇匀后将支试管放入沸水浴中5 min后立即取出流水冷却,
4、然后在对照管中再加入1 mL酶液,再用蒸馏水定容至25 mL,于490 nm处测OD值。
5、酶活力计算:从标准曲线中查出葡萄糖μmol数,酶活力(U)=葡萄糖量/(5×EW)
其中:5为保温时间(酶与底物作用时间,min); EW为1 mL酶液中含有的样品量(g); U是指在特定条件下,每分钟每克酶粉催化纤维素水解生成的葡萄糖量。
实验七 DNS法测定纤维素酶活力
实验七DNS法测定纤维素酶活力
一、试剂耗材
实验共分为6组，在每组的实验台上需要配置以下试剂和耗材：
25mL比色管(容量瓶或离心管也可)10支；试管架1个；50mL容量瓶；移液枪（移液管）1000μL 1把；5000μL1把，对应枪头若干；DNS 溶液100mL；1mg/mL葡萄糖标准溶液100mL；%羧甲基纤维素钠水溶液50 mL，滴管数支，烧杯100 mL 2个。
公用仪器设备：电子天平，分光光度计(2台以上)，恒温水浴锅
二、需要配置的溶液
溶液：称取10g 3，5-二硝基水杨酸溶于蒸馏水中，加入20g氢氧化钠，200g酒石酸钾钠和500mL 水，加热溶解后再加入重蒸酚2g、无水亚硫酸钠，待全部溶解后冷却，定容至1000mL，储存于棕色瓶中，放置一周，用前过滤分装。
L乙酸乙酸钠缓冲液配置：（1000毫升）参考缓冲液配置手册
3. 1mg/mL葡萄糖标准溶液:称取1g葡萄糖,用蒸馏水溶解,并定容到1000mL.分装
4. %羧甲基纤维素钠溶液：用L pH 的乙酸乙酸钠缓冲液配置。
纤维素酶使用说明要点
纤维素酶使用说明精选优良菌株，先进的液体深层发酵工艺，全套不锈钢设备，进口酶分离设备和严格的质量控制程序生产，质量稳定，服务周道。
适用于中草药提取、植物提取、食品加工、果蔬汁加工、纺织、酿造、饲料等多个行业。
1.作用机理纤维素酶由内切葡聚糖酶(C1酶)；外切葡聚糖酶(Cx酶)；β-葡萄糖苷酶（又称纤维二糖水解酶）组成。
C1-酶作用于不溶性纤维素表面，使纤维素链裂开、长链纤维素分子末端部分游离，使纤维素链易于水化。
Cx-酶主要包括内切β-1,4葡聚糖酶和外切β-1,4葡聚糖酶，作用于经C1-酶催化的纤维素，分解β-1，4糖苷键。
前者是从高分子聚合物内部任意位置切开β-1,4键，主要生成纤维二糖、纤维三糖等。
后者作用于低分子多糖，从非还原性末端游离出葡萄糖。
β-葡萄糖苷酶可进一步将纤维二糖、纤维三糖及其它低分子寡聚糖分解为葡萄糖。
通过纤维素酶的作用，可以在不改变原料风味和营养价值的前提下，有效地破坏细胞结构，使有效成份得到充分利用。
2.执行标准及酶活定义【标准】QB2583-2003CMC酶活单位定义（U）：在50℃、pH4.8条件下，1分钟水解底物CMC -Na产生1μg还原糖（以葡萄糖计）所需的酶量定义为1个酶活单位。
3、理化指标外观：黄褐色粉剂pH 值：pH3.5-6.5，最适pH为4.8温度：40-60℃，最适温度为55℃。
4.适用范围本品可应用于中草药提取、植物提取、果蔬汁加工、食品酿造、酿酒、饲料、纺织、食品加工、乙醇等工业。
具体使用方法请与我们联系，用户需根据自己的产品、原料特点及工艺条件确定最佳使用方案。
5.包装规格 20kg/桶，可按顾客要求进行包装。
6.运输与贮存本品为生物制剂，运输、贮存过程应避光。
贮存于阴凉、通风、干燥场所。
保质期为12个月。
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中纤维素酶(CE)白介
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中纤维素酶（CE）白介素ELISA试剂盒水平。
用纯化的纤维素酶（CE）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入纤维素酶（CE），再与HRP标记的纤维素酶（CE）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的纤维素酶（CE）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中纤维素酶（CE）活性浓度。
试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶2酶标试剂6ml×1瓶8标准品（160U/L）0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
80U/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液40U/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液20U/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液10U/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液5U/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
纤溶酶—α2纤溶酶抑制剂复合物(PIC)测定试剂盒(化学发光免疫分析法)产品技术要求模板
医疗器械产品技术要求编号：纤溶酶-α2纤溶酶抑制剂复合物（PIC）测定试剂盒（化学发光免疫分析法）1.产品型号/规格及划分说明1.1产品型号/规格2×25人份/盒：Ra：2×2.0mL；Rb：2×2.0mL；Rc：2×3.0mL；2×50人份/盒：Ra：2×3.0 mL；Rb：2×3.0mL；Rc：2×5.0mL；2×100人份/盒：Ra：2×5.5mL；Rb：2×5.5mL；Rc：2×9.5mL；校准品（可选购）：C0：1×1.0mL，C1：1×1.0mL，C2：1×1.0mL、质控品（可选购）：L：1×2.0mL，H：1×2.0mL。
1.2结构组成Ra：包被着抗PIC抗体的超顺磁性微粒（0.2mg/mL），悬浮于含0.5g/L防腐剂的TRIS缓冲液。
Rb：抗PIC抗体-碱性磷酸酶标记物稀释于含0.5g/L防腐剂的MES缓冲液。
Rc：样本处理液，含0.5g/L防腐剂的TRIS缓冲液。
校准品C0：TRIS缓冲液，含防腐剂的冻干品；校准品C1和C2：PIC 抗原稀释于TRIS缓冲液，含防腐剂的冻干品（浓度见靶值单）。
质控品：PIC抗原稀释于TRIS缓冲液，含防腐剂的冻干品（接受范围见靶值单）。
1.3适用范围用于体外定量测定人体血浆中纤溶酶-α2纤溶酶抑制剂复合物（PIC）的含量，用于反映体内纤溶状态。
2性能指标2.1外观和性状试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏；包装标签应清晰，准确、牢固；外观和性状应符合表2要求。
表2试剂盒内各组分的外观性状组分外观性状Ra应为棕色含固体微粒的液体，无板结、无絮状物。
Rb应为清澈透明的液体，无沉淀、无悬浮物、无絮状物。
Rc应为清澈透明的液体，无沉淀、无悬浮物、无絮状物。
校准品应为冻干粉，呈疏松状，加入纯水后在15min内溶解，无沉淀或絮状物。
纤维素酶活的测定(IUAPC推荐方法)
纤维素酶活力的测定1试剂1.1缓冲溶液乙酸-乙酸钠缓冲液（0.1mol/L，pH 4.8）柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液（0.1mol/L，pH 4.8）1.2DNS试剂DNS试剂：取7.5g 3,5-二硝基水杨酸，14.0g氢氧化钠，充分溶解于煮沸冷却后的去离子水中，加入酒石酸钾钠216.0g，苯酚5.5mL，偏重亚硫酸钠6.0g，完全溶解后，定容至1L，室温下储存于棕色瓶中。
1.3葡萄糖检测试剂R1试剂：苯酚，10.6mmol/L，pH 7.0。
R2试剂：磷酸盐缓冲液，70mmol/L；4-氨基安替比林，0.8mmol/L；葡萄糖氧化酶，＞10U/mL；氧化物酶，＞1U/mL。
R1试剂和R2试剂在使用前等量混合均匀即可使用，混合液室温下放置时间不宜超过12h，否则就会因变色而失效。
1.4考马斯亮蓝试剂考马斯亮蓝G-250（CBB-G250）试剂按照传统的Brandford法制备：准确称取0.100±0.0001CBB-G250溶于50mL乙醇（95%，v/v）中，然后加入100mL磷酸（85%，w/v），将溶液转移至1L容量瓶，用去离子水定容，最后将染料溶液用滤纸过滤后，4℃下储存于棕色瓶中。
2仪器和设备2.1分析天平：感量0.0001g2.2精密pH计：精确至0.012.3磁力加热搅拌器2.4紫外可见分光光度计，购自美国安捷伦公司，可在数秒内快速扫描波长200-1000nm范围的吸收值，配置1cm石英比色皿2.5电热恒温水浴锅：30-100℃2.6移液器：量程为1000μL-5000μL，200-1000μL，20-100μL，0-10μL各1支，均购自芬兰大龙（Dragon）公司3纤维素酶活力测定按照IUAPC推荐的方法（Ghose，1987）分析纤维素酶的滤纸酶活、CMC酶活和β-葡萄糖苷酶活。
3.1滤纸酶活测定纤维素酶滤纸酶活的方法如下：（1）将Whatman No 1或国产相同等级的滤纸（新华1号滤纸）裁剪为1.0×6.0cm2（约50mg）的滤纸条，折成扇形，置于一个25mL的具塞比色管中；（2）加入1.0mL柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液（0.05mol/L，pH 4.8）预热至50℃；（3）然后加入0.5mL适当稀释的酶液，要求至少有两个稀释梯度最终释放的葡萄糖的量分别略高于和略低于2.0mg，并在50℃保温1h；（4）分别以不加滤纸和不加酶的试样作为空白，在相同条件下保温；（5）反应结束后加入3.0mLDNS试剂，煮沸5min后，在冷水浴中快速冷却，用去离子水定容至25mL，摇匀；（6）置于紫外可见分光光度计上测波长540nm处的吸收值，并根据葡萄糖-DNS工作曲线计算1h释放的葡萄糖的量，按下式计算纤维素酶的滤纸酶活：滤纸酶活（PFU·mL-1）=0.37×释放2.0mg葡萄糖所需酶的稀释度（3-1）3.2羧甲基纤维素（CMC）酶活测定羧甲基纤维素CMC酶活的方法如下：（1）使用柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液（0.05mol/L，pH 4.8）配制质量浓度为2%的羧甲基纤维素（简写成CMC，取代度接近0.7）溶液；（2）在25mL的具塞比色管中加入0.5mL适当稀释的酶液，要求至少两个稀释梯度最终释放葡萄糖的量分别略高于和略低于0.5mg，然后在50℃下保温5-10min；（3）加入0.5mL羧甲基纤维素CMC溶液，混合均匀后在50℃下保温30min；（4）加入3.0mLDNS试剂以结束反应，煮沸5min后，在冷水浴中快速冷却，用去离子水定容至25mL，摇匀；（5）置于紫外可见分光光度计上测波长540nm处的吸收值，并根据葡萄糖-DNS工作曲线计算释放的葡萄糖的量，按下式计算纤维素酶的CMC酶活：CMC酶活（IU ·mL-1）=0.185×释放0.5mg葡萄糖所需酶的稀释度（3-2）3.3纤维二糖酶活（β-葡萄糖苷酶活力）测定纤维二糖酶活力的方法如下：（1）用乙酸-乙酸钠缓冲溶液（0.05mol/L，pH 4.8）配制浓度为15mmol/L的纤维二糖标准溶液，仅在测试前配制新鲜溶液；（2）将酸用乙酸-乙酸钠缓冲溶液稀释至一系列浓度，保证有两个稀释梯度在反应结束后分别释放略高于和略低于1.0mg的葡萄糖；（3）在试管中加入1.0mL稀释的酶液，加热至50℃后，再加入1.0mL纤维二糖标准溶液，并在50℃保温30min；（4）反应结束后在沸水浴中煮沸5min，冷却，用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法测定葡萄糖的量；（5）分别以不加底物和不加酶的试样作为空白，计算释放1mg葡萄糖所需的酶的稀释度，并按下式计算酶的活力：β-葡萄糖苷酶活力（IU ·mL-1）=0.0926×释放1.0mg葡萄糖所需酶的稀释度（3-3）4葡萄糖含量的快速测定（1）准备测试液，即将R1试剂和R2试剂在使用前等量混合均匀；（2）将待测试样适当稀释，使最终紫外分光光度及记录的信号值在0.1-0.8之间，测试结果葡萄糖浓度应低于28mmol/L；（3）在5mL塑料离心管中先后加入2mL测试液和10μL待测液，37℃水浴中保温15min；（4）待显红色后，置于紫外分光光度计中测量505nm处的吸收值，室温下显色的试样可稳定2h；（5）以去离子水代替待测液，与测试液混合后，作为空白样；（6）使用标准的葡萄糖试剂建立校正曲线。
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纤维素酶测定试剂盒使用说明
货号：BC2540
测定意义：
CL（EC3.2.1.4）存在于细菌、真菌和动物体内，能够催化纤维素降解，是一类可广泛应用于医药、食品、棉纺、环保及可再生资源利用等领域的酶制剂。
测定原理：
采用3.5－二硝基水杨酸法测定CL催化纤维素降解产生的还原糖的含量。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体4mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：液体10mL×1瓶，4℃保存；
试剂三：液体13mL×1瓶，4℃保存；
标准品：粉剂×1支，4℃保存，含10mg无水葡萄糖（干燥失重<0.2%），临用前加入1ml蒸馏水溶解，配制成10mg/ml葡萄糖溶液备用，4℃可保存1周，或者用饱和苯甲酸溶液溶解，可保存更长时间。
标准品准备：将标准品用蒸馏水稀释至1、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1mg/ml。
样品测定的准备：
1、细菌或细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声冰浴破碎细菌或细胞（功率20％，超声3S秒，间隔10S，重复30次）；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：称取约0.1g组织加入1mL提取液，冰浴中匀浆。
8000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
加样表和测定步骤：
试剂名称（μL）对照管测定管标准管试剂一5050-
试剂二200200-
双蒸水5050-
样本50-煮沸的样本50-
混匀，40℃准确水浴30min，取出后立即放入沸水中煮沸15min,得糖化液
糖化液5050-
标准液--50
试剂三150150150
混匀，沸水浴中煮沸显色15min，冷却
双蒸水105010501050
混匀，540nm处蒸馏水调零，测定吸光值A，样品管计算ΔA=A测定管-A对照管。
标准曲线的建立：540nm处蒸馏水调零，读标准管吸光值A。
以浓度（y）为纵坐标，吸光度A（x）为横坐标建立标准曲线。
CL活力计算：
根据标准曲线，将ΔA带入公式中（x）计算样品浓度y（mg/mL）。
1、按照蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生1μg葡萄糖定义为一个酶活力单位。
CL活力（U/mg prot）＝1000×y×V反总÷（V样×Cpr）÷T=233×y÷Cpr
2、按样本鲜重计算
单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟催化产生1μg葡萄糖定义为一个酶活力单位。
CL活力（U/g鲜重）＝1000×y×V反总÷（W×V样÷V样总）÷T=233×y÷W
3、按细菌或细胞密度计算
单位的定义：每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟催化产生1μg葡萄糖定义为一个酶活力单位。
CL活力（U/104cell）＝1000×y×V反总÷（500×V样÷V样总）÷T=0.467×y
1000：1mg/mL=1000ug/mL；V反总：反应体系总体积，0.35mL；V样：加入样本体积，0.05mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，30min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。