高效人抗利尿激素血管加压素精氨酸加压素(ADHVPAVP)酶
抗利尿激素分泌失调综合征
辅助检查：
5、血氯降低，血二氧化碳结合力正常或 偏低。
6、血清尿素氮、肌酐、尿酸、白蛋白常 降低；
7、血浆和尿中ADH水平升高，血浆ADH大 于1.5pg/ml；
8、甲状腺、肝脏、肾脏、心脏和肾上腺 皮质功能均正常。
辅助检查：
定义(二) ：
ADH失调综合症（SIADH），是由于某些 致病因素，如慢性肺部疾病、肿瘤、中 枢神经病变等引起的ADH分泌过多，或 ADH作用增强，导致体内水分潴留、稀释 性低钠血症、尿钠与尿渗透压升高为其 主要临床表现。
病因及发病机制(一)
1、肺部疾病：为引起SIADH的最常见病因。如 慢性支气管炎、肺结核、肺脓肿、肺曲菌病， 重症哮喘、重症肺炎，均可产生异源性ADH。
诊断标准
4、尽管水储留4 ～ 5L，临床上没有水肿。 5、临床上无容量不足和水肿，包括无脱水、 充血性心衰、肝硬化腹水。 6、肾脏、肾上腺、甲状腺和垂体前叶功能 正常。 7、血浆ADH升高。 其他实验室特征性表现为血清尿素氮、肌 酐和尿酸降低。
鉴别诊断
1、慢性心功能不全 有慢性心功能不全的 病因和原发病表现，低血钠，尿钠不高， 伴水肿等水钠潴留表现。 2、失代偿期肝硬化 有肝硬化和门脉高压 表现，如腹水、侧支循环的形成、脾肿 大，低血钠、尿钠不高，有水肿。 3、甲状腺功能减退 黏液性水肿，低代谢 等表现，如畏寒、纳差、思睡、便秘、心 率慢。血甲状腺激素水平降低。
临床表现：
SIADH的临床表现主要依赖于低钠血 症、低渗透压血症的发展速度和低 钠血症的绝对值，实际上只有1/4的 病人有临床症状，也可能因服用噻 嗪类利尿剂或非类固醇抗炎药，或 口服过多的水或静脉补液过多促使 症状表现。
抗利尿激素异常分泌综合征与脑性盐耗综合征
抗利尿激素异常分泌综合征与脑性盐耗综合征武元星!王强"低钠血症的传统定义为血清钠<l35mmoI/L a可能伴低\正常或高血浆张力1]a其多见于术后1周左右a易被忽视a应引起重视O低钠血症临床多表现为头痛\呕吐\精神症状\意识障碍加重及癫痫样抽搐等a与血清钠浓度及其下降速度有关O当血钠浓度< 120mmoI/L\每小时下降速度!0.5mmoI/L时可出现严重临床后果a并与病死率及伤残率相关O 神经外科术后并发低钠血症的常见因素:!术后患者过度脱水\排钠增多a盐摄入不足a输入较多或过多低渗液O并发尿崩症时a如只补液不补钠a时间过长也可致低钠血症O这些原因在某种意义上属医源性因素a报道中占神经外科术后低钠血症的86%!95%a应予足够重视2!4]O"抗利尿激素(ADH)异常分泌综合征(syndrome of inappropriate antidi" uretic hormone secretion a SIADH)O#脑性耗盐综合征(cerebraI saIt wasting syndrome a CSWS)O国外报道a SIADH与CSWS是引起非医源性低钠血症最主要的原因O二者临床表现极相似a但发病机制不同a治疗原则相反a故区别SIADH与CSWS 对治疗有重要意义5]O一\病理生理及病因学SIADH由Schwartz等于1957年报道a认为由下丘脑\垂体受刺激致ADH分泌异常增多引起O CSWS由Peters等于1950年提出a认为与促肾上腺皮质激素(ACTH)分泌减少或脑内某些神经元分泌的某种生物因子有关OCSWS的临床表现和实验室指标大多与SIADH 相似a早期血浆ADH也增高a长时间以来CSWS被误诊为SIADH O近年来a CSWS才被明确认识a且认为它是比SIADH更多致低钠血症的原因6!8]O 1#SIADH的病理生理机制:ADH又称血管加压素a亦称精氨酸加压素(arginine vasopressin a AVP)a主要由下丘脑视上核及室旁核分泌并储存于神经垂体a通过渗透压感受器\容量和压力调节其释放O SIADH的病理生理改变与低血浆渗透压时机体抑制ADH分泌能力不足及ADH或类似物分泌过多有关O ADH不适当地分泌过多a致肾远曲小管和集合管水通道开放a自由水重吸收增加a尿排钠增多a尿量减少a尿渗透压升高O细胞外液扩张a致稀释性低钠血症;肾小球滤过率增加a尿排钠增加;肾素$血管紧张素$醛固酮系统受抑制a醛固酮保钠作用下降;心钠素分泌增加a抑制钠重吸收a使血钠\血浆渗透压下降a严重者可致脑水肿\循环衰竭等O临床上血容量正常或稍高a皮肤弹性正常a无脱水表现;尿排钠增多a部分细胞外液进入细胞内a低渗a导致肾脏对ADH敏感性下降a水分不会过多潴留体内a皮肤少见水肿O低钠血症在一定程度上可使机体对血管加压素产生相对抵抗a使水吸收与排泄到达某种平衡a低钠血症\高渗尿进展程度受抑a这被称为血管加压素逃逸现象 a其机制未完全阐明9]OSIADH常见于肺部疾病伴缺氧\酸中毒严重时;炎症时产生的IL-6可刺激ADH释放增加致SIADH发生;多种肿瘤也可异源性分泌ADH;某些药物如抗精神病药物\抗抑郁药物(西他罗仑)\镇静催眠药物\镇痛药物(吗啡)\噻嗪类利尿剂\化疗药物(长春新碱\苯丙酸氮芥\环磷酰胺\顺铂等)\降糖药物氯磺丙脲以及卡马西平等可导致医源性SIADH发生l0a ll]O二尖瓣狭窄分离术后a因左心房压力骤减刺激容量感受器a反射性地使ADH分泌增加O低钠血症是新生儿期常见的电解质紊乱a血清钠<l30mmoI/L O新生儿脑性低钠血症属ADH分泌异常综合征范畴a其病理改变及临床表现为细胞内水肿\细胞外液容量改变(稍有增加)及神经肌肉应激性低下l a l2]a儿科尤见中枢感染\出血\肿瘤\窒息缺氧和外科术后O2%CSWS的病理生理机制:Harrinan l3]将其定义为颅内疾病中由肾性失钠而致低钠血症和细胞外液减少O两个主要过程解释此紊乱:肾脏交感神经冲动输入减少和循环中利钠因子存在O大脑中a毒毛旋花子类结合物可能也在CSWS发生中起作用l3]O 目前已知的利钠素有四种l4]:心房利钠多肽(A!综述!l.首都医科大学附属北京天坛医院急诊科(邮编100050)2.ICUNP脑利钠多肽BNP C型利钠尿肽CNP及最近被发现的树眼睛蛇属利钠肽(DNP)它们在脑部疾病后分泌紊乱对肾功能的直接影响可能与CSWS发病有关严重颈髓损伤合并顽固低钠血症与CSWS有关Zhang等15认为,CSWS由于颈髓损伤后交感神经被抑制尿排钠增多所致动脉瘤蛛网膜下腔出血后循环中利钠肽浓度升高在持续性低钠血症时维持高浓度升压激素和一些胺类物质在动脉瘤破裂短时间后升高这些物质可刺激心钠素释放颅缝早闭成型术等也与CSWS的发生有关1617也有作者报道儿童颅脑外伤时可检测到高水平的ANP18二诊断及鉴别诊断发现低钠血症后应明确其病因和类型医源性因素占神经外科术后的多数应先排除我们在此强调尿钠浓度包括瞬时和24h尿渗透压和比重的检查经济有效应予重视以尿钠为例常可对下列情况做出判断见表1SIADH的诊断标准19①血清钠<135mmoI/L ②血浆渗透压<270!280m0sm/(kg H20)③高尿钠尿钠浓度>20mmoI/L④尿渗透压>300m0sm/(kg H20)尿渗/血渗>1⑤肾肾上腺及甲状腺等功能正常⑤限水后病情好转血浆渗透压可按公式19计算血浆渗透压=2"血钠mmoI/L+血糖mmoI/L/18+BUN mmoI/L/2.8CSWS尚无统一诊断标准下列情况有助于诊断①低血钠伴多尿②尿钠升高尿量增加而尿比重正常③低血容量中心静脉压下降常<6cm H20脱水征心率快体位性低血压红细胞压积和血BUN增高④补水补钠后病情好转SIADH与CSWS的鉴别常有困难血清ADH ANP可作为鉴别诊断的依据但其分泌受多因素影响低血容量疼痛恶心呕吐以及某些药物均可致ADH分泌增加7;CSWS早期可有ANP增高,ADH也升高后期ANP增高而ADH下降SIADH因高血容量也可致ANP升高鉴别要点依据文献#021并略作修改见表2三治疗预防是治疗的关键高危患者应定期检测电解质渗透压情况手术及危重患者输液内容应合理对肿瘤患者应早期诊断及做相应手术切除或放疗化疗可疑引起SIADH的药物及时停用长期卧床者应注意改善静脉回流尽快撤除呼气末正压PEEP等降低手术损伤是神经外科医师尤其应注意的问题低血容量无症状低钠血症患者可予等渗盐水恢复血容量尽量减少自由水摄入急性有症状低钠血症者一般通过中心静脉予3%盐水严格控制高渗盐水输入是安全有效的方法少数严重患者予1.5%盐水可能更佳呋噻米可产生低渗尿低钠血症因自由水摄入过多引起及症状不太严重时可只用呋塞米过快纠正低血钠可能形成逆转的细胞内外渗透梯度脑细胞脱水萎缩致一种罕见不可逆转的中央脑桥桥外脱髓鞘病centraI pontine or extrapontine myeIinoIysis22该病发生率可占尸检中的0.25%现推荐纠正低血钠速度为24h内血钠上升8!10mmoI/L症状严重开始几小时速度可稍快1!2mmoI/L但仍应保持靶目标下列公式1可确定已选液体输入速度血清钠变化=补充液中钠-血清钠浓度/总体含水量+1如选1.5%钠溶液治疗血清钠浓度120mmoI/L体重60kg50岁男患者血清钠变化=256-120mmoI/L/0.6"60+1=3.7 mmoI/L用1L1.5%钠溶液可提升血清钠3.7 mmoI/L纠正低钠速度为每24h8mmoI/L约需该溶液2.2L/24h或90mI/h表!低钠血症的不同特点诊断细胞外液尿钠mmoI/L尿崩失水钠摄入不足!<10充血性心力衰竭肝硬化"<10肾肾上腺疾病利尿剂治疗,CSWS!>20 SIADH#或">20表"CSWS与SIADH的鉴别要点项目CSWS SIADH血容量减少增加盐平衡负平衡不定脱水症状与体征明显无体重减少增高或不变肺毛细血管楔压降低增高或正常中心静脉压CVP降低增高或正常红细胞压积HCT降低增高或不变渗透压增高或正常下降血尿素氮和肌酐增加正常血清蛋白增加正常血钠下降下降尿钠降低或增高增高血钾增高或不变降低或不变血尿酸正常降低CVP监测行试验性治疗对SIADH与CSWS有鉴别作用,可防止因盲目限制液体入量而进一步降低CSWS患者血容量,致脑缺血~脑梗死的危险CVP在0!5cm H20时,低钠血症可能与CSWS有关,行补液补钠治疗;CVP在6!10cm H20时,低钠血症可能与SIADH或CSWS有关,应先予补液补钠,如短期内低钠血症未能纠正则改行限制液体入量并可适当利尿;CVP>11cm H20时,低钠血症可能与SIADH有关,可采用限制液体入量及利尿治疗SIADH在限液补钠同时运用袢利尿剂疗效会更佳此外,大剂量的盐皮质激素(醛固酮1mg/d~ 9"-氟氢可的松2!8mg/d>也有提高血钠的作用近年来,精氨酸加压素受体亚型!-拮抗剂(SR121463)为SIADH的治疗开辟了新的途径22]对CSWS应根据脱水的严重程度决定口服补盐~静脉补充生理盐水~高渗盐水(3%>或联合应用原发病治疗很重要,尤其对脑积水和颅内压增高相关CSWS,脑脊液引流或降低颅内压可很快治愈另外,盐皮质激素活性药物如氟氢可的松也可应用23]文献报道,低钠血症的儿童和成人相似,血中抗利尿激素浓度均增高,此时在ADH分泌增多的基础上,静脉内如输入低渗液,可出现严重低钠血症儿童与成人对补液耐受程度不同,成人可承受较大的静脉输液量,其体内净潴留空间为63ml/(kg~d>,而儿童仅为28ml/(kg~d>,因此与成人相比,儿童只要稍微多输入低渗液体即可能导致致命的低钠血症对此,临床医师应予高度重视参考文献1]Adrogu#HJ,Madias NE.Hyponatremia.N Engl J Med,2000, 342:1581-1589.2]祝源,孙世远.神经外科低钠血症的鉴别诊断和处理.中华神经医学杂志,2004,3:108-110.3]翟旭,魏炳杰,刘兴波.神经外科患者低钠血症的病因分析.锦州医学院学报,1999,20:19-22.4]陈洪,陈建良,吴耀晨,等.神经外科患者低钠血症的临床特点和治疗.中国临床神经外科杂志,2004,9:35-36.5]Berkenbosch JW,Lentz CW,Jimenez DF,et al.Cerebral salt wasting syndrome following brain injury in three pediatric pa$ tients:suggestions for rapid diagnosis and therapy.Pediatr Neu$ rosurg,2002,36:75-79.6]Coenraad MJ,Meinders AE,Taal JC,et al.Hyponatremia in in$ tracranial h J Med,2001,58:123-127.7]Betjes M.Hyponatremia in acute brain disease:the cerebral saltwasting syndrome.Eur J Intern Med,2002,13:9-14.8]Kwon TH,Hager H,Nejsum LN,et al.Physiology and pathophys$ iology of renal aguaporins.Semin Nephrol,2001,21:231-238. %]Ecelbargar CA,Murase T,Tian Y,et al.Regulation of renal salt and water transporters during vasopressin escape.Prog Brain Res, 2002,139:75-84.10]Tan S.Recognition and treatment of oncologic emergencies.J In$ fus Nurs,2002,25:182-188.11]Miehle K,Paschke R,Kodh DA.Citalopram therapy as a risk fac$ tor for symptomatic hyponatremia caused by the syndrome of in$ appropriate secretion of antidiuretic hormone(SIADH):a case re$ port.Pharmacopsychiatry,2005,38:181-182.12]刘雁,董为伟,刘勇,等.脑桥中央髓鞘溶解五例临床分析.中华神经科杂志,2001,3:326-328.13]Harrinan MR.Cerebral salt wasting syndrome.Crit Care Clin, 2001,17:125-138.14]Lisy0,Lainchbury JG,Lesniken H,et al.Therapeutic actions of a new synthetic vasoactive and natriuretic peptide,dendroaspis na$ triuretic peptide,in experimental severe congestive heart failure.Hypertension,2001,37:1089-1094.15]Zhang L,Cai OL,Dang GD,et al.Secondary hyponatremia after frankel class-a acute cervical spinal cord injury.J Beijing Medi Univ,2000,32:369-373.16]Byeon JH,Yoo G.Cerebral salt wosting sydrome after calvarial re$ modeling in craniosynostosis.J Korean Med Sci,2005,20:866-869.17]Revilla-Pacheco FR,Herrada-Pineda T,Loyo-Varela M,et al.Cerebral salt wosting sydrome in patients with aneurismal sub$ arachnoid heuerrhage.Neurol Res,2005,27:418-422.18]Donati-Genet PC,Dubuis JM,Girardin E,et al.Acute symp$ tomatic hyponatremia and cerebral salt wasting after head injury: an important clinical entity.J Pediatr Surg,2001,36:1094-1097.19]Vesely D.Inappropriate secretion of antidiuretic hormone//Schw artz G,Hanke B,Mayer T,et al.Editions.Principles and prac$ tices of emergency medicine.4th edition.Baltimore(MD): Williams&Wilkins,1999:969-972.20]Kappy MS,Ganong CA.Cerebral salt wasting in children:the role of atrial natriuretic hormone.Adv Pediatr,1996,43:271-308. 21]0ruckaptan HH,0zisik P,Akalan N.Prolonged cerebral salt wast$ ing syndrome associated with the intraventricular dissemination of brain tumors.Report of two cases and review of the literature.Pediatr Neurosurg,2000,33:16-20.22]Verbalis JG.Vasopression V2receptor antagonists.J Mol En$ docrinol,2002,29:1-9.23]Kinik ST,Kandemir N,Bayka A,et al.Fludrocortisone treatment in a child with severe cerebral salt wasting.Pediatr Neurosurg, 2001,35:216-219.(收稿:2006-05-16>抗利尿激素异常分泌综合征与脑性盐耗综合征作者：武元星， 王强作者单位：武元星(首都医科大学附属北京天坛医院急诊科,100050)， 王强(首都医科大学附属北京天坛医院ICU,100050)刊名：北京医学英文刊名：BEIJING MEDICAL JOURNAL年，卷(期)：2007,29(3)被引用次数：3次1.Adrogué HJ;Madias NE Hyponatremia[外文期刊] 20002.祝源;孙世远神经外科低钠血症的鉴别诊断和处理[期刊论文]-中华神经医学杂志 2004(2)3.翟旭;魏炳杰;刘兴波神经外科患者低钠血症的病因分析[期刊论文]-锦州医学院学报 1999(2)4.陈洪;陈建良;吴耀晨神经外科患者低钠血症的临床特点和治疗[期刊论文]-中国临床神经外科杂志 2004(1)5.Berkenbosch JW;Lentz CW;Jimenez DF Cerebral salt wasting syndrome following brain injury in three pediatric patients:suggestions for rapid diagnosis and therapy[外文期刊] 20026.Coenraad MJ;Meinders AE;Taal JC Hyponatremia in intracranial disorders[外文期刊] 2001(3)7.Betjes M Hyponatremia in acute brain disease:the cerebral salt wasting syndrome[外文期刊] 2002(1)8.Kwon TH;Hager H;Nejsum LN Physiology and pathophysiology of renal aquaporins[外文期刊] 2001(3)9.Ecelbargar CA;Murase T;Tian Y Regulation of renal salt and water transporters during vasopressin escape[外文期刊] 200210.Tan S Recognition and treatment of oncologic emergencies[外文期刊] 200211.Miehle K;Paschke R;Kodh DA Citalopram therapy as a risk factor for symptomatic hyponatremia caused by the syndrome of inappropriate secretion of antidiuretic hormone (SIADH):a case report[外文期刊] 2005(4)12.刘雁;董为伟;刘勇脑桥中央髓鞘溶解五例临床分析[期刊论文]-中华神经科杂志 2001(03)13.Harrinan MR Cerebral salt wasting syndrome[外文期刊] 2001(1)14.Lisy O;Lainchbury JG;Lesniken H Therapeutic actions of a new synthetic vasoactive and natriureticpeptide,dendroaspis natriuretic peptide,in experimental severe congestive heart failure 200115.Zhang L;Cai QL;Dang GD Secondary hyponatremia after frankel class-a acute cervical spinal cord injury 200016.Byeon JH;Yoo G Cerebral salt wosting sydrome after calvarial remodeling in craniosynostosis[外文期刊] 200517.Revilla-Pacheco FR;Herrada-Pineda T;Loyo-Varela M Cerebral salt wosting sydrome in patients with aneurismal subarachnoid heuerrhage[外文期刊] 2005(4)18.Donati-Genet PC;Dubuis JM;Girardin E Acute symptomatic hyponatremia and cerebral salt wasting after headinjury:an important clinical entity[外文期刊] 2001(7)19.Vesely D Inappropriate secretion of antidiuretic hormone 199920.Kappy MS;Ganong CA Cerebral salt wasting in children:the role of atrial natriuretic hormone 199621.Oruckaptan HH;Ozisik P;Akalan N Prolonged cerebral salt wasting syndrome associated with the intraventricular dissemination of brain tumors.Report of two cases and review of the literature[外文期刊] 200022.Verbalis JG Vasopression V2 receptor antagonists[外文期刊] 2002(1)23.Kinik ST;Kandemir N;Bayka A Fludrocortisone treatment in a child with severe cerebral salt wasting[外文期刊] 20011.胡颖.李定国.陈源文肝硬化患者血浆血管紧张素Ⅱ浓度与肾功能关系[期刊论文]-上海医学2004,27(8)2.王波.戴敏方儿童中枢性尿崩症的垂体MRI表现分析[期刊论文]-中国医学影像技术2002,18(8)3.魏咏梅失代偿期肝硬化患者并发低钠血症100例临床分析[期刊论文]-实用肝脏病杂志2005,8(4)。
高效人抗利尿激素血管加压素精氨酸加压素(ADHVPAVP)酶
人抗利尿激素/血管加压素/精氨酸加压素(ADH/VP/AVP)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号：CSB-E09080h检测范围：7.8 pg/ml - 500 pg/ml最低检测限：1.95 pg/ml特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的人ADH，且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中ADH 含量。
说明1.试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2.浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3.中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗ADH抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗ADH抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的ADH呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板(Assay plate )：一块（96孔）。
2.标准品（Standard）：2瓶(冻干品)。
3.样品稀释液(Sample Diluent)：1×20ml/瓶。
4.生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液（HRP-avidin Diluent）1×10ml/瓶。
6.生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）。
7.辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）。
8.底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
精氨酸加压素V2受体拮抗剂托伐普坦的合成进展
再游离，降低了碱液的消耗。第三步采用单一或混合醇类和 采纳。
·174·
药学研究·Journal of Pharmaceutical Ｒesearch 2015 V ol． 34，N o． 3
图 3 托伐普坦合成路线 1
图 4 托伐普坦合成路线 2 图 5 托伐普坦合成路线 3
药学研究·Journal of Pharmaceutical Ｒesearch 2015 V ol． 34，N o． 3
冢制药公司进一步保护了托伐普坦的相关合成路线及化合 物［19］，它通过图 8 所示路线来合成［20］，化合物 1 与 1 － 乙氧 基 － 1 － 三甲硅氧基环丙烷反应生成化合物 2，化合物 2 用柠 檬酸脱三甲基硅基保护基，用叔丁基二甲基硅基保护后水解 成羧酸化合物 5。化合物 5 被还原后，再关环生成托伐普坦 的苯并氮杂卓母环化合物 8。化合物 8 再与酰氯反应成化合 物 9，化合物 9 脱硅基保护基得托伐普坦［21］。该合成路线设 计的难点主要在第一步碳链延长与关环反应，路线中硝基还 原用钯碳的成本较高。 3 结论
图 2 托伐普坦合成路线
该路线的缺点是化合物 3 反应生成 4 的过程中，用盐酸 有机烷基烃类的混合溶剂重结晶，提高收率。最后一步采用
反应速度慢，收率低，杂质多。在化合物 5 的合成过程中，用 二氯甲烷替代氯仿，降低了工人的劳动保护，利于车间的安
到 PPA 粘稠性高，易吸潮且成本较高。该合成路线中化合物 全生产。
精氨酸加压素（ AVP） 是一种强效抗利尿激素，在调节游
离水的吸收、体液渗透压、血容量、细胞收缩和血压方面起关 键作用［4］，其各种作用由 G 蛋白结合的受体亚型 V1a、V1b 和 V2 介导［5］。心衰病人出现系统性血管收缩和稀释性低 钠血症，部分是由于循环 AVP 水平异常升高。近年来有许 多文献报道精氨酸加压素 V2 受体拮抗剂能拮抗 AVP 对肾 脏 V2 受体的作用，缓解体液潴留，使低钠血症患者的血钠 正常化，并且 同 时 纠 正 高 容 量 患 者 的 水 肿 症 状［6］。 提 高 生 活质量，降低死亡率。
高效人抗利尿激素血管加压素精氨酸加压素(ADHVPAVP)酶
人抗利尿激素/血管加压素/精氨酸加压素(ADH/VP/AVP)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号：CSB-E09080h检测范围：7.8 pg/ml - 500 pg/ml最低检测限：1.95 pg/ml特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的人ADH，且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中ADH含量。
说明1. 试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2. 浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3. 中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4. 刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗ADH抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗ADH抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的ADH呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1. 酶联板(Assay plate )：一块（96孔）。
2. 标准品（Standard）：2瓶(冻干品)。
3. 样品稀释液(Sample Diluent)：1×20ml/瓶。
4. 生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
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代测试剂盒,人抗利尿激素血管加压素精氨酸加压素(ADHVPAVP)进口ELISA试剂盒
代测试剂盒,人抗利尿激素/血管加压素/精氨酸加压素(ADH/VP/AVP)进口ELISA试剂盒规格96T/48T保存条件：2-8℃低温保存本试剂盒用于测定血清、血浆及相关液体样本中待测物质的含量。
抗利尿激素上海古朵ELISA试剂盒检测类型：双抗体夹心法测抗原、双抗原夹心法测抗体、间接法测抗体、竞争法测抗体、竞争法测抗原、捕获包被法测抗体、ABS-ELISA法。
代测试剂盒,人抗利尿激素/血管加压素/精氨酸加压素(ADH/VP/AVP)进口ELISA试剂盒试剂盒组成标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤抗利尿激素1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
抗利尿激素11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。
测定应在加终止液后15分钟以内进行。
抗利尿激素不适当分泌综合症SIADH
苏麦卡 (托伐普坦）能够提高并维持血 [Na+] 浓度
SALT-1 and SALT-2 （两个平行进行的多中心、双盲、对照试验）的联合分析
平均血[Na+] (±SD, mEq/L)
基线血 [Na+] <135 mEq/L
苏麦卡™ (托伐普坦)15-60 mg (n=2安慰剂 (n=203)
*P<.0001 for Samsca® (tolvaptan) vs placebo, based on Cochran-Mantel-Haenszel (CMH) test. Data on file: Protocols 156-02-235 and 156-03-238; Pooled.
SALTWATER
Tomas Berl,* Friederike Quittnat-Pelletier,† Joseph G. Verbalis,‡ Robert W. Schrier,* Daniel G. Bichet,§ John Ouyang, and Frank S. Czerwiec, for the SALTWATER Investigators *Division of Renal Diseases and Hypertension, University of Colorado Denver, Aurora, Colorado; †Renal Division, University of Toronto, Toronto, Ontario, Canada; ‡Endocrine Division, Georgetown University, Washington, DC; §Renal Division, Universite´ de Montre´ al, Montre´ al, Que´ bec, Canada; and Otsuka Pharmaceutical Development & Commercialization, Inc., Rockville, Maryland
血管加压素的心血管效应与临床应用
血管加压素的心血管效应与临床应用1血管加压素概述血管加压素(Arginine vasopressin,A VP)是在下丘脑（主要在视上核、室旁核）的神经元中合成、由九个氨基酸构成的环状活性分子，其分子量近似1000Kda。
在人下丘脑合成的血管加压素中，因第八位氨基酸是精氨酸，故又称为精氨酸血管加压素。
A VP合成后经突触进入脑垂体后叶，并贮存其中及释放，因而“垂体后叶素”中含有A VP，因也称为垂体后叶加压素（Pituitarii Posterrioris,Pitressin）A VP最早被发现有抗利尿作用，故又称抗利尿激素(Antidiuretic hormone，ADH)。
正常人体生理范围A VP的血浆浓度为0.3~30pg/ml(或2ng/L），可增加外周血管阻力，从而使血压升高。
不同部位血管对A VP的反应是有差别的。
各部位血管對A VP收缩反应的强弱顺序为：皮肤动脉>大脑基底动脉>肾动脉>冠状动脉>骨骼肌动脉。
A VP对肺动脉无明显收缩作用。
外源性A VP对重要器官的影响为：对冠脉血管有一定的收缩作用。
对心肌有负性变力作用。
能增加脑血流量，提高脑氧供。
3血管加压素对循环系统影响的临床应用3.1麻醉手术中严重低血压中的应用手术麻醉中可出现对常规剂量儿茶酚胺治疗不敏感的低血压。
低血压对儿茶酚胺治疗不敏感的原因可能是：麻醉药或方法（如全麻和椎管内阻滞联合麻醉）对交感神经系统的严重抑制；术前长期应用血管紧张素转化酶抑制剂、血管紧张素II拮抗剂和β受体阻滞剂；嗜铬细胞瘤切除后儿茶酚胺水平不足；严重酸中毒；血管扩张性休克等。
麻醉中若出现常规剂量儿茶酚胺治疗效果不敏感的低血压，可静脉注射特利加压素1mg或静脉注射A VP10~20u[2]。
3.2血管加压素在血管扩张性休克中的应用血管扩张性休克是指虽然大量补充容量和不断增加儿茶酚胺剂量，仍出现进行性的全身血管扩张、严重低血压和组织低灌注为临床特点的休克状态。
抗利尿激素分泌失调综合症
诊断标准
主要标准： （1）血清钠＜ 135 mmol/L；有效血清渗透压降低＜ 275 mmol/L； （2）尿钠＞ 30 mmol/L；尿渗透压＞ 100 mmol/L； （3）无脱水及水肿的临床表现和证据； （4）肾、肾上腺及甲状腺功能正常； （5）近期未使用利尿剂。 次要标准： （1）尿酸排泄分数＞ 12.0%，尿钠排泄分数＞ 0.5%； （2）水负荷试验提示有水利尿障碍； （3）AVP 水平不适当升高。
中枢神经系统疾病
颅脑肿瘤、炎症、创伤、出血、梗死等病变使下丘脑 - 垂体受损，促肾上腺皮质激素（ACTH）和 AVP 分泌异常，AVP 起主导作用；下丘脑渗透压感受器、下丘脑核或垂体后叶的直接机械性刺激和缺 血性损害引起 AVP 的过度分泌；同时下丘脑嘴部有前交通动脉的穿通动脉供血，额叶底部的脑挫裂伤、 蛛网膜下腔出血可导致前交通动脉及穿通动脉损伤或痉挛，使下丘脑功能失调，AVP 分泌增多，有报道 蛛网膜下腔出血患者中超过 30% 出现 SIADH；血钠异常与脑出血的部位有关系，丘脑和基底节区出血 明显高于其他部位；吉兰－巴雷综合征（GBS）患者可能由于 GBS 病变侵犯外周容量感受器，将血容 量不足的错误信号传入中枢刺激 AVP 释放而引起 SIADH。
恶性肿瘤
发病机制为： （1）肿瘤自身分泌异位 AVP； （2）肿瘤可能使中枢 AVP 释放的渗透调定点下降，使得正常的血浆渗透浓度也引起 AVP 释放。 （3）肿瘤组织产生一些 AVP 样物质，具有 AVP 的活性。
确诊 SIADH 后，即使患者无肿瘤的相关表现，也应常规行相关肿瘤筛查，即使 为阴性，在排除了其他因素后，也不能完全排除肿瘤的可能，应定期随访，以防漏诊。 SCLC 合并SIADH提示预后不良。不少患者切除肿瘤后，SIADH可减轻或消失，对于 大部分无法手术的Ⅳ期肺癌患者，尽早化疗也是控制 SIADH的有效方法。
脑脊液精氨酸加压素
脑脊液精氨酸加压素文章目录*一、脑脊液精氨酸加压素的基本信息1. 定义2. 专科分类3. 检查分类4. 适用性别5. 是否空腹*二、脑脊液精氨酸加压素的正常值和临床意义1. 正常值2. 临床意义*三、脑脊液精氨酸加压素的检查过程及注意事项1. 检查过程2. 注意事项*四、脑脊液精氨酸加压素的相关疾病和症状1. 相关疾病2. 相关症状*五、脑脊液精氨酸加压素的不适宜人群和不良反应1. 不适宜人群2. 不良反应脑脊液精氨酸加压素的基本信息1、定义AVP又称血管加压素、抗利尿激素或由下丘脑的视上核和室旁核细胞产生,贮存于神经垂体。
在中枢神经系统可调节颅内压和脑组织代谢,具有抗利尿、缩血管、加强记忆、参与体温及免疫调节等生理功能。
利用放射免疫分析原理测定脑脊液精氨酸加压加压加压素的释放量,在适当的抗体浓度下,让标本中的精氨酸加压加压素与标记的精氨酸加压加压素竞争地结合,然后用第二抗体和PEG 作为结合标记抗原的分离剂,再根据结合率查标准曲线,求出标本中精氨酸加压加压素的含量。
2、专科分类无3、检查分类脑脊液检查4、适用性别男女均适用5、是否空腹空腹脑脊液精氨酸加压素的正常值和临床意义1、正常值成人 2.87±1.84ng/L,无部位间浓度差异新生儿 2.6±1.8ng/L,无部位间浓度差异2、临床意义异常结果:升高:脑积水、颅内肿瘤、良性颅内压升高、脑外伤后48min-10天,新生儿缺氧缺血性脑病等患者CSF中AVP含量增高;减少:原发性蛛网膜下腔出血、脑血栓形成、脑栓塞、帕金森氏病、基底神经节疾病、原发性退化性痴呆、偏头病等,其中原发性蛛网膜下腔出血昏迷者比嗜睡者下降更明显。
需要检测的人群:肢体发麻,运动不灵、言语不清、眩晕、视物模糊、大小便失禁等症状的人。
脑脊液精氨酸加压素的检查过程及注意事项1、检查过程采集1ml CSF立即置于预冷的装有抑肽酶1250KIU的试管中,低温离心沉淀5min后,取上清液置-30℃冰箱内备用。
AVP的生理作用及调节
（一）AVP的合成与代谢血管加压素在下视丘视上核、室旁核神经元内合成，其最初产物为前激素原，进入高尔基体内形成激素原，后者被包裹在神经分泌囊泡内。
囊泡沿神经垂体束轴突流向神经垂体，在流劝过程中通过酶的作用产生活性九肽，即精氨酸血管加压素（Arginine Vasopressin，AVP）和一种分子量（neurophysin）以及一种39个氨基酸组成的糖肽。
这三种产物均释放到外周血中。
AVP由下丘脑神经元分泌后，沿丘脑-神经垂体束下行至末梢，储存于神经垂体中。
近年来发现AVP纤维也见于正中隆起外侧带，AVP也可分泌到垂体门脉系统，在第三脑室底部及脑干血管运动中枢等处。
AVP与位于肾脏远曲小管、集合管内皮细胞结合，促进水从管腔向间质流的，帮助维持渗透压和体液容量的恒定。
AVP在血浆中浓度很低，并无血管活性作用，但高浓度的AVP作用于V1受体可以引起血管收缩。
存在于大脑轴突的AVP的可能参与学习和记忆过程，正中隆起的AVP纤维可能与促进ACTH释放有关。
血浆和尿液中的AVP浓度可用免疫法测定。
在随意摄入液体的情况下，神经垂体含近6单位或18mmol(20μg)的AVP，外周血AVP浓度在2.3～7.4pmol/L(2.5～8ng/L)。
血中AVP浓度随昼夜变化，深夜及清晨最高，午后最低。
在正常给水时，健康人24小时从脑垂体释放AVP23～1400pmol(400～1500ng)，从尿中排出AVP23～80pmol(25～90ng)。
禁水24～48小时后，AVP的释放增加3～5倍，血及尿中水平持续增加。
AVP主要在肝脏和肾脏灭活，近7%～10%的AVP以活性形式从尿中排出。
（二）AVP释放的调节1.渗透压感受器：AVP的释放受多种刺激的影响。
正常情况下AVP的释放主要由于下视丘的渗透压感受器调节，渗透压的变化刺激AVP的产生与释放。
血浆渗透压变化与AVP释放的反馈调节机制使血浆渗透压维持在狭小的范围。
给于正常人20ml/kg水负荷后，平均血浆渗透压为281.7mOsm/kg·H2O在给于水负荷的人注射高渗盐水后血浆渗透压为287.3/kg·H2O。
抗利尿激素介绍
化验介绍：
由垂体后叶（神经垂体）分泌细胞合成。
它和催产素均由9个氨基酸残基所组成。
⽂献上常称它们是8肽，是把分⼦中的两个半胱氨酸残基当成⼀个胱氨酸来计算的。
ADH的主要⽣理功能是促进⽔在肾⼩管远曲⼩管和集合管内的重吸收，使尿量减少，产⽣抗利尿作⽤。
⼤剂量的ADH还有加压作⽤，它可普遍地引起体内各部分⼩动脉和⽑细⾎管的收缩，所以抗利尿素⼜有加压—抗利尿素之称，但在⽣理情况下，抗利尿素的分泌量不⾜以引起加压效应，⽽抗利尿作⽤很强。
临床意义：
增加：⽀⽓管癌或其它癌症可产⽣外源性ADH，哮喘持续状态，中枢神经系统疾病；如脑膜炎、头部外伤，脑肿瘤，动脉内膜炎，蛛膜下腔出⾎，Guilain—Barre综合征。
肺炎，结核病，急性间歇性⾎紫质症。
减少：尿崩症，充⾎性⼼⼒衰竭，肾病综合征。
参考值：
饮⽔时：0.45ng/L；不饮⽔时1.3～7.0ng/L。
《和肽素》论文
和肽素（copeptin）和肽素（copeptin）、神经垂体素运载蛋白（neurophysin）以及精氨酸加压素/抗利尿激素（arginine vasopressin ，AVP）共同组成加压素原（pre-provasopressin）。
和肽素（copeptin）在1972年被科研人员所发现，并且当时有相关方面的报道指出：和肽素（copeptin）由39个氨基酸残基的糖肽构成，是血管加压素即抗利尿激素（AVP）的前体。
精氨酸加压素/抗利尿激素(arginine vasopressin,AVP)是由下丘脑分泌，在中枢系统可调节脑部组织代谢和调和颅内压，具有收缩血管、升高血压、加强记忆、参与集体应激反应、参与体温及免疫调节等生理功能。
和肽素(copeptin)作为一种与精氨酸加压素/抗利尿激素(arginine vasopressin,AVP)同源的生物素，其分泌量和精氨酸加压素（AVP）大致相同，和肽素作为含有39个氨基酸残基的糖肽,为抗利尿激素原(provasopressin)的C端部分肽段。
近年来的有关研究发现,和肽素（copeptin）与通常用来作为糖尿病以及心脏衰竭预测指标的精氨酸加压素（AVP）相比，在人体内较化学性质较为稳定,其检测方法也更为方便、快捷，另外的，和肽素在血浆中的变化趋势和精氨酸加压素(AVP)在很大程度上也趋向于一致。
精氨酸加压素(AVP)对于维持机体水平衡、血容量即循环功能有重要意义,此外还在细胞收缩、增殖和肾上腺皮质激素的分泌等方面扮演重要角色。
因此，在多种疾病，例如：不稳定型心绞痛、慢性阻塞性肺疾病、糖尿病等的患者中,精氨酸加压素（AVP）水平和常人相比，明显升高,并且与疾病严重程度和预后密切相关。
作为精氨酸加压素原的片段,和肽素（copeptin）具有生物学效应稳定、检测迅速方便、易保存等特点,且血浆和肽素（copeptin）与精氨酸加压素（AVP）水平明显相关,可作为其检测的替代物。
抗利尿激素的作用部位
抗利尿激素的作用部位
肾上腺激素（别称血管升压素）是由下丘脑垂体的视上核日式榻榻米旁核的神经元细胞代谢的9肽生长激素，经下丘脑垂体—脑垂体束抵达神经垂体后叶后释放出。
其关键功效是提升远曲小管和集合管对水的渗透性，推动水的消化吸收，是尿里萃取和稀释液的至关重要调整生长激素。
除此之外，该生长激素还能提高内髓部集合管对尿素溶液的渗透性。
肾上腺激素的功效位置是集合管。
肾上腺激素的生理学功效
血压抗有利排尿：ADH与肾远曲小管和集合管的特异性蛋白激酶融合变成生长激素-蛋白激酶一氧化氮合酶，激话腺苷酸环化酶，使ATP转化成cAMP，在cAMP的功效下激话蛋白激酶，使膜蛋白磷酸化，肾小管鳞状上皮细胞对水的渗透性提升，水顺着渗入梯度方向普攻地分解代谢。
血液升血压：ADH使血管和內脏平滑肌收拢，造成充压功效。
生成的ADH可用以治疗食道静脉曲张裂开流血。
补充激动ACTH释放出来：ADH具备促肾上腺生长激素释放出来因素(CRF)样推动ACTH的释放出来功效，可能系立即功效于脑垂体前叶而刺激性ACTH释放出来，但并不是CRF。
负重在小动物中有提高记忆力的功效。
在试验大白鼠中有推动糖原分解，抑止油酸合成作用。
血管加压素简介
血管加压素简介目录•1精氨加压素说明书o 1.1药品名称o 1.2英文名称o 1.3血管加压素的别名o 1.4分类o 1.5剂型o 1.6精氨加压素的药理作用o 1.7精氨加压素的药代动力学o 1.8精氨加压素的适应证o 1.9精氨加压素的禁忌证o 1.10注意事项o 1.11精氨加压素的不良反应o 1.12精氨加压素的用法用量o 1.13血管加压素与其它药物的相互作用这是一个重定向条目，共享了精氨加压素的内容。
为方便阅读，下文中的精氨加压素已经自动替换为血管加压素，可点此恢复原貌，或使用备注方式展现1血管加压素说明书1.1药品名称血管加压素1.2英文名称Arginine Vasopressin1.3血管加压素的别名必压生；长效尿崩停；加压素；抗利尿激素；精氨加压素；Arginine Vasopressin；Pitressin；Pitressin Tannate；Vasopressin；Vasopressinum1.4分类内分泌系统药物 > 下丘脑及影响内分泌的药物1.5剂型5ml∶100mg。
贮法：避光，凉处保存。
1.6血管加压素的药理作用血管加压素对肾脏有直接的抗利尿作用，也能收缩周围血管，并引起肠道、胆囊及膀胱的收缩。
但血管加压素几乎无催产作用。
1.7血管加压素的药代动力学血管加压素注射液吸收慢，具有长效抗尿崩症的作用，可减少用药次数。
一次注 *** 氨加压素0.3ml，可维持2～6天；注射1ml，可维持10天左右。
血管加压素在肝、肾脏内失活，以代谢产物及药物原形从尿中排出。
1.8血管加压素的适应证1.用于尿崩症的治疗。
2.用于脑外科手术或头颅创伤后多尿的初期治疗。
3.也用于其他药物效果不佳的腹部肌肉松弛。
4.亦用于食管、胃肠道等消化道疾病引起的急性大出血的辅助治疗。
1.9血管加压素的禁忌证1.对加压素或血管加压素过敏者。
2.动脉硬化患者。
3.心力衰竭患者。
4.冠状动脉疾病患者。
5.高血压患者。
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人抗利尿激素/血管加压素/精氨酸加压素(ADH/VP/AVP)酶联免疫分析试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用
产品编号：CSB-E09080h
检测范围：7.8 pg/ml - 500 pg/ml
最低检测限：1.95 pg/ml
特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的人ADH，且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期：6个月
预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中ADH含量。
说明
1. 试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2. 浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3. 中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4. 刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
实验原理
用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗ADH抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗ADH抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的ADH呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制
1. 酶联板(Assay plate )：一块（96孔）。
2. 标准品（Standard）：2瓶(冻干品)。
3. 样品稀释液(Sample Diluent)：1×20ml/瓶。
4. 生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液（HRP-avidin Diluent）1×10ml/瓶。
6. 生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）。
7. 辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）。
8. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9. 浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10. 终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
需要而未提供的试剂和器材
1. 标准规格酶标仪
2. 高速离心机
3. 电热恒温培养箱
4. 干净的试管和Eppendof管
5. 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器
6. 蒸馏水，容量瓶等
标本的采集及保存
1. 血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000 g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
标本的稀释原则：
首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。
只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。
稀释的过程中，应做好详细的记录。
最后计算浓度时，稀释了"N"倍，标本的浓度应再乘以"N"。
标准品的稀释原则：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为500 pg/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释500 pg/ml，250 pg/ml，125 pg/ml，62.5 pg/ml，31.2 pg/ml，15.6 pg/ml，7.8 pg/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml，临用前15分钟内配制。
如配制250 pg/ml标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）500 pg/ml的上述标准品加入含0.5ml 样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
生物素标记抗体的稀释原则：
临用前以生物素标记抗体稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。
如10μl生物素标记抗体加990μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则：
临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。
如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
操作步骤
实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。
每次检测都应该做标准曲线。
如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。
1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。
空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。
为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。
每孔加生物素标记抗体工作液100μl（取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。
3. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，200μl/每孔，甩干。
4. 每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物素标记抗体工作液）100μl，37℃，60分钟。
5. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，200μl/每孔，甩干。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔显色不明显，即可终止）。
7. 依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。
为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。
在加终止液后15分钟以内进行检测。
实验备注
1. 用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。
2. 每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加底物溶液及2N H2SO4。
测量时先用此孔调OD值至零。
3. 为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。
4. 未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。
标准品、生物素标记抗体工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。
请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素标记抗体工作液、或辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。
5. 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内，浸泡1-2分钟。
根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
计算
以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项
1. 本操作说明适用于48T试剂盒，但48T试剂盒所有试剂减半。
2. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。
3. 洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。
4. 一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
5. 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
6. 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请最后乘以稀释倍数。
7. 在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。
8. 底物请避光保存。
9. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。
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