第2章讲义细胞生物学技术
细胞生物学课件PDF 细胞生物学技术
戊二醛 CH2
C
O
H
包埋剂: 环氧树脂(万能胶)
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不使用超薄切片的
透射电镜技术
负染法和投影法
负染法是在将颗粒和纤
维样品分散在具有亲水性支 撑膜的载网上以后，滴加磷 钨酸或醋酸双氧铀等染料， 并随即吸去多余的染液。样 品干燥后残余染料将沉积在 样品的周围以及样品的凹陷、 空隙处，而样品本身反而呈 浅色，故称为负染。
把放射性前体(例如3H-胸苷、14C-尿苷和
3H-亮氨酸分别是DNA、RNA和蛋白质合成的前
体)加到细胞中，使放射性前体与已存在的前体
分子混合，因为它们原子之间仅是原子核重量
不同，而化学性质相同，这样，细胞就以同样
方式对其产生反应。
蛋白质
3H-亮氨酸
细胞
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2.3.3. 放射自显影技术
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首页 用超速离心机分离细胞器和大分子
用制备超速离心机可从细胞匀浆的混合物中分 离出细胞的各种组分。
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首页 离心级段
图解表示如何用递增的速 度反复离心、分离纯化细胞提 取液较小的细胞组分一般要求 巨大的离心力速度才能沉淀。 图中备个离心级段的典型数值：
低 速： 1000g l 0分钟 中 速： 2000g 20分钟 高 速： 80000g 1小时 超高速：150000g 3小时
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首页 复型和冷冻蚀刻技术
升华后，细胞内外
凡空隙处或含游离水较 多的地方将下陷，从而 除上述膜的脂质面外， 其他一些结构也被显示 出来，并进一步增强了 断面的浮雕效果。
(完整版)细胞生物学知识点总结
细胞生物学目录第一章绪论第二章细胞生物的研究方法和技术第三章质膜的跨膜运输第四章细胞与环境的相互作用第五章细胞通讯第六章核糖体和核酶第七章线粒体和过氧化物酶体第八章叶绿体和光合作用第九章内质网，蛋白质分选，膜运输第十章细胞骨架，细胞运动第十一章细胞核和染色体第十二章细胞周期和细胞分裂第十三章胚胎发育和细胞分化第十四章细胞衰老和死亡第一章绪论1.原生质体：被质膜包裹在细胞内的所有的生活物质，包括细胞核和细胞质细胞质：细胞内除核以外的原生质，即细胞中细胞核以外和细胞膜以内的原生质部分原生质体：除去细胞壁的细胞2.结构域：生物大分子中具有特异结构和独立功能的区域3.装配模型：模板组装，酶效应组装，自组装4.五级装配：第一级,小分子有机物的形成第二级，小分子有机物组装成生物大分子第三级,由生物大分子进一步组装成细胞的高级结构第四级,由生物大分子组装成具有空间结构和生物功能的细胞器第五级，由各种细胞器组装成完整细胞6.支原体：目前已知的最小的细胞第二章细胞生物的研究方法和技术1.显微镜技术：光镜标本制备技术、2.光镜标本制备技术步骤：样品固定、包埋与切片、染色3.电子显微镜种类：透射电子显微镜，扫描电镜，金属投影，冷冻断裂和冷冻石刻电镜，复染技术，扫描隧道显微镜4.细胞化学技术：酶细胞化学技术，免疫细胞化学技术，放射自显影5.细胞分选技术：流式细胞术6.分离技术：离心技术，层析技术，电泳技术第三章质膜的跨膜运输1.细胞功能：外界与通透性障碍，组织和功能定位，运输作用，细胞间通讯，信号检测2.膜化学组成：膜脂，膜糖，膜蛋白3.膜脂的三个种类：磷脂，糖脂，胆固醇4.脂质体用途：用作生物膜的研究模型，作为生物大分子与药物的运载体5.膜糖功能：细胞与环境的相互作用，接触抑制，信号转导，蛋白质分选，保护作用。
6.膜蛋白类型：整合蛋白，外周蛋白，脂锚定蛋白7.膜蛋白功能：运输蛋白，酶，连接蛋白，受体（信号接受和传递）8.不对称性的研究方法：冰冻断裂复型，冰冻蚀刻9.膜流动性研究方法：质膜融合，淋巴细胞的成斑成帽效应，荧光漂白恢复技术10.膜流动性的重要性：酶活性，信号转导，物质运输，能量转换，细胞周期11.影响膜脂流动性的因素：脂肪酸链，胆固醇，卵磷脂/鞘磷脂比值12.影响膜蛋白流动的因素：整合蛋白，膜骨架，细胞外基因，相邻细胞，细胞外配体、抗体、药物大分子13.膜骨架的主要蛋白：血影蛋白，肌动蛋白和原肌球蛋白，带4.1蛋白，锚定蛋白14.转运蛋白质包括：载体蛋白，通道蛋白15.协同运输的方向：同向协同，反向协同第四章细胞与环境的相互作用1.细胞表面结构：细胞外被、膜骨架、胞质溶胶2.细胞外被功能：连接，细胞保护，屏障3.糖萼：由细胞表面的碳水化合物形成的质膜保护层，又称为多糖包被。
《细胞生物学》学习指南
第一章细胞概述细胞生物学的发展经历了从细胞的发现、细胞学说的建立,以及对细胞分裂和细胞器做基本描述的经典时期；直到1953年DNA双螺旋分子结构的确立，伴随着研究手段的进展,细胞生物学才得以确立并得到突飞猛进的发展.近代分子生物学的迅速发展极大地促进了细胞生物学的进步，而分子生物学的研究离不开细胞这个平台。
在这两门生命科学前沿学科的相互促进协调发展中逐渐实现了细胞科学从细胞生物学到细胞分子生物学的转变。
无论是根据细胞的进化,细胞的功能和形态，都可以将细胞人为的分成三大系统:细胞的膜系统，细胞的核系统和细胞的骨架系统。
第二章细胞生物学技术细胞生物学是研究细胞结构与功能的学科，细胞生物学研究方法的建立与完善，促进了细胞生物学的发展.本章重点介绍了细胞生物学领域中最常用的技术方法与基本原理，并简要介绍了该技术的基本延伸。
细胞形态结构的观察依赖于显微镜技术。
复式光学显微镜是光镜下观察细胞结构的基础,适用于观察活体或固定染色的样品.荧光显微镜技术与免疫学技术相结合,实现了生物大分子在细胞内的定位与分布的观察。
相差显微镜和微分干涉显微镜技术，适用于观察活体细胞的结构，结合荧光标记技术可以对细胞活体示踪与观察。
激光共聚焦显微镜利用共焦光路和激光扫描技术,可排除焦平面以外光的干扰，增强图像反差和提高分辨率.但光学显微镜具有局限性，它不能分辨﹤0。
2 μm的物体,而利用电子束对样品成像而制成的电子显微镜,已成为研究机体微细结构的重要手段.根据观察样品的需要，可对观察样品采用特殊的制样方法,如超薄切片技术适于观察细胞内部精细结构，而扫描电镜则用来观察细胞表面形貌特征。
细胞组分的分析可以采用细胞化学、免疫荧光、免疫电镜、原位杂交等方法。
超速离心技术与生化提纯可用于细胞组分的分离与纯化.同位素标记技术与放射自显影技术结合,可应用于研究生物大分子在细胞内的动态变化。
细胞培养技术是细胞工程的基础，细胞融合、杂交瘤制备及组织工程都建立在良好的细胞培养技术基础之上。
02细胞生物学技术PPT课件
15
相差显微镜和微分干涉差显微镜
用相差显微镜和微分干涉差显微镜可直接从显微中 观察未经固定和染色的活细胞。
通过活细胞的光的相位 发生了变化，相差和微分干 涉差显微镜可使光相位变化 转变为振幅变化，产生高反 差影像。
不同显微结构的尺寸
由左至右依次为动物细胞、细菌、线粒体、流感病毒、核糖 体、绿色荧光蛋白、胸腺嘧啶。虚线为光学显微镜分辨极限。
5
凸透镜的五种成象规律
物距 (u)
像距(v) 正倒
大小
虚实
u>2f 2f>v>f 倒立 缩小 实像
u=2f v=2f 倒立 等大 实像
2f>uቤተ መጻሕፍቲ ባይዱf v>2f 倒立 放大 实像
• 由电子照明系统、电磁透镜成像系统、 真空系统、记录系统、电源系统等5部 分构成；
• 分辨率0.2nm，放大倍数达百万倍； • 用于观察超微结构（小于0.2µm）。
27
制样技术
超薄切片技术 固定技术 负染法和投影法 复型和冷冻蚀刻技术
28
超薄切片技术
电子的穿透能力很弱， 因此要把样品做成很薄。
2. 熟悉细胞生物学基本研究方法的技术特点。 3. 了解细胞生物学研究方法的进展。
3
细胞生物学的许多进展，尤其是近年来振奋 人心的发展，都是由于引入新研究方法的结果。
1 显微镜技术 2 细胞培养 3 细胞及其组份的分离和纯化 4 重组DNA技术 5 细胞工程技术
4
一、显微镜技术
一个典型的动物细胞，直径为10~20µm，比 人肉眼能见到的最小颗粒还小5倍。
最常用的是50纳米左右 的切片，即一个一般大 小的 动物细胞要切成300片。 用超 薄切片机 （ultramicrotome） 制作。
细胞生物学技术
第二章细胞生物学技术细胞生物学的发展是与实验技术的进步密切相关的，细胞生物学的每一个重大进展都是由于引入了新的研究技术的结果。
光学显微镜的发明开创了细胞学，电子显微镜的出现使人们对细胞结结构的认识深入到超微结构水平。
细胞化学和分析细胞学技术可对细胞的各种成分进行定位和定量的分析，有利于细胞结构与功能的研究。
细胞培养技术可将细胞在体外环境中生长，在体外研究细胞的结构、功能和生命活动规律，而细胞工程技术则可人为地将细胞进行改造，以获得具有特定生物学特性的细胞。
近年来，分子生物学技术的广泛应用，更有力地推动了细胞生物学的发展。
细胞生物学技术种类很多，包括物理技术、化学技术和实验生物学技术等，本章仅对主要的细胞生物学技术作简略的介绍，对于在细胞生物学研究中广泛应用的分子生物学技术，由于篇幅有限，本书不作介绍了。
第一节显微镜技术显微镜技术是细胞学和细胞生物学得以建立和发展的重要工具，包括光学显微镜（light microscope）、电子显微镜(electron microscope )和扫描探针显微镜(scanning probe microscope)三个层次的显微镜和相应的技术。
在光学显微镜下看到的细胞结构称为细胞显微结构（microscopic structure），由于受到分辨率的限制，光学显微镜不能分辨直径小于0.2μm的结构，如生物膜、细胞骨架和一些细胞器等。
电子显微镜下则可以观察到这些光学显微镜下看不到的结构，称为细胞亚显微结构（submicroscopic structure）。
随着电子显微镜分辨率的不断提高，再结合一些其他技术如扫描探针显微镜和X光衍射等，己使人们对细胞结构的认识达到分子水平。
一般把细胞从亚显微水平到分子水平的结构统称为细胞超微结构（ultrastructure）。
图2-1显示了不同分辨率时所看到的拇指表皮结构，从大体、显微、亚显微、一直到分子、原子水平。
图2-1 细胞与原子比例图（引自Alberts等，2002）参照前书图2-1一、显微镜与分辨率人类最初只是用肉眼直接观察周围世界，可是人眼观察事物的能力是有限的，一般情况下在25cm的明视距离内，只能分辨相距0.1～0.2mm的两个物体，如果小于这一距离，人的眼睛就不能分辨。
《细胞生物学》第二章细胞基本知识ppt课件
植物细胞模式图
是代谢与功能的基本单位，具有完整的代谢和 调节体系，不同的细胞执行不同的功能；
是遗传的基本单位，具有发育的全能性
细胞概念的一些新思考
细胞是多层次、非线性的复杂结构体系
细胞是物质（结构）、能量与信息过程 精巧结合的综合体
细胞是高度有序的，具有自装配与自组 织能力的体系
组成细胞的化学元素
元素 C、H、O、N、P、S、Ca、 K、Fe、Na、Cl、Mg 化合物 无机物（水、无机盐）
弹形：形似子弹头，如狂犬病病毒等，其他 多为植物病毒;
砖形：如痘病毒、天花病毒等； 蝌蚪形：由一卵圆形的头及一条细长的尾组
成，如噬菌体
疱疹病毒 腺 病 毒
人类天花病毒
骨髓灰质炎病毒
病毒衣壳的排列
蛋白质感染因子
• S. B. Prusiner 1982年发现于患羊瘙痒病的仓鼠， 命名为prion。Prusiner因此于1997年获得诺贝尔 奖
• 克-雅二氏病：1913, 德国 不知名物质危害人
类脑细胞
• 克鲁病：1950，新几内亚发现 “笑死病” 相识 • 羊搔痒症：1959，伦敦发现羊的疾病与克鲁病 • 疯牛病：1985，英国发现，人类被感染
PRION感染
第三节 原核细胞与古核细胞
一、支原体(mycoplast)（最小、最简单的细胞） 膜，环状双螺旋DNA，多聚合糖体，700多种蛋 白；细菌的1/10，在培养基上生长
第二章 细胞基本知识概要
第一节 细胞基本概念 第二节细胞形态的生命体
- 病毒及其与细胞关系 第三节 原核细胞与古核细胞 第四节 真核细胞基本知识概要
第一节 细胞基本概念
细胞是一切生命活动的基本结构和功能单位
细胞是由膜包围的原生质团，通过质膜与周围 环境进行物质和信息交流；
(细胞生物学)02第二章细胞的概念与分子基础14
生物小分子
单糖
有机小分子 脂肪酸
细
氨基酸
核苷酸
核酸
有
机
胞
蛋白质
化 合
生物大分子 脂类
物
多糖
一、生物小分子
(一)无机化合物
1.水 细胞中含量最大（75%），极性小分子，是良 好的溶剂，是细胞内生化反应的场所。 游离水 结合水
2.无机盐
以离子形式存在。
种类
阳离子：Na+,K+,Ca2+,Fe2+,Mg2+等 阴离子：Cl-,SO42-,PO43-,HCO3-等
草 履 虫
巨 噬 细 胞
神 经 元 细 胞
细胞形态多样性与功能相适应
2.细胞的大小
变异范围很大：人与动物10—100μm ，人体卵细胞， 直径100μm ，小淋巴细胞直径4—5μm ，鸵鸟卵直径达 12cm .支原体直径0.lμm，人的坐骨神经细胞可长达1m。
大 多 数 动 植 物 细 胞 直 径 在 20~30μm 间。一般真核细胞的体积大于原核细 胞，卵细胞大于体细胞。
3.RNA的结构与功能
RNA为单链，可自身回折形成局部假双链（发夹结构）。
mRNA (信使RNA) tRNA (转运RNA)
分 rRNA (核糖体RNA) 类 snRNA (小核RNA)
miRNA (微小RNA) piRNA (Piwi蛋白相互作用RNA) 有酶活性的RNA (核酶)
三种RNA分子的结构特征和功能比较
精 子
3. 细胞的数量 单细胞生物 多细胞生物 新生儿1.5*1012 ，成人2.2*1014
（二）真核细胞的基本结构
细胞膜
光
镜 下
细胞质
细胞生物学重点讲义
《细胞生物学》重点讲义第1章—绪论1、概念：细胞生物学2、9世纪自然科学的“三大发现”：细胞学说、能量转化与守恒定律、达尔文进化论第2章—细胞基本知识概要1、概念：细胞2、如何理解细胞是生命活动的基本单位？3、病毒的结构及其增殖过程？第3章—细胞生物学研究方法略第4章—细胞膜与细胞表面1、概念：细胞膜、生物膜、细胞连接、胶原2、生物膜的基本结构特点是什么？这些特征与它的生理功能有什么关系？3、细胞连接有哪几种类型？各有何功能？第5章—物质的跨膜运输与信号传递1、概念：协同运输（共运输与对向运输）、细胞通讯、细胞识别、细胞信号通路、分子开关蛋白2、物质的跨膜运输方式与哪些？各有什么特点？3、Na+-K+泵的工作原理？4、胞饮作用与吞噬作用的比较？5、细胞有哪些方式进行通讯？各种方式之间有何不同?6、细胞有哪几种方式通过分泌化学信号进行细胞间相互通讯?第6章—细胞质基质与细胞内膜系统1、概念：蛋白质分选、信号肽、共转移、后转移2、信号假说的主要内容？第7章—细胞的能量转换—线粒体和叶绿体1、概念：呼吸、呼吸链、光合作用、光反应中心2、线粒体各结构上的标志酶分别是什么？3、光合作用的过程4、线粒体的氧化磷酸化与叶绿体的光合磷酸化的异同点5、氧化磷酸化偶联机制的化学渗透假说的内容第8章—细胞核与染色体1、概念：核孔复合体、染色体、染色质、核小体、常染色质、异染色质（结构异染色质和兼性异染色质）、2、核孔复合体的功能3、染色体DNA的三种功能元件第9章—核糖体略第10章—细胞骨架1、概念：细胞骨架、细胞核骨架2、微管和微丝的特异性药物第11章—细胞增殖及其调控1、概念：细胞周期、检验点、细胞周期同步化、联会、二价体、四分体、2、细胞周期中各个时期及其主要事件（包括有丝分裂和减数分裂）第12章—细胞分化与基因表达调控1、概念：细胞分化、细胞癌变、转分化、去分化、再分化、再生、细胞全能性、癌基因、抑癌基因2、细胞分化的影响因素3、癌细胞的基本特征4、良性肿瘤与恶性肿瘤的区别第13章—细胞衰老与凋亡1、概念：细胞衰老、Hayflick界限、细胞凋亡、细胞坏死2、细胞衰老的特征3、细胞凋亡的特征4、细胞凋亡与细胞坏死的区别。
细胞生物学ppt课件
■ 细胞都具有遗传物质和遗传体系 细胞内最重要的物质就是遗传物质DNA。 现有的研究表明，在生命的进化过程中，最早的遗传物质是RNA而不是DNA，也就是说先出现RNA，后逐渐进化形成DNA。 证明最早的遗传物质是RNA而不是DNA的证据是什么?
6、一个细胞生存与增殖必须具备的结构为 、 、 和催化酶促反应所需要的酶。 7、病毒的抗原性是由 来决定的。 8、原核细胞和真核细胞核糖体的沉降系数分别为 和 。 9、细菌细胞表面主要是指 和 及其特化结构 、 和 等。 10、真核细胞亚显微水平的三大基本结构体系是 、 和 。 11、目前发现的最小最简单的细胞是 ，直径只有 。 12、细胞的 与 的相关性和一致性是很多细胞的共同特点。
■ 细胞都具有核糖体 所有类型的细胞（除红细胞外），包括最简单的支原体都含有核糖体。真核细胞和原核细胞的核糖体不仅功能相同，在结构上也十分相似，都是由大小两个亚基组成的，只不过原核细胞的核糖体比真核细胞的核糖体稍小一些。
第二节 原核细胞 Prokaryotic cell
第二章 细胞的统一性与多样性
第一节 细胞的基本概念 一、 细胞区别于无机界的主要特征： 1.在结构上具有自我装配的能力； 2.在生理活动中具有自我调节能力； 3.在增殖上具有自我复制的能力。 这些特征也可以说是生命的特征，它们的丧失即意味着死亡。
如何理解细胞是生命活动基本单位？
（一）一切有机体都由细胞构成，细胞是构成有机体的基本单位 （二）细胞具有独立的、有序的自控代谢体系，细胞是代谢与功能的基本单位 （三）细胞是有机体生长与发育的基础 （四）细胞是遗传的基本单位，细胞具有遗传的全能性 （五）没有细胞就没有完整的生命
细胞生物学技术
1.可以直接观察和分辨单离子通道电流及其 开闭时程，使细胞信号的跨膜转导和细胞 分泌机制的研究更加直接。
2.能够区分离子通道的离子选择性，可以借 此技术发现新的离子通道。极大的推动了 细胞生物学的发展。
3.可以应用与药物开发和药理分析推动医学 进一步发展。
电泳技术
概念：电泳是指混悬于溶液中的样品电荷颗粒,在 电场影响下向着与自身带相反电荷的电极移动的 现象。
分离提纯一些微量物质，在医学诊断及刑 侦方面的应用广，具有准确操作简单等优 点。
在农业中应用于鉴别假冒伪劣种子，比之 传统的生态法鉴种，具有速度快，可靠性 强，成本少，不受环境影响等优点。
原理：一些基团在溶液中能吸收或者给出氢离子， 从而成为电荷粒子；又由于电荷粒子的多少不等 以及影响下，它们移动的速度 也不相同了。人们利用这种特性，用电泳的方法 对上述物质进行定性及定量分析，或者将一定的 混合物分离成。它是一项生物学研究中常用的技 术。
细胞生物学第二章 细胞生物学技术
人皮肤组织切片照片（苏木素、伊红染色）
3、荧光显微镜技术(fluorescence microscopy) 是以紫外线为光源来激发生物标本中的 荧光物质，产生能观察到各种颜色荧光的一 种光学显微镜。利用它可研究荧光物质在组 织和细胞内的分布。
荧光（Fluorescence）： 细胞中的某些物质（如叶绿素）经紫外线照 射后能发出可见光线，称为荧光。 自发荧光：由细胞本身存在的物质经紫外线 照射后发出的荧光。 诱发荧光：一些细胞成分本身经紫外线照射 后不发荧光，但用荧光染料（酸性品红、甲基绿、 吖叮橙等荧光色素）进行活体染色或固定后切片 染色，就能在荧光镜下看见荧光，这种荧光叫诱 发荧光。
子束的强度，显示出与电子束同步的扫描图像。
为了使标本表面发射出次级电子，标本在固定、脱水后，
要喷涂上一层重金属膜，重金属在电子束的轰击下发出次
级电子信号。
扫描电子显微镜原理
人类红细胞
酵母
人类精子
三、扫描隧道显微镜
scanning tunneling microscope，STM
原理：根据隧道效应而设计，当原子尺度的针尖在不到一
(freeze etching rep1ica e1ectron microscopy) 亦称冰冻断裂。标本置于干冰或液氮中冰冻。然 后断开，升温后，冰升华，暴露出了断面结构。 向断裂面上喷涂一层蒸汽碳和铂。然后将组织溶
掉，把碳和铂的膜剥下来，此膜即为复膜
（replica）。
冷冻：制冷剂（一般为液态氮）快速冷冻，使样 品固定。 断裂：在低温真空中将样品劈开，断裂面上可见 各种细胞内结构
透射电子显微镜
1）、透射电镜标本制备过程:
取材:尽可能保持生活状态,避免损伤必须耐真空。
【精品】细胞生物学讲义
绪论一、细胞生物学的概念二、细胞生物学的学科地位既是基础学科,又是前沿学科三、细胞生物学的主要研究内容＊细胞的结构与功能：细胞核，染色体以及基因表达的研究生物膜与细胞器的研究细胞骨架体系的研究细胞的生命活动:细胞的增裂、细胞的分化、细胞的衰老与凋亡、细胞的起源与进化、细胞工程四、研究细胞生物学有重要的意义*1．揭示生命活动的规律发育、衰老等2．为工农医服务单克隆抗体技术、动物克隆、组织工程、肿瘤等五、细胞学与细胞生物学的发展简史1．细胞的发现技术：显微技术学者：Z。
Jansen和H。
Jansen,R。
Hooke,A.V.Leeuhoek2．细胞学说的建立技术：显微技术学者：M。
J.Schleiden和T.Schwann成果：提出了细胞学说3．细胞学的经典时期技术：显微技术、石腊切片技术和染色技术；观察与描述学者：普金耶、雷马克、弗勒明、高尔基等成果：发现了多种细胞器与细胞的分裂活动4．实验细胞学与细胞学的分支技术：实验手段学者：孟德尔、摩尔根等成果：细胞遗传:受精现象、核质关系、遗传三大规律细胞生理:组织培养技术细胞化学:（化学染色、放射自显影技术免疫荧光技术等）细胞的化学组成5．细胞生物学学科的形成与发展技术:电子显微镜技术、超薄切片技术、分子生物学技术等学者:Ruska，Waston和Crick成果：细胞的超微结构与细胞分子生物学第二章细胞基本知识概要第一节细胞的形状与大小一、细胞的概念细胞是由原生质小团所组成的基本单位,其中含有一个核(或拟核）,四周被膜包围着.二、细胞的形状多样有球状、柱状、纤维状、纺垂体状等.形状的维持：细胞骨架和某些细胞的胞壁三、细胞的大小千差万别测量方法与使用的单位大小悬殊：最小支原体，最大的驼鸟卵细胞四、细胞形态大小与细胞的功能是相适应的1。
细胞的大小有一定的限制2.细胞的形态与功能相适应哺乳动物红细胞神经细胞骨骼肌细胞第二节原核细胞与真核细胞一、原核细胞与原核生物在原核细胞内含有DNA的区域，没有核膜包围，这个区域为拟核，其中只有一条DNA。
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原位杂交技术
2.2.6 定量细胞化学技术
显微分光光度术 （紫外显微分光光度仪、可见光显微分光光度染色）
流式细胞仪
2.2.7 细胞内大分子的分离与分析
2.4 细胞生物学研究的模式生物
病毒（转基因载体） 细菌（大肠杆菌作为基因工程菌株） 酵母（真核表达载体，基因功能分析） 线虫（1000个左右细胞构成） 黏菌（同步化材料） 蛙（卵细胞大，易操作） 果蝇（遗传背景清楚，表型易掌握） 斑马鱼（胚胎发育研究的好材料） 小鼠（与人更接近）
学生报告题目：
2.3.3 显微操作技术
转移细胞核、细胞器、基因等
2.3.4 转基因、基因沉默、基因敲除、模式生物等
转基因技术
显微操作仪
显微操作示意图
基因敲除技术
Mario Capecchi (Late 1980s) (University of Utah) embryonic stem cells in inner cell mass as target cells 1/104 cells undergo a process of homologous recombination.
细胞提取物，细胞核提取物
动物细胞培养
细胞的克隆
植物组织培养
2.3.2 细胞工程
1）细胞融合与杂交 植物细胞先去壁； 融合方式：仙台病毒或聚乙二醇介导，电融合等 同核融合细胞，异核融合细胞，染色体丢失
2）单克隆抗体技术 1975年英国科学家Milstein and Kohler, 1984年获诺贝尔奖 B淋巴细胞 + 小鼠骨髓瘤
2.1.2 电子显微镜技术
1）电镜基本知识和结构（波长小于0.1nm） 2）样品制备
（超薄切片，负染色，冰冻蚀刻，三维重构，扫描） 3）电镜种类
扫描电子显微镜 透射电子显微镜 扫描隧道显微镜和原子力显微镜
透射电镜及其图像
透射电镜照片
免疫电镜照片
扫描电镜及其图像
扫描电镜照片
冰冻蚀刻技术
冰冻蚀刻电镜技术照片
2.2.3 特异抗原的定性与定位
免疫荧光 免疫电镜 免疫沉淀 Western blotting
2.2.4 放射性标记生物大分子的合成和动态
3H（DNA合成） 35S（蛋白质合成） 14C（碳水化合物合成） 32P（核酸合成） 定性、定位、半定量研究（标记，自显影） 32P（14天）, 14C（5760年）, 3H（12年）, 35S（87天）, 131I （8）
柱层析、分子筛、免疫吸附、免疫沉淀等方法分离 蛋白胞术
2.3 细胞培养、细胞工程与显微操作技术
2.3.1 细胞培养
1）植物细胞 （单倍体细胞培养，原生质体培养，体细胞培养）
2）动物细胞 （原代细胞培养，永生细胞系） 3）非细胞体系 （DNA复制，RNA转录，蛋白质合成，高尔基体的膜泡 运输，细胞核装配等）
负染色电镜技术照片
2.2 细胞组分的分析方法
2.2.1 高速、超速和梯度密度离心分离各种细胞器、生物 大分子及其复合物
差速离心 密度梯度离心
差速离心过程
2.2.2 细胞内核酸、蛋白质、酶、糖类、脂类的显色
DNA：福尔根（Feulgen）反应－－紫红色 多糖类：PAS反应－－黄色 脂肪：苏丹III－－红色 蛋白质：米伦（Millon）－－红色
此处加标题
第2章细胞生物学技术
眼镜小生制作
显微镜成像原理
普通复式光学显微镜
（light microscope）
双目显微镜
正置显微镜
倒置显微镜
相差显微镜
（phase-contrast microscope） （光程差或相位差转变为振幅差，相差板）
微分干涉显微镜
（differential-interference microscope） （厚度差转变为明暗差；增加样品反差，立体感强）
荧光显微镜
（fluorescence microscope）
荧光显微镜及其照片
黏着斑蛋白
细胞骨架
激光共聚焦显微镜
（laser scanning confocal microscope）
激光共聚焦原理
激 光 共 聚 焦 显 微 镜 及 其 显 微 图 像
黏着斑蛋白 细胞骨架（应力纤维） 共定位分析
显微镜的暗视野功能
暗视野成像原理
(A)明视野显微术；(B)相差显微术； (C)微分干涉显微术；(D)暗视野显微术
荧光漂白恢复技术
（fluorescence recovery after photobleaching, FRAP）
荧光共振能量转移技术
（fluorescence resonance energy transfer, FRET）
1，转基因技术及其应用； 2，细胞工程技术在生产实践中的应用； 3，基因敲除技术及其应用； 4，模式生物线虫及其在细胞生物学研究中的应用； 5，模式生物斑马鱼及其在细胞生物学研究中的应用；
按学号分组，按组确定题目，每个组确定一名组长并委派一 个报告人。每个组除提交PPT材料外，要提供一个组长、报告人 和人员分工明细表。每个报告不超过10分钟，提问3-5分钟。
报告安排时间：3月28日 上次作业提交时间：3月14日之前，交给学习委员。
THANKS