狂犬病

• 狂犬疫苗的发展——经历五代疫苗
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神经组织疫苗 禽胚培养疫苗 细胞培养疫苗 亚单位及精致疫苗 基因工程疫苗
神经组织疫苗
• 最早制造狂犬病疫苗的是法国的巴斯德。1882年他成功地应用连续传代 减弱病毒毒力的方法，用适应毒种来制造疫苗。早期的狂犬病疫苗是用 成年山羊和绵羊神经组织经石炭酸或石炭酸和乙醚灭活后制成．用于犬 的免疫。但免疫后不仅引起神经系统副反应，而且疫苗中残余的活毒能 够引起狂犬病。1955年 Fuenialida和 Palacios将狂犬病毒脑内接种 3～ 5日龄的新生鼠。于接种后 4天 收集脑组织。制备了新生鼠脑疫苗。由 于新生鼠脑神经组织中仅存在少量鞘磷脂，所以引发的副反应较少。在 过去的 4O多年里，南美洲广泛使用此疫苗。由于神经组织疫苗注射量 大，接种次数多(14针以上1，抗体产生慢、水平低，含有神经麻痹因子 ，易引发变态反应．而且疫苗中易残留有感染性的活病毒．因此， WHO狂犬病专家委员会已提出尽快停止使用神经组织疫苗。
鸡胚疫苗
• 用鸡胚生产狂犬病疫苗的毒株主要是 Flury和Kelev株。Flury株为 1939年分离自死于 狂犬病名叫Flury的女孩，经 1日龄雏鸡脑内传了 138代减毒，随后又经鸡胚卵黄囊 传 4O～50代 ，取名 Flury鸡 胚株 (Flury LEP1)。Flury LEP对小白鼠、大白鼠和地 鼠经脑内或肌肉途径感染均有致病性，对豚鼠脑内感染有致病性．肌 肉感染则无致 病力。Flury LEP对家兔脑内或肌肉均无致病性．对犬肌 肉注射也没有任何感染症但 对猫和牛仍有致病性，因此认为 LEP株对犬是安全的．被推荐仅供 3月龄 以上犬肌 肉免疫用。LEP株进一步传代至 138代 称为 LEP高 代鸡胚株fFluryHEP1，其毒力进 一步减弱，但对乳鼠脑内接种仍有致病性，被推荐用于犬、猫和牛的肌肉免疫。 Kelev株为 1950年分离 自以色列的一只患狂犬病的犬经鸡胚传 100代减毒 。对地鼠 、豚鼠和家兔肌肉和脑内接种均未感染。用高浓度病毒悬液肌肉接种犬未产生任何 感染症状，用于制备疫苗的毒种为 60—70代鸡胚株，已被推荐用于犬和牛的肌肉注 射。
防制
• 由于该病一出现临床症状即无治疗意义，死亡率高达100％，因 此疫苗预防和控制是对待此病的基本措施。当发现患病动物或可 疑动物不宜治疗，应尽快扑杀，防止其攻击人及其他动物，以免 造成该病的传播。其次就是对犬和猫进行疫苗预防接种，当前大 部分国家所用的兽用狂犬病疫苗主要有三种，即弱毒苗、灭活疫 苗和基因工程疫苗。当前我国兽用的有灭活苗和弱毒苗两种，但 是随着生物和分子生物学技术的发展，新型狂犬病疫苗已经逐渐 走进研究者的视野。例如多肽疫苗、基因工程疫苗、核酸疫苗、 活载体疫苗及植物疫苗等。
狂犬病的诊断与防控
孟祥磊 傅振东
简述
• 狂犬病的病原体主要是狂犬病病毒，它会导致动物的急性脑 炎和周围神经炎症，当神经症状出现后几乎必然死亡，通常 的死亡原因都是由于中枢神经(脑-脊髓)被病毒破坏，最终死 于神经受损导致的脏器衰竭。 • 狂犬病是由狂犬病毒引发的急性、进行性、几乎不可逆转的 脑脊髓炎，是人畜共患的急性传染病。因其有恐水特征，故 又名恐水症，它是目前病死率最高的疾病。 • 1881年法国巴斯德认为本病的病原体是极小的生物，1903年 Negri在狂犬病人尸脑部发现了包涵体，并命名为Negri小体， 直至现在仍然是诊断狂犬病的标准之一。
犬狂犬病的诊断
• 根据病犬的临床症状，结合被咬伤病史及其他可疑情况可以 初步诊断。但要注意与破伤风等病鉴别诊断，确诊需做实验 室检查。 • 常用的实验室诊断方法有内基氏小体检查，酶联免疫吸附试 验，血凝抑制试验，补体结合试验，中和试验等等。
根据临床症状进行诊断
• 典型的狂犬形象为“伸舌红眼夹尾走，耸毛流涎不认人”。狂犬发病 的病程一般可分三期：前驱期的行为改变，通常只有与狗接触较多的 人才易发觉。如平时与你很亲近的狗变得退缩，或找地方躲藏，有时 甚至会跑到很远的地方去。而平时不愿靠拢人的狗却变得与人十分亲 热，舔主人的手和身体，这时狗的唾液中已含有病毒，因此有接触传 染的危险。病狗此时中度发热，少食或不食，还可能会乱咬泥土、石 块、破布等杂物，有时还会呆立凝视，或望空扑咬，遇到刺激则惊恐 万状。前驱期持续 2天左右就进人兴奋期 ，此时病狗表现极不安静， 并常攻击人或其他动物，流涎，尾巴紧紧夹在两后腿间，低头狂奔， 两眼发红，甚至狂咬乱叫，颈项发硬或转动不灵等。此期狂暴发作往 往与抑郁交替出现。病犬卧地不起，但不久又站起，表现一种特殊的 斜视和惶恐的表情，当再次受到外界刺激时，再次发作。最后是麻痹 期，表现为行动摇摆，被毛散乱，下颌下垂，张口伸舌，最终可因呼 吸中枢衰竭或心力衰竭而死。
实验室诊断
• 内基小体检查 取新鲜未固定脑等神经组织制成压印标本或制作 病理组织切片，用Seller氏染色，内基小体呈鲜红色，其中见有 嗜碱性小颗粒。内基小体最易在海马回，大脑皮层椎体细胞和小 脑蒲肯野细胞胞浆内检出，也见于丘脑，桥脑，脊髓，感觉神经 节。 • 动物接种试验 取脑组织制成乳剂，给3-5周龄鼠脑内接种，在接 种后第二天开始每天扑杀，用鼠脑做荧光抗体试验。如接种1-2 周内出现麻痹，脑炎临诊症状，死后脑内检出内基小体，也可做 出诊断
3 兽用弱毒口服疫苗
• 弱毒活疫苗是通过细胞培养生产，所用毒株主要包括 Street Alabama Duferin (SAD) 株、Evelyn— Rokitnicki—Abelseth (ERA)株及其他 SAD 株相关毒株。与灭活疫苗相比，弱毒活疫苗的生产成本低廉，主 要是由于弱毒疫苗株 RV能在动物体内增殖 、合成病毒抗原，能以较 少的病毒量诱导有效地保护性免疫反应，降低了狂犬病疫苗的生产成 本，因而在亚洲、非洲和欧洲部分地区仍被使用。尽管弱毒活疫苗价 格比灭活疫苗低廉．而且可以通过口服途径免疫接种，然而弱毒活疫 苗存在一个致命缺陷：病毒在动物体内增殖时．其残留毒力或致病性 突变有时会致使接种动物发病。世界卫生组织不推介弱毒活疫苗经非 口服途径免疫接种动物，因此，现在灭活疫苗比弱毒活疫苗的使用范 围更为广泛。
பைடு நூலகம்
基因工程疫苗
• 随着现代生物技术的发展和应用，人们开始研究狂犬病病毒重组活疫苗．目的在于 保留狂犬病病毒有免疫原性的抗原部分，而不含狂犬病病毒的致病性，降低组织培 养的生产成本。狂犬病病毒中可诱导中和抗体产生的抗原为糖蛋白(G)，具有诱导细 胞免疫的保护性抗原为核蛋白 (N)。近几年对狂犬病病毒 G和 N 基因表达及免疫效 果进行了研究，主要为口服免疫有效的重组体。 1984年 美国 Wistar研 究所和法国 Trangen合作研究，由 Kieny等合成了一种新疫苗。用牛痘病毒加人狂犬病毒的糖蛋 白抗原基因，称为 VRG (Vaccinia RabiesGlycoprotein)。VRG 的主要步骤是先克隆 G基因的 cDNA，经 修饰后拼接启动子及痘病毒的 TK基因构成载体，再与感染痘病 毒的细胞进行重组。再经空斑克隆 3次纯化后 ，经 Southemblot、免疫荧光、免疫 印染等证实表达的糖蛋白分子量为 66kD，与天然糖蛋白相同。可在 Veto细胞系上 培养。VRG口服疫苗于 1987年 l0月 24日在比利时进行投放，共投放了 250个诱饵 。对实验中心地区 238个诱饵进行观察，在投放后 94％的诱饵被 吃掉。温度在一 10-20℃的条件下 ．VRG保存 90天没有明显的滴度变化．只有在 4个月时发生下降 。由此可见 VRG株 VI 服疫苗具备有效性、无毒性和热稳定性的特点。1989年加拿 大 Prevec等将狂犬病病毒 ERA株的糖蛋 白基因 cDNA重组到人腺病 毒 5型基 因组 中。获得重组体HAd5RG。臭鼬口服 HAd5RG后。保护率 100％基因重组口服疫苗 比现行活疫苗更安全、更便于生产，而且成本低，使用方便。