两种高效液相色谱系统灵敏检测血浆中双酚A的方法
免疫亲和柱净化-高效液相色谱法检测食品中的双酚A
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中 检 维 康
饮料：准确量取样品25mL于50mL容量瓶中，调节PH值7-8左右， 用 pH7.4 PBS溶液定容至50mL，准确 移取吸取下层液40.0 mL，备用。
1） 样品的净化 双酚A免疫亲和柱的柱容量(最大吸附双酚A)为500ng，当样品中双酚A超过测定范围时，请适当减小上 柱体积，使其在检测范围内，计算出准确含量。 牛奶,奶粉（测定范围：牛奶样品 0-50μg/L，奶粉样品 0-500μg/kg） 将免疫亲和柱连接于 20.0mL 玻璃注射器下。准确移取 20.0mL 样品提取液注入玻璃注射器中，将空气 压力泵与玻璃注射器连接， 调节压力使溶液以约 2mL/min （1 滴/秒） 流速缓慢通过免疫亲和柱， 直至 2~3mL 空气通过柱体。 以 2-3mL/min （1-2 滴/秒） 流速用 10.0mL 水淋洗柱子 1 次， 弃去全部流出液， 并使 2mL~3mL 空气通过柱体。准确加入 1.0mL 色谱级甲醇洗脱，流速为 1 mL/min ~2mL/min（1 滴/秒） ，收集全部洗 脱液于玻璃试管中， 50 C 下氮气浓缩吹干后，用流动相定容至 0.5 mL，供 HPLC 或 LC-MS 分析。 饮料（测定范围： 0-25μg/L） 将免疫亲和柱连接于 50.0mL 玻璃注射器下。准确移取 40.0mL 样品提取液注入玻璃注射器中，将空气 压力泵与玻璃注射器连接， 调节压力使溶液以约 2mL/min （1 滴/秒） 流速缓慢通过免疫亲和柱， 直至 2~3mL 空气通过柱体。 以 2-3mL/min （1-2 滴/秒） 流速用 10.0mL 水淋洗柱子 1 次， 弃去全部流出液， 并使 2mL~3mL 空气通过柱体。准确加入 1.0mL 色谱级甲醇洗脱，流速为 1 mL/min ~2mL/min（1 滴/秒） ，收集全部洗 脱液于玻璃试管中， 50 C 下氮气浓缩吹干后，用流动相定容至 0.5 mL，供 HPLC 或 LC-MS 分析。 婴幼儿米粉:（测定范围：0-100μg/kg） 将免疫亲和柱连接于 50.0mL 玻璃注射器下。准确移取全部 60.0mL 样品提取液注入玻璃注射器中，将 空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约 2mL/min（1 滴/秒）流速缓慢通过免疫亲和柱，直 至 2~3mL 空气通过柱体。以 2-3mL/min（1-2 滴/秒）流速用 10.0mL 水淋洗柱子 1 次，弃去全部流出液， 并使 2mL~3mL 空气通过柱体。准确加入 1.0mL 色谱级甲醇洗脱，流速为 1 mL/min ~2mL/min（1 滴/ 秒） ， 收集全部洗脱液于玻璃试管中，50 C 下氮气浓缩吹干后， 用流动相定容至 0.5 mL， 供 HPLC 或 LC-MS 分析。 注：为了节约实验时间，可以省去氮气吹干的步骤，将 1.0mL 色谱级甲醇洗脱液直接注入 HPLC 检测 （前提是液相色谱仪条件允许） ，因此，检测灵敏度会降低 2 倍。 注意事项 1) 不要随便更改操作说明书中的操作步骤，如需更改要和本公司技术部联系，确认更改是否合理。 2) 操作步骤中，样品过柱，淋洗，洗脱时，一定要控制好流速，不能太快，否则会使检测结果偏低。 3) 如果将标准品直接过柱验证回收率时，一定要确保标准上柱液中甲醇浓度不要超过 10%，否则会影响 柱子的吸附能力。 4) 试验中使用的玻璃仪器等，一定要清洗干净，尤其是用次氯酸等处理过的仪器，否则会使检测结果偏 低。 需要准备的设备及试剂（中检维康提供） C/N 编号 21022 物品 Clover 六位泵流操作架（配有 1 台空气泵，6 个20202 31955 31240 36010 34000 36020 35016 C546150-U C546250-U 高速匀质器，转速可达 18,000 r/min 22,000 r/min 美国 vicam 微纤维滤纸（1.5um，100 张/盒） 折叠式槽纹滤纸（100 张/盒） ，或中速定性滤纸 一次性塑料烧杯(25/包) 一次性测试管(250 支/包) 塑料漏斗(10 个/包) 色谱纯级的甲醇（4 升/瓶） Cloversil C18 反相色谱柱 4.6*150mm（5um） Cloversil C18 反相色谱柱 4.6*250mm（5um）
液相色谱测定双酚A
液相色谱测定双酚A摘要：由于双酚A在水样中通常为微量甚至痕量级，且水样基体复杂，干扰物多，往往难以直接测定，必须经过样品富集处理（包括萃取、洗脱、净化、浓缩、定容等步骤）后才可进行分析，本实验采用了高效液相色谱法对水样中双酚A 的测定。
关键词：双酚A；高效液相色谱；水样。
双酚A(BPA)是一种重要的有机化工原料主要用于生产环氧树脂、聚碳酸酯、聚砜树脂的单体；又可用作酚醛树脂、可塑性树脂的生产原料和橡胶、塑料、农药、油漆、油墨等的抗氧化剂及稳定剂；在食具、食品包装材料、塑料制品、防腐涂料、外科修补术用的填充物、输配水及贮水材料等方面应用广泛¨。
BPA在一定条件下会因溶出、迁移、排放及事故等原因进入水体。
研究表明BPA不仅对水生生物有急性毒性，而且还具有雌激素的特性，是环境内分泌干扰物之一，可影响人或动物的中枢神经系统和生殖免疫系统，降低人或动物的生殖繁衍能力，并被怀疑诱发生殖系统和心血管系统的癌变等。
因此，水样BPA的测定具有十分重要的意义。
目前，水样中BPA的常规测方法主要有气相色谱一质谱联用法(GC—MS) 、液相色谱一质谱联用法(LC—MS) 、液相色谱一多级质谱联用法(LC—MS—MS)以及高分辨色谱一高分辨质谱法(HRGC／LC —HRMS)No]等，Gomes…、任仁¨、赵利霞等先后对此进行了评述。
基于色谱或色一质联机的BPA检测方法灵敏度高、选择性好，因此，本实验采用高效液相色谱法测定水中的双酚A。
高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。
高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。
双酚a检测方法
双酚a检测方法双酚A（BPA）是一种广泛存在于塑料制品和环境中的化学物质，它被认为对人体健康有潜在的危害。
因此，开发一种快速、准确、可靠的双酚A检测方法对于保障公众健康具有重要意义。
目前，常用的双酚A检测方法包括高效液相色谱法、气相色谱法、质谱法等。
其中，高效液相色谱法是一种常用的分离和检测双酚A的方法。
该方法利用色谱柱对样品中的双酚A进行分离，然后通过检测器进行定量分析。
高效液相色谱法具有分离效率高、灵敏度高、准确性好的特点，被广泛应用于双酚A的检测领域。
除了高效液相色谱法，气相色谱法也是一种常用的双酚A检测方法。
该方法通过样品的蒸发和气化，将双酚A转化为气态，然后利用气相色谱柱进行分离和检测。
气相色谱法具有分离效果好、分析速度快的优点，适用于对双酚A进行快速检测的场合。
此外，质谱法也是一种准确度较高的双酚A检测方法。
该方法通过将样品中的双酚A分子进行离子化，然后利用质谱仪对离子进行检测和定量分析。
质谱法具有灵敏度高、选择性好的特点，能够对双酚A进行准确的检测和定量分析。
总的来说，针对双酚A的检测方法有多种选择，每种方法都有其适用的场合和特点。
在实际应用中，需要根据具体的检测要求和条件选择合适的方法进行检测。
除了上述的常规检测方法，近年来还出现了一些新的双酚A检测技术，如免疫分析法、生物传感器法等。
这些新技术在提高检测灵敏度、简化检测流程、降低成本等方面具有一定的优势，对于双酚A的快速检测具有重要意义。
总之，双酚A作为一种潜在的有害物质，其检测方法的研究和发展对于保障公众健康具有重要意义。
随着科学技术的不断进步，相信会有更多更优秀的双酚A检测方法出现，为公众健康保驾护航。
两种高效液相色谱系统灵敏检测血浆中双酚A的方法
试验中，在BPA的洗涤和分析过程中没有发现污染。用50%的乙醇和水分别提取血浆和血清中的BPA表现时出的提取能力相同。然而当乙醇的浓度大于50%时，提取的能力减弱了。在HPLC-ED的系统中，检测下限为0.2ng/ml。当往水中加入10ng/ml的BPA时，HPLC-ED在0、1、2、5天的检测值分别为9.6、9.7、9.3和9.8ng/ml，表现出无规律的变化。HPLC-ED中BPA的峰值有GC-MS确定。在HPLC-ED分析BPA时，没有其他类似结构的化合物，如17ß-雌二醇、17α-乙炔雌二醇的干扰。在HPLC-MS的监测范围为0.1ng/ml。两种检测系统的线性数据范围为0-100ng/ml。加入10ng/ml的BPA到人的血浆和羊的血清中，提取能力为93%。
人们认为因为BPA有很好的水溶性，可以从牙科材料和医用密封剂中溶出。用塑料瓶保存的商用血浆中含有较高浓度的BPA，而在用玻璃瓶保存的商用血浆中也发现了惊人浓度BPA.我们怀疑商用血浆在采集的后续操作中受到高浓度BPA的污染，例如在血浆作脱纤维蛋白的过程中受到污染。这也可以解释为什么在家养羊的新鲜血液中没有发现BPA，以及已相当量的BPA在5℃的PC瓶中被发现，其浓度是37℃水中的40倍。这些结果表明BPA在人体体液如血清、唾液中有很好的溶解性。同时，体液中BPA的含量也有酶反应决定。在实验中，将人体血清和水同时在60℃下保存3天，其BPA的增加量比37℃条件下高出许多。结果表明BPA的产生速率与温度和体液中的脂类等成分有很大关系。最近有报道称低浓度的BPA可以扰乱幼鼠的生殖系统，刺激脑垂体释放催乳素。由于商用血清在许多实验室中用于疫苗的生产和细胞培养，这些血清是否会产生副作用还有待于进一步观察。
2.实验部分
2.1材料
从日本制药公司购买牛胚胎血清和羊的血浆。从WAKO化学公司购得BPA。聚碳酸脂离心管从Nalgenunc国际公司获得。干燥冷冻的商用血清蛋白从日本畜牧产业公司获得，蛋白在水中的溶解浓度为5g/l。新鲜的羊血是从三只家养羊的腿部血管中收集到的。人体的血液来自21名（9女，12男）健康的日本成年志愿者，年龄分布在30-50之间。100g人体血红细胞经过十分钟离心分离出血将、血清。为避免受到BPA污染，玻璃注射器和试管在使用前都要经过99%乙醇清洗。试验中BPA的水溶液有ODS-silica、sep-pak制备。Oasis HLB用来固相萃取BPA，使用3.5ml 甲醇和3.5ml水进行冲洗。使用乙酸乙酯作为洗脱液。每次试验前都要做BPA的空白检测确保没有BPA污染。
液相色谱-串联质谱法测定污水处理厂水样中双酚A、四溴双酚A及烷基酚类化合物
液相色谱-串联质谱法测定污水处理厂水样中双酚A、四溴双酚A及烷基酚类化合物液相色谱-串联质谱法测定污水处理厂水样中双酚A、四溴双酚A及烷基酚类化合物一、引言污水处理厂是将废水进行处理，去除其中的有害物质，最终达到排放标准。
然而，近年来，一些有机物污染物，如双酚A、四溴双酚A和烷基酚类化合物等，经常被检测出在污水处理厂的水样中。
这些化合物具有潜在的环境和健康风险，因此对其进行准确测定是十分重要的。
二、双酚A双酚A (BPA) 是一种常见的内分泌干扰物，广泛用于塑料制品和树脂的生产中。
由于其广泛应用，它已经被检测出在各种环境样品中，包括水和废水中。
传统的双酚A测定方法主要依赖于气相色谱-质谱法，但该方法需要样品预处理过程复杂，且仪器昂贵。
液相色谱-串联质谱法 (LC-MS/MS) 是一个更快捷、更灵敏的测定方法。
三、四溴双酚A四溴双酚A (TBBPA) 是一种阻燃剂，普遍应用于电子产品和塑料制品中。
它具有持久性，易在环境中累积并引起一系列生态问题。
TBBPA可以通过液相色谱-串联质谱法定量测定，该方法具有高分辨率、高选择性和高灵敏度。
四、烷基酚类化合物烷基酚类化合物包括烷基酚 (AP) 和烷基酚聚氧乙烯醚(APEOs)。
它们广泛存在于工业和家庭用品中，是水体中常见的有机污染物之一。
由于其疑似致癌性和内分泌干扰作用，十分关注。
LC-MS/MS是测定烷基酚类化合物的最常用方法，它准确快速、操作简便。
五、实验方法液相色谱-串联质谱法测定水样中双酚A、四溴双酚A及烷基酚类化合物主要包括以下步骤：1. 样品预处理：水样中的有机物需经过提取和净化处理，消除干扰物。
2. 色谱条件优化：选择适当的色谱柱、流动相以及梯度洗脱条件。
3. 质谱条件设置：设置质谱的离子源参数、离子传输参数和离子检测参数。
4. 标准曲线制备：制备一系列浓度已知的标准溶液，通过建立标准曲线来定量待测样品中目标化合物的浓度。
5. 样品测定：将经过预处理的样品通过液相色谱-串联质谱系统，测定目标化合物的浓度。
双酚a 毕宇芳 质谱方法
双酚A（BPA）的检测方法有很多种，其中包括质谱法。
毕宇芳教授是这个领域的专家之一，她在相关研究中可能使用了不同的质谱技术来分析双酚A。
以下是几种常见的双酚A质谱检测方法：
1. 液相色谱-质谱联用（LC-MS）：
- 液相色谱用于分离样品中的各组分，然后通过质谱仪进行定性和定量分析。
- 这种方法灵敏度高、选择性强，适用于食品、环境水样和生物样本中双酚A的检测。
2. 气相色谱-质谱联用（GC-MS）：
- 通常用于挥发性化合物的分析。
- 双酚A需要经过衍生化处理以增加其挥发性，然后才能用GC-MS进行分析。
3. 高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）：
- 提供更高的灵敏度和特异性，尤其适合复杂基质中的痕量分析。
- HPLC可以对样品进行有效的分离，而MS/MS则提供了更精确的质量信息。
4. 直接进样质谱（DIMS）：
- 对于某些情况，可以直接将样品注入到质谱仪中进行分析，无需预先分离。
- 这种方法快速简便，但可能会受到基质干扰的影响。
高效液相色谱―串联质谱法测定儿童和成人尿液中双酚A、四溴双酚A和辛基酚-文档
高效液相色谱―串联质谱法测定儿童和成人尿液中双酚A、四溴双酚A和辛基酚1 引言双酚A（Bisphenol A，BPA）、四溴双酚A （Tetrabromobisphenol A，TBBPA）和辛基酚（4-Tert-octylphenol，OP）作为典型环境内分泌干扰物[1～4]已经引起人们的广泛关注。
这3种化合物一般可以通过呼吸道和消化道等途径进入体内，流经血液、肝脏和肾脏，经过尿液排出体外[2，5，6]。
生物检测结果表明，在人体尿液[7，8]、血液[9，10]、母乳[11，12]、胆汁[13，14]、肝脏[15]等生物样品中均含有BPA和OP。
毒理研究表明，较低浓度的BPA对小鼠具有雌激素效应[16]，BPA和OP都可以通过调节E2目标基因对小鼠产生内分泌干扰效应[17]。
TBBPA可以干扰哺乳动物正常生殖行为[18]，通过与甲状腺激素受体结合产生内分泌干扰效应[19]。
目前，水体中BPA、OP和TBBPA含量的分析方法已经比较成熟[20～27]，但是关于人体尿液中3种化合物同时测定的研究鲜有报道。
此外，尿液分析中多采用固相萃取法[7，8，16，28]作为前处理方法，但对于大量样品检测时，存在费用较高、操作步骤较多的缺点。
因此，本研究采用液-液萃取的前处理方法，建立了高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）分析技术，同时检测成人和儿童尿液中BPA， OP和TBBPA的含量，并对成人和儿童尿液中3种内分泌干扰物的暴露水平作了初步分析评价。
2 实验部分2.1 仪器与试剂AG-285电子天平（瑞士Mettle公司）；数显往复振动摇床（德国IKA公司）；旋转蒸发仪（瑞士BUCHI公司）；高效液相色谱-串联质谱仪（LC-Agilent Technologies 1290 Infinity，MS-AB SCIEX QTRAP 4500，美国）；Milli-Q超纯水仪（美国Millipore公司）；Centrifuge 5430R台式高速离心机（德国Eppendorf公司）。
双酚a测定法标准
双酚a测定法标准引言双酚a（BPA）是一种常见的化学物质，广泛应用于塑料制品的生产中。
然而，由于其潜在的对人体健康的威胁，对BPA的测定和监测变得愈加重要。
本文将介绍双酚a测定的常用方法——双酚a测定法标准。
本篇文章将结合实验步骤、仪器设备、数据处理等方面详细探讨双酚a测定法标准。
仪器设备在进行双酚a测定之前，需要准备以下仪器设备：1.高效液相色谱仪（HPLC）2.透射电镜（TEM）3.紫外可见分光光度计实验步骤样品准备1.将待测样品通过适当的方法提取出中间产物。
2.通过旋转蒸发器将样品溶解于甲醇中。
3.使用分液漏斗将溶解样品过滤。
HPLC分析1.将经过过滤的样品注入到HPLC中。
2.使用反相色谱柱进行分离，设定流动相和梯度。
3.设置检测器波长为275nm，测量吸光度值。
TEM观察1.将样品制备成薄片。
2.使用TEM观察样品的形态和结构。
3.分析TEM图像，确认样品中BPA的存在和分布。
数据处理校准曲线为了测定样品中BPA的含量，需要先建立一条校准曲线。
以下是建立校准曲线的步骤：1.准备一系列不同浓度的标准溶液。
2.使用HPLC仪器测量每个标准溶液的吸光度值。
3.绘制标准曲线，以吸光度值为横坐标，浓度为纵坐标。
样品浓度计算通过测量待测样品的吸光度值，并利用校准曲线，可以计算出样品中BPA的浓度。
数据分析对于多个样品的测定结果，可以进行统计分析和比较。
可以计算样品之间的平均值和标准偏差，进一步判断样品中BPA的含量是否符合标准要求。
结论通过本文介绍的双酚a测定法标准，可以准确测定样品中BPA的含量，并对实验结果进行数据处理和分析。
这将有助于监测和控制双酚a在塑料制品中的使用，保护人体健康。
当然，在实际操作中仍需注意操作规范，保证实验过程的准确性和可靠性。
参考文献[1] Zhang, H., Liao, J., Guo, H., et al. (2019). Simultaneous determination of bisphenol A and tetrabromobisphenol A in environmental water by dispersive liquid–liquid microextraction combined with high-performance liquid chromatography. Journal of Separation Science, 42(1), 38-44. [2] Shon, W., Jang, M., Lee, H., et al. (2018). Simultaneous determination of bisphenol A, tetrabromobisphenol A, and triclocarban in human urine using dispersive liquid-liquid microextraction by high-performance liquid chromatography with ultraviolet-visible detection. Journal of Chromatography B, 1092, 429-436. [3] Biedermann-Brem, S.,Reinhard, M., Muller, M. D., & Fiselier, K. (2009). Determination of Bisphenol A by high-performance liquid chromatography in basal bovine milk. Journal of Chromatography A, 1216(46), 8046-8049.。
液相色谱-串联质谱法测定化妆品中的双酚A
液相色谱-串联质谱法测定化妆品中的双酚A郑荣;茹歌;陈静;陈丹丹;钟吉强;王柯【摘要】为建立测定化妆品中双酚A的液相色谱-质谱法,将样品经甲醇-氨水混合溶液提取,以Waters BEH C18柱(2.1 mm×5 cm×1.7μm)为色谱柱,以甲醇为流动相A相,以含5 mmol/L醋酸铵的水溶液为流动相B相,梯度洗脱,柱温40℃,流速0.25 mL/min,以多反应离子监测模式进行监测,内标法定量.结果表明,双酚A在0.2～50 ng/mL质量浓度范围内,线性关系良好,相关系数r>0.995,检出限为0.005μg/g,平均回收率为85.5％～104.7％,精密度为0.9％～2.0％.该方法快速简便,适用于化妆品中双酚A类物质及其衍生物的快速筛查.【期刊名称】《香料香精化妆品》【年(卷),期】2018(000)006【总页数】4页(P46-49)【关键词】双酚;A化妆品;液相色谱-串联质谱法【作者】郑荣;茹歌;陈静;陈丹丹;钟吉强;王柯【作者单位】上海市食品药品检验所,上海 201203;上海市食品药品检验所,上海201203;上海市食品药品检验所,上海 201203;上海市食品药品检验所,上海201203;上海市食品药品检验所,上海 201203;上海市食品药品检验所,上海201203【正文语种】中文双酚A（BPA），化学名2,2 - 二（4 - 羟基苯基）丙烷，简称二酚基丙烷，是重要的有机化工原料，苯酚和丙酮的重要衍生物，主要用于生产聚碳酸酯、环氧树脂、聚砜树脂、聚苯醚树脂等多种高分子材料。
也可用在增塑剂、阻燃剂、抗氧剂、热稳定剂、橡胶防老剂、农药、涂料等精细化工产品中。
它还大量应用于生活塑料制品中，包括饮用水瓶、婴儿奶瓶等。
BPA 的毒性效应主要包括内分泌干扰物、神经毒素、免疫毒素等方面，这些致毒效应甚至会增加细胞癌变、畸变的可能性[1]。
双酚A有模拟雌激素的效果[2-3]，低剂量的双酚A也能使动物产生雌性早熟、精子数下降、前列腺增长等作用。
高效液相色谱法检测油墨中双酚A含量
移液管（1ml\2ml\5ml）和移液枪 （20μm/1ml/500μm）。
双酚A标准品（Bisphenol A） 纯度：≥99.8% 厂 家：Dr.Enrenstorfer Gmbh。
甲醇标准品 纯度≥99.8% 厂家：美国基尼斯高纯化 学有限公司（GENIUS）。
在GB9685-2016[20]及GB 31603-2015[21]生效实施后， 油墨被列入食品接触材料物质，相应配套的测试标准 GB31604.10-2016是用HPLC-MS/MS测试双酚A迁移量， 然而油墨生产企业也无法准确预计下游客户将产品用于 包装何类型食品，且用标准配套的测试方法测试双酚A 迁移量对油墨生产家厂来说测试成本高，因此，需要有 一个简单快捷，低成本的测试方法来替代标准的测试方 法来确保油墨厂的下游客户产品符合相关国家标准。
当前报道双酚A的测试方法有很多种，如液相色谱 串联四级杆质谱仪[5-6]，高效液相法[7-10]，极谱法[11]，酶 联免疫吸附分析法 ， [12] 电化学分析法 ， [13] 分子印迹法 [14]，高效液相串联质谱法[15-16]，气相色谱串联质谱法[1718]，气相色谱法[19]。目前对油墨中相关迁移双酚A测试 标准方法相对较少，特别是油墨中可含量双酚A的测试 方法，尚未有相
高效液相色谱仪（配FLD检测器）1260型 美国安捷 伦科技有限公司。
电子天平：ME204E型，感量0.0001g，梅特勒托利 多仪器（上海）有限公司。
超声波：KQ-700DE型，最大功率：700W，昆山超 声仪器有限公司 。
超纯水器：Human power型超纯水机 韩国human 公司。
双酚A（bisphenol，BPA）学名2，2-二（4羟基苯 基）丙烷，也可以称为二烷基丙烷。双酚A具有耐用、 轻巧、防冲击性，防酸性腐蚀性等性能，因此广泛用于 食品饮料的包装材料、奶瓶、水瓶等产品中，然而油墨 在为这些物品增加色彩起着重要的作用。同时，双酚A 是1B类生殖毒性物质，导致内分泌失调，威胁着胎儿和 儿童的健康，双酚A带来了不可忽视的危害。中国和加 拿大、美国、法国等欧美国家均将双酚A禁使用于食品 接触材料中[1-4]。
果蔬清洗剂中双酚A、双酚F的测定高效液相色谱法
果蔬清洗剂中双酚A、双酚F的测定高效液相色谱法编制说明1、仪器与试剂1.1 仪器1.1.1 高效液相色谱仪：配置荧光检测器。
1.1.2 快速混匀器。
1.1.3 离心机：转速大于5000 r/min。
1.1.4 分析天平：感量0.01 mg和0.0001g。
1.1.5 0.45 μm滤膜。
1.1.6 容量瓶：10 mL。
1.1.7 圆底烧瓶：50 mL。
1.1.8 离心管：50mL，带盖。
1.1.9 旋转蒸发仪。
1.2 试剂1.2.1 双酚A标准品：CAS号：80-05-7，纯度大于99％。
1.2.2 双酚F标准品：CAS号：620-92-8，纯度大于99％。
1.2.2 无水乙醇：色谱纯。
1.2.3 甲醇：色谱纯。
1.2.4 标准储备液（1mg/mL）：准确称取双酚A、双酚F标准品各50 mg（精确至0.1mg）于50 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，于4℃冰箱中保存。
1.2.5 混合标准中间液（1 mg/L）：准确吸取各标准储备液0.1 mL分别于100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，于4℃冰箱中保存。
1.2.6 混合标准使用液：准确吸取准中间液0.2、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mL，于6个10 mL容量瓶中，甲醇定容，此标准系列的浓度为0.02、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8 mg/L。
2、实验部分2.1样品前处理精密称取果蔬清洗剂样品1.0 g（精确至0.001g）于50 mL圆底烧瓶中，加入10 mL乙醇充分振荡溶解，于50℃旋转蒸发至干（如有残留水分，可加入5 mL乙醇进行溶剂替换，直至蒸干为止）。
用5 mL甲醇溶解残渣并转移至50 mL离心管中，再用5 mL甲醇洗涤圆底烧瓶，合并洗涤液，于5000 r/min 离心3 min ，转移上清液至10 mL 容量瓶，用甲醇定容至刻度，取1 mL 过0.45μm 滤膜，进行高效液相色谱分析。
2.2 色谱参考条件a ）色谱柱：C 18色谱柱（4.6mm ×250mm ，5μm ），或性能类似的分析柱；b ）柱温：室温；c ）流动相：甲醇-水（70+30）；d ）流速：1 mL/min ；e ）进样体积：10 µL ；f ）荧光检测器：激发波长227 nm ，发射波长313 nm 。
双酚A的测定
双酚A的测定
一．实验目的
1.掌握液相色谱仪的使用
2.对水中双酚A的测定
二．实验原理
由于双酚A在水样中通常为微量甚至痕量级，且水样基体复杂，干扰物多，往往难以直接测定，必须经过样品富集处理（包括萃取、洗脱、净化、浓缩、定容等步骤）后才可进行分析，
三．实验仪器与试剂
高效液相色谱仪水样
四．实验步骤
1. 气相色谱条件
色谱柱：30m×0.25mm(内径) ×0.25μm(膜厚)，HP-5MS固定相；
柱温：80℃(保持1min)，以20℃/min，至300℃(保持3 min)；
进样口温度：250℃；
色谱/质谱接口温度：280℃；
载气：氦气，纯度＞99.99%，柱流量1.0mL/min；
流速：1ml/min
进样量：5μL
浓度：1ppm
比例相：90％
2．制作标准曲线
3．对样品进行测定
五．实验数据如下
y = 4.5138x +12.7962 R2 =0.99993
根据标准曲线即可测得双酚
六．实验总结
本实验分析方法具有简便、快速、灵敏度高等特点，适用于水中痕量双酚A的快速测定。
高效液相色谱_串联质谱法测定环境水体中双酚A_辛基酚_壬基酚
Ξ 收稿日期 : 2007204217 ; 修订日期 : 2007208202 作者简介 : 张奎文 (1980 - ) , 男 , 硕士研究生 ; E2mail : kuiwenzh @hotmail. com
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第 27 卷第 2008 年 8
8期 月
Chinese
关键词 : 高效液相色谱2串联质谱法 ; 双酚 A ; 辛基酚 ; 壬基酚
中图分类号 : O657. 63 文献标识码 : A 文章编号 : 100020720 (2008) 082062205
烷基酚聚氧乙烯醚作为非离子表面活性剂在 20 世纪 70 年代得到了广泛应用[1] 。20 世纪 80 年 代研究发现烷基酚聚氧乙烯醚的降解产物 ( 如 : OP、NP、42tert2Octylphenol 等) 具有比母体化合物 更强的毒性[2] 。双酚 A (BPA) 主要是用于生产环氧 树脂 、聚碳酸酯 、聚丙烯酸酯等的材料[3] , 现在许 多研究已经将 OP、NP 和 BPA 定为内分泌干扰物 , 该类物质能影响生物体的内分泌系统[4～6] 。它们 的危害日益引起人们的关注 , 为了更好地评价该 类物质对生态系统的影响 , 建立这些物质的快速 、 灵敏和高效的分析方法就显得比较重要 。目前测 定该类化合物的方法主要有气相色谱和气质联用 等 , 但是环境样品中基质复杂 、干扰物多 , 且该类 方法 需 要 进 行 衍 生 等 繁 杂 的 预 处 理 , 而 采 用 HPLC2MSΠMS 能更有效的排除干扰 , 快速 、准确的 测定 。因此 , 本文建立了高效液相色谱2串联质谱
泵分别注入离子源 , 对其进行全扫描 , 确定各自 的母离子 , 通过优化离子传输管电压 、喷射电压 、 鞘气压力 、辅助气压力使母离子丰度及稳定性最 佳 ; 然后对每种化合物进行子离子扫描 , 得到碎 片信息 , 并对二级质谱碰撞气能量 (CE) 进行优化 , 使特征碎片离子的强度达到最大 。本试验优化后 的参数如 1. 4 所述 。
分散液液微萃取-高效液相色谱法联用检测豆浆中双酚A的质量浓度
２ ０ １ ６ 年１ ２ 月
上海戈 报（ 自 然 科 学 版 ）
Ｊ ＯＵＲＮ ＡＬ ＯＦ Ｓ ＨＡＮＧＨＡＩ ＵＮＩ ＶＥ ＲＳ Ｉ ＴＹ （ Ｎ ＡＴ ＵＲＡＬ Ｓ ＣＩ Ｅ ＮＣ Ｅ）
Ｖｂ １ ．２ ２ Ｎ Ｏ ．６
Ｄｅ ｃ ． ２ ０１ ６
， 罗立强
摘要： 建立一种采用分散液液微萃取． 高效液相色谱法（ ｄ ｉ ｓ ｐ ｅ ｒ ｓ ｉ ｖ ｅ ｌ ｉ ｑ ｕ ｉ ｄ — ｌ ｉ ｑ ｕ ｉ ｄ ｍ ｉ ｃ ｒ ｏ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ． ｔ ｉ ｏ ｎ ｃ ｏ ｕ ｐ ｌ ｅ ｄ ｗ ｉ ｔ ｈ ｈ ｉ ｇ ｈ ｉ ｑ ｕ ｉ ｄ ｃ ｈ ｒ ｏ ｍａ ｔ ｏ ｇ ｒ ａ ｐ ｈ ｙ ， Ｄ Ｌ Ｌ ＭＥ － Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ ） 联用对豆浆中
ｍｉ ｌ ｋ ｕ ｓ ｉ ｎ ｇ ｄ ｉ ｓ ｐ ｅ ｒ ｓ ｉ ｖ ｅ ｌ ｉ ｑ ｕ ｉ ｄ － ｌ ｉ ｑ ｕ ｉ ｄ ｍｉ ｃ ｒ ｏ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｃ ｏ ｕｐ ｌ ｅ ｄ ｗｉ ｔ ｈ ｈ ｉ ｇ ｈ ｐ ｅ ｒ ｆ ｏ ｒ ｍａ ｎ ｃ ｅ ｌ ｉ ｑ ｕｉ ｄ
ｃ ｈ ｒ ｏ ｍ ａ ｔ ｏ ｇ ｒ ａ ｐ ｈ ｙ（ Ｄ Ｌ Ｌ ＭＥ — Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ ） ． Ｕ ｎ ｄ ｅ ｒ ｔ ｈ ｅ ｏ ｐ ｔ ｉ ｍａ ｌ ｃ ｏ ｎ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ， ｔ ｈ ｅ ｐ ｅ ａ ｋ ａ ｒ ｅ ａ ｈ ａ ｄ ａ ｌ ｉ ｎ —
Ａ ｂｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： Ａ ｎ ｏ ｖ ｅ ｌ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｗａ ｓ ｄｅ ｖ ｅ ｌ ｏ ｐ ｅ ｄ ｆ ｏ ｒ ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｂ ｉ ｓ ｐｈ ｅ ｎ ｏ ｌ Ａ ｉ ｎ ｓ ｏ ｙ ｂ ｅ ａ ｎ
液相色谱测定双酚A
液相色谱测定双酚A摘要：由于双酚A在水样中通常为微量甚至痕量级，且水样基体复杂，干扰物多，往往难以直接测定，必须经过样品富集处理（包括萃取、洗脱、净化、浓缩、定容等步骤）后才可进行分析，本实验采用了高效液相色谱法对水样中双酚A 的测定。
关键词：双酚A；高效液相色谱；水样。
双酚A(BPA)是一种重要的有机化工原料主要用于生产环氧树脂、聚碳酸酯、聚砜树脂的单体；又可用作酚醛树脂、可塑性树脂的生产原料和橡胶、塑料、农药、油漆、油墨等的抗氧化剂及稳定剂；在食具、食品包装材料、塑料制品、防腐涂料、外科修补术用的填充物、输配水及贮水材料等方面应用广泛¨。
BPA在一定条件下会因溶出、迁移、排放及事故等原因进入水体。
研究表明BPA不仅对水生生物有急性毒性，而且还具有雌激素的特性，是环境内分泌干扰物之一，可影响人或动物的中枢神经系统和生殖免疫系统，降低人或动物的生殖繁衍能力，并被怀疑诱发生殖系统和心血管系统的癌变等。
因此，水样BPA的测定具有十分重要的意义。
目前，水样中BPA的常规测方法主要有气相色谱一质谱联用法(GC—MS) 、液相色谱一质谱联用法(LC—MS) 、液相色谱一多级质谱联用法(LC—MS—MS)以及高分辨色谱一高分辨质谱法(HRGC／LC —HRMS)No]等，Gomes…、任仁¨、赵利霞等先后对此进行了评述。
基于色谱或色一质联机的BPA检测方法灵敏度高、选择性好，因此，本实验采用高效液相色谱法测定水中的双酚A。
高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。
高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。
高效液相色谱法测定血清中的双酚A
冷冻 保
存。此外 , 经提取后的样 品应当天进 样 , 避免双 酚 A 的氧 化
检测记录多个波长数据的特点 , 采用峰面积比值法进行定 性 鉴别 , 原理是吸 收度的比 值法 [ 4] 。在标准 品经 多次进 样后 ,
中华预防医学杂志 2003 年 11 月第 37 卷第 6 期 Chin J Prev M ed, N ovember 2003, V ol 37, N o. 6
and bisphenol A and F in t he enbironment Wat er R earch, 2002, 36: 1429 -1438 2 St aples CA , D orn PB, K lecka G M , et al Bisphenol A concent rat ions in receiving w at ers near U S manufacturing and processing facilities Chemosphere, 2000, 40: 521 - 525 3 Sajiki J, T akahashi K , Yonekubo J Sensit ive met hod for t he det erminat ion of bisphenol A in serum using t w o syst ems of high performance liquid chromat ography J Ch romat ogr B Biomed S si Appl, 1999, 736: 255 -261 4 马广 慈 , 主 编 药 物分 析 方 法 与 应用 北 京 : 科 学 出 版 社 , 2000 226
2
= 249 1, P < 0 01) ; 文 化程度 以小学 和初中 人
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2.3实验时从PC管中提取血浆中的BPA和水
2ml不含BPA的新鲜羊血浆分别保存在3个PC离心管中，他们各自的保准温度为37℃、20℃、5℃。每天从各个管中提取0.2ml用于BPA的检测，为防止BPA污染，在操作过程中只是用超纯水。
2.4高效液相色谱和质谱的操作条件
其中一个HPLC系统的型号为LC-10 AD，使用VP-ODS色谱柱（150mm×4.6mm）和电化学检测器（CoulochenⅡ5200A）。流动相使用乙腈-水-磷酸（40:60:0.2）。流速为1.0ml/min，色谱柱温度为40℃。注入的样品量为50ul。ED使用条件：保护细胞电势E 600mV,分析细胞电势E1300mV,和E2550mV；电流均为1uA。鉴定BPA要使用色谱分析法将HPLC中BPA的出峰时间与标准曲线的时间进行比较。对于一个完整的分析，BPA的峰值保留时间要由GC-MS确认。
[13] M.E. Murphy, J.P. Kehrer, J. Chromatogr. 421 (1987) 71.
[14] G. Achilli, G.P. Cellerino, G. Melzi d’Eril, S. Bird, J.Chromatogr A. 697 (1995) 357.
两种高效液相色谱系统灵敏检测血浆中双酚A的方法
摘要：这篇文章的目的是建立一种简单准确检测血清、尿液等体液中双酚A的方法。两种高效液相色谱系统（HPLC），HPLC联合电化学检测器（ED）和HPLC联合质谱检测，使用电喷雾离子源（ESI）作为连接，共同检测固相萃取血清中BPA的样品。水或者50%浓度以下的乙醇可有效地萃取血清中的BPA。HPLC-ED的检测限为0.2ng/ml，HPLC-MS的检测限为0.1ng/ml。两个HPLC系统所得到的数据具有很好的相关性。正常人类的血清中BPA的浓度较低（0-1.6ng/ml）。在牛的胚胎血清和羊的血液中均发现相当浓度的BPA。但是在刚刚采集到的新鲜羊血中并没有发现BPA。我们认为血液在采集后准备阶段的操作过程中产生了BPA。在用PC离心管做实验时发现聚碳酸酯瓶的BPA浸入血液中的量是浸入水中的40倍，且浸入量与温度有关（37℃>20℃>5℃）。
[6] A. Gonzalez-Casado, N. Navas, M. del Olmo, J.L. Vilchez, J.Chromatogr. Sci. 36 (1998) 565.
[7] K.A. Mountfort, J. Kelly,S.M. Jickells, L. Castle, FoodAddit. Contam. 14 (1997) 737.
3.结果
试验中，在BPA的洗涤和分析过程中没有发现污染。用50%的乙醇和水分别提取血浆和血清中的BPA表现时出的提取能力相同。然而当乙醇的浓度大于50%时，提取的能力减弱了。在HPLC-ED的系统中，检测下限为0.2ng/ml。当往水中加入10ng/ml的BPA时，HPLC-ED在0、1、2、5天的检测值分别为9.6、9.7、9.3和9.8ng/ml，表现出无规律的变化。HPLC-ED中BPA的峰值有GC-MS确定。在HPLC-ED分析BPA时，没有其他类似结构的化合物，如17ß-雌二醇、17α-乙炔雌二醇的干扰。在HPLC-MS的监测范围为0.1ng/ml。两种检测系统的线性数据范围为0-100ng/ml。加入10ng/ml的BPA到人的血浆和羊的血清中，提取能力为93%。
[3] W. Spahl, H. Budzikiewicz,W. Geurtsen, J. Dent. 26 (1998)137.
[4] W. Geurtsen, Eur. J. Oral. Sci. 106 (1998) 687.
[5] C.A. Staples, P.B. Dom,G.M. Klecka, S.T. O’Block, L.R.Harris, Chemosphere 36 (1998) 2149.
2.实验部分
2.1材料
从日本制药公司购买牛胚胎血清和羊的血浆。从WAKO化学公司购得BPA。聚碳酸脂离心管从Nalgenunc国际公司获得。干燥冷冻的商用血清蛋白从日本畜牧产业公司获得，蛋白在水中的溶解浓度为5g/l。新鲜的羊血是从三只家养羊的腿部血管中收集到的。人体的血液来自21名（9女，12男）健康的日本成年志愿者，年龄分布在30-50之间。100g人体血红细胞经过十分钟离心分离出血将、血清。为避免受到BPA污染，玻璃注射器和试管在使用前都要经过99%乙醇清洗。试验中BPA的水溶液有ODS-silica、sep-pak制备。Oasis HLB用来固相萃取BPA，使用3.5ml 甲醇和3.5ml水进行冲洗。使用乙酸乙酯作为洗脱液。每次试验前都要做BPA的空白检测确保没有BPA污染。
BPA在羊血清中的析出速度取决于温度，尤其是在人体体温的范围内BPA的释放速度得到明显加强。最近发现一种用于牙科材料的新型松香成分，其在人体温度下BPA的释放速度较大。所以BPA从牙科和外科医疗材料中的迁移机理有必要作进一步的研究。
4.讨论
使用Sep-pak和Oasis装置可以很方便地从血浆、血清等生物样品中提取BБайду номын сангаасA。两种装置的结果没有什么明显的区别。两种HPLC系统在操作方便程度和准确性方面都很适合分析水相生物样品。
[8] T. Yamamoto, A. Yasuhara, Chemosphere 38 (1998) 2569.
[9] M. Yamashita, J.B. Fenn, J. Phys. Chem. 88 (1984) 4451.
[10] J.F. Banks, J. Chromatogr. A. 691 (1995) 325.
2.2从血浆和血清中提取BPA
0.2-0.5ml血浆或血清用超纯水稀释到5ml。样品适用于Sep-pak，用3.5ml的乙醇分离溶液中的极性脂类，用3.5ml石油醚分离溶液中的非极性脂类。最后，用3.5ml乙酸乙酯萃取BPA。萃取液用氮气吹干。残留物溶解在乙腈-水（40:60）的溶液中。BPA标准曲线用1ug/ml原料溶于25%甲醇中制成。
图1表示在商用纤维蛋白血浆和人类血浆中检测BPA标准曲线的峰值。用HPLC检测纤维蛋白血浆和人体血浆中BPA所得到的质谱峰值与真实的数据一致。样品的出峰时间可以用来鉴定是否是BPA。利用两个系统检测同一样品中的BPA所得到的数据具有很好的相关性。在人的血浆中BPA检测的平均值和标准偏差为男性0.59±0.21ng/ml,女性0.33±0.54ng/m.迅速检测刚刚采集到的新鲜羊血，其中并没有发现BPA。用乙醇处理后的玻璃容器对血样的污染可以忽略不计。使用两种HPLC系统检测商用纤维蛋白血浆、羊血清和牛备胎血清中的BPA浓度，其数据如表1所示。HPLC-MS的检测值比HPLC-ED的稍高一些。在用塑料瓶保存的血清中，AD检测到较高浓度的BPA。同时，塑料瓶保存的冷冻干燥的牛血清蛋白中也发现大量的BPA。PC离心管离心制出的羊血浆中BPA含量随环境温度和离心时间的增加而增多。在所有温度下PC管中羊血浆的BPA含量都要比同条件下水中含量多。特别是实验第八天，37℃下羊血浆中BPA浓度为333.5ng/ml比水中的浓度高出44.5倍。在20℃和37℃下羊血浆中的BPA浓度比5℃下的高出3.9倍和12.4倍，相似的现象还可在人体血浆中发现。37℃下人类血浆中BPA在第四天的浓度为112.2±8ng/ml，第八天为369.7±53.0ng/ml。
[2] N. Olea, R. Pulgar, P. Perez, F. Olea-Serrano, A. Rivas, A.Novillo-Fertrell, V. Pedraza, A.M. Soto, C. Sonnenschein,Environ. Health Perspect. 104 (1996) 298.
关键词：双酚A
1.介绍：
自从1993年，Krishman等证明聚碳酸酯瓶在高温灭菌的过程中会产生双酚A，并且会刺激人体产生雌激素以来。BPA对人体健康是否会产生影响就一直是一个有争论的话题。据报道树脂底物和牙科用密封剂会产生大量的BPA，已经有许多研究指出BPA存在于自然环境、婴儿奶瓶、塑料废弃物的水体中。由于缺乏合适的检测生物样品中BPA浓度的方法，现在还不知道多大浓度的BPA会对人体健康造成危害。目前，气象色谱质谱（GC-MS）和高效液相色谱-紫外荧光法通常用于检测水样中的BPA，而HPLC-MS也已经广泛用于生物样品中BPA的分析。此外，电喷雾离子源用来连接质谱可以将不稳定的化学成分如蛋白质、多肽、核酸以及二十烷类去晶体化和离子化。Youkubo提出直接用HPLC-MS分析检测水样中的BPA。他认为在三种离子化方法（ESI、EI和APCI）中ESI的灵敏性最好。另一方面，电化学检测器（ED）现在也广泛用于分析具有较高特异性的酚类化合物。因此我们确定了一种便捷、准确检测BPA的方法，即使用两种HPLC系统，一个与ED连接，一个使用ESI-MS。在这次试验中，我们将分析不同实验材料中BPA的含量。
另一个HPLC系统是Alliana2690型，同时要使用3.5um C18萃取柱和ZMD喷雾质谱仪，联合ESI电喷雾接口。流动相是乙腈-水（40:60）。流速和色谱柱温度分别为0.25ml/min和40℃。ESI阴离子扫描条件：毛细管电压3.5KV；圆锥电压39V；分析电压59V；反溶剂温度390℃。注入样品量20ul。