核因子-κB p65在肝细胞癌中的表达及意义 夏 庚

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３３ 卷 １２ 期 ２０１７ 年 １２ 月 ㊀ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｈｅｐａｔｏｌ， Ｖｏｌ． ３３ Ｎｏ． １２， Ｄｅｃ． ２０１７ 临 床 肝 胆 病 杂 志 第 第
Ｂ ｐ６５ /Íζ:5ÏÐ{@Ñ ÊÃË － Ì
６５０５００ ） （昆 明 医 科 大 学 第 二 附 属 医 院 消 化 内 科 二 病 区 ，昆 明
㊀ 庚 ㊀ 飞 夏 ，祁 ，杨 晋 辉 ，唐 映 梅 ，石 梦 琳 ，张 峻 崎
㊀ 利用肝癌组织芯片观察核因子 － κＢ（ ＮＦ － κＢ） ｐ６５ 在癌组织及癌旁组织中的表达，探讨其对肝癌发生、发展的意 摘 要 ： 目 的 ㊀ 肝癌组织芯片（ ＨＬｉｖＨ１８０Ｓｕ０５ ） 包括 ８１ 例癌组织和 ８１ 例癌旁组织，手术时间为 ２００６ 年 ５ 月 － ２００７ 年 ５ 月，随访截止时 义。 方 法 间为 ２０１２ 年 ２ 月，其中复发 ４６ 例，无复发 ３５ 例；参考美国癌症联合会胆囊癌 ＴＮＭ 分期（ 第 ７ 版） 分为：Ⅰ期 ５６ 例，Ⅱ期 ２５ 例；有癌 栓 ２８ 例，无癌栓 ５３ 例。 利用免疫组化法检测 ＮＦ － κＢ Ｐ６５ 蛋白的表达及相关性。 依据所检测蛋白在细胞内的定位，分别以检测蛋 白表达部位的阳性信号强度和阳性表达细胞数 ２ 种观察标准进行综合评分。 计数资料组间比较采用 χ２ 检验，采用 Ｋａｐｌａｎ － Ｍｅｉｅｒ 法进行生存分析，采用 ｌｏｇ － ｒａｎｋ 时序检验比较生存率。 ㊀ ＮＦ － κＢ ｐ６５ 蛋白在癌组织及癌旁组织表达定位于细胞质及部分细
ＸＩＡ Ｇｅｎｇ ＱＩ Ｆｅｉ ＹＡＮＧ Ｊｉｎｈｕｉ ｅｔ ａｌ．
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Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｃｔｏｒ － ｋａｐｐａ Ｂ ｐ６５ ｉｎ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ａｎｄ ｉｔｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ
，
ｄｏｉ １０． ３９６９ ／ ｊ． ｉｓｓｎ． １００１ － ５２５６． ２０１７． １２． ０１７ ２０１７ － ０６ － １５ ２０１７ － ０７ － ０４ １９８８ － １９９２ －
结 果
胞核，在癌组织及癌旁组织阳性率分别为 ９０． １２％ 、６９． １４％ ，差异有统计学意义（ χ２ ＝ １０ ． ９９８ ， Ｐ ＝ ０． ００１ ） ；癌组织中 ＮＦ － κＢ ｐ６５ 蛋 ㊀ ＮＦ － κＢ ｐ６５ 在肝癌组织中的表达高于癌旁组织，调控 白表达与临床分期、癌栓、有无复发无明显相关性（ Ｐ 值均 ＞ ０． ０５ ） 。 ＮＦ － κＢ 功能的关键在于抑制 ＲｅｌＡ（ ｐ６５ ） 对肝肿瘤的促进作用。 由此推测，阻断 ＮＦ － κＢ ｐ６５ 活性能够发挥抑制肿瘤细胞分化、生 长的作用，为临床治疗提供了新的思路。 癌， 肝细胞； ＮＦ － κＢ； 转录因子 ＲｅｌＡ 关 键 词 ： 中 图 分 类 号 ： 献 标 志 码 ： 章 编 号 ： Ｒ７３５． ７㊀ ㊀ ㊀ 文 Ａ㊀ ㊀ ㊀ 文 １００１ － ５２５６ （ ２０１７ ） １２ － ２３４２ － ０４
： 收 稿 日 期 ： ； 修 回 日 期 ： 。 作 者 简 介 ： 夏 庚 （ ）， 男 ， 主 要 从 事 肝 病 诊 疗 方 面 的 研 究 。 祁 飞 （ ）， 女 ， 主 要 从 事 肝 病 诊 疗 方 面 的 研 究 。 二 者 对 本 文 贡 献 相 同 ， 同 为 第 一 作 者 。 通 信 作 者 ： 唐 映 梅 ， 电 子 信 箱 ： ｔａｎｇｙｉｎｇｍｅｉ＿ｍｅｄ＠ １６３． ｃｏｍ。
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． 核 － κＢ ｐ６５ 在 夏 庚 ， 等 因 子 肝 细 胞ＮＦ － κＢ） Ｂ淋 核 因 子 被 首 次 发 现 ， 其 能 够 与 活 化 ［ ］ 巴 细 胞 的 免 疫 球 蛋 白 链 增 强 子 元 件 结 合。异 常 κ轻 ＮＦ － κＢ 与 癌 细 胞 发 生 、 发 展 相 关 ， 可 作 为 癌 症 激 活 的 的 标 志 物 。ＮＦ － κＢ 可 通 过 以 下 方 式 促 进 癌 细 胞 的 发 生 、 发 展 ： 诱 导 抗 凋 亡 基 因 的 表 达 ， 促 进 癌 细 胞 的 存 活 能 力 ； 诱 导 细 胞 周 期 蛋 白 和 原 癌 基 因 的 表 达 诱 导 细 胞 增 殖 ； 调 节 基 质 金 属 蛋 白 酶 和 细 胞 黏 附 基 因 的 表 达 促 进 转 移 ； 调 节 与 癌 组 织 新 血 管 生 长 相 关 的 基 因 刺 激 血 管 生 成 。本 实 验 通 过 在 肝 癌 组 织 芯 片 上 检 测 ＮＦ － κＢ ｐ６５ 的 表 达 ， 探 讨 其 与 者 癌 栓 、 分 期 及 复 发 的 关 系 ， ＨＣＣ 患 为 早 期 诊 断 和 治 疗 提 供 新 的 思 路 。 ＨＣＣ 的 １㊀ 材 料 与 方 法 １． １㊀ 实 ㊀ 肝 ＨＬｉｖＨ１８０Ｓｕ０５ ） 癌 组 织 芯 片 （ 购 自 验 材 料 ， 包 括 癌 上 海 芯 超 生 物 科 技 有 限 公 司 ， 共 １６２ 芯 ８１ 例 组 织 及 癌 旁 组 织 ； 手 术 时 间 为 ８１ 例 ２００６ 年 ５ 月 － ； 随 访 截 止 时 间 为 ， 复 发 ５月 ２０１２ 年 ２月 ４６ ２００７ 年 例 ， 无 复 发 ； 参 考 美 国 癌 症 联 合 会 胆 囊 癌 ３５ 例 ＴＮＭ ［ ］ ７版 ５６ 例 ２５ 例 分 期 （ 第 ）分 为 ： ， ； 有 癌 栓 Ⅰ期 Ⅱ期 ， 无 癌 栓 。抗 克 隆 抗 体 购 自 ２８ 例 ５３ 例 ＮＦ － κＢ ｐ６５ 多 司 。山 羊 抗 兔 二 抗 及 色 试 剂 盒 购 自 Ａｂｃａｍ 公 ＤＡＢ 显 福 州 迈 新 生 物 技 术 有 限 公 司 。 １． ２㊀ 免 ㊀ 组 ＰＢＳ 洗 ３ 次 织 芯 片 脱 蜡 至 水 ， ； 疫 组 化 加 在 切 片 上 ， 室 温 静 置 ， ； 抗 原 ３％ Ｈ Ｏ 滴 ＰＢＳ 洗 ３次 ０． ０１ ｍｏｌ ／ Ｌ 柠 ９５ ħ ， 修 复 ， 檬 酸 缓 冲 液 自 然 冷 却 至 室 温 ， ＰＢＳ 洗 ３次 ； 滴 加 正 常 山 羊 血 清 封 闭 液 ， 甩 去 多 余 克 隆 抗 体 ， 血 清 ； 滴 加 兔 抗 人 ＮＦ － κＢ ｐ６５ 多 ４ ħ过 夜 ； 温 ， ； 滴 加 山 羊 抗 兔 二 抗 ， ３７ ħ 复 ＰＢＳ 洗 ３次 ＰＢＳ 洗 ； 色 ， 在 显 微 镜 下 掌 握 染 色 程 度 ， 自 来 水 ３次 ＤＡＢ 显 冲 洗 ； 苏 木 精 复 染 ， 酸 分 化 ， 逐 级 乙 醇 脱 水 ， 二 甲 １％ 盐 体 稀 苯 透 明 ， 中 性 树 脂 封 片 。对 照 用 ＮＦ － κＢ ｐ６５ 抗 释 液 ， 结 果 应 为 阴 性 。 据 所 检 测 蛋 白 在 细 胞 内 的 定 位 ， １． ３㊀ 判 ㊀ 依 定 标 准 分 别 以 检 测 蛋 白 表 达 部 位 的 阳 性 信 号 强 度 和 阳 性 表 达 细 胞 数 观 察 标 准 进 行 综 合 评 分 。阳 性 表 达 结 ２种 果 判 定 标 准 ： （ 根 据 阳 性 染 色 强 度 判 断 ， 细 胞 无 染 色 １） 记 ； 细 胞 呈 浅 棕 色 ， 弱 阳 性 ， 记 ； 细 胞 染 成 棕 ０分 １分 色 ， 并 无 背 景 染 色 ， 或 细 胞 呈 深 棕 色 、 有 浅 棕 色 背 景 ， 为 中 等 阳 性 ， 记 ２分 ； 细 胞 呈 深 棕 色 ， 无 背 景 着 色 ， 为 强 阳 性 ， 记 。（ 根 据 阳 性 细 胞 表 达 数 计 分 ， 阳 性 ３分 ２） ＜ ５％ ， ０分 １ 表 达 细 胞 计 ； 阳 性 表 达 细 胞 计 ≤ ２５％ ， ２５％ ＜ 阳 ２分 分 ； 性 细 胞 数 计 ； 阳 性 表 达 细 胞 ≤５０％ ，
结 论
， ， （Ｓｅｃｏｎｄ Ｄｉｓｅａｓｅ Ａｒｅａ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，Ｔｈｅ Ｓｅｃｏｎｄ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｋｕｎｍｉｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋｕｎｍｉｎｇ ６５０５００ ，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ㊀ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｃｔｏｒ － ｋａｐｐａ Ｂ （ ＮＦ － κＢ）ｐ６５ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ｔｉｓｓｕｅ ａｎｄ ａｄｊａｃｅｎｔ ｔｉｓｓｕｅ ｕｓｉｎｇ ｈｅｐａｔｏｍａ ｔｉｓｓｕｅ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ，ａｓ ｗｅｌｌ ａｓ ｉｔｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ （ ＨＣＣ） ． Ｍｅｔｈｏｄｓ㊀ Ｔｈｅ ｈｅｐａｔｏｍａ ｔｉｓｓｕｅ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ ＨＬｉｖＨ１８０Ｓｕ０５ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ａｎａｌｙｚｅ ８１ ｃａｎｃｅｒ ｔｉｓｓｕｅ ｓａｍｐｌｅｓ ａｎｄ ８１ ａｄｊａｃｅｎｔ ｔｉｓｓｕｅ ｓａｍｐｌｅｓ． Ｓｕｒｇｅｒｙ ｗａｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ｆｏｌｌｏｗｅｄ ｕｐ ｔｏ Ｆｅｂｒｕａｒｙ ２０１２． Ｏｆ ａｌｌ ｐａｔｉｅｎｔｓ， ４６ ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅｄ ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ ａｎｄ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｆｒｏｍ Ｍａｙ ２００６ ｔｏ Ｍａｙ ２００７ ， ３５ ｄｉｄ ｎｏｔ ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ． Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ＴＮＭ ｓｔａｇｉｎｇ ｏｆ ｇａｌｌｂｌａｄｄｅｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｂｙ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｉｎｔ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ Ｃａｎｃｅｒ， ５６ ｈａｄ ｓｔａｇｅ Ｉ ｔｕｍｏｒ ａｎｄ ２５ ｈａｄ ｓｔａｇｅ ＩＩ ｔｕｍｏｒ； ２８ ｈａｄ ｔｕｍｏｒ ｔｈｒｏｍｂｕｓ ａｎｄ ５３ ｈａｄ ｎｏ ｔｕｍｏｒ ｔｈｒｏｍｂｕｓ． Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｍｅａｓｕｒｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＮＦ － κＢ ｐ６５ ，ａｎｄ ｉｔｓ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｏｔｈｅｒ ｆａｃｔｏｒｓ ｗａｓ ａｎａｌｙｚｅｄ． Ｏｎ ｔｈｅ ｂａｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｔｏ ｂｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ，ａ ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ ｏｆ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｓｉｇｎａｌ ａｎｄ ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｅｌｌｓ． Ｔｈｅ ｃｈｉ － ｓｑｕａｒｅ ｔｅｓｔ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｃａｔｅｇｏｒｉｃａｌ ｄａｔａ ｂｅｔｗｅｅｎ ｇｒｏｕｐｓ， ｔｈｅ Ｋａｐｌａｎ － Ｍｅｉｅｒ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｓｕｒｖｉｖａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ， ａｎｄ ｔｈｅ ｌｏｇ － ｒａｎｋ ｔｅｓｔ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅｓ． Ｒｅｓｕｌｔｓ㊀ ＮＦ － κＢ ｐ６５ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗａｓ ｌｏｃａｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｃｙｔｏｐｌａｓｍ ａｎｄ ｓｏｍｅ ｎｕｃｌｅｉ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ｔｉｓｓｕｅ ａｎｄ ａｄｊａｃｅｎｔ ｔｉｓｓｕｅ， ｗｉｔｈ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒａｔｅｓ ｏｆ ９０． １２％ ｉｎ ｔｈｅ ｃａｎｃｅｒ ｔｉｓｓｕｅ ａｎｄ ６９． １４％ ｉｎ ｔｈｅ ａｄｊａｃｅｎｔ ｔｉｓｓｕｅ， ａｎｄ ｔｈｅｒｅ ． Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｗａｓ ａ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｉｎ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒａｔｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｃａｎｃｅｒ ｔｉｓｓｕｅ ａｎｄ ｔｈｅ ａｄｊａｃｅｎｔ ｔｉｓｓｕｅ （ χ ＝ １０． ９９８ ，Ｐ ＝ ０． ００１ ） ＮＦ － κＢ ｐ６５ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ｔｉｓｓｕｅ ｗａｓ ｎｏｔ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｔａｇｅ，ｔｕｍｏｒ ｔｈｒｏｍｂｕｓ，ｏｒ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｃｅ ｏｒ ａｂｓｅｎｃｅ ｏｆ ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ （ ａｌｌ Ｐ ＞ ０． ０５ ） ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ㊀ ＨＣＣ ｔｉｓｓｕｅ ｈａｓ ｈｉｇｈｅｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＮＦ － κＢ ｐ６５ ｔｈａｎ ａｄｊａｃｅｎｔ ｔｉｓｓｕｅ． Ｔｈｅ ｋｅｙ ｔｏ ｔｈｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＮＦ － κＢ ｆｕｎｃ ｔｉｏｎ ｉｓ ｔｏ ｉｎｈｉｂｉｔ ｔｈｅ ｐｒｏｍｏｔｉｏｎａｌ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＲｅｌＡ（ ｐ６５ ）ｏｎ ｌｉｖｅｒ ｔｕｍｏｒ． Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ， ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＮＦ － κＢ ｐ６５ ｍａｙ ｓｕｐｐｒｅｓｓ ｔｈｅ ｄｉｆ ｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ，ｐｒｏｖｉｄｉｎｇ ａ ｎｅｗ ｉｄｅａ ｆｏｒ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ＨＣＣ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｃａｒｃｉｎｏｍａ，ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ；ＮＦ － ｋａｐｐａ Ｂ；ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ＲｅｌＡ
细 胞 癌 （ＨＣＣ）是 全 球 第 五 大 常 见 恶 性 肿 瘤 疾 ㊀ ㊀ 肝 病 ， 也 是 癌 症 死 亡 率 的 第 二 大 原 因 。２００８ 年 ，我 国 病 率 男 性 为 人 ， 女 性 为 ＨＣＣ 发 ３７． ４ ／ １０ 万 １３． ７ ／ １０ 万 ［ ］ ［ ］。大 ４１ ６０ 岁 人， 其 中 以 人 群 的 发 病 率 最 高 多 ＨＣＣ 患 ３ ６个 数 者 在 确 诊 后 的 月 内 死 亡 ， 因 此 早 期 ＨＣＣ 病 发 现 、 早 期 治 疗 对 控 制 死 率 尤 为 重 要 。１９８６ 年