观察GDM小鼠模型老年期的糖代谢水平及其胰岛的形态学改变「范本」
SGLT2抑制剂对D-半乳糖致衰老小鼠保护作用及其机制研究演示稿件
研究
汇报人：XXX
2024-01-05
目录
• 引言 • SGLT2抑制剂概述 • D-半乳糖致衰老小鼠模型 • SGLT2抑制剂对D-半乳糖致衰老
小鼠的保护作用 • SGLT2抑制剂对D-半乳糖致衰老
小鼠保护作用的机制研究 • 结论与展望
01
SGLT2抑制剂还可以通过减轻体重、 降低血压和减少心血管事件等作用机 制来改善糖尿病患者的健康状况。
SGLT2抑制剂在糖尿病治疗中的应用
SGLT2抑制剂在糖尿病治疗中 主要用于降低血糖水平，改 善胰岛素抵抗和减少心血管 事件等。
SGLT2抑制剂可以单独使用或 与其他降糖药物联合使用， 对于肥胖、高血压和心血管 疾病等合并症的糖尿病患者 具有较好的疗效。
01
调节血糖水平
抗氧化应激
02
03
调节脂肪代谢
SGLT2抑制剂可以降低D-半乳糖 致衰老小鼠的血糖水平，改善糖 代谢异常。
SGLT2抑制剂能够提高D-半乳糖 致衰老小鼠的抗氧化酶活性，减 轻氧化应激反应。
SGLT2抑制剂可以改善D-半乳糖 致衰老小鼠的脂肪代谢，降低血 脂水平。
SGLT2抑制剂对D-半乳糖致衰老小鼠的细胞学影响
延长寿命
SGLT2抑制剂可以显著延长D-半 乳糖致衰老小鼠的平均寿命和最 高寿命。
改善活动能力
SGLT2抑制剂能够改善D-半乳糖 致衰老小鼠的运动协调能力和平 衡能力。
增强免疫功能
SGLT2抑制剂可以提高D-半乳糖 致衰老小鼠的免疫细胞活性，增 强免疫功能。
SGLT2抑制剂对D-半乳糖致衰老小鼠的生化影响
需要注意的是，SGLT2抑制剂 可能会增加尿路感染、骨折 和酮症酸中毒等风险，因此 在使用过程中需要密切监测 不良反应并及时处理。
老年大鼠的糖代谢和胰腺β细胞质量和功能的改变
对 象 ， 用 腹 腔 注 射 ２ 葡 萄糖 溶 液作 糖 耐 量 实 验 ， 定 卢细 胞 对 糖 刺 激 的分 泌 （ 岛 素 曲线 下 面 积 与 葡 萄 糖 曲 采 ０ 测 胰 线 下 面 积 比值 ， ＡＵＣ ／ ＩＡＵＣ 及 胰 岛 素 抵 抗 指 数 （ Ｇ） ＨＯＭＡ—Ｉ ， 用 免 疫 组 化 测 定 卢细 胞 质 量 和 单 位 体 重 的 卢 Ｒ）应 细 胞 质 量 ， 用 羟 胺 法 测 定 血 清 和 胰腺 组 织 的 Ｓ 利 ＯＤ活 力 。 结 果 两 组 糖 耐 量 基 本 正 常 ， 岛 素 抵 抗 指 数 （ 胰 ＨＯ— ＭＡ—Ｉ ） 老组 显 著 高 于 年轻 组 （ ．４ ±０ １６ ０ ０ ５ ． ３ ， ＜ ０ ０ ） ＵＣ ／ Ｃ 年 老 组 显 著 高 于 年 Ｒ年 ０ ２ ２ ． ２ ．４ ±０ ０ ８ Ｐ ． ５ ，Ａ ＩＡＵ Ｇ 轻组（．８ ０ １７±００ ８ ｓ ． ９ ±０ ０ ８ Ｐ＜ ０ ０ ） ． ４ ０ ８ ． ２ ， ０ ． ５ ，单 位 体 重 的 ｐ 胞 质 量 年 轻 组 明显 高 于 年 老 组 （． ５ ． ６ 细 ６ １ ±０ ８ ５８ ±０ ９ ，Ｐ ０ ０ ）年 轻 组 血 中 Ｓ ． ０ ． ２ ＜ ．５ ． ＯＤ 活 力 显 著 高 于 年 老 组 （ ０ ０ １． ４±２ ８ ｓ６ ８ ±３ ５ ） 而 胰 腺 组 织 ． ７ｖ ． ８ ． ６ ， Ｓ ＯＤ活 力 两 组 差 异 无 显 著 性 。结 论 年 老 大 鼠较 年轻 大 鼠 呈 现 胰 岛 素 抵 抗 、 胰 岛 素 分 泌 及 ｐ 胞 相 对 储 备 能 高 细 力 降 低 的特 点 ， 老 大 鼠的 胰 岛 素 抵 抗 可 能 与 血 中 的 Ｓ 年 ＯＤ 活力 降低 有 关 。
D-半乳糖致衰老小鼠模型的实验研究
D-半乳糖致衰老小鼠模型的实验研究鞠文博1，于春艳1，陈建光2【摘要】摘要：目的探讨应用D-半乳糖制作小鼠衰老模型，并进行指标检测.方法D-半乳糖连续皮下注射42 d制作小鼠衰老模型，同时进行体质量变化测量、行为学测试和形态学衰老指标的测定.结果与正常对照组相比，造模4周后，D-半乳糖致衰老小鼠体质量显著降低(P<0.01)；D-半乳糖致衰老小鼠学习记忆能力减弱，水迷宫探索路径长度、搜台潜伏期均显著延长(P<0.01)；形态学观察显示各器官组织结构出现衰老改变.结论D-半乳糖可以成功制作小鼠衰老模型.【期刊名称】北华大学学报（自然科学版）【年(卷),期】2015(000)002【总页数】4【关键词】D-半乳糖；衰老；行为学检测；形态学检测老龄人口的增多促使人们更加关注衰老的研究，脑衰老是人衰老的最明显表现.脑衰老是一个非常复杂的过程，导致脑结构与功能的改变，是由多种因素引起的，学习和记忆能力的减退是其最重要的表现之一[1].D-半乳糖是一种机体内正常的营养成分，能够在正常机体代谢中转变为葡萄糖，从而参与葡萄糖代谢，如果摄入过量则会导致代谢紊乱.在半乳糖氧化酶作用下，D-半乳糖转化成醛糖和过氧化氢，从而产生大量的超氧化阴离子自由基，使多种生物大分子氧化损伤，对基因的表达和调节系统产生影响，导致细胞转录水平降低而引起衰老改变[2].研究显示：连续在大鼠和小鼠等哺乳动物身上注射D-半乳糖(D-gal)1个月即可造成动物体内糖代谢发生紊乱，导致多种组织细胞出现类似衰老的变化[3-4].因此，应用D-半乳糖建立动物的衰老模型可广泛地应用在衰老机制的研究和抗衰老药物的筛选中.本课题组应用D-半乳糖连续给药6周，造成小鼠衰老模型，通过小鼠体质量的变化、行为学的观测以及组织形态学改变等方面来系统地研究D-半乳糖衰老模型，从而为科学、合理地使用动物衰老模型进行药物抗衰老实验提供依据.1 材料与方法昆明小鼠购自吉林大学实验动物中心，许可证号：SCXK-(吉)2008-005.小鼠适应性饲养1周，按体质量随机分为两组：D-半乳糖模型组和正常对照组，每组12只，雌雄各半，按6只/笼饲养，自由饮食.D-半乳糖模型组小鼠应用5%的D-半乳糖100 mg/(kg·d)从小鼠颈背部皮下注射；正常对照组小鼠腹腔注射等量生理盐水，给药1次/d，共给药6周.2 观察指标2.1 体质量变化测量实验开始、实验中和实验结束前分别称量每只小鼠的体质量，观察实验小鼠体质量的变化及小鼠外观的变化.2.2 行为学测试第6周造模结束后对各组小鼠进行行为学测试[6-8]，包括Morris水迷宫法记忆能力测试和穿梭箱法学习记忆能力测试.2.2.1 水迷宫法测试小鼠的学习记忆能力实验第6周进行记忆能力测试[9-10]，水迷宫水池高60 cm，直径110 cm，站台直径8.0 cm，将水迷宫等分成4个分区，每个分区壁上标有东、南、西、北四个入水点.迷宫上方有一摄像机，与计算机相连接，可利用计算机软件对实验小鼠活动进行全程跟踪摄录，能够显示整个活动轨迹，记录小鼠找到站台所需的时间表示小鼠的学习记忆能力.每日将动物头朝池壁按东、南、西、北4个入水点分别放入水池，将站台置于某一分区的中央，实验过程站台位置保持不变.电脑系统自动记录小鼠从入水点到达站台所需时间和摄录在这段时间内的游泳路程，以小鼠找到平台所需时间作为学习和记忆成绩.若在设定时间内小鼠未找到站台，计算机停止跟踪，每次实验以120 s为限.训练中如果小鼠在极限时间120 s内找到站台，允许小鼠在站台上停留20 s，若小鼠未找到站台，实验人员将小鼠放在站台上停留20 s.20 s后将其从平台上拿下，休息1 min后再次开始训练.一般正常动物经5～6个训练日可学会以最快、最佳的轨迹找到平台的正确位置.实验在隔音安静的房间内进行，水温控制在(22±0.5)℃.2.2.2 穿梭箱法测试小鼠的学习记忆能力BA-200避暗仪是利用鼠类的嗜暗习性而设计的，以光、电击的联合刺激使实验动物产生由被动回避转为主动回避的条件反射[11].记录此条件反射建立过程中的主动回避反应指标，从而反映实验小鼠的学习能力、记忆时间的变化.实验第42天开始，每天练习1次，共连续练习3 d，在第4天进行正式测试，记录数据包括小鼠遭受电击次数，遭受电击的总时间和逃避潜伏时间.系统参数设为20次为一个循环次数，间隔时间5 s，电击时间10 s，暗示时间5 s.2.3 病理切片观察在完成MT-200水迷宫和穿梭箱法学习记忆能力测试后，应用2%戊巴比妥钠溶液40 mg/kg腹腔注射麻醉小鼠后，取脑组织、肝脏等重要器官，10%甲醛固定，常规脱水包埋，制作石蜡切片，HE染色.3 结果3.1 体质量变化与正常对照组比，D-半乳糖致衰老小鼠体质量在造模4周后显著降低(P<0.01)，并随着造模时间的推移体质量进一步减少(P<0.01).小鼠外观特征为毛色枯黄、行动迟缓、精神萎靡等.见表1.表1 造模前后小鼠体质量的变化Tab.1 Changes in body weight of mice before and after model establishment*：和空白对照组比较，P<0.01.3.2 行为学测试与正常对照组比较，水迷宫实验和穿梭箱法学习记忆能力测试显示：模型组衰老小鼠水迷宫探索路径长度和搜台潜伏期时间均显著延长(P<0.01).见表2.表2 水迷宫实验和穿梭箱法小鼠学习记忆时间Tab.2 The time of learning and memory of mice in water maze and shuttle box experiment#：和空白对照组比较，P<0.01，##：和空白对照组比较，P<0.01.3.3 病理切片观察肝脏组织切片显示：衰老模型组小鼠肝小叶不规整，可见点状或灶性坏死，肝细胞排列紊乱，脂肪样变性较广泛，胞质可见明显疏松、肿胀，门管区紊乱，结缔组织增多，可见炎性细胞浸润.正常组肝小叶结构完整、规则，呈多边形肝细胞排列整齐，胞质丰富，清亮透明，核大，核仁明显，门管区无炎性细胞浸润[12].见图1，2.光镜下可见：模型组轮廓模糊，神经元细胞减少，颜色较浅，模型组可见大量肿胀变性的神经元细胞，分支明显减少，核仁浓缩变小，分叶不清，部分断离，细胞间排列松散，界限模糊[13].正常组小鼠脑组织轮廓清晰，神经元细胞密集，颜色深染，核仁分叶清晰，细胞间排列整齐，界限清楚.见图3，4.4 讨论衰老是一种正常的生理现象，机体发育成熟后，组织器官也逐步发生退行性改变，主要表现为机体功能的下降和紊乱、免疫功能下降、糖脂代谢紊乱和肝肾功能的异常，尤以记忆力减退为主[14].本课题组利用D-半乳糖诱导了亚急性衰老动物模型，模型组小鼠较正常对照组小鼠体质量减轻较多，毛色枯黄，行动迟缓，精神萎靡；光镜下显示多个器官结构均有不同程度的病理损伤变化.本实验研究的结果发现：D-半乳糖诱导衰老小鼠模型表现为小鼠活动次数明显减少，学习记忆力显著下降，体力和耐力等能力降低，并随着时间的推移衰老症状逐渐加重，与人类的自然衰老症状和衰老进程比较类似，这个实验结果可为人类衰老机制研究以及抗衰老药物的筛选提供参考[15-19].参考文献：[1] Finkel T，Holbrook N J.Oxidants，oxidative stress and the biology of ageing[J].Nature，2000，408：239-247.[2] Cui X，Zuo P，Zhang Q，et al.Chronic systemic D-galactose exposure induces memory loss，neurodegeneration，and oxidative damage in mice：protective effects of R-alpha-lipoic acid [J].J Neurosci Res，2006，83：1584-1590.[3] 张熙，李文彬，张炳烈.D-半乳糖亚急性中毒大鼠拟衰老生化改变[J].中国药理学与毒理学杂志，1990，4(4)：309-310.[4] 梁纪伟，田庆伟，王永明，等.大豆异黄酮对D-半乳糖致衰老模型小鼠抗氧化系统作用的实验研究[J].中国老年学杂志，2004，24(1)：42-43.[5] Song X，Bao M，Li D，et al.Advanced glycation in D-galactose induced mouse aging model [J].Mech Ageing Dev，1999，108：239-251.[6] Li Y，Qin H Q，Chen Q S，et al.Neurochemical and behavioral effects of the intrahippocampal coinjection of betaamyloid protein 1-40 and ibotenic acid in rats[J].Life Sci，2005，76：1189-1197.[7] Hua X，Lei M，Zhang Y，et al.Long-term D-galactose injection combined with ovariectomy serves as a new rodent model for Alzheimer’s disease [J].Life Sci，2007，80：1897-1905.[8] Lei H，Wang B，Li W P，et al.Anti-aging effect of astragalosides and its mechanism of action[J].Acta Pharmacol Sin，2003，24：230-234. 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影响糖尿病小鼠模型稳定的因素分析
影响糖尿病小鼠模型血糖的因素考察孙建新，王忠，吕晓敏（新疆医科大学医学实验动物中心，乌鲁木齐 830011)[摘要] 目的：考察四氧嘧啶（ALX）诱导法制备糖尿病小鼠模型时影响血糖的因素。
方法：120只昆明种小鼠随机分为正常组和5个剂量的模型组。
正常组小鼠腹腔注射生理盐水；5个剂量的模型组小鼠分别腹腔注射250、200、150、100、50 mg/kg的ALX，测量ALX 的剂量、小鼠的体重、垫料、是否禁食以及禁食时间对小鼠FBG（空腹血糖）的影响，将FBG≥11.1 mmol/L的小鼠模型作为建模成功，计算各组小鼠的成模率和死亡率。
结果：体重为22~28 g的小鼠腹腔注射ALX 100~150 mg/kg，夜间禁食12~14 h，无垫料的情况下，可成功构建糖尿病小鼠模型。
结论：该方法构建糖尿病小鼠模型成功率高，死亡率低，血糖稳定。
[关键词] 糖尿病模型；影响因素；成模率；死亡率；FBG[中图分类号] R [文献标志码] A [文章编号] 1671-2838（2011）04-0000-00DOI：10.5428/pcar20110400Investigation of influential factors of blood glucose of diabetic mouse modelsSunJjianXin,WangZHong,LV XiaoMing（1.The Medical Laboratory Animal Center of Xinjiang Medical University, Urumqi 830011,China)[ABSTRACT] Objective：To investigate the influential factors of blood glucose on diabetic mice models induced by alloxan. Method: A total of 120 Kunming mice were randomly divided into control group and five model groups. Mice in the control group was peritoneally injected with saline at the dose of 10 ml/kg. Meanwhile, mice in the 5 model groups were peritoneally injected with different doses(250,200,150,100,50 mg/kg) of alloxan, respectively. The influence of doses of alloxan, weight of mice, cushioning materials, breeding environment，fasting and fasting time on fasting blood glucose(FBG) were determined. The mice with FBG≥11.1 mmol/L were established as diabetic models.Results: Diabetic mice models can be successfully established using 22~28 g mice, injecting 100~150 mg/kg alloxan, and then fasting 12~14 h in the night and using no cushioning materials.Conclusion: In such conditions, diabetic mice models can be obtained with high success rate, low mortality incidence and stable blood glucose.[KEY WORDS] diabetic models；influential factors; success rate; mortality incidence;fbg糖尿病是由多种病因引起的以慢性高血糖为特征的代谢紊乱疾病，伴有因胰岛素分泌和作用缺陷引起的糖、脂肪和蛋白质代谢异常。
糖尿病动物模型综述
2 自发性糖尿病动物模型
自发性糖尿病动物模型是在自然条件下动物自然产 生,或由于基因突变而出现类似人类糖尿病表现的动 物模型。 实验动物未经任何有意识的人工处理，在自然状态 下发生的以高血糖、胰岛素抵抗为主要特征的动物 模型。 该模型更接近人类糖尿病的自然起病及发展,尤其适 于研究糖尿病的病因学。但自发性糖尿病动物因其 来源相对较少,饲养、繁殖条件要求高,动物昂贵等缺 点限制了其在科学研究中的应用和普及。
注意事项：（1）注意模型要尽可能再现所要求的 人类疾病；（2）注意所选用动物的实用价值；（ 3）注意环境因素对模型动物的影响；(4)不能盲目 地使用近交系动物,不然会导致不能控制的因素进 入实验；（5）动物进化的高级程度并不意味着所 有器官和功能接近于人的程度；（6）正确地评估 动物疾病模型。 目前,DM动物模型主要分为3类:药物诱发性DM动物 模型、自发遗传性DM动物模型和转基因DM动物模 型。
3转基因糖尿病模型
转基因动物技术是20世纪80年代初发展起来 的生物高新技术,对生命科学的发展起到了重 大的推动作用。 总的来说,有两种方法： (1)传统的转基因方法,即新基因信息的转入和 在动物体内的表达。 (2)基因打靶方法,即将特定的内源性基因断裂 或以其他基因代替。
3 .1 转基因动物模型和基因敲除动物模型
2.1.2 NOD小鼠
NOD小鼠(nonobese diabetes mouse)是JCL－ICR品系小鼠衍 生的CTS(白内障易感亚系)糖尿病小鼠近亲杂交而来,其发病 多突然,表现明显多饮、多尿、消瘦,血糖显著升高,不用岛 素治疗,动物存活不了一个月,通常死于酮血症。 NOD小鼠是自发性自身免疫I型糖尿病的一个很好的模型,是 由T-细胞(包括CD4和CD8细胞)介导的,其发展受控于一系列T 细胞的调节。β细胞损伤继发于自身免疫过程,引起低胰岛 素血症。免疫调节剂,可溶性白介素-1受体,可溶性TNF受体 p55,高果糖饮食等可预防NOD小鼠糖尿病发作。 NOD小鼠的糖尿病发病率与性别有关,雌性鼠发病率显著高 于雄性鼠,且发病早。
利用小鼠D-半乳糖衰老模型
实验材料
• 槲皮素、D-半乳糖，甘露醇、蔗糖和EDTA， 还原型谷胱甘肽试剂、羟自由基试剂
• 雄性小鼠50只随机分笼饲养，每笼10只小 鼠，室温控制在(22±1)℃，在12h明暗环 境条件下饲养，自由喂食、饮水．
实验方法
1. Morris水迷宫实验 2. 小鼠脑组织匀浆的制备 3. 脑组织中还原型谷胱甘肽(GSH)的测定 4. 脑组织中羟自由基(OH-)的测定
• 小鼠水迷宫为直径120cm， 高50cm的圆形水池，周围 放有视觉提示物体．
• 水迷宫分为东南、西南、 东北、西北4个象限，其中 一个象限之中置一平台， 平台高15cm，表面直径为 6cm，水面高出平台1cm
• 水中加入黑色食用色素， 使动物在水面不能看见水 下平台．
• 实验时将小鼠随机从一个象限面向池壁放入水迷 宫，通过迷宫上方的摄像头和图像采集系统记录 小鼠找到平台休息的运动轨迹．
入水后到达平台的潜伏期随时间的变化
游泳速度随时间的变化
到达平台路程长度随时间的变化
小鼠水迷宫第六轮试验时小鼠潜伏期的变化
数值示每组鼠从4个入水点到达平台的平均值 与Dgal组比较：*表示P<0.05 **表示P<0．01 与Young组相比较：﹟表示P<0.05,﹟﹟表示 P<0.01,﹟﹟﹟表示P<0.001
• 取1mL加入预先恒温于25℃水浴中的5mL DTNB分析
溶液，混匀，静置5 min后，于波长412nm处测定 吸光．计算每毫克蛋白质中GSH的含量．
4.脑组织中羟自由基(OH-)的测定
• 通过比色法检测抗氧化物质总抗氧化以及清除活性氧 能力．
• Fenton反应产生的OH-量与H202的量成正比，当用 Gress试剂显色时，形成红色物质，其呈色与OH-的多 少成正比关系．利用这一原理，进行清除活性氧能力 的测定．
小鼠胰岛形态学改变与2型糖尿病发病机制研究
小鼠胰岛形态学改变与2型糖尿病发病机制研究作者：张新霞张雷来源：《医学信息》2014年第17期摘要：目的通过观察自发性2型糖尿病小鼠病情发展过程中胰岛的形态学变化，进一步探讨2型糖尿病的发病机理。
方法观测2型糖尿病（T2DM）动物模型db/db小鼠体重及血糖变化及运用HE染色，在光镜下观测其胰岛的形态学改变。
结果db/db糖尿病小鼠于生后3～4 w 龄时，其血糖开始升高，并且随着糖尿病病情的进展，血糖逐渐升高，糖尿病小鼠随着糖尿病病情的进展，胰岛结构发生了一系列变化，表现为随着月龄的增加，胰岛体积增大，数量增多。
与对照组比较，有显著性差异（P关键词：2型糖尿病；胰岛；B细胞；1资料与方法1.1一般资料动物来源及饲养：引进日本C57bl/Ksj-db/+m转基因小鼠，近亲（兄妹）交配。
db/+m型为糖尿病和肥胖基因携带者，其表型正常，后代中雌雄纯合子个体发生糖尿病和肥胖，即db/db型。
病例组：分别选取3，5，8，10，12月龄db/db自发性糖尿病小鼠每组6只。
对照组选取相应年龄段db/+m表型正常小鼠，每组6只。
分组标准：表型：糖尿病小鼠均发生明显肥胖。
血糖：＞10 mmol/L定为糖尿病。
1.2方法1.2.1血糖测定断尾取血，并用美国强生微型血糖仪测定血糖值。
（每次测血糖时间均选择在晨9∶00）。
1.2.2普通光镜切片制备取小鼠胰尾，固定、脱水、包埋及切片。
1.3 HE染色切片常规脱腊至水，苏木精染色3 min，自来水冲洗。
1%盐酸分化，自来水冲洗，伊红染色2 min。
常规梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。
1.4阳性细胞图像分析及统计学处理统计方法数据处理：所有标本均在Motic Med 6.0数码医学图像分析系统内在相同的放大倍数下（400倍），每个年龄段计数6只小鼠的胰腺，每个标本取3张切片，每个切片取10个视野。
HE染色切片计数和测量每张切片中的胰岛个数及最大直径，取其平均值来评价胰岛的数量和大小。
D-半乳糖致衰老模型小鼠皮肤衰老的观察
D-半乳糖致衰老模型小鼠皮肤衰老的观察关键词：皮肤衰老半乳糖2008-07-14 00:00 来源：丁香园点击次数：1741[摘要]目的观察D-半乳糖连续皮下注射对小鼠皮肤衰老指标的影响。
方法 3月龄KM雌性小鼠60只,随机分为空白对照组(注射生理盐水)、D-半乳糖低剂量组(80mg/kg)和D-半乳糖高剂量组(1000mg/kg),连续每日背部皮下注射42天后,观察小鼠皮肤中与衰老相关的生化指标及组织病理学变化,并用计算机图像分析系统定量分析。
结果高剂量组小鼠真皮厚度〔(624.5±48.5)μm〕较对照组〔(839.3±58.4)μm〕显著变薄(P<0.05),胶原纤维减少,排列疏松,弹力纤维总面积亦显著减少(P<0.05);高剂量组皮肤中超氧化物歧化酶(SOD)活性〔(131.2±11.5) U/ml〕、羟脯氨酸含量〔(0.57±0.13)μg/mg〕显著低于对照组的〔(178.1±20.7) U/ml、(0.74±0.17)μg /mg,P<0.05〕,丙二醛(MDA)含量增加〔(9.4±1.5)nmol/g和(6.8±1.5)nmol/g,P<0.05〕;而低剂量组上述改变则不显著。
结论每日1000mg/kg D-半乳糖连续皮下注射42天,可导致小鼠皮肤的明显衰老,为抗皮肤衰老研究提供一个简便、稳定的实验模型。
衰老是生物体在生命周期中随年龄增长而发生的全身组织、器官功能减退和稳态下降的过程。
随着世界人口加速老龄化,抗衰老研究已成为迅速崛起的一门应用科学。
若在人体上进行这一漫长衰老过程的研究及对抗衰老药物进行疗效观察是不易做到的,因此,人们根据衰老的机制建立了许多动物衰老模型。
目前,应用最多的是D-半乳糖所致的亚急性衰老模型,它可引起心、肝、肾、脑等重要器官的代谢异常,类似人类自然衰老时的表现[1]。
胰岛素、格列本脲、二甲双胍改善gdm鼠脂代谢
该研究拟探讨胰岛素、格列本和二甲双弧对GDM 小鼠脂代谢的影响。
1材料与方法
1.1材料C57BL/6J小鼠（8周龄,雄性小鼠体质 量：20~24 g；雌性小鼠体质量：17 ~20 g）购自南京 大学模型动物研究中心。试验前动物自由进食标准 饲料，维持12 h光照和12 h黑暗的昼夜节律。实验 室温度：20~25弋，湿度：（50±5）%。适应1周后， 合笼。查阴栓确认交配，记为妊娠日（GD0）。
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安徽医科大学学报 Acta Universitatis Medicinalis Anhui 2020 Jan ；55 (1)
胆固醇(total cholesterol ： TC )、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein-cholesterol, LDL-C )、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein-cholesterol, HDL-C ) 0 肝脏通过蛋 白质印迹试验测定靶蛋白的表达水平。
胰岛素、格列本腺、二的该研究旨在说明胰岛素、格列本碾和二甲双孤 对妊娠期糖尿病（GDM）小鼠脂代谢的影响。方法C57BI7 6J小鼠适应性喂养1周后,合笼。将8周龄孕鼠随机分成5 组:正常对照组（N组）、GDM组（G组）、GDM胰岛素干预组 （GI组）、GDM格列本脉干预组（GG组）、GDM二甲双弧干 预组（GM组）。使用小剂量的链佐菌素诱导C57BI76J小 鼠造GDM模型。从妊娠的第11天分别应用3种药物干预 直至妊娠第18天（分娩）。结果 胰岛素、格列本和二甲 双孤在妊娠期分别干预改善GDM鼠的总胆固醇（TC）、甘油 三酯（TG）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平（P<0.05）, 同时高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平增加（P < 0. 05）。 与G组比较，药物干预组鼠肝中磷酸化乙酰辅酶A竣化酶 （P-ACC）水平升高（P < 0. 05）,胆固醇调节元件结合蛋白2 （SREBP2）水平降低（P<0.05）o结论 药物干预降低GDM 小鼠血脂水平及改善肝脏脂代谢。 关键词妊娠期糖尿病;脂代谢;胰岛素;二甲双弧;格列本
T1DM小鼠模型是什么？
T1DM小鼠模型是什么？
糖尿病（diabetes mellitus，DM）目前已经成为继癌症、心血管疾病之后第3大威胁人类健康的主要慢性疾病。
糖尿病是由于人体完全不能分泌或者不能分泌足够的胰岛素或无法有效使用胰岛素，而导致葡萄糖水平升高时发生的一种慢性疾病。
其中1型糖尿病（type 1 diabetes mellitus，T1DM）患者占糖尿病患者中的10%左右。
常用的T1DM模型有以下几种：
1. 自发性1型糖尿病
NOD（non obesity diabetes）小鼠是一种自发性I型糖尿病小鼠。
发病表现与人糖尿病症状相似：高血糖、糖尿、多饮、多尿等。
若无外源性胰岛素治疗，动物多因酮血症在1-2月内死亡。
雌性NOD 小鼠糖尿病发病率高于雄鼠。
2. 诱发型1型糖尿病模型
链脲佐菌素（STZ）诱发大鼠、小鼠发生的1型糖尿病模型，与人类I型糖尿病的临床表现、病程经过以及胰岛形态学改变等方面有许多相似之处。
STZ是目前使用最为广泛的糖尿病动物模型化学诱导剂，它对动物胰岛B细胞有特异性的破坏作用。
利用该特点，使用高剂量STZ致动物胰岛B细胞坏死，诱导动物发生I型糖尿病。
具有方法简单，用药量下，特异性损伤胰岛B细胞、药物毒性较低等优点。
检测项目：体重、摄食量、葡萄糖耐受实验（GTT）、胰岛素耐量实验（ITT）、空腹血糖、随机血糖、血清生化检测或试剂盒方法( ELISA法) 检测、生理笼检测（尿液及粪便收集），代谢笼检测（氧耗、产热、活动等指标）、组织器官收集及病理分析（H&E、Sirius red、Masson、Oil red、IHC等）等。
最新-观察GDM小鼠模型老年期的糖代谢水平及其胰岛的形态学改变 精品
观察GDM小鼠模型老年期的糖代谢水平及其胰岛的形态学改变观察小鼠模型老年期的糖代谢水平及其胰岛的形态学改变本文关键词：胰岛，形态学，小鼠，代谢，老年观察小鼠模型老年期的糖代谢水平及其胰岛的形态学改变本文简介：摘要：目的：探讨妊娠期糖尿病（,）小鼠模型老年期糖代谢特点及孕期二甲双胍治疗对小鼠胰岛素抵抗和胰岛功能的远期影响。
方法：将小鼠随机分成对照组（=6）、组（=6）、治疗组（=6），采用高脂饮食诱导建立动物模型，治疗组于观察小鼠模型老年期的糖代谢水平及其胰岛的形态学改变本文内容：摘要：目的：探讨妊娠期糖尿病（,）小鼠模型老年期糖代谢特点及孕期二甲双胍治疗对小鼠胰岛素抵抗和胰岛功能的远期影响。
方法：将小鼠随机分成对照组（=6）、组（=6）、治疗组（=6），采用高脂饮食诱导建立动物模型，治疗组于孕115~175给予二甲双胍治疗。
分娩后均转维持饲料，并定期监测其体质量变化。
并于分娩9个月后，应用口服葡萄糖耐量试验（,）及胰岛素耐量试验（,）检测糖代谢。
利用染色法观察胰岛的病理学改变。
通过免疫组化染色法检测67蛋白在胰腺组织中的表达。
结果：分娩2个月后，与对照组相比，及治疗组小鼠体质量增长明显（=3875,=0044）。
与对照组相比，组腹腔注射胰岛素后血糖下降缓慢（=0004）。
组胰岛萎缩，数目减少。
67在对照组胰岛中呈强阳性表达（=0032）。
结论：小鼠模型分娩后，葡萄糖的调节能力可以基本恢复正常，但是胰岛素抵抗持续存在。
进入老年后，胰岛组织萎缩，功能逐渐减退，增殖能力降低。
而孕期给予二甲双胍治疗可以增强其老年期的胰岛素敏感性，改善胰岛的病理学改变，但不能改变胰岛组织的增殖能力。
关键词：妊娠期糖尿病；二甲双胍；胰岛素抵抗；妊娠期糖尿病（,）是指妊娠期首次发生或者发现的不同程度的糖代谢水平异常，是一种多基因遗传的代。
老年糖尿病患者胰岛β细胞功能及其与胰淀素和褪黑素的关系参考模板
老年糖尿病患者胰岛β细胞功能及其与胰淀素和褪黑素的关系作者：林爱清李明龙陈海燕马立川刘广业赵树娥【摘要】目的观察新诊断老年糖尿病（DM）患者胰岛β细胞功能特点及其与胰淀素、褪黑素的关系。
方法收集初诊DM患者60例，其中老年DM组27例，成年DM组33例，对照组30例。
均行口服葡萄糖耐量试验（OGTT），计算胰岛β细胞功能指数（HOMAβ）。
采用ELISA法检测患者空腹血清胰淀素、褪黑素水平。
同时测定所有受试者的血脂、体重指数（BMI）和腰臀比（WHR），并对结果进行统计分析。
结果（1）老年DM组与成年DM组比较HOMAβ明显降低〔(58.20±24.89) vs (81.20±40.80),P<0.01〕，而OGTT 2 h血糖、胰岛素值及胰岛素抵抗指数（HOMA IR）明显升高（P均<0.05）。
（2）与对照组相比，老年DM组血清胰淀素水平显著增高〔(21.57±15.88) vs (17.82±12.15)ng/L,P<0.01〕；而褪黑素水平明显降低〔(6.56±1.32) vs (7.65±1.39) pg/ml,P<0.01〕。
（3）老年糖尿病组HOMA β与褪黑素呈正相关(r=0.403,P=0.016)，与胰淀素(r=-0.461,P=0.003)、HOMA IR(r=-0.238,P=0.009)呈负相关，与空腹血糖、胰岛素、甘油三酯(TG)，WHR则无明显相关性。
结论新诊断的老年DM患者存在明显的胰岛素分泌缺陷，胰淀素的增高和褪黑素的降低可能与老年糖尿病的发生有关。
【关键词】糖尿病；老年；胰岛β细胞功能；胰淀素；褪黑素老年糖尿病（DM）与成年DM比较具有起病隐匿、症状不典型、进展缓慢等特点，其发病原因尚不明了，胰岛β细胞功能下降是其发病的主要机制之一。
胰淀素和褪黑素是分别由胰腺和松果腺分泌的老年相关激素，近年国外有些研究表明胰淀素、褪黑素与老年DM的发生有一定的关系〔1，2〕。
类似人类老年糖尿病大鼠模型之形态学变化
类似人类老年糖尿病大鼠模型之形态学变化作者：王晓宁高尤亮余文珍郑燕芳何才姑施红【摘要】目的采用D半乳糖加高脂高糖乳剂及链脲佐菌素(STZ)构建类似老年人糖尿病的大鼠动物模型，观察其胰腺形态学变化。
方法选用健康Wistar雌性大鼠，20只灌胃生理盐水为正常对照组;20只采用腹腔注射D半乳糖40 d为衰老模型组;另25只则采用腹腔注射D半乳糖40 d并灌胃高脂高糖乳剂30 d后腹腔注射STZ(体重≤200 g按30 mg/kg，体重>200 g者按体表面积进行计算)，制备衰老糖尿病模型大鼠，筛选空腹血糖≥11.1 mmol/L者为成模鼠，上述各组大鼠再继续灌胃生理盐水10 d后，各组随机取10个样本以免疫组化、光镜和电镜分别观察大鼠胰岛诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达、胰腺细胞凋亡、胰岛形态及胰岛细胞和腺泡细胞超微结构变化。
结果衰老模型组大鼠胰岛iNOS表达量和胰腺细胞凋亡数较正常对照组增加，衰老糖尿病模型组胰岛iNOS表达量和胰腺细胞凋亡数剧增达3倍以上。
HE染色显示，衰老模型组胰岛数量、面积仅为正常的50%～70%，衰老糖尿病模型组胰岛数量、面积仅为正常的20%～30%，且岛内中心部细胞(β细胞)消失尤为显著。
电镜观察显示，衰老糖尿病模型组大鼠胰腺细胞明显脱颗粒，呈现膜性结构皱缩，核染色质固缩、碎裂等细胞凋亡征象。
结论采用腹腔注射D半乳糖加高脂高糖乳剂及腹腔注射STZ，胰腺形态组织学证实大鼠在衰老模型基础上胰岛β、D细胞数量进一步下降可引发糖尿病。
【关键词】衰老;糖尿病;实验性/动物模型; D半乳糖;链脲佐菌素【Abstract】 Objective To observe the variances in morphology of the rat model similar to aged human diabetes mellitus (DM). Methods Healthy female Wistar rats were chosen.20 rats were intragastric administrated with physiological saline to build the normal control group; 20 rats were intraperitoneal injected with D galactose for 40 days to set up the aged model group; and 25 rats were intraperitoneal injected with D galactose for 40 days, intragastric administrated with enriched diet for 30 days since injection with D galactose 11 days, then intraperitoneal injected with low dose streptozotocin (STZ) to construct the aged DM model group. Rats whose full blood sugar (FBG) ≥11.1 mmol/L were chosen as successful aged DM rats. After intragastric administrating all rats with physiological saline for 10 days, 10 rats were selected from each group to detect inducing nitric oxide synthase (iNOS) expression in pancreatic island by immunohistochemistry ABC method, detect pancreatic gland apoptosis by TUNEL, and observe the change of hist morph and ultrastructure of pancreatic gland by light microscope and electron microscope. Results Contrasted with the normal control group,the amount of iNOS expression of pancreatic island andpancreatic gland apoptosis in the aged model group increased. HE staining manifested the amount and area of pancreatic island in the aged model group was only 50%～70% of that of the normal control group, and the deprivation of cells in the center of pancreatic island was especially predominant. The observation of electron microscope manifested the cells of rats′ pancreas in the aged DM model group obviously degranulated. Conclusions The adopt of intraperitoneal injection with D galactose, intragastric administration with enriched diet, and then intraperitoneal injection with STZ can produce the increase of apoptosis and/or cell death of iNOS and βcell in pancreatic island, which leading to degression of function and quantity of βcell in pancreatic islet and successfully building the aged DM rats model which is similar to the old people DM best.【Key words】 The aged; Diabetes mellitus; Experiment/ animal model; D galactose; Streptozotocin随着人民群众生活水平的提高、老龄群体的扩大，老年糖尿病患病率亦随之大幅度增加〔1〕。
规章制度观察GDM小鼠模型老年期的糖代谢水平及其胰岛的形态学改变
规章制度观察GDM小鼠模型老年期的糖代谢水平及其胰岛的形态学改变研究背景妊娠糖尿病（gestational diabetes mellitus，GDM）是妊娠期发生的一种糖代谢紊乱疾病，其特点是胰岛素抵抗增强、胰岛β细胞分泌不足，导致血糖升高。
GDM的发生率在全球范围内呈上升趋势，且有大量的研究表明，GDM会增加孕妇和胎儿的疾病风险，如妊娠期高血压、胎儿巨大化等。
而针对GDM小鼠模型老年期的糖代谢水平及其胰岛的形态学改变的研究还较为少见。
研究目的本研究旨在观察GDM小鼠模型老年期的糖代谢水平、胰岛形态学及其相应的变化，探讨GDM对老年期胰岛β细胞的影响及其机制。
研究方法本研究选用8周龄的雌性C57BL/6J小鼠，将其随机分为对照组与GDM组。
对GDM组小鼠进行妊娠糖尿病的诱导，跟踪监测GDM小鼠模型的血糖变化。
在小鼠自然死亡后，使用常规的组织学方法对胰腺进行组织学分析和形态学评估。
通过对胰腺的HE染色、免疫组织化学染色等方式对胰岛形态学和胰岛β细胞数量和形态进行评估。
研究结果在GDM小鼠模型组中，体重增加、胰岛素水平升高、胰岛β细胞数量和形态受到明显影响。
与对照组相比，GDM小鼠模型组的胰岛β细胞数量减少，形态不规则，且存在融合现象。
结论GDM小鼠模型老年期胰岛β细胞数量和形态受到明显影响，提示GDM对胰岛β细胞的损伤可能是造成老年期糖代谢紊乱的原因之一。
参考文献1.Raja-Khan N, et al. Gestational diabetes and maternal obesity: new insights into pathophysiological mechanisms. Placenta, 2018, 71: 60-65.2.Schubeck D, et al. Beta Cell Loss and Mass in Syngeneically Transplanted Islets Exposed to an Environment of Hyperglycemia and Hypoxia. Cell transplantation, 2017,26(5): 783-792.3.Kwon H, et al. Hyperactive mTORC1 signaling contributes to the loss of beta cell function in type 2 diabetes. Cell reports, 2019, 27(11): 3397-3406.e3.。
观察GDM小鼠模型老年期的糖代谢水平及其胰岛的形态学改变
观察GDM小鼠模型老年期的糖代谢水平及其胰岛的形态学改变观察GDM小鼠模型老年期的糖代谢水平及其胰岛的形态学改变本文关键词：胰岛，形态学，小鼠，代谢，老年观察GDM小鼠模型老年期的糖代谢水平及其胰岛的形态学改变本文简介：摘要：目的：探讨妊娠期糖尿病（gestationaldiabetesmellitus,GDM）小鼠模型老年期糖代谢特点及孕期二甲双胍治疗对GDM小鼠胰岛素抵抗和胰岛功能的远期影响。
方法：将小鼠随机分成对照组（n=6）、GDM组（n=6）、治疗组（n=6），采用高脂饮食诱导建立GDM动物模型，治疗组于观察GDM小鼠模型老年期的糖代谢水平及其胰岛的形态学改变本文内容：摘要：目的：探讨妊娠期糖尿病（gestational diabetes mellitus,GDM）小鼠模型老年期糖代谢特点及孕期二甲双胍治疗对GDM小鼠胰岛素抵抗和胰岛功能的远期影响。
方法：将小鼠随机分成对照组（n=6）、GDM组（n=6）、治疗组（n=6），采用高脂饮食诱导建立GDM动物模型，治疗组于孕11.5~17.5 d给予二甲双胍治疗。
分娩后均转维持饲料，并定期监测其体质量变化。
并于分娩9个月后，应用口服葡萄糖耐量试验（oral glucose tolerance test,OGTT）及胰岛素耐量试验（insulin tolerance test,ITT）检测糖代谢。
利用HE染色法观察胰岛的病理学改变。
通过免疫组化染色法检测Ki67蛋白在胰腺组织中的表达。
结果：分娩2个月后，与对照组相比，GDM及治疗组小鼠体质量增长明显（F=3.875,P=0.044）。
与对照组相比，GDM组腹腔注射胰岛素后血糖下降缓慢（P=0.004）。
GDM组胰岛萎缩，数目减少。
Ki67在对照组胰岛中呈强阳性表达（P=0.032）。
结论：GDM小鼠模型分娩后，葡萄糖的调节能力可以基本恢复正常，但是胰岛素抵抗持续存在。
进入老年后，胰岛组织萎缩，功能逐渐减退，增殖能力降低。
糖尿病动物模型
糖尿病动物模型糖尿病（diabetes mellitus，DM）已成为严重危害人类健康的公共卫生问题，DM及其并发症不仅严重影响糖尿病患者的生活质量，同时也是致残、致死的重要原因。
因此，建立合适的糖尿病动物模型，阐明DM及其并发症的发病机制就显得尤为重要。
目前，DM动物模型制备方法主要有：①手术切除胰腺；②化学药物诱导；③自发性糖尿病动物模型；④转基因动物等。
【切除胰腺的DM模型】常采用狗、猫和大鼠等造模，全部或大部分切除实验动物的胰腺，但保存胰十二指肠动脉吻合弓。
如果连续两天血糖值超过11.1mmol/L或行葡萄糖耐量试验120min时的血糖值仍未恢复到注射前水平则认为DM造模成功。
其机制是全部或大部分切除胰腺后，β细胞缺如而产生永久性DM。
【化学药物诱发的DM模型】采用链脲佐菌素腹腔注射或四氧嘧啶静脉注射可诱发DM，常用动物有小鼠、大鼠、家兔和狗。
链脲佐菌素（streptozotocin STZ）的参考剂量为50～150mg/kg；四氧嘧啶（alloxan）的参考剂量为60～110mg/kg。
STZ是一种含亚硝基的化合物，进入体内可通过以下机制特异性地破坏胰岛β细胞：①STZ直接破坏胰岛β细胞：主要见于注射大剂量STZ后。
STZ注射后可引起β细胞内辅酶I（NAD）的浓度下降，NAD依赖性能量和蛋白质代谢停止，导致β细胞死亡。
②通过诱导一氧化氮（NO）的合成，破坏胰岛β细胞；③STZ激活自身免疫过程，进一步导致β细胞的损害：小剂量注射STZ可破坏少量胰岛β细胞，死亡的胰岛β细胞可作为抗原被巨噬细胞吞噬，产生TH1刺激因子，使TH1细胞系占优势而产生IL-2及IFN-γ，在胰岛局部促使炎性细胞浸润，并活化释放IL-1、TNF-α、IFN-γ、NO和H2O2等物质杀伤细胞。
死亡细胞又可作为自身抗原，再次递呈给抗原递呈细胞进行处理，释放细胞因子,放大细胞损伤效应，最终诱发DM。
四氧嘧啶进入体内后能迅速被胰岛β细胞摄取，影响细胞膜的通透性和细胞内ATP的产生，抑制葡萄糖介导的胰岛素分泌。
不同糖尿病模型小鼠糖原代谢变化的研究
不同糖尿病模型小鼠糖原代谢变化的研究肖梅芳;张学梅;白香;谭焕然【期刊名称】《中国临床药理学与治疗学》【年(卷),期】2005(10)6【摘要】目的:通过观察不同类型糖尿病动物模型糖原代谢的变化,初步探讨糖原代谢异常在糖尿病发病过程中的作用。
方法:首先建立4种糖尿病小鼠模型:四氧嘧啶诱导模型、STZ诱导模型、n5STZ诱导模型和葡萄糖激酶基因敲除模型,并对模型小鼠血糖水平进行检测。
然后测定上述动物模型肝糖原和肌糖原的含量,并采用Westernblot方法对葡萄糖激酶基因敲除模型鼠肝组织中葡萄糖激酶的蛋白表达量进行测定。
结果:血糖检测结果显示各模型组空腹血糖值均显著高于对照组,表明糖尿病造模基本成功。
除n5STZ诱导模型外,其它模型组肝糖原的含量均明显低于对照组。
此外,与对照组比较,4种糖尿病模型肌糖原含量均显著降低。
Westernblot结果表明葡萄糖激酶基因敲除模型鼠肝组织中葡萄糖激酶的蛋白表达显著降低,这可能是该模型肝糖原含量减少的机制之一。
结论:糖尿病动物模型出现糖原代谢异常,表现为肝糖原和肌糖原减少,提示糖原代谢在糖尿病发病过程中起着重要的作用。
【总页数】4页(P613-616)【关键词】糖原;动物疾病模型;四氧嘧啶;链脲佐菌素;糖尿病;葡萄糖激酶【作者】肖梅芳;张学梅;白香;谭焕然【作者单位】北京大学医学部基础医学院药理学系;大连大学医学院基础医学部药理教研室【正文语种】中文【中图分类】R965.1【相关文献】1.吉祥草总皂苷对非胰岛素依赖性糖尿病模型大鼠肌糖原、肝糖原及糖代谢的影响[J], 张元;胡一冰;王学勇;杜江;林强2.四氧嘧啶型糖尿病模型小鼠糖耐量和肝糖原与大豆胰蛋白酶抑制剂的干预 [J], 郭瑞华;王慧丽;翟义敏;胡艳;金晓董3.不同运动强度干预2型糖尿病模型大鼠的内脂素及糖代谢变化 [J], 李颖; 林文弢; 翁锡全4.不同运动强度干预2型糖尿病模型大鼠的内脂素及糖代谢变化 [J], 李颖; 林文弢; 翁锡全5.降糖消渴颗粒对糖尿病小鼠肝脏糖原储备量及糖代谢相关基因表达的影响 [J], 张毅;赵丹丹;莫芳芳;高思华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
中老年人群胰岛β细胞功能对糖代谢的影响
中老年人群胰岛β细胞功能对糖代谢的影响佚名【期刊名称】《解放军医学院学报》【年(卷),期】2013(000)006【摘要】Objective To study the effect of pancreaticβ-cell function on glucose metabolism in middle-aged and elderly subjects. Methods Middle-aged and elderly subjects for diabetes mellitus (DM) screening in our hospital from May 2005 to May 2007 were included in this study. Their glucose metabolism was tested by OGTT at the dose of 75g. The subjects were divided into normal glucose tolerance (NGT) group, impaired glucose tolerance (IGR) group and newly diagnosed DM group according to their OGTT. Their pancreatic β-cell function and insulin resistance were assessed, respectively, according to the HBCI/IR and HOMA-IR. Results A total of 756 subjects were included in this study. HBCI/IR showed that the glucose metabolism decreased gradually from NGT to IGR and from IGR to DM and the insulin resistance increased gradually (P<0.001). Univariate linear regression analysis revealed that the HBCI/IR was closely related with glucose metabolism (β=-10.0, 95%CI:-12.6 and-7.3, P < 0.001). Multivariate linear regression analysis displayed that the pancreaticβ-cell function was an important factor for glucose metabolism in middle-aged and elderly subjects after adjustment for sex, age, BMI, SBP, TG, HDL-C and HOMA-IR (β=-0.003, 95%CI:-0.006 and 0.000;P<0.05). Conclusion Pancreaticβ-cellfunction is an important factor for glucose metabolism in middle-aged and elderly subjects.% 目的探讨中老年人群胰岛β细胞功能对糖代谢状态的影响。
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观察GDM小鼠模型老年期的糖代谢水平及其胰岛的形态学改变「范本」观察GDM小鼠模型老年期的糖代谢水平及其胰岛的形态学改变本文关键词：胰岛，形态学，小鼠，代谢，老年观察GDM小鼠模型老年期的糖代谢水平及其胰岛的形态学改变本文简介：摘要：目的：探讨妊娠期糖尿病（gestationaldiabetesmellitus,GDM）小鼠模型老年期糖代谢特点及孕期二甲双胍治疗对GDM小鼠胰岛素抵抗和胰岛功能的远期影响。
方法：将小鼠随机分成对照组（n=6）、GDM组（n=6）、治疗组（n=6），采用高脂饮食诱导建立GDM动物模型，治疗组于观察GDM小鼠模型老年期的糖代谢水平及其胰岛的形态学改变本文内容：摘要：目的：探讨妊娠期糖尿病（gestationaldiabetesmellitus,GDM）小鼠模型老年期糖代谢特点及孕期二甲双胍治疗对GDM小鼠胰岛素抵抗和胰岛功能的远期影响。
方法：将小鼠随机分成对照组（n=6）、GDM组（n=6）、治疗组（n=6），采用高脂饮食诱导建立GDM动物模型，治疗组于孕11.5~17.5d给予二甲双胍治疗。
分娩后均转维持饲料，并定期监测其体质量变化。
并于分娩9个月后，应用口服葡萄糖耐量试验（oralglucosetolerancetest,OGTT）及胰岛素耐量试验（insulintolerancetest,ITT）检测糖代谢。
利用HE染色法观察胰岛的病理学改变。
通过免疫组化染色法检测Ki67蛋白在胰腺组织中的表达。
结果：分娩2个月后，与对照组相比，GDM及治疗组小鼠体质量增长明显（F=3.875,P=0.044）。
与对照组相比，GDM组腹腔注射胰岛素后血糖下降缓慢（P=0.004）。
GDM组胰岛萎缩，数目减少。
Ki67在对照组胰岛中呈强阳性表达（P=0.032）。
结论：GDM 小鼠模型分娩后，葡萄糖的调节能力可以基本恢复正常，但是胰岛素抵抗持续存在。
进入老年后，胰岛组织萎缩，功能逐渐减退，增殖能力降低。
而孕期给予二甲双胍治疗可以增强其老年期的胰岛素敏感性，改善胰岛的病理学改变，但不能改变胰岛组织的增殖能力。
关键词：妊娠期糖尿病；二甲双胍；胰岛素抵抗；妊娠期糖尿病（gestationaldiabetesmellitus,GDM）是指妊娠期首次发生或者发现的不同程度的糖代谢水平异常，是一种多基因遗传的代谢性疾病。
近年来，GDM发病率不断升高，严重危害母婴健康，增加妊娠期高血压疾病、早产、巨大儿、新生儿呼吸窘迫综合征等疾病的发病率[1-3],同时还会对母亲及其子代产生远期危害。
有研究发现，患有GDM的母亲，产后发生2型糖尿病[4]、心血管疾病[5]、代谢综合征[6]的风险也明显增加。
因此，孕期控制血糖同时改善糖代谢是减少不良结局的关键。
二甲双胍（metformin）是常用的口服降糖药物[7-8].但因其可通过胎盘屏障，故在GDM中应用的安全性一直存在争议。
本研究旨在探讨GDM小鼠模型老年期糖代谢特点及孕期二甲双胍治疗对其胰岛素抵抗和胰岛功能的远期影响。
1材料与方法1.1材料实验动物：6~8周健康雌性C57小鼠40只，6~8周健康雄性C57小鼠20只，本研究符合作者所在单位实验动物伦理委员会所制定的伦理学标准。
动物饲料：高脂饲料（ResearchDietsD12451），含45%脂肪，20%蛋白质，35%碳水化合物；低脂饲料（ResearchDietsAIN-93G），含15.8%脂肪，20.3%蛋白质，63.9%碳水化合物。
主要试剂：二甲双胍及葡萄糖（美国Sigma公司），胰岛素注射液（江苏万邦），Ki67抗体（Proteintech）。
主要仪器：血糖仪及试纸（美国强生）。
1.2GDM动物模型的建立健康成年的雌鼠随机分为2组，模型组（n=8）和正常组（n=8）。
模型组高脂饲料喂养1周后与雄鼠按2﹕1比例合笼，次日清晨检查阴栓，若检测到阴栓则标记为妊娠0.5d,整个孕期持续高脂饮食。
正常组孕前1周及孕期给予低脂饲料，其余同模型组。
于孕16.5d行葡萄糖耐量试验，若模型组糖代谢明显异常，则造模成功。
1.3实验分组所有实验小鼠普通饮食适应性喂养2周，随机分为3组：对照组（n=6）、GDM组（n=6）、治疗组（n=6）。
GDM及治疗组孕前1周及孕期给予高脂饮食喂养，对照组孕前1周及孕期给予低脂饮食喂养。
于孕11.5~17.5d,治疗组给予300mg/（kgd）二甲双胍溶液灌胃，GDM及对照组则给予相同剂量的PBS灌胃。
2组孕鼠分娩后均给予普通维持饲料，喂养至12月龄。
1.4检测指标1.4.1OGTT和ITT检测小鼠12月龄时的口服葡萄糖耐量试验（oralglucosetolerancetest,OGTT）水平。
首先将小鼠禁食6h,按禁食后的体质量，以2g/kg的量经口腔灌注20%的葡萄糖溶液，由尾静脉采血，用血糖仪检测灌注前，灌注后30、60、90、120min 的血糖水平，绘制OGTT曲线并计算曲线下面积（AUC）。
检测小鼠12月龄时的胰岛素耐量试验（insulintolerancetest,ITT）水平。
首先将小鼠禁食6h,按禁食后的体质量，以2.5U/kg的量经腹腔注射0.25U/mL的胰岛素溶液，由尾静脉采血，用血糖仪检测注射前、注射后15、30、60、120min的血糖水平，绘制ITT 曲线并计算AUC.1.4.2胰腺组织HE染色所有12月龄的小鼠禁食6h后，戊巴比妥钠溶液腹腔麻醉后，快速分离胰腺组织。
4%多聚甲醛溶液固定，常规石蜡包埋切片，苏木精-伊红染色后于光镜下观察胰腺组织的形态学变化。
1.4.3免疫组化法检测胰腺组织Ki67蛋白的表达胰腺组织4%多聚甲醛溶液固定，常规石蜡包埋切片，免疫组化法检测Ki67的表达。
脱蜡；微波修复法抗原修复，PBS冲洗，5min?1次；3%过氧化氢溶液孵育10min,PBS冲洗，3min?3次；非免疫山羊血清室温封闭30min;滴加一抗，4℃过夜，PBS冲洗，10min?3次；滴加二抗，室温孵育1h,PBS冲洗，10min?3次；DAB 显色；苏木精复染；脱水封片。
显微镜下采集图片，利用Image-ProPlus6.0软件计算平均光密度。
1.5统计学处理采用SPSS23.0软件进行统计学分析，结果以均数标准差的形式表示。
采用独立样本的t检验进行2组间比较；采用单因素方差分析进行多组比较，事后进行LSD检验分析2组间的差异；模型建立中的OGTT结果先进行重复测量方差分析，后应用独立样本t检验分析同一时间点2组间的血糖差异及曲线下面积差异；检验水准=0.05.2结果2.1高脂饮食诱导妊娠期糖尿病小鼠模型建立为了评价建模效果，我们对妊娠期16.5d的OGTT结果进行了重复测量方差分析，结果显示分组主效应（F=107.379,P=0.000），时间主效应（F=1187.974,P=0.000）及两者交互效应（F=40.621,P=0.000）均具有统计学差异。
说明血糖值有随时间因素变化的趋势，且时间对血糖的影响会随着分组的不同而变化。
接下来我们对同一时间点不同分组间的血糖值进行了比较（表1）。
与正常组相比，模型组空腹血糖偏高（t=2.485,P=0.026）；给予葡萄糖灌胃后，模型组血糖下降缓慢，与正常组相比，其灌注后30min（t=18.756,P=0.000）、60min（t=7.766,P=0.000）、90min（t=3.452,P=0.004）的血糖水平明显升高；通过AUC分析也发现，模型组较正常组有升高的趋势（t=10.926,P=0.000）。
综上所述，模型组OGTT结果明显异常，调节葡萄糖的能力下降，高脂饮食诱导妊娠期糖尿病小鼠模型建模成功。
2.2分娩后小鼠体质量增长趋势3组小鼠分娩后均转普通饲料喂养。
在分娩2个月后，3组小鼠体质量具有明显统计学差异（F=3.875,P=0.044）。
与对照组相比，GDM组（P=0.028）及治疗组（P=0.031）的小鼠体质量持续升高。
分娩5个月后，虽然治疗组的体质量增长速度较GDM组有所减慢，但2组间仍无明显统计学差异（P=0.097）。
2.3GDM小鼠分娩后对葡萄糖的调节能力基本恢复正常但出现胰岛素抵抗OGTT结果及曲线下面积（AUC）分析显示，葡萄糖灌注前，3组小鼠血糖值无明显统计学差异（F=2.009,P=0.169），灌注后2hGDM组较对照组血糖值高（P=0.002），但3组的AUC并无明显统计学差异（F=1.624,P=0.230）。
说明与对照组相比，GDM组调节葡萄糖的能力无明显差异（图2A、B）。
ITT结果及AUC分析显示，与对照组相比，GDM组腹腔注射胰岛素后30min（P=0.000）、60min （P=0.008）血糖下降缓慢，其AUC明显升高（P=0.004），说明GDM组老年小鼠存在明显胰岛素抵抗。
与GDM组相比，治疗组小鼠注射胰岛素后30min（P=0.009）、60min（P=0.026）血糖降低较快，AUC有降低的趋势，说明孕期二甲双胍治疗存在提高胰岛素敏感性的作用（图2C、D）。
2.4进入老年期，GDM小鼠胰岛出现病理学改变，孕期二甲双胍治疗可以改善3组小鼠的胰腺组织经HE染色后光镜下观察。
对照组小鼠胰岛数量较多，面积大小不等，形态规则边界清楚。
GDM组小鼠胰岛数量明显减少，胰岛面积萎缩，形态不一。
治疗组小鼠胰岛数量较高脂组增多，胰岛面积与正常组类似，形态较规则，边界欠清（图3）。
2.5Ki67在胰腺组织的表达通过免疫组化染色，可以看到细胞增殖标记物Ki67主要定位于胰岛的细胞核（图4）。
对照组胰岛部着色较深，而GDM组及治疗组染色较浅，其平均光密度分别为对照组0.1490.109、GDM组0.0060.003、治疗组0.0160.0030.3组之间比较虽然无明显统计学差异（F=4.791,P=0.057），但两两比较发现，对照组较GDM组（P=0.032）和治疗组（P=0.042）Ki67的表达量升高。
3讨论GDM是一种以代谢异常为主要表现的妊娠期并发症，其发病机制复杂，主要涉及2个关键环节，即胰岛素抵抗、胰岛细胞分泌相对不足。
妊娠中后期生理性血容量增加，胰岛素浓度降低，同时孕期增加的雌孕激素及胎盘激素具有拮抗胰岛素的作用，外周组织对胰岛素的敏感性下降，胰岛素需求增大。
如果此时胰岛细胞分泌的胰岛素不能代偿胰岛素抵抗的部分，糖代谢就会发生紊乱，进而发展为GDM.虽然大多数患有GDM的女性在产后血糖值可以恢复正常水平。
但是大量的研究[4-6,9]发现，这部分女性产后发生2型糖尿病、心血管疾病、代谢综合征的风险明显增加。
说明虽然血糖值恢复了正常，但其体内的代谢紊乱并未完全消除。
国内外的一部分临床研究[10-12]发现，GDM的产妇在分娩后依然表现出慢性胰岛素抵抗的状态。