美登木内生真菌产抗癌物质球毛壳甲素的分离及鉴定

合集下载

云南美登木内生真菌Beauveriasp_Lr89中的两个环肽

天然产物研究与开发Nat Prod Res Dev 2011，23：667-669，695文章编号：1001-6880（2011）04-0667-04收稿日期：2010-12-13接受日期：2011-04-29基金项目：云南省基金（2007C096M ）；云南省后备人才培养项目（2009CI071）*通讯作者Tel ：86-871-5223111；E-mail ：zhaopeiji@mail．kib．ac．cn云南美登木内生真菌Beauveria sp．Lr89中的两个环肽李俊天1，2，付晓莉2，曾英2，王琦1，赵沛基2*1吉林农业大学食药用菌教育部工程研究中心，长春130118；2中国科学院昆明植物研究所植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室，昆明650204摘要：从云南美登木（Maytenus hookeri Loes．）的根部分离到内生真菌Lr89，根据ITS 序列分析，鉴定为白僵菌属（Beauveria ）真菌。

在PDA 琼脂平板发酵物中分离得到2个环肽类化合物，经波波谱鉴定为isaridin A （1）和isariin B （2），本文首次报道了这两个化合物的13C NMR 数据。

关键词：云南美登木；内生真菌；Beauveria sp．Lr89；环肽中图分类号：Q936文献标识码：ATwo Cyclopeptides from Endophytic Fungus Beauveria sp．Lr 89Isolated from Maytenus hookeriLI Jun-tian 1，2，FU Xiao-li 2，ZENG Ying 2，WANG Qi 1，ZHAO Pei-ji 2*1Engineering Research Center of Chinese Ministry of Education for Edible and Medicinal Fungi ，Jilin Agricultural University ，Changchun 130118，China ；2The State Key Laboratory of Phytochemistry and Plant Resources in West China ，KunmingInstitute of Botany ，Chinese Academy of Sciences ，Kunming 650204，ChinaAbstract ：Endophytic fungus Lr89was isolated from Maytenus hookeri and identified to be Beauveria by ITS sequence．Two cyclopeptides were isolated from PDA solid cultures of Beauveria sp．Lr89．They were determined to be isaridin A （1）and isariin B （2）on the basis of spectroscopic analysis ，and the 13C NMR data of compounds 1and 2were reported for the first time．Key words ：Maytenus hookeri ；endophytic fungus ；Beauveria sp．Lr89；cyclopeptides云南美登木（Maytenus hookeri ）属于卫矛科（Celastraceae ）美登木属（Maytenus ）植物，是云南特有种。

微生物资源

产抗癌药物内生真菌
1.产紫杉醇内生真菌：多数为小盘多拉毛霉 1963 年美国化学家 MCWani 和Monre E Wall 首次从太平洋紫杉树皮中分离到了紫杉醇的粗提物, 该活性物质为一种四环二萜化合物, 1979 年美国NCI 证实紫杉醇独特的抗癌机理。
注： National Cancer Institute, USA （美国国家癌症研究院）
内生真菌资源运用存在的问题
(1)有些内生真菌专一性地寄生在植物体内, 不能在人工培养基上生长, 即使使用不同的营养培养基培养, 也不能确保把生活在植物组织内的所有真菌全部分离出来。 (2)有些已分离到的内生真菌在人工培养基上不产生可育性孢子, 就会由于菌丝体的死亡而造成菌种丢失, 因此不能准确地反映出植物组织内生菌的数量和种群。 (3)内生真菌所产生的次生代谢产物含量很低, 目前每升发酵液中仅能获得很少的活性成分, 一般的检测手段很难检测到, 加大了新化合物的分离难度, 很难达到工业生产水平, 而且在分离纯化及多次传代后内生真菌的生物特性退化, 其代谢产物特性不稳定, 这也给产物的检测带来困难。
植物内生菌的生物多样性
• 植物内生菌为植物组织内的正常菌群, 包括植物内生真菌、内生细菌和内生放线菌, 广泛分布于各种陆生及水生的低等植物和高等植物中。植物内生菌具有丰富的生物多样性, 主要有以下三方面: 寄主物种类多样性、内生菌在寄主植物不同部位分布多样性和内生菌自身种类多样性。
植物内生菌的分类
4.其它生物学作用
• 植物的他感作用是指植物植株向环境中释放某些化学物质, 影响周围其它植株生理生化代谢及生长过程的现象。这种作用是种间关系的一部分, 是生存竞争的一种特殊形式, 种内关系也有此现象。他感作用是自然界存在的普遍现象。 • 研究表明：有的感染内生菌植物会对周围的其它植物产生抑制或促进其生长的他感作用, 其中牧草内生菌产生的毒麦碱对邻近植物有较强的他感作用。感染内生细菌的红花车轴草( T rif olium p r atense ) 也具有抑制玉米生长的他感作用[ 31] 。在植物与内生菌的作用过程中, 有的内生菌成为了分解宿主植物自身组织的先锋, 有的内生菌能够诱导宿主植物细胞的活性物质代谢[ 33~ 35] 。植物内生菌的上述生物学作用使其在菌- 植物- 动物- 环境生态系统中扮演着重要角色。

内生真菌资源学

• 2.1.2 产鬼臼毒素内生菌鬼臼毒素(Podophyllotoxin)：一类天然木脂类化合物1946 年King 和Sullivan 证实鬼臼树脂和鬼臼毒素对动物实验癌细胞有破坏作用。 • 2.1.3 产喜树碱内生真菌喜树碱属于喹啉类生物碱, 是继紫杉醇之后第二个获准上市的具高效抗癌活性的天然药物。 • 2.1.4 产长春碱内生真菌长春花(Catharanthus roseus(L.)Don) 全草可入药。目前已经从长春花中分离出了70多种生物碱, 具较强的抗肿瘤活性成分主要是二聚吲哚类化合物, 如长春碱(VLB)、长春新碱(VCR)等。 • 2.1.5 产球毛壳甲素A 内生真菌球毛壳甲素 A(Chaetoglobosin A)是20 世纪80 年代发现的一种新抗癌化合物。张玲琪等[11] 首次报道了从美登木(Maytenus hookeri.)的茎、叶中分离出一株内生真菌———球毛壳菌 (Chaetomium globosum.), 可产球毛壳甲素。
植物内生真菌资源的研究进展
苏晨曦
概述
物内生真菌(Plant endophytic fungi)是指寄生在健康植物茎干或叶片及根部，完成其全部或部分生活周期，但不形成明显侵染的一类真菌。植物内生真菌由于长期生活在稳定的植物微生物系统中，和宿主建立了共生或半共生关系，因此它是植物体内的正常菌群，可通过组织学方法或严格表面消毒从植物体中分理处内生真菌，也可以直接从植物组织中扩增出真菌DNA的方法来证明其内生，宿主植物与其内生真菌彼此互影响，研究表明已分离出的大多数植物内生真菌能够产生与宿主相同或相似的活性成分。由于植物内生菌来自独特的生存环境而成为人们寻找微生物新药的一个重要药源，具有重要的药用价值。
• (2)有些已分离到的内生真菌在人工培养基上不产生可育性孢子, 就会由于菌丝体的死亡而造成菌种丢失, 因此不能准确地反映出植物组织内生菌的数量和种群。 • (3)内生真菌所产生的次生代谢产物含量很低, 目前每升发酵液中仅能获得很少的活性成分,一般的检测手段很难检测到, 加大了新化合物的分离难度, 很难达到工业生产水平, 而且在分离纯化及多次传代后内生真菌的生物特性退化, 其代谢产物特性不稳定, 这也给产物的检测带来困难。

内生毛壳菌的发酵培养及次生代谢产物研究[毕业作品]

真菌广泛存在于自然界中，是生物界中的一个很大的种群。

到目前为止，世界上被人类记录的真菌约有12万种。

真菌与人类生活密切相关，有些真菌有食用价值，有些真菌则具有药用价值，可以生产抗生素或治疗癌症等。

植物的内生真菌种类繁多,分布广泛,可以产生各种活性天然产物，是一种丰富资源。

目前为止，从植物的内生真菌中得到的次生代谢产物普遍具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤和抗细胞毒等一系列活性。

一些结构多样性次生代谢产物来源于毛壳属真菌。

已经发现的某些次生代谢产物结构新颖并具有新的生物活性，例如抗炎、酶抑制活性、抗肿瘤、细胞毒性和抗菌活性等。

本文以天然产物化学的理论为依据，以微生物的发酵技术、有机溶剂的萃取技术以及柱层析色谱的分离技术为手段，将植物内生毛壳菌TY菌株进行扩大发酵培养，并对发酵液进行了分离提取及纯化。

提取物的分离提纯主要通过三种色谱技术即Seghadex LH-20、反相色谱、薄层层析色谱相结合来达到目的。

目前已经完成分离纯化工作，并且得到了一些纯度比较高的化合物样品，运用高分辨电子轰击质谱（EI-MS）技术结合氢谱（1H-NMR）技术对分离纯化所得到的物质进行结构鉴定，即可以推断出分离所得的化合物为何，甚至有可能进一步发现新的物质。

关键词：内生毛壳菌TY菌株；发酵；次生代谢产物；结构鉴定There is a wide range of fungi in nature it belongs in the biosphere large populations.As of recent years there have been about 120,000 fungi discovered and recorded by humans around the world.Fungus plays an important role in human life and human beings have a very close relationship.Among them some fungi have edible value such as Pleurotus ostreatus and some fungi have medicinal value such as Ganoderma lucidum which can extract effective substances to treat cancer or produce antibiotics.Plant endophytic fungi a wide range of widely distributed can produce a variety of natural products is a rich resource.So far the secondary metabolites obtained from plant endophytic fungi generally have a series of activities such as anti-inflammatory anti-oxidation anti-tumor and anti-cytotoxicity.Some structural diversity of secondary metabolites derived from the genus Fungi.Some of the secondary metabolites that have been found are novel and have new biological activities such as anti-inflammatory enzymatic inhibitory activity antitumor cytotoxicity and antibacterial activity.The main basis of this article is the basic theory of natural product chemistry the use of organic solvent extraction technology microbial fermentation technology and chromatographic chromatography separation method and means to expand the fermentation of plant endophytic fungus TY strain,and then the fermentation broth was separated and purified and the effective ingredients were extracted.Separation and purification of fermentation broth is mainly through the use of three chromatographic techniques to achieve the desired purpose,the three chromatographic techniques are:thin layer chromatography,reverse chromatography and Seghadex LH-20.So far has been completed separation and purification work and has been extracted from a number of relatively high purity compounds and structural identification of the sample.At the same time some compounds with high purity have been extracted and identified.The structure is identified by high-resolution electron impact mass spectrometry (EI-MS) combined with 1H-NMR so that it can be clarified what are the compounds that are isolated and extracted and that some of the new substances may be found.Keywords：Endogenous caterpillar fungus TY;Fermentation;Secondary metabolites; Structural identification目录摘要 (I)Abstract (II)第一章前言 (1)第1节内生毛壳菌TY菌株化学成分研究现状 (1)1.1 内生毛壳菌TY菌株研究现状 (1)1.2内生毛壳菌TY菌株研究的重要意义 (3)第2节分离纯化技术 (4)2.1硅胶柱层析 (4)2.2 Sephadex柱层析色谱 (4)2.3 反相层析柱 (4)2.4薄层色谱（TLC） (4)第3节结构鉴定主要技术 (5)3.1紫外-可见吸收光谱 (5)3.2核磁共振波谱（NMR） (5)3.3 质谱 (5)3.4红外光谱 (5)第4节研究背景、目的和意义、方法和路线 (6)4.1选题背景 (6)4.2研究目的和意义 (6)4.3研究路线和方法 (6)第二章内生毛壳菌TY菌株扩大培养与发酵 (7)第1节内生毛壳菌TY菌株的扩大培养 (7)1.1菌种的保存 (7)1.2.实验仪器和试剂 (7)1.3 实验方法 (7)第2节内生毛壳菌TY菌株的发酵 (8)2.1实验材料、药品及仪器 (8)2.2 实验方法 (9)第三章次生代谢产物的提取、萃取及分离纯化 (10)第1节内生毛壳菌TY菌株TY菌株次生代谢产物的提取 (10)1.1 实验材料、试剂及仪器 (10)1.2 实验方法 (10)第2节内生毛壳菌TY菌株次生代谢产物提取物的萃取 (11)2.1 实验材料、药品及仪器 (11)2.2 实验方法 (11)2.3 色谱分析 (11)2.4 详细流程图 (13)第3节提取物的分离纯化 (13)3.1 实验材料、药品及仪器 (13)3.2 C1部分 (14)3.3 C2部分 (14)3.4 C3部分 (15)3.5 详细流程图 (16)第四章结构鉴定 (17)1.1实验材料 (17)1.2样品 (17)1.3实验仪器 (17)1.4结构分析 (17)讨论 (18)结论 (19)致谢......................................................................... 错误!未定义书签。

云南美登木的研究进展

云南美登木的研究进展【摘要】美登木在临床上常用，是一种卫矛科植物，是一种中药材，也是一种抗癌原料物，临床常用云南美登木，从其组织、各种菌株中，可将20余种化学成分获取，主要包括美登普林、美登木素、美登布丁等，在抗肿瘤方面，提取物存在以下突出特点，包括安全系数大、有效剂量小、不良反应小等。

本文综合分析了云南美登木的研究进展，以供临床参考。

【关键词】云南美登木；研究；进展临床研究美登木，是灌木植物或者常绿乔木，是卫矛科Maytenus属，在亚热带以及热带地区分布。

分析中国Maytenus属植物，在广西、云南、长江以南各省分布，最多分布地区是云南[1]。

由于云南美登木抗肿瘤活性较强，国内外相关学者对其均关注，近年来，越来越重视云南美登木，对其进行了深入分析。

1化学成分介绍分析云南美登木，苷类、安沙大环内酯类以及酮酸类、甾体类、苯丙素类化合物、芳香多聚酮、环肽类化合物等属于其化学成分。

在1972年，在齿叶美登木采集时，发现了微量美登木素，属于安沙大环内酯抗天然肿瘤活性成分，由高等植物中首次分离，在1978年，分离云南美登木茎，获得了美登木素、美登普林、B－香树素、卫矛醇，然后紧接着获得了美登布丁。

为了对云南美登木进行深入研究，获得美登木素类化合物的生物起源，分析其属于自身合成，还是属于作用其共生微生物而得到，在大量研究探讨之后，独立云南美登木组织以及其共生菌株，进行了大量研究。

部分文献中，原材料选择云南美登木新鲜嫩叶、茎尖及叶柄[2]，通过组织培养，将愈伤组织诱导出，首次分析化学成分，开展了相关报道以及研究，将5个化合物分离出，包括胡萝卜甙、β－谷甾醇、大子五层龙酸、s itoindosideⅠ以及2α－羟基美登酮酸，后来，其他学者在愈伤组织基础上，将悬浮细胞培养系继续建立起，将9种化合物分离鉴定而出。

通过对云南美登木共生放线菌菌株1B1进行研究发现了C19H18O7，后来，分离云南美登木新鲜茎皮，将共生放线菌菌株3C获得。

内生菌与天然药物

!""# 年 1 月第@卷第2期
据部分内生菌具有合成和宿主植物相同或相似活性成分的能力这一特点，从药用植物中寻找具有合成确定化合物的内生菌，常用方法是对分离得到的内生菌培养液提取物通过色谱技术、单克隆抗体免疫检测等手段来确定该内生菌是否有产生目的化合物的能力。这一思路目标明确、针对性强、工作量相对较小，是目前从内生菌中筛选活性物质的主要方法，采用这种方法已从多种资源缺乏的药用植物的内生菌中分离得到了和宿主植物相同或相似的活性物质。当然，这种思路具有一定的偶然性，因为不能证实所有的植物中都存活着具有合成和宿主植物相同或相似活性物质的内生菌。二是按照传统的化合物分离纯化鉴定的思路，寻找未知但具有特定活性的化合物。首先是按照目的选择不同的筛选模型进行活性菌株的筛选。其次是对筛选出的活性菌株发酵培养、分离纯化活性物质，再对活性物质进行理化研究及结构鉴定。 ! 已分离到的部分内生菌药用活性物质及其生物学作用 !"# 抗肿瘤物质类
［@］一系列大环内酯类化合物。此后，还从红树林
植物内生真菌中先后分离出 ?’<8.?79:<0 =A,、灰黄霉素 =、异香豆素 .B9:’??9? = 和 /909)<??9: .:9;、
［2］、麦角甾醇、三羟基麦角甾醇、鞘 > 及其类似物［#， C］胺醇苷等化合物。［1］二是各种药用植物。 4DD@ 年 E69’&0’ 首次从中分离得到一株能合短叶红豆杉（ 7$52% 8.0#-9"-$ ）
生真菌微孢拟盘多毛孢（ =(%7"-,7*,6%*% .*0’,%6,’" ）的紫杉醇产量也已经开始显示其商业潜力。鬼臼毒素（ @’A’@BC((’$’&+*）是存在于鬼臼类植物中的一类天然的木脂素（ (+;*%*9），能够抑制微管蛋白的解聚作用和阻断中期相细胞分裂，并具有抑制 DEF 拓扑异构酶活性，是合成多种抗癌药物的前体，其糖苷衍生物 .$’@’9+A. 和 $.*+@’9+A. 毒性较低，对小细胞肺癌、淋巴癌等多种肿瘤疾病均有很好的疗效而被美国 GDF 批准上市。李海燕等从桃儿七（ >*1,6,2,64/--$. (.,2* ）茎中分到一株能产［50］生鬼臼毒素的内生真菌。曾松荣等又分别从南［54］方山荷叶（ ?*64/--(*" %*1(1%*% ）和川八角莲（ ?/%,%." )(*704** ）中分离到了产生鬼臼毒素的内生［5,］真菌。长春新碱（ H+*I/+9$+*. ）是有效的抗癌药物之一，一般用于治疗白血病和恶性淋巴瘤等症。张

药用植物内生真菌研究进展

药用植物内生真菌研究进展郭龙妹;高林怡;孙文静;王莉莉;黎万奎【摘要】药用植物是人类生存与发展的重要自然资源,具有丰富的物种多样性.内生真菌寄生在健康的植物组织内部,是植物微生态系统中的天然组成成分.自然界许多药用植物中蕴藏着丰富的内生真菌,与宿主植物长期进化中产生与宿主相同或相似的活性物质.近年来药用植物内生真菌广泛应用于农业生产、工业发酵、生物制药等领域中,具有广阔的开发利用前景.药用植物内生真菌多样性及其与宿主植物关系的概述,有助于药用植物内生真菌资源的合理开发利用.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2019(047)009【总页数】4页(P11-13,18)【关键词】药用植物;内生真菌;多样性;宿主植物【作者】郭龙妹;高林怡;孙文静;王莉莉;黎万奎【作者单位】上海中医药大学中药研究所,上海201203;上海中医药大学中药研究所,上海201203;上海中医药大学中药研究所,上海201203;上海中医药大学中药研究所,上海201203;上海中医药大学中药研究所,上海201203【正文语种】中文【中图分类】R282.71植物内生真菌是指在其生活史的部分或全部阶段，生存在健康植物体的各类组织和器官内而不引起明显感染症状的真菌[1]。

内生真菌普遍存在于健康植物组织中，种类繁多，分布广泛。

研究表明，药用植物中内生真菌除了自身合成药物活性成分外，还能促进宿主植物合成活性成分[2]。

药用植物内生真菌代谢产物的多样性，为新型活性化合物的发现开辟了新途径。

近年来，我国药用植物生态环境日益恶劣，生物多样性遭到破坏，加强药用植物内生真菌的研究，对其资源的合理开发利用具有重要意义。

1 药用植物内生真菌的多样性1.1 物种多样性研究表明，几乎所有被研究的植物体内都含有内生真菌[3]，且具有丰富的物种多样性，药用植物也不例外。

谭小明等[4]对近10年来国内外已报道的可培养内生真菌进行总结，从83科212种药用植物各类组织中分离出376属以上的内生真菌，具有丰富的物种多样性。

产球毛壳甲素真菌NK-36b中Gα的功能研究

产球毛壳甲素真菌NK-36b中Gα的功能研究摘要摘要本实验室已从柏树枝中分离筛选到一株腐生真菌NK-36b，其发酵产物经过 TLC 法初步鉴定，HPLC定性定量检测，以及质谱和核磁共振谱进一步确定，证明了该菌的发酵产物中含有大量的球毛壳甲素，产量高达83mg／L。

实验证明，NK．36b在以杨树叶子为唯一碳源的培养基上生长良好，可以在刚果红培养基上可产生水解圈，这些结果表明该菌同时具有降解纤维素的能力。

这些特殊的NK-36b的生物学功能让它在应用领域具有巨大的潜力，所以我们需要通过分子生物学的方法对它进行研究来了解其代谢途径的分子机制。

G蛋白是真核生物中一类很重要的信号蛋白，控制调节着很多代谢通路，如MAPK级联反应和cAMP信号通路，能够将环境中的信号传导到细胞内调控细胞的代谢。

G蛋白是由Ga，Gp，研三个亚基组成的。

据文献报道，Ga基因在里氏木霉(Trichoderma reesei)中调节纤维素酶的表达，影响碳源代谢；Ga基因也被报道影响拟枝孢镰刀菌(F淞anum sporotrichioides)和构巢曲霉(Aspergillus nidulans．)中真菌毒素的合成，因此推测Ga基因在NK．36b中对纤维素降解能力和次级代谢产物的合成有影响。

通过GenBank比对获得NK-36b的所有Ga亚基序列，文献报道，丝状真菌中Gal和Ga3基因最为保守，因此选择敲除这两个基因来研究Got亚基在NK-36b中的功能。

本论文通过PCR扩增得到Gal和Ga3基因的同源片段，构建了敲除质粒(pUC．Gal和pGAPDH．Barl．Ga)后通过原生质体转化的方法将其导入NK．36b 中。

利用潮霉素(hyg)和双丙氨磷(bar)选择压力来筛选转化子，通过PCR，Southern blot等方法进一步筛选敲除重组子(CHD4)。

最后通过RT-PCR检测敲除重组子Gal基因的表达水平，结果发现CHD4的Gal基因的表达水平显著下降。

大学生科技创新项目申请书(董梅_上交材料)

[13]
,远远不能满足临床治疗的需要。通过对喜树的不同部位内生真菌的分
离情况看 ,喜树的叶、枝条和果实的内生真菌菌株的含量高。喜树内生真菌菌株进行体外抗肿瘤活性筛选 ,在筛选出的 10 个内生菌株中,有 7 个内生菌株发酵液能显著抑制白血病细胞 HL60 的生Maytasine)
植物内生真菌(plant entophytic fungi)是指那些在其生活史的一定阶段或全部阶段生活于健康植物的各种组织和器官内部的真菌,被感染的宿主植物不表现或暂不表现出外在病症, 可通过组织学方法从严格表面消毒的植物组织中分离或从植物组织内直接扩增出微生物 DNA 的方法来证明其内生。植物内生真菌具有普遍存在性和生物多样性,许多种类在植物体内作为生防菌,能有效地防治植物病害,增强植物对病原菌的抗性。蒙自市枇杷种植历史悠久，且随着市场需求的不断增加，枇杷种植规模不断扩大，已成为当地农民脱贫致富的经济支柱。但近年来枇杷根腐病严重发生，造成巨大的经济损失，制约着蒙自枇杷产业的发展。据蒙自市农业局期路白农业综合服务中心的调查研究，农药防治该病总是短期有效、治标不治本。另外，化学农药引起土壤、水体和大气污染，农副产品中农药残留，直接危害人类的健康及生存；而且，病原菌产生抗药性。研究表明,内生真菌不仅能促进寄主植物的快速生长,增强植物的抗逆性,而且能产生丰富的与寄主植物相同或相似的,并具有生物活性的次级代谢产物,因此为生物防治研究开辟了一个新的方向。
[10.11] [8]
(Vinblastine)、长春新碱(Vincristine)是五十年代末 ,从长春花(Cat
haran thusroseus（L.) Don)中发现的具有抗肿瘤活性,尤其对白血病具显著疗效。此后,从长
春花不同部位分离出 100 多种生物碱 ,但这些生物碱在植物体内含量低 ,且植物生长缓慢, 资源短缺 ,限制了抗癌药物的进一步开发。而从长春花的内生真菌中分离提取出长春新碱将解决这一难题。 3.2.3 喜树碱

中国被毛孢活性物质分离纯化及结构鉴定的开题报告

中国被毛孢活性物质分离纯化及结构鉴定的开题报
告
一、研究背景
毛孢属真菌是一类广泛存在于土壤中的单细胞生物，具有很强的代
谢活性和生物活性，包括抗菌、抗氧化、抗炎和抗肿瘤等多种生物活性。

因此，对毛孢属真菌的研究已成为当前研究的热点之一。

二、研究目的
本研究旨在分离纯化毛孢属真菌中的活性物质，并对其进行结构鉴定，为进一步应用和开发毛孢属真菌提供一定的理论依据和实验依据。

三、研究内容
1. 采用离子交换层析法分离毛孢属真菌中的活性物质；
2. 通过薄层层析、高效液相层析等技术对离子交换层析得到的物质
进行进一步纯化；
3. 利用核磁共振、质谱等技术进行活性物质的结构鉴定和分析。

四、研究方法
1. 采用毛孢属真菌为研究对象，进行培养和提取；
2. 利用离子交换层析法分离物质；
3. 通过薄层层析、高效液相层析等技术对离子交换层析得到的物质
进行进一步纯化；
4. 利用核磁共振、质谱等技术进行活性物质的结构鉴定和分析。

五、预期成果
1. 成功分离纯化毛孢属真菌中的活性物质；
2. 对活性物质的结构进行鉴定和分析；
3. 为毛孢属真菌的应用和开发提供一定的理论依据和实验依据。

六、研究意义
本研究对于深入了解毛孢属真菌代谢物的结构和功能具有重要意义，对于开发和应用毛孢属真菌的活性成分具有实际应用价值，对于促进我
国医药、生物农业等领域的高质量发展也具有积极作用。

药用植物内生菌活性成分及药效学研究进展

药用植物内生菌活性成分及药效学研究进展丁仁伟;邓毅【摘要】查阅国内外近年相关文献,对药用植物内生菌代谢产物的种类及药效进行分析总结,概述药用植物内生菌的活性成分和药效学研究现状,提出药用植物内生菌可产生多种活性成分和药理作用,此项研究对于解决药用植物资源匮乏和发现新成分、新疗效具有重要价值.%Metabolites types of endophytes in medicinal plants and efficacy were analyzed and summarized; active ingredient and pharmacodynamic study of endophytes in medicinal plants were outlined through consulting associated literature at home and abroad in recent years, endophytes in medicinal plants can produce many kinds of active ingredients and pharmacological action. The study is valuable for covering scarcity of medicinal plants and discovering new ingredient and curative effects.【期刊名称】《西部中医药》【年(卷),期】2012(025)003【总页数】5页(P109-112,封3)【关键词】药用植物;内生菌;活性成分;药效【作者】丁仁伟;邓毅【作者单位】甘肃中医学院,甘肃,兰州,730000;甘肃中医学院,甘肃,兰州,730000【正文语种】中文【中图分类】R282.71植物内生菌(endophytic)是指生活在健康植物组织和器官内部的真菌或细菌，是与宿主植物在长期共同进化过程中衍生的一类微生物。

植物内生真菌活性产物的研究人参内生真菌发酵产物

植物内生真菌活性产物的研究人参内生真菌发酵产物植物内生真菌(endophyte)指生活于健康植物组织内部，不引发植物产生明显病症的一类真菌，但在植物衰老或外界刺激条件下，植物自身免疫力下降，也可能出现某些病症；它们在其全部或部分生活周期内生活在植物组织内。

这类真菌生活在植物体这一特殊生境中，不但能促进植物的生长发育和提高宿主植物对生物胁迫和非生物胁迫的抵抗能力，还能产生多种具有生物活性的次生代谢产物。

目前人们已从植物内生真菌中找到许多具有各种生物活性的新物质，在医药业、农业方面显示出重要的应用价值。

抗肿瘤活性的代谢产物寻找生产抗癌药物的有效途径一直是人类攻克癌症的主要工作之一。

目前获取抗癌药物的主要途径有天然植物中提取、化学合成或半合成、组织或细胞培养等。

近年来，人们发现分离自某些抗癌药用植物的内生真菌能产生与宿主相同或相似的抗癌活性物质，从而为抗癌药物的生产开辟了一条新的途径。

即利用产抗癌活性物质的内生真菌发酵生产抗癌药物。

产紫杉醇的内生真菌产抗癌活性物质的内生真菌首先从产紫杉醇的红豆杉植物中分离到。

1993年，Strobel等从短叶红豆杉的树皮中分离到一种内生真菌――安德氏紫杉霉，并从其发酵产物中分离出抗癌活动物质――紫杉醇。

紫杉醇对卵巢癌、乳腺癌等多种临床恶性肿瘤具有突出的疗效，为重要的抗肿瘤药物之一，但因红豆杉植物资源有限，造成紫杉醇价格昂贵此发现为解决紫杉醇的药源危机提供了新的思路，人们开始从红豆杉植物中寻找产紫杉醇及其类似物的内生真菌。

有研究已从云南红豆杉、西藏红豆杉、中国红豆杉、南方红豆杉等红豆杉植物中分离到了产紫杉醇或其类似物的内生真菌。

产鬼臼毒素的内生真菌鬼臼毒素有显著的抗肿瘤活性，能抑制微管蛋白的聚合作用和DNA拓扑异构酶活性，以它为母体改造所得的一些衍生物如:依托泊甙和替尼泊甙等已用于临床。

云南大学的张玲琪等先后从桃儿七、四川八角莲、南方山荷叶三种产鬼臼毒素的植物中都分离到产鬼臼毒素的内生真菌，并且这些内生真菌分布在不同的属中。

西洋参叶三萜皂苷的分离与鉴定_孟勤

UC -4376生长的活性成分③为抗癌活性成分球毛壳甲素(chaetoglobosin A )。

图2　98M -6组分③的化学结构Fig 2　T he chemical structure of the fraction ③of 98M -63　讨　论3.1　12株美登木内生真菌的液体发酵产物提取物的抑菌实验发现,提取液B 均无抑菌圈出现,提取液A 的抑菌实验显示有7株菌出现抑菌圈,并随着提取物样品用量的增加,抑菌圈加大。

因为提取物样品用量加大,其所含抑制榛色青霉菌UC -4376生长的活性成分含量增加。

其中,98M -6菌株的抑菌圈最大,说明98M -6菌株产生的抑制榛色青霉菌UC -4376生长的活性成分活性最高或含量最高。

3.2　从研究可知,利用榛色青霉菌UC -4376可方便地检测目的物中的微量的生物活性物质,简化了筛选产某些抗癌成分的植物内生真菌的繁杂的工作。

榛色青霉菌UC -4376不仅可作为美登素类似物的检测菌[5,8～9],还可作为其它抗癌活性化合物的检测菌,如本实验的球毛壳甲素。

3.3　榛色青霉菌UC -4376还检测到了美登木内生真菌98M -6产生的3组活性成分,其中①为混合物,②和③是单一成分,③经鉴定为球毛壳甲素,①、②以及另外的6株菌产生的生物活性成分需作深入的研究工作,其中也有可能含有美登素。

但从植物内生真菌中分到能产生与宿主不同的生物活性成分,这还是第一次报道。

由此可见,植物体内的真菌种类具有一定的多样性,这些内生真菌都能适应宿主的环境,尤其是能适应宿主产生的抑制其它真菌生长的生物活性成分。

反过来,这些植物对其内生真菌产生的与其不同的生物活性物质也能产生适应性的反应。

有关机制尚待进一步的深入研究。

参考文献[1]S trobel G ,Stierle A ,Stierle D ,et al .Taxomyces andreanae ,a proposed new taxon for a bulbill iferous hyphomycete associated w ith pacific yew (Taxus brevifolia )[J ].Myc ota xon ,1993,47:71.[2]Sekita S ,Yoshihira K ,Natori S ,et a l .Chaetoglobosis ,cytotoxic 10-(Indo -3-yl )-[13]cytochalasans from Chaetomium spp .Ⅰproduction ,is olation and some cytological effects of chaetoglo -bosins A -J [J ].Chem Pharm Bull ,1982,30(5):1609.[3]Sekita S ,Yoshihira K ,Natori S ,et a l .Chaetoglobosis ,cytotoxic 10-(Indo -3-yl )-[13]cytochalasans from Chaetomium spp .Ⅳ13C -nuclear magnetic resonance spectra and their application to a biosynthetic study [J ].Chem Phar m B ull ,1983,31(2):490.[4]周韵丽,黄丽瑛,周倩如,等.云南美登木中美登素和美登普林的分离和鉴定[J ].科学通报,1980,25:427.[5]Hanka LJ ,Barnett M S .M crobiological assays and bioautography of may tansine and its homologues [J ].A ntimicrobial Agents A nd C hemother apy ,1974,(6)5:651.[6]魏景超.真菌鉴定手册[M ].上海:上海科学技术出版社,1979,196～197.[7]Sekita S ,Yoshihira K ,Natori S ,et a l .Chaetoglobosis ,cytotoxic 10-(Indo -3-yl )-[13]cytochalasans from Chaetomium spp .Ⅱstructures of chaetoglobosins A ,B ,and D [J ].Chem Phar m Bu ll ,1982,30(5):1618.[8]武济民,陈佩君,王富金,等.美登素的微生物鉴定方法研究[J ].抗生素,1980,5(6):26.[9]武济民,陈佩君,王富金,等.美登素抗菌作用的研究[J ].微生物学通报,1982,9(6):277.(收稿日期:2000-10-26)作者简介:孟勤,男,硕士研究生,主管技师Tel :(0431)5645911-6763西洋参叶三萜皂苷的分离与鉴定孟勤1,尹建元1,赵俊艳2,徐景达1(1.吉林大学药学院,吉林长春130021;2.吉林大学制药厂,吉林长春130021)摘要:目的　研究西洋参叶的皂苷成分。

天名精内生真菌的分离鉴定及抗肝癌活性研究

天名精内生真菌的分离鉴定及抗肝癌活性研究作者：张艺姚思凡孙伍慧欧阳琳赵碧清周小江来源：《湖南中医药大学学报》2024年第01期〔摘要〕目的對天名精内生真菌进行分离和鉴定，并从中筛选出具有抗肝癌作用的活性菌株，为寻找新的抗肝癌先导化合物提供菌株资源。

方法采用植物组织切块法和平板划线法对天名精内生真菌进行分离纯化；MTT法筛选对肝癌HepG2细胞增殖具有抑制作用的活性菌株，并计算活性显著内生真菌的IC50值；运用形态学鉴定和分子鉴定的方法对活性菌株进行鉴定。

结果从天名精中共分离得到60株内生真菌，其中TMJ-03、TMJ-13、TMJ-15、TMJ-23、TMJ-54为活性内生真菌，其发酵物抑制HepG2细胞增殖的IC50值分别为19.49（TMJ-C-03）、31.13（TMJ-C-13）、88.65（TMJ-C-15）、37.42（TMJ-D-23）、17.22（TMJ-D-54）、32.72（TMJ-C-54）μg·mL-1。

5株活性菌株均鉴定到种，分别为Aspergillus terreus、Chaetomium globosum、Alternaria tillandsiae、Fusarium proliferatum、Alternaria arborescens。

结论首次从天名精中筛选出对HepG2细胞增殖具有抑制作用的活性内生真菌，为寻找新的抗肝癌药物提供了菌株资源。

〔关键词〕天名精；内生真菌；分离鉴定；抗肝癌；HepG2细胞；活性菌株〔中图分类号〕R284.1；R285.5 〔文献标志码〕A 〔文章编号〕doi：10.3969/j.issn.1674－070X.２０24.01.007Isolation， identification， and anti-hepatoma activity of endophyticfungi from Carpesium abrotanoidesZHANG Yi1， YAO Sifan1， SUN Wuhui1， OUYANG Lin1， ZHAO Biqing1， ZHOU Xiaojiang1，2*1. Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410208， China;2. Hunan Engineering Technology Research Center for Standardization and Function of Chinese Herbal Decoction Pieces， Changsha， Hunan 410208， China〔Ａｂｓｔｒａｃｔ〕 Objective To isolate and identify endophytic fungi from Carpesium abrotanoides and screen active strains with anti-hepatoma effects， so as to provide strain resources for the development of new anti-hepatoma lead compounds. Methods The endophytic fungi were isolated and purified from Carpesium abrotanoides by plant tissue culture and scribing method， the active strains with inhibitory effects on the proliferation of HepG2 cells were screened by MTT， and the IC50 value of the notably active endophytic fungi was calculated. Morphological and molecular identification were then applied for the identification of active strains. Results Sixty strains of endophytic fungi were isolated from Carpesium abrotanoides， among which， TMJ-03， TMJ-13，TMJ-15， TMJ-23， and TMJ-54 were active. The IC50 values of their fermentation products inhibiting the proliferation of HepG2 cells were 19.49 （TMJ-C-03）， 31.13 （TMJ-C-13），88.65 （TMJ-C-15）， 37.42 （TMJ-D-23）， 17.22 （TMJ-D-54）， and 32.72 （TMJ-C-54）μg·mL-1， respectively. These five active strains have been identified to species level， namely Aspergillus terreus， Chaetomium globosum， Alternaria tillandsiae， Fusarium proliferatum， and Alternaria arborescens. Conclusion The active endophytic fungi with inhibitory effects on the HepG2cell proliferation were screened from Carpesium abrotanoides for the first time， which can provide strain resources for the development of new anti-hepatoma drugs.〔Ｋｅｙｗｏｒｄｓ〕 Carpesium abrotanoides; endophytic fungi; isolation and identification; anti-hepatoma; HepG2 cells; active strains内生真菌（endophytic fungi）是指在其生活史的某一段时期生活在植物组织内，对植物组织没有引起明显病害症状的真菌[1-2]。

药用植物内生真菌代谢产物的活性研究进展

肿瘤活性，以鬼臼毒素为母体改造所得的一些衍生物，如依托泊苷和替尼泊苷等已用于临床治疗。刘仕平等＂Ｊ从中华山山荷叶的根状茎和ｉｌｉａ角莲中分离到可产生鬼臼毒素或其类似物的内生真菌。２００６年Ｅｙｂｅｒｇｅｒ等旧。从盾叶鬼臼的根茎得到１株内生真菌Ｐｈｉａｌｏｃｅｐｈａｌａｆｏｒｔｉｎｉｉ，从它的发酵液中得到了具有抗肿瘤活性的鬼臼毒素。王兴红一１通过对桃儿七、云南八角莲等７种鬼臼类植物中的３４８株内生真菌发酵液进行抗癌活性测定，获得了抗癌活性菌株１１２株。１．４产其他抗肿瘤活性物质的化合物除了上述化合物，次生代谢产物中的抗肿瘤活性物质还有很多。朱佳等¨训通过对槲寄生内生真菌的分离培养，并对ＳＭＭＣ一７７２１肿瘤细胞增殖的影响研究发现，槲寄生内生菌发酵液具有抗肿瘤作用，对人肝癌和胃癌细胞增殖具有抑制作用。泰国学者从藤黄属植物中分离出５１种内生真菌，并对这些内生真菌产生的６５种次生代谢产物活性进行了测定，其中有１１．１％的代谢产物具有抗人肺癌ＮＣＩ．Ｈ１８７细胞活性，有１２．７％的代谢产物抗人口腔表皮样癌ＫＢ细胞¨¨。２００６年，Ｔｅｌｅｓ等ｕ２ｏ从茎皮香木瓣树的树叶中分离出一株内生真菌Ｐｅｒｉｃｏｎｉａａｔｒｏｐｕｒｐｕｒｅａ，从其代谢产物中也得到了该二萜化合物，Ｔｅｌｅｓ发现该化合物能够明显降低肿瘤细胞ＨｅＬａ和中国仓鼠卵巢的生存能力，与著名的抗癌药物顺铂有类似的疗效。２００７年，Ｔａｎ等¨到从植物青蒿的一株内生真菌Ｈｙ．
医堂绽渣垫！Ｑ生２屋筮！垒鲞筮！！翅丛鲤堡查陋韭堑些塑：墨望垫！Ｑ：！堂：！垒。№：！Ｚ
药用植物内生真菌产次生代谢产物的研究进展
徐范范Ａ（综述），金波，丁志山※（审校）
（浙江中医药大学，杭州３１００５３）中图分类号：Ｒ７３－３５４文献标识码：Ａ文章编号：１００６－２０８４（２０１０）１７－２６６７－０３