用于低乳糖牛奶生产的乳糖酶添加剂候选菌株筛选及粗酶性质研究
乳糖酶研究进展
乳糖酶黑 曲霉突变菌株 ，获得 的突变菌株乳 糖酶产 量是 出发 菌株 的 ３ ， － 达到 ｌ． 单位 ， 倍 ６７ ２ 毫升 ； 海 杜
植 酸 ’ 在 畜 禽 饲 料 生 产 中 的 应 用 酶
任 素 兰 （ 山西省忻州市牧草饲料工作站 ０４０ ） ３００
糖 因被 微 生 物 降解 产 生 的乳 酸 使 牛 乳产 生 凝 固现 象
等。
１不 同来源乳糖 酶的酶学性质及 应用
不 同来 源 的乳 糖 酶 由于 其 酶 学 性 质 的 不 同 ， 使 其 可 以作 为适 应 不 同工业 生 产 的乳糖 酶 源 。
１１来 源于克鲁 维酵母 菌的乳糖 酶 ．
来 源 于嗜 热 古 细菌 的耐 高 温乳 糖 酶 的最适 温 度 为 １５１，５ １０１热稳 定性 较 好 ，对 金 属依 赖性 不 ０ ￣ ９ — ＇ ２ １ ２
强 。 嗜热 古 细菌 等 细 菌类 产 乳糖 酶 的方 式 多 为胞 内 表达 。 目前 ， 乳制 品 的基本 工艺 流程 是 巴 氏杀菌＿ 冷
酶水解的乳制品 ， 可增 加 乳 制 品 的甜 度 ， 奶 香 更 加 使 醇正 ， 避免 因乳 糖 结 晶 产生 的砂 状 口感 ， 以及 避 免 乳
水 解 乳 糖 ， 抑 制 ９ ％以上 腐 败 细菌 的生 长 ， 可 ０ 避免 干
酪、 酸乳和酸性乳清的腐败变质。
１３ 来源于嗜热茵的乳糖酶 ，
３ 提 高乳糖酶 的热稳定性
采 用高 温 乳 糖 酶处 理 乳 制 品 ，提 高处 理 温 度 可 以大 大 缩 短 工艺 流程 时 间 ，避免 乳 制 品 在乳 糖 酶 处 理 过 程 中被 腐 败 菌 腐 败 ， 少 工 艺步 骤 等诸 多 优 点 ， 减 因此 ，乳糖 酶 的热 稳 定性 对 乳 制 品 的工 业 生 产有 着
乳糖酶
乳糖酶在乳品工业中的应用乳与乳制品是营养成分十分丰富的天然食品，其营养价值早已得到了世人的公认，然而美中不足的是由于部分人体内缺乏乳糖酶导致的乳糖不耐受现象，影响了他们对乳制品在人们日常中的普及和人体对乳制品营养成分的消化吸收。
随着现代生物科学技术的发展，人们利用乳糖酶定向水解乳中大量的乳糖，从而使得从根本上解决乳糖不耐受这一困扰世人多年的医学难题成为可能。
本文就乳糖酶在乳品加工业生产中的应用做一简要论述，希望对大家有所启迪和帮助。
β—半乳糖苷酶又称β—D—半乳糖苷半乳糖水解酶，商品名为乳糖酶。
它能够催化β—半乳糖苷化合物中β—半乳糖苷键发生水解，还具有半乳糖苷的作用，是一种无毒无副作用的生物酶制剂，已由FDA、FCC、WHO／FAO和JACFA等权威评审机构确认为安全物质，国际生化编号EC3.2.1.23，CAS编号为9031﹣11﹣2。
中国卫生部已于1998年10月同意列入GB2760中。
利用乳糖酶水解乳糖的性质降低乳制品的乳糖含量，开发更易被人体吸收、被更多的消费群体所适用的低乳糖系列奶制品已成为乳品行业的新亮点。
但是众多因素诸如制备酶的过程中酶活力的损失、生产工艺复杂、产量低等制约了乳糖酶在生产中的应用，其中很重要一点是成本太高。
因而很多学者在构建高效生产乳糖酶的菌株，筛选酶学性质更为优良的乳糖酶，培养基的优化等方面做了大量研究。
乳糖酶属于糖基水解酶家族的一员，分子量在54万左右，是一个四聚体三维结构；是一种白色粉末，无嗅无味；可催化乳糖水解为半乳糖和葡萄糖。
乳糖酶在植物和微生物中分布广泛，植物来源主要有桃、李、杏、苹果、扁桃和咖啡豆等，动物来源主要有肠、脑等器官和皮肤组织，微生物来源主要有大肠杆菌、乳酸杆菌、酵母菌和霉菌等，在实际应用中一般都是从微生物中得到。
乳糖酶根据不同来源可分为胞内水解酶和胞外水解酶，其中乳酸酵母、黑曲霉、米曲霉和米根霉等所产生的乳糖酶均为胞外水解酶，胞壁克鲁维酵母和大部分细菌所产生的乳糖酶均为胞内水解酶。
低乳糖牛奶的工艺参数研究
相应 的水解率 。
．
２ 结 果 与分 析
ＣＨ ＯＨ
ＣＨ２ ０Ｈ
２１ 温 度 对 乳 糖 酶 水 解 的 影 响 乳 糖 酶 是 由 天 然 酵 母 ｒ ｙ ｅｏ ｖ ｅ ａ ｔ （ 造 ￣ｕ ｖ ｒｍ． ． Ｌ ｅｉ 制 ｃｓ ｓ 乳 品 用 的 酵 母 ）提 取 的 ， 其 虽 适 ｐ 为 牛 奶 的 自然 Ｈ ｐ ． 而 且 生 产 上 一 般 不 调 ｐ ， 以 只 对 温 度 这 个 Ｈ６６， Ｈ 所
温度 ℃
０
枣
斟 盛
图 ２ 温度 与乳 糖 酶 （ ｘｌ ｔＬ０ ０活 性 的 关 系 Ｍａｉ ｃ ￣ ０） ａ
由 图 ２可 知 最 佳 温 度 为 ３ ＇ ５Ｅ。 同 时 从 图 中 也 可
ｅＦ Ａ ＝ Ｐ （ Ｐ Ｆ Ｄ ， Ｐ 为 去 除 误 差 ｒ 中 ．Ｐ Ｆ Ａ－Ｆ Ｃ— Ｐ ） Ｆ Ａ 奶
如 图所 示 ：
蓄
冰点 值 绝 对值
图 １ 标 准 曲线 图
１２２ 测 实 际 水 解 率 ．． １２２１ 原 料 准 备 ．． 鲜 牛 奶 超 高 温 灭 菌 ， 后 降 温 至 然
６ ： 各 取 ５ Ｏ ｌ 人 ３个 烧 杯 中 ， 分 别 加 入 ０５ 、 ℃ ０ｒ 放 ａ ‰ １Ｏ １ ‰ 的 乳 糖 酶 于 烧 杯 中 ， 在 ６ 下 均 匀 搅 拌 ， ．‰ ． ５ ℃ ８ 后 取 出 约 ｌ０ 终 止 酶 反 应 ， 测 其 冰 点 值 ， 后 ｈ Ｏ ｍｌ 并 以
添加 乳糖酶 而产生） 所得 的 冰点值 ； 后 ｆ 以 冰 点 值 的 绝 对 值 为 横 座 标 ， 水 解 率 为 纵 座 标 ， 立 座 标 系 ， 出 Ｆ Ｂ和 Ｆ Ａ 建 标 Ｐ Ｐ 的 值 ， 出 标 准 曲 画
乳糖酶在乳糖中的应用
乳糖酶是一种酶类，它能够将乳糖分解为葡萄糖和半乳糖。
乳糖是乳制品中主要的碳水化合物，而有些人体内缺乏乳糖酶，无法消化乳糖，导致乳糖不耐受。
因此，乳糖酶在乳糖处理中有以下几种应用：
1.制造乳糖低或无乳糖产品：通过添加乳糖酶到牛奶或其他乳制品中，可以将其中的乳糖
分解为葡萄糖和半乳糖，从而制造出乳糖含量较低或无乳糖的产品。
这种产品通常被称为乳糖低或无乳糖产品，适合那些乳糖不耐受的人食用。
2.食品加工中的应用：乳糖酶也被广泛用于食品加工中，特别是在糕点、冰淇淋、果酱等
甜品的制作过程中。
添加乳糖酶可以帮助分解乳糖，改善产品口感和消化性能。
3.医学和制药领域的应用：乳糖酶在医学和制药领域也有一定的应用。
例如，一些医疗测
试中需要使用无乳糖标本，可以通过添加乳糖酶来降解样本中的乳糖。
此外，乳糖酶还被用于制备医药产品和生物技术工艺中。
总的来说，乳糖酶在乳糖处理中起到了重要的作用，使得那些乳糖不耐受的人也能够享受到乳制品的美味。
乳糖酶的生产技术及其在食品工业应用研究进展.介绍
乳糖酶的生产技术及其在食品工业应用研究进展摘要：乳糖酶亦称β-半乳糖苷酶，在工业生产中有广泛的应用，本文通过来源及其性质、基础研究与应用等方面对乳糖酶进行综述。
关键词：乳糖酶；固定化；应用乳是各种哺乳动物哺育其幼仔最理想的天然食物。
它富含优质蛋白质、乳脂、乳糖等营养成分和钙、磷、钾等矿物质以及多种维生素，还含有多种免疫物质、酶、激素等具有生理活性调节功能的生物活性物质。
乳糖是哺乳动物乳汁中特有的糖类，它是由一分子葡萄糖和一分子半乳糖组成的双糖，其合成步骤为：以葡萄糖为前体物质，一部分葡萄糖先转化为半乳糖，然后经乳糖合成酶催化。
半乳糖与葡萄糖结合，形成乳糖。
人体摄入乳糖后，在消化过程中，经乳糖酶催化，分解为葡萄糖和半乳糖。
乳糖是矿物质的载体，能促进钙、磷吸收及整理肠道，其分解产物半乳糖是婴儿脑发育的必需物质，参与脑组织及其神经系统的构成。
但是，机体却不能直接利用乳糖，乳糖必须经乳糖酶分解为单糖后才能被吸收和利用（杨卉新等，2014）。
若乳糖酶缺乏者一次摄入较多乳糖，乳糖未能及时被消化吸收，进入结肠后被肠道细菌分解，产生大量乳酸、甲酸等短链脂肪酸和氢气，造成渗透压升高，使肠腔中的水分增多，引起腹涨、肠鸣、肠绞痛直至发生水泻等症状，总称为乳糖不耐受症。
乳糖不耐受症状，在中国人群中发生率很高，因此限制了很大一部分国人对牛奶的摄入，而牛奶又是人类良好的优质蛋白、矿物质及维生素的天然来源，故乳糖酶缺乏问题显得尤为突出（张玉英，2014）。
1889年荷兰生物学家，Beijerineek首次报道了乳糖酶可水解乳糖以来，人们对于乳糖酶的研究日趋完整（蒋世琼，2000）。
目前，解决乳糖不耐受的最佳方法是用乳糖酶水解乳糖来生产低乳糖或无乳糖乳制品。
而现在商业乳糖酶中乳糖酶的最适温度在37℃左右或者更高（P Nicholas，2002）。
国外学者经多年研究，已成功地找到产乳糖酶的微生物，并研制了一系列乳糖酶商品，现已投入市场。
固定化乳糖酶制备低乳糖牛奶的研究进展
充分利用牛乳，这对牛乳的生产及消费的增长具 有较大的阻碍作用。降低牛乳中的乳糖含量，对 于满足乳糖不耐症患者的乳品消费需求，以及促 进我国乳品工业的发展具有重要的意义。
卜建斌，云战友［23］以酰肼颗粒为载体、戊二 醛为交联剂，通过共价结合制得固定化乳糖酶， 对它的特性进行了研究。结果表明，固定化乳糖 酶的最适反应温度为 38 41℃ ，最适反应 pH 值 为 6. 5 7. 0，动力学常数 Km = 304. 87mmol / L， Vmax = 0. 10mmol / （ g · min） ，固 定 化 酶 在 较 低 温度下的使用稳定性好，在 10℃ 下反应 65 个批 次后 活 性 仅 降 低 15. 8% ， 而 在 室 温 下 （ 24 26℃ ） 经过 65 批的反应活性下降将近 50% 。 2. 4 多种方法共用
196
2. 2 交联法 （ cross － linking） 使酶与带两个以上的多官能团试剂进行交联
反应，生成不溶于水的二维交联聚集体。作为交 联剂的有形成希夫碱的戊二醛，形成肤键的异氰 酸酯，发生重氮偶合反应的双重氮联苯胺等，其 中戊二醛最为常用［13］。但是交联法一般不单独使 用，而是与其他方法结合一块使用。
酶会使牛奶掺入外来蛋白以及使用游离乳酶酶提高了生产成本，从而使乳糖酶的应用受到限制。将乳糖酶固
定化后既可以重复使用，又能连续操作，且缩短了处理时间，从而明显降低了使用成本，因此对于乳糖酶的
固定化受到了酶学专家的关注。本文简要介绍了乳糖和乳糖酶及其分类、乳糖酶的固定化方法及其应用，包
乳糖酶的工业生产原理
乳糖酶的工业生产原理
乳糖酶是一种酶，它能够将乳糖分解成葡萄糖和半乳糖。
乳糖酶的工业生产原理主要包括以下几个步骤：
1. 菌种培养：首先，培养乳糖酶产生菌株。
常用的菌株有放线菌、大肠杆菌等。
这些菌株经过筛选和改良，具有较高的乳糖酶产量。
2. 酶的提取与纯化：将培养得到的菌株进行破碎、离心等操作，获取到含有乳糖酶的菌液。
接下来，通过过滤、酶解和纯化等步骤将乳糖酶从菌液中分离出来，获得较纯的乳糖酶。
3. 乳糖酶的固定化：为了提高乳糖酶的稳定性和重复使用性，常常将乳糖酶固定在固体载体上。
常用的固体载体有树脂、硅胶、海藻酸钙等。
将乳糖酶与固体载体相混合，通过吸附、交联等方法将酶固定在载体上，形成固定化乳糖酶。
4. 生产过程的优化和控制：在乳糖酶的工业生产过程中，需要优化和控制多种因素，包括合适的菌种培养条件、培养基的配方和浓度、酶的提取条件、固定化乳糖酶的反应条件等。
5. 产品的提取和纯化：最后，将固定化乳糖酶的反应体系进行分离和纯化，以获得高纯度的乳糖酶产品。
乳糖酶的工业生产原理可以根据具体的生产需求和工艺技术进行调整和改进。
一种低乳糖牛奶及其制备方法[发明专利]
![一种低乳糖牛奶及其制备方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/54237e29a9114431b90d6c85ec3a87c240288a32.png)
[19]中华人民共和国国家知识产权局[12]发明专利申请公布说明书[11]公开号CN 101228904A[43]公开日2008年7月30日[21]申请号200810007521.4[22]申请日2008.02.26[21]申请号200810007521.4[71]申请人内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司地址011500内蒙古自治区呼和浩特市和林格尔盛乐经济园区内蒙古蒙牛乳业(集团)股份有限公司[72]发明人孙国庆 康小红 胡新宇 刘卫星 [51]Int.CI.A23C 9/152 (2006.01)权利要求书 2 页 说明书 7 页[54]发明名称一种低乳糖牛奶及其制备方法[57]摘要本发明涉及一种奶及其制备方法，特别是一种乳糖酶水解牛奶及其制备方法。
属于人类生活必需(农、轻、医)，食品，乳饮料的技术领域。
本发明添加乳糖酶牛奶的制备方法，包括常规液体奶生产工艺，其中，巴氏杀菌和超高温杀菌步骤之间，还包括乳糖酶水解步骤。
本发明产品通过添加乳糖酶工艺，降低产品乳糖的含量，从而提高消费者对牛奶更好的吸收。
200810007521.4权 利 要 求 书第1/2页1.一种乳糖酶水解牛奶的制备方法，包括常规液体奶生产工艺，其特征在于：巴氏杀菌和超高温杀菌步骤之间，还包括添加乳糖酶步骤。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述的添加乳糖酶的优选参数为：添加量控制在0.6～1.2∶1000的体积比例，温度控制在35～45℃之间，水解时间控制在1.5～3.5h之间。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述的添加低乳糖酶的优选参数为：添加量0.8∶1000体积比例，温度39℃，水解时间2h。
4.根据权利要求1-3中任意一项所述的制备方法，其特征在于：所述的添加乳糖酶后牛乳中乳糖水解为90％～95％，提高消费者对牛奶更好的吸收。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述的常规液体奶生产工艺包括：均质、闪蒸、巴氏杀菌、UHT杀菌、无菌灌装。
乳糖酶研究进展
乳糖酶研究进展张敏文;顾取良;张博;李荷【摘要】Lactase has a quite wide range of applications as an additive to dairy products. This article summarized many aspects in research progress of lactase, including the sources and natures, basic research, the applications and so on, and emphatically introduced its new progresses and application in new fields in recent years. Recently cryo-lactase has become a research hot spot. This paper especially introduced the research progress of cryo-lactase.%乳糖酶作为乳品添加剂,应用相当广泛,通过来源及其性质、基础研究和应用等方面对乳糖酶进行综述,重点介绍乳糖酶研究上的新进展和应用的新领域,由于近年来低温乳糖酶成为研究热点,特别对低温乳糖酶的研究进行介绍.【期刊名称】《微生物学杂志》【年(卷),期】2011(031)003【总页数】6页(P81-86)【关键词】乳糖酶;基础研究;应用;低温乳糖酶【作者】张敏文;顾取良;张博;李荷【作者单位】广东药学院,生物化学与分子生物学系,广东广州510006;广东药学院,生物化学与分子生物学系,广东广州510006;广东药学院,生物化学与分子生物学系,广东广州510006;广东药学院,生物化学与分子生物学系,广东广州510006【正文语种】中文【中图分类】Q786乳糖酶又称β-半乳糖苷酶，是哺乳动物乳汁中一种重要的营养成分。
黑曲霉产乳糖酶的研究
黑曲霉产乳糖酶酶学性质研究牛奶是最接近完善的营养食品，它包含了人类生长和维持健康的一切营养成分，具有丰富的蛋白质氨基酸和维生素，是天然钙质的极好来源。
乳糖是奶类中特有的糖类，也是重要的营养成分之一，该物经小肠粘膜上皮细胞绒毛远端刷状缘上的乳糖酶水解成为半乳糖和葡萄糖后，才能被小肠吸收利用。
乳糖酶学名半乳糖苷半乳糖水解酶，又名半乳糖苷酶，是一种白色粉末，无味道，无嗅，溶解后是一种浅棕色液体，乳糖酶通过特定条件水解半乳糖苷键将乳糖水解成葡萄糖和半乳糖，易被肠道吸收。
大量研究表明哺乳动物的乳糖酶活性随年龄的增长，具有典型的生理性降低，成人乳糖酶下降的不可逆受基因控制。
[1] 假如乳糖不被吸收，它将被排放到肠中，被肠道微生物发酵产酸、产气，从而导致胃肠功能失调，并造成有价值的蛋白质和矿物质的损失，如铁、锌、钙质的丢失，这与小儿佝偻病和成年人的骨质疏松症都有关系，专家们的有关调查研究结果显示：乳糖酶缺乏患者比正常情况下的人的骨骼结构差，而更为严重的是，如果体内缺乏乳糖酶半乳糖使得乳糖将无法被水解成为单糖（葡萄糖和半乳糖），而半乳糖供人体吸收、利用，能促进脑苷和粘多糖的合成从而起到促进幼儿智力发育的作用。
乳糖吸收障碍不仅伴有乳糖不耐的征兆，而且还伴有食欲下降，导致饮食量减少、腹泻，也导致一定数量已被消化的食物的丧失，这些消化的食物本能够被吸收却没有被吸收，包括有价值的蛋白、微生物、矿物质和一些牛奶中的糖类、使得牛奶的利用率极低、也浪费了牛奶这种宝贵的饮食资源。
乳糖不耐症在世界范围内是一种多发疾病，易发人群有以下几种情况：（1）成年人主要是由于遗传原因，体内乳糖酶从出生一年后开始衰减。
（2）是先天性疾病。
婴儿在刚出生时肠道内就缺乏乳糖酶活性，这将导致严重的肠胃系统失调。
（3）由于早产而造成婴儿肠道低乳糖酶活性。
（4）蛋白质热值吸收障碍严重的儿童，其乳糖酶活性在一个时期内会暂时消失。
乳糖不耐症发生的人种间差别：据悉，70%的成年黑人、10-15%的成年白人、95%的亚洲人受乳糖不耐症困扰。
在低乳糖牛奶质量控制中的应用初探
鬻 渗≯ 利用离心原理除去原料
奶 中的牛毛 脱 落细 胞 以及粉 尘等 杂 物， 但净乳机可能因为机械或 电压 波动
装机械 原因所 造成的封ｌ不严等． ： ｑ 都会 导致产品的严重变质 ， 属显著性危害。 验翻 毒 保温取样试验和 入库都不会 影响到产品的内在质量， 属 非显著性危害。 此外， 低乳糖牛奶在生产加工过程 中所用到的管道设备等如果清 洗消毒不
的过程 中不受污染 ， 并保证牛奶处于一 定 的温度 范围内 在酶解过程中不受外 界杂茵污染， 才能确保低 乳糖牛奶产品
的 卫 生质 量 安全 。
灭菌后 的牛奶冷 ￣Ｉ ３ 。 Ｉ １０Ｃ以下 易导 １ 则 致梅拉德反应的发生 ． 响产品的感官 影
质 量 但 并 不 影 响 其 内 在 质 量 ， 非 显 属
彻 底 的话 ， 会 使 其 遭 受 物 理 、 学 或 也 化 微 生 物方 面 的 污染 ， 而 严 重 影 响 产 品 从
等方 面的原 因导 致净 乳不 彻底 使得
原料 奶 中仍 然 混有少 量 的微 尘等 其
危害 显 著 。
爱露 ≤麓 在低 乳糖牛奶的生产加 工过程中， 只有 通过 对贮 奶罐 包装设 备以及 连接管道 等的彻底 清洗和严格
消毒， 并配合超高温灭菌和无菌灌装等
工艺措施 ， 才能够保证生产 出高质量 的
低 乳 糖 牛奶 产 品 。
的内在质量， 因此属于显著性危害。
曩键 质量控制赢 的确巍
根 据Ｈ Ｃ Ｐ Ａ Ｃ 管理 体系 中关键 质量 控制点的概念及 其显著性的选项原则， 结合上述危害程度分析评估 特选定以
爰蓉笺 如果巴氏杀菌 不彻底 则会使 原料奶 中残存 一定数 量的致病 菌及一些不耐热细菌． 使牛奶中细菌毒 素分泌量增加 ， 并会使后续工艺水解过 程中的原料奶变质 同时抑制乳糖酶的 活性 降低 乳糖水解率 而影响产品 从 的最 终质量， 属显著性危害。 麓篱拳豢 如果乳糖酶在转移的过 程中受到污染 ． 或牛奶 在酶解 的过程 中 受到外界杂茵的污染 ，Ｉ Ｉ Ｉ Ｉ 会使牛奶 中 Ｉ￣ 的细菌大量繁殖、 微生物毒素的分泌量
用于低乳糖牛奶生产的乳糖酶添加剂候选菌株筛选及粗酶性质研究
ｔ ｅ ａ ｔｖ ｔ ｆｔ ｒ ｅ ｅ ｙ ｅ ｗａ ｈ ｃ ｉ ｉｙ ｏ ｈｅｃ ｕｄ ｎｚ ｍ ｓ ２ ５℃ ａ ｄ ７ ０， ｅ ｐｅ ｔｖ ｌ ． ｎ ． ｒ ｓ ｃ ｉ ｅ ｙ Ｔｈｅｌｃａ ｅｆｏ Ｐｌ ｎ ｃ ｃｕｓｓ ａ ｔ ｓ ｒ ｍ ａ ｏ ｏ ｃ ｐ．Ｙ ｗａ ｏ ａｅ ｎ ｒ ｃ ｌ ｌｒｙ Ｔｈ ｓｗｉｌｐ ｏ ｉ ｅ ａｆ ｕ ｄ ｔｏ ｏ ｒ ｄ ｃｎ ｏ ｌｃｏ ｅｍｉｋ ｉ ｕ ｕ ｅ ｓｌ ｃ ｔ ｄ ｉ ｔａ ｅｌ ａ ｌ ． ｉ ｌ ｒ ｖｄ ｏ ｎ ａ ｉｎ ｆ ｒｐ ｏ ｕ ｉｇ ｌ ｗ ａ ｔ ｓ ｌ ｎ ｆ ｔ ｒ ． ｕ
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低乳糖牛奶生产技术
项目简介：临床学者认为，乳糖消化不良是由于人类肠腔内缺乏乳糖酶或乳糖酶活性低所致，这种情况会导致乳糖吸收障碍，从而产生乳糖不耐症现象，造成人体肠胃不适，如胃胀、腹泻、肠绞痛等。
我国可能有70%的人不同程度有这种症状。
乳糖对人体的生长发育具有重要意义。
当饮食中有乳糖时，可提高人体对钙、镁、磷和其他必需微量元素的吸收，还可降低钙的流失，正因如此，牛奶成了人体的一种最佳钙源。
乳糖在乳糖酶的作用下，可水解成葡萄糖和半乳糖，并进一步代谢产生酸，从而对嗜酸性微生物有利，促进厌氧菌丛的生长，起到调节肠道微生态平衡的作用。
另外，半乳糖是脑和脊髓重要结构物质的合成原料，并可直接形成内膜黏多糖，有助于内膜组织的迅速再生。
目前，乳糖不耐症使许多人放弃饮用牛奶。
而低糖奶的问世可以让这一数量庞大的群体喝上牛奶。
本项目采用国际先进的加工工艺，利用乳糖酶将乳糖分解，使其分解度达到60%，并完成uht低乳糖奶的褐变抑制技术，同时添加乳糖酶后，能明显提高奶的香味、甜度，改善口感，提高牛奶的营养价值，普遍提高人们对乳制品中多种蛋白质、维生素、矿物质及糖类的吸收，促进肠道中有益菌群的生长、繁殖，使乳制品中多种营养物质得到更全、更直接的吸收，从而使“乳糖不耐”人群能够从牛奶中摄取丰富的营养素。
产品质量：产品质量标准（乳糖分解率为60%以上）。
市场前景：乳品消费结构中，鲜奶的消费量最大，酸奶的消费量有所上升，奶粉基本保持不变。
2001年，全国城镇居民每人鲜奶消费量占全年消费总量的71.6%，奶粉占19.4%，酸奶占9%，而低乳糖奶消费尚属空白。
按照国际市场的消费情况，低乳糖奶应高于酸奶的消费量。
而低乳糖液态奶按生产总量的10%计算，则每年需生产低乳糖奶近百万吨，加之每年液态奶的消费比重逐年增长，所以低乳糖奶市场前景非常可观。
酶解制备低乳糖牛奶的优化研究
摘
要：针对低乳糖牛奶制备 中的酶解工艺进行 优化研究 ． 采用正交试验设计考察 了乳糖酶 用量 、 酶解 时间、 酶解
温度和 ｐ Ｈ等因素对乳糖水解率的影响。试验 结果表明 ， 最佳酶解工艺条件为 ： 乳糖 用量 ４０ ｌ Ｌ 酶解 时间 ３ ， ０ ０Ｎｕ ， ／ ｈ
酶 解 温 度 ３ ℃ ，Ｈ －， 糖 水 解 率 可达 ７ ．％， ９ ｐ ６８ 乳 ６６ 达到 生产 低 乳糖 牛奶 产 品 的要 求 ， 足 乳糖 不耐 受症 患 者 的 需求 。 满 关键词 ：乳糖 ； 糖酶 ； 乳 水解 率 ； 交试 验 正 中 图分 类 号 ：Ｓ ０ ． Ｔ２ １ ２ 文献 标 识 码 ： Ａ 文 章 编 号 ：６ １６ ９ （０ ７０ — ０ ２０ ０ １７ — ８ ２ ２０ ）５ ０ ３ — ０ ３
维普资讯
四 ， 仓 品 ． 】
崖 磅
Ｓｉ ｈｔ ． ｏ ｃ ｍ ｎ Ｆ ｏｄ ｎｄ ｒ ｎｅ ａｔ０ｎ ａ Ｆｅ ｔ ｎｔ ｉ
酶解制备低乳糖牛奶的优化研究
蔡 永进
（ 津 市 工业 微 生 物 研 究 所 ， 津 ３０ ６ ） 天 天 ０ ４ ２
Ｋ ｅ ｒ ： ｌｃｏｓ ｙ ｗｏ ｄｓ ａ ｔ ｅ；ｌｃ ａ ｅ；ｈｙ ｒ ｌｔｃ ｒ ｔｏ；ｏ ｔ ｇ ａ ｅ ｔ ａｔｓ ｄ ｏｙ ｉ ａｉ ｒｈｏ ｏｎ ｌｔ ｓ
牛奶 是人 们公 认 的 营养 丰 富 的天然 优 质食 品 ， 但 由于 牛奶所 含 的乳 糖 不易 被人 体 消化 、吸 收 ， 极
ｔｍ ｐ ｒ ｔ ｅ ａ ｄ ｐ ｏ ａ ｔｓ ｙ ｏｙｉ ａｉ ｒ ｎ ｉｎｅ ｎ ｔ ｅ ｏ ｔｏ ｏ ｌｄｅ ｉ ｎ ｅ ｅ ａｕｒ ｎ Ｈ ｎ ｌｃｏ ｅ ｈ ｄｒ ｌｔｃ ｒ ｔｏ ｗｅ ｅ ｍｅ ｔｏ ｄ ｉ ｈ ｒｈ ｇ ｎａ ｓｇ ．Ｔｈ ｅ ｕ ｔ ｈ ｗｅ ｈａ ｐ ｉ ｌ ｅ ｒ ｓ ｌｓ ｓ ｏ ｄ ｔ ｔｏ ｔｍａ
固定化乳糖酶在低乳糖乳制品中的应用
固定化乳糖酶在低乳糖乳制品中的应用文/景文娟 刘晓兰*（黑龙江齐齐哈尔大学食品与生物工程学院）摘要：乳糖不耐症及低乳糖乳制品口感问题是制约乳制品消费增长的重要因素。
通过固定化乳糖酶分解牛乳中的乳糖，同时调整配方，制备出口感佳、营养丰富、成本低的低乳糖乳制品。
结果表明，固定化后的乳糖酶在温度50.00～70.00 ℃、pH值6.7左右时，具有较高的酶活力，稳定性好，金属离子对固定化酶活力影响较小。
通过响应面法优化出制备低乳糖乳制品的最佳条件为：温度50.33 ℃，时间181.99 min，固定化乳糖酶添加量1.28 g/L，乳糖水解率为83.98%，固定化乳糖酶可重复使用8 次。
通过正交试验及感官评价，确认低乳糖乳制品的最佳添加剂配方为：玛卡粉0.08%，椰粉3.00%，乳清蛋白粉1.80%和果葡糖浆2.00%，为低乳糖乳制品的规模化生产奠定了基础。
关键词：固定化；乳糖酶；低乳糖；乳制品；水解率；配方牛乳是人们从大自然中获得的“最完美的天然食物”[1]，然而乳糖不耐症这一世界性问题已经成为制约乳制品消费增长的重要因素[2，3]，中国成人乳糖不耐症的比例为75.00%～92.00%[3～5]。
β-半乳糖苷酶（β-galactosidase，EC 3.2.1.23）能够水解牛奶中的乳糖，生成D-葡萄糖、D-半乳糖、低聚半乳糖[6]。
通过乳糖酶水解技术，研究、开发和生产低乳糖含量的乳制品，对解决现阶段乳糖不耐症问题，增加人均乳制品摄入量具有深远意义。
经调查，部分乳品企业通过在牛乳中直接添加乳糖酶的方式生产低乳糖乳制品，该方法存在乳糖酶无法回收，反应时间无法控制，乳糖酶用量大、生产成本高等缺点[7，8]，而乳糖酶的固定化有望解决上述问题。
固定化酶技术从1957年发展至今，已应用的固定化载体主要有海藻酸钠[9～13]、树脂[14～16] 、壳聚糖 [17～19]、纤维素[20～22]、磁性高分子微球[23]等。
乳糖酶提取与纯化的研究
乳糖酶提取与纯化的研究乳糖酶(lactase)一种极其重要的酶，它可以分解乳糖(lactose)，乳糖是一种主要存在于乳制品中的多糖。
乳糖酶的提取与纯化是必不可少的，以满足实际应用的需求。
乳糖酶在发酵或微生物体内可以分解乳糖，也可以在生物体中充当抗病毒物质。
此外，乳糖酶也可以用于食品加工、营养检测、生物燃料制备等多种用途。
另外，乳糖酶还可以用于分离和纯化。
乳糖酶的提取和纯化是一个比较简单的技术。
它的提取需要把源物质（如发酵液，血清，血清型乳汁等）经过溶解，水解，沉淀，离心等处理方式得到。
其中，离心技术是最主要的方式，它可以将乳糖酶从源物质中分离出来，并用离心管将其膨胀成稀释液，然后在离心速度，温度，pH值等条件下分离出纯化的乳糖酶。
纯化乳糖酶是由不同类型的凝胶分子离子交换模拟膜分离，将含乳糖酶的稀释液中的乳糖酶分离出来的一种方法。
它可以分离出含有较高含量乳糖酶的纯化液，这样乳糖酶的纯度就达到了90％以上。
乳糖酶的质量取决于提取和纯化的整个过程中各个步骤的操作质量，如溶解溶液的酸碱度，沉淀剂的添加量，滤过技术等方面，都要求极高。
经过以上提取和纯化的整个过程，所获得的乳糖酶具有高活性，高稳定性，高纯度，低异质性等特点，并可实现产业化生产。
乳糖酶的提取与纯化的研究在现今的生物技术发展中起着核心作用，从而更好地实现对乳糖酶的应用。
因此，乳糖酶的提取与纯化的研究工作具有重要的现实意义。
未来的发展趋势是，采用更高效、低成本、高纯度的方法来进行乳糖酶的提取和纯化，并如何能更充分地发挥乳糖酶的抗病毒和各种应用性质，将乳糖酶用于食品加工，营养检测等方面。
未来，乳糖酶的提取和纯化将得到更深入的研究，从而更好地满足人类社会对它的需求。
综上所述，以《乳糖酶提取与纯化的研究》为标题的文章可以从乳糖酶的重要性，乳糖酶的提取与纯化的过程，及未来的发展趋势三方面来介绍。
乳糖酶的提取和纯化的研究对于乳糖酶的应用十分重要，也在持续发展，不断被应用到各个领域。
食品乳糖酶的制备与功能性研究
食品乳糖酶的制备与功能性研究随着食品科技的不断发展，人们对于食品的要求也日益提高。
而乳糖不耐症成为了一个不容忽视的问题。
乳糖不耐症是指人体缺乏乳糖酶，因而无法有效消化和吸收乳糖，从而导致腹泻、腹痛等消化道不适症状。
针对这一问题，食品乳糖酶的制备与功能性研究成为了当前食品科技领域的热点之一。
乳糖酶是一种能够催化乳糖分解为葡萄糖和半乳糖的酶类。
在乳糖不耐症患者的食品制备过程中加入乳糖酶，可以有效地降低产品中的乳糖含量，从而提供适合乳糖不耐症患者食用的产品。
因此，乳糖酶的制备成为了食品科技研究的重点之一。
乳糖酶的制备方法主要有微生物发酵法、纯化法和基因工程法。
微生物发酵法广泛应用于乳糖酶的制备过程中。
通过优化微生物发酵条件，如发酵温度、时间和培养基成分，可以提高乳糖酶的产量和活性。
纯化法则是通过对发酵液进行分离纯化，从中提取乳糖酶。
通过离心、过滤、柱层析等技术手段，可以得到纯净的乳糖酶。
而基因工程法则是通过基因重组技术，将乳糖酶基因转移到大肠杆菌等微生物中，利用大肠杆菌的表达系统来产生乳糖酶。
这种方法不仅能提高乳糖酶的产量，还可以对乳糖酶进行修饰，提高其稳定性和催化效率。
乳糖酶不仅可以在食品加工中用作添加剂，还具有多种其他的功能性。
首先，乳糖酶可以降低乳糖含量，解决乳糖不耐症患者的食品选择问题。
其次，乳糖酶可以改善乳制品的质地和口感。
乳糖酶可将乳糖水解为葡萄糖和半乳糖，降低乳制品中乳糖的含量，减少糖的结晶，提高产品的稳定性和口感。
此外，乳糖酶还可以用于生产低乳糖奶粉和乳糖水解制品，满足乳糖不耐症患者的特殊需求。
近年来，乳糖酶在医学领域的研究也取得了突破。
研究人员发现，乳糖酶在乳糖不耐症的治疗中具有辅助作用，可以提高患者对乳糖的耐受性。
然而，乳糖酶的制备和应用还面临着一些挑战。
首先，乳糖酶的制备工艺有待进一步优化。
目前，乳糖酶的制备过程中存在一些问题，如乳糖酶产量低、活性不稳定等。
因此，需要针对这些问题进行深入研究，优化乳糖酶的制备工艺。
乳糖酶 低聚乳糖
乳糖酶低聚乳糖1.引言1.1 概述乳糖酶是一种重要的酶类蛋白质，广泛存在于动物体内和微生物中。
它在乳糖的分解过程中发挥着关键作用。
乳糖是一种双糖，由葡萄糖和半乳糖组成。
然而，一些人体内缺乏乳糖酶，导致其无法消化乳糖，从而产生不适的乳糖不耐症状。
乳糖酶能够催化乳糖的水解，将其分解为葡萄糖和半乳糖。
这使得那些缺乏乳糖酶的人们能够更好地消化乳制品，而不会出现消化不良的症状。
乳糖酶的重要性不仅体现在人类的消化系统中，还广泛应用于食品工业和医药领域。
除了乳糖酶，低聚乳糖也是本文的重点之一。
低聚乳糖是由两个或更多乳糖分子组成的短链寡糖，与乳糖相比，其化学结构更为简单。
低聚乳糖在人类消化系统中被认为具有益生作用，可以促进肠道健康，增强免疫力，改善肠道菌群平衡。
在现代食品工业中，乳糖酶和低聚乳糖被广泛应用于乳制品的加工和生产过程中。
乳糖酶的应用可以使乳制品更易消化，降低乳糖含量，满足不同人群对乳制品的需求。
而低聚乳糖则可以被用作食品添加剂，增强食品的营养价值，改善口感，并具备保健效果。
未来，乳糖酶和低聚乳糖领域的研究和应用还有很大的发展空间。
我们可以通过更深入的了解乳糖酶的分子结构和催化机制，进一步提高其活性和稳定性。
同时，开发新的生产方法和技术，提高低聚乳糖的产量和纯度，也是未来的研究方向。
相信通过不断的努力，乳糖酶和低聚乳糖将在食品工业和医药领域发挥更大的作用，为人类的健康和生活带来更多的福祉。
文章结构部分的内容如下：1.2 文章结构本文主要分为三个部分进行论述，以下是各个部分的简要介绍：1. 引言：首先对乳糖酶和低聚乳糖进行概述，介绍它们的定义、特点以及重要性。
同时，还会给出本文的目的，即分析乳糖酶和低聚乳糖的作用、应用以及未来发展方向。
2. 正文：本部分主要分为两个小节，分别是乳糖酶和低聚乳糖。
其中，乳糖酶小节将对其定义、特点进行详细说明，并探讨它在不同领域的作用和应用。
而低聚乳糖小节则会介绍其定义、特点，以及它在生产和应用方面的情况。
一种新型乳糖酶在制备低乳糖牛奶中的应用研究
一种新型乳糖酶在制备低乳糖牛奶中的应用研究
侯重文;刘飞;钊倩倩;袁超;朱希强
【期刊名称】《食品与药品》
【年(卷),期】2012(000)011
【摘要】目的通过检测一种新型乳糖酶在不同条件下对牛乳中乳糖的水解率,研究其在制备低乳糖牛奶的最适条件.方法产乳糖酶基因工程菌株发酵并提取乳糖酶,分别在10,25和37℃条件下按不同比例添加该新型乳糖酶液,使用HPLC检测其乳糖水解率.结果该酶在10℃(0.9%)水解率可达83%以上,25℃(0.9%)水解率93%以上,37℃(0.3%)水解率94%以上.结论该酶在低温下具有良好的乳糖水解率,在工业上具有广阔的应用前景.
【总页数】3页(P392-394)
【作者】侯重文;刘飞;钊倩倩;袁超;朱希强
【作者单位】山东福瑞达医药集团公司,山东济南 250101; 山东省生物药物研究院博士后科研工作站,山东济南250101;山东福瑞达医药集团公司,山东济南 250101;山东福瑞达医药集团公司,山东济南 250101;山东福瑞达医药集团公司,山东济南250101;山东福瑞达医药集团公司,山东济南 250101
【正文语种】中文
【中图分类】TQ925+.9
【相关文献】
1.用于低乳糖牛奶生产的乳糖酶添加剂候选菌株筛选及粗酶性质研究 [J], 李荷;张博;张敏文;顾取良
2.乳糖酶在生产低乳糖奶中的应用研究 [J], 孙国庆;史玉东;付治军;康小红;胡新宇;刘卫星
3.固定化乳糖酶制备低乳糖牛奶初步研究 [J], 姚学平
4.固定化乳糖酶制备低乳糖牛奶的研究进展 [J], 孙成行;陈历俊
5.一种新型乳糖酶在制备低乳糖牛奶中的应用研究 [J], 侯重文;刘飞;钊倩倩;袁超;朱希强
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乳糖酶的性质及其在低乳糖乳制品中的应用
乳糖酶的性质及其在低乳糖乳制品中的应用
侯瑾;杨凯;薛冰;张大虎;陆世海
【期刊名称】《食品安全导刊》
【年(卷),期】2022()19
【摘要】乳糖酶的应用范围十分广泛,在乳制品生产、果蔬的成熟与软化、医药领域和保护环境等方面有较大的应用价值,尤其是在乳制品行业,可有效缓解“乳糖不耐症”。
本文主要从乳糖酶的来源、微生物乳糖酶的特点、乳糖酶的生产现状以及乳糖酶在低乳糖乳制品中的生产工艺和应用等方面对乳糖酶进行综述,并对国内低乳糖乳制品市场前景进行了展望,旨在为研究开发生产新型乳糖酶和低乳糖乳制品提供理论参考。
【总页数】6页(P172-177)
【作者】侯瑾;杨凯;薛冰;张大虎;陆世海
【作者单位】齐鲁工业大学(山东省科学院)山东省科学院菏泽分院山东省生物工程技术创新中心;聊城市检验检测中心;山东大树达孚特膳食品有限公司
【正文语种】中文
【中图分类】TS2
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收稿日期:2010-10-29基金项目:国家自然科学基金项目(30570055);广东省科技计划项目(2009B020313005);广东省自然科学基金博士启动基金(9451022401003873);广东药学院博士启动项目(2006JCX06)作者简介:李 荷(1968-),女,黑龙江绥化人,副教授,博士,硕士生导师,主要从事微生物分子生物学的研究。
*为通讯作者。
E -mail:lihe32@163.co m用于低乳糖牛奶生产的乳糖酶添加剂候选菌株筛选及粗酶性质研究李 荷*,张 博,张敏文,顾取良(广东药学院生物化学与分子生物学系,广东广州510006)摘要:在低乳糖牛奶加工过程中需要高活性的低温乳糖酶作为添加剂。
为此,从采集土样中分离纯化获得1株低乳糖奶加工过程中需要的高乳糖酶活性候选菌株,应用形态学和分子生物学方法,初步鉴定该菌株为动球菌属(Planococcus sp.),命名为Planococcus sp.Y 。
研究表明,该菌株是1株低温菌株,其最适生长温度为25e ,最佳生长pH 值为7.0,所产酶为胞内酶,粗酶液的最适酸碱度和温度分别为pH 7.0和25e 。
关键词:乳糖酶;筛选;低温菌中图分类号:S879.1 文献标识码:A 文章编号:1004-3268(2011)04-013805Screening of A Psychrotolerant Bacterium of P lanococcus sp.YProducing Low T emperature Lactose and PreliminaryStudy on Its Enzyme A ctivityLI H e *,ZH ANG Bo,ZH ANG M in -w en,GU Q u -liang(Department of Biochemistry&M olecular Biology ,Guangdong Pharmaceutical U niv ersity,Guangzhou 510006,China)Abstract :H igh activ ity of cold -adapted low lactase as an additive is necessary in pro cessing lowlactose milk.T he psychrotrophic and bacterium strain w as isolated from surficial soils.A str ain capable of producing psy chrotrophic a lactase was identified as a Planococcus sp.Y according to the morpholog ical and m olecular characteristics.T he optimal conditions for the g row th of the strain w ere ex amined.The optimal temperature and pH value for g row th w ere 25e and 7.0,re -spectively.Study on the activity o f the lactase show ed that the optim al tem perature and pH fo r the activity o f the crude enzym e w as 25e and 7.0,respectiv ely.The lactase from Planococcus sp.Y was located intracellularly.T his will provide a foundation for producing low lactose milk in future.Key words :Lactase;Screening ;Psy chrotolerant bacterium 在畜牧业奶制品及其副产品生产及加工过程中,存在着生产所用的常温乳糖酶在低温下酶活力很低,成本高,难以满足市场及生产所需的问题[1]。
为解决此问题,国外的研究者首先致力于产低温乳糖酶(乳糖酶又名B -半乳糖苷酶)菌株的分离筛选[2-5]。
国内外对低温乳糖酶的研究是从近十几年才开始,而且尚处于实验室研究阶段[6-10]。
但目前常用的乳糖酶其最适反应温度大多较高,对pH 的要求比较严格,其生产成本相对较高,消耗较多的能源。
因此,寻找一种在较低温度和较大pH 范围下具有高活性的乳糖酶,对于降低成本、节约能源,具有重要的应用价值。
本研究采集土样作为获取菌株河南农业科学,2011,40(4):138-141,145 Jour nal of H enan Ag ricultural Sciences的来源,先在低温条件下进行分离、筛选,然后再以ON PG为底物测定B-半乳糖苷酶酶活力,获取1株具有高B-半乳糖苷酶活的低温菌株,通过对菌株形态的研究和16S rDNA分析,对菌株进行初步鉴定,为进一步研究优质低乳糖奶的生产工艺提供条件。
1材料和方法1.1材料与试剂试验用土样采集自小兴安岭。
T aq DNA聚合酶与各种限制性内切酶均购自宝生物工程(大连)有限公司,胶回收试剂盒购自上海申能博彩生物科技有限公司,PCR引物由上海博亚公司合成。
pGEM-T-Easy购自Promeg a公司。
对硝基苯酚(Sig ma公司),ONPG(Sig ma公司),胰蛋白胨、酵母抽提物购自Ox oid公司,其他化学试剂均为分析纯。
1.2主要溶液及培养基溶液的配制:碳酸钠溶液(0.5mol/L),磷酸二氢钾-柠檬酸缓冲液pH(2.5~6.0);磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液(PBS)pH(6.0~8.0);Tris-HCl缓冲液: pH(7.5~9.0);甘氨酸-氢氧化钠缓冲液:pH (8.5~10.0);广泛缓冲液:pH(11.0~12.0)pNPG溶液(10mmol/L);对硝基苯酚标准储备液(10mmol/L);对硝基苯酚标准工作液。
1.3试验方法1.3.1低温菌的富集和分离在采集土样区,取表土层下不同深度的土样,然后将土样配制成悬浮液,接种到培养基中,振荡培养。
待菌长出后,将所得的菌液稀释成不同浓度,涂布在固体培养基上,倒置在4e冰箱培养;当平板出现菌落时,将单菌落在平板上划线分离、纯化菌株。
将生长快、菌落规则、传代稳定的单菌落斜面保存;斜面单菌落接入液体培养基,振荡培养2d,以ONPG为底物测定乳糖酶的活力。
1.3.2乳糖酶活力测定程序将培养液离心,弃上清,加入0.2mo l/L pH9.0的醋酸钠缓冲液,用超声破碎,然后将破碎后的菌体,离心,将上清移入试管,放入冰箱;取上清,加入0.25%ONPG(0.2mol/L pH9.0醋酸钠缓冲液配制),30e水浴30min,加入2m L、1m ol/L碳酸钠显色液,测定乳糖酶活性,同时以0.2mo l/L pH9.0醋酸钠缓冲液代替上清作为对照;计算水解产物邻硝基酚(ONP)的含量和酶活性。
1.3.3产高B-半乳糖苷酶活性的低温菌株的分离和筛选采集土样,经富集培养,将样品稀释后涂布于选择性培养基平板上进行分离,并放在4e冰箱培养,选择平板上共筛选到10株细菌,将10株细菌接种于液体选择性培养基中25e培养24h后,进行乳糖酶活性的测定,其中菌株Y具有较高的酶活性,其他均无乳糖酶活性。
1.3.4细菌的鉴定形态学鉴定根据形态观察和鉴定手册进行。
分子生物学鉴定提取需要鉴定菌种的DNA,以其为模板,利用细菌保守的间隔序列的通用引物进行PCR扩增,纯化后连接载体或直接测序。
1.3.5产高B-半乳糖苷酶活性的低温菌株的生长条件的研究1.3.5.1菌株Planococcus sp.Y生长曲线的测定对菌株Y进行活化,接入装有25m L培养基的三角瓶中,25e振荡培养12h,以2%的接种量接入装有50mL培养基三角瓶中,3次重复,相同条件下培养,在波长600nm处测定OD值,开始每隔1h测1次,5h后每隔2h测1次,记录数据。
1.3.5.2不同碳源和氮源对菌株Planococcus sp. Y生长和产酶性能的影响在装有无机盐培养基的三角瓶中,接种,分别添加已灭菌的葡萄糖、蔗糖、可溶性淀粉、乳糖、麦芽糖溶液、蛋白胨、牛肉膏、尿素、酵母粉,同时做无碳氮源对照和空白对照。
每个处理3个重复,取平均值作为结果。
在25e,振荡培养2d后,分别取样10m L测定菌体的生长量和乳糖酶活性,确定对菌株的生长和产酶性能有较大影响的营养物质。
1.3.5.3温度对菌株Planococcus sp.Y生长的影响按种子培养液2%的接种量接种于培养基中,在不同温度下(4、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70e)培养2d后,分别取样10mL测定菌体生长量,确定对菌株的生长有较大影响的温度。
每个处理3个重复。
1.3.5.4pH对菌株Planococcus sp.Y生长的影响测定培养基pH值在2.0~12.0之间时对菌株Y 生长的影响。
每个处理3个重复,25e下振荡培养2d后,取样10m L测定菌体生长量。
1.3.6酶的定位和粗酶液理化性质的研究1.3.6.1酶的定位取活化过的菌株接种于培养基,25e下培养2d后,10000r/min离心10min,取上清液,边搅拌边加研磨好的硫酸铵至饱和度为80%,4e透析过夜,12000r/m in离心15min收集沉淀。
用pH6.2、0.02m ol/L的磷酸缓冲液溶解后,再用同一缓冲液透析得即得胞外粗酶液。
把离心沉淀下来的菌体用pH6.2、0.02m ol/L的磷酸缓冲液洗涤3次。
然后将离心沉下来的菌体配成菌悬139第4期李荷等:用于低乳糖牛奶生产的乳糖酶添加剂候选菌株筛选及粗酶性质研究液,超声破碎,离心,取上清液,即得胞内粗酶液。
1.3.6.2酶的最适反应pH值将酶液分别加入到上述pH2.0~12.0的缓冲液中,按标准方法测定酶活力,以酶活性最高者定为100%,以相对活力和所对应的pH值作图。
1.3.6.3酶的pH稳定性将酶液分别加入到pH2.0~12.0缓冲液中,30e保温1h后,按标准酶活力测定方法测定残余酶活力,以在最适反应pH下测得的酶活力定为100%。
以相对活力和所对应的pH值作图。
1.3.6.4酶的最适反应温度将酶液和pH9.0的0.05mo l/L甘氨酸-氢氧化钠缓冲液分别在4、10、20、25、30、35、40、45、50、60、70e的水浴中保温30min,然后加入底物溶液,按照标准方法测定酶活力,得到酶液在不同的反应温度下所具有的酶活力,以酶活力最高者定为100%,以相对活力对温度作图。