低次烟叶中蛋白质提取工艺优化及氨基酸分析研究

合集下载

生物技术应用于现代卷烟工业研究进展

生物技术应用于现代卷烟工业研究进展饶国华1，沈光林1，温东奇1，赵谋明2（1.广东中烟工业公司技术中心，广东广州 510145）（2.华南理工大学轻工与食品学院，广东广州 510640）摘要：生物技术广泛应用于现代卷烟工业，不仅可提高烟草原料的质量，而且还可降低卷烟对人体的危害，对现代卷烟工业发展具有重大的战略意义。

本文综述了生物技术应用于烟草陈化发酵、改善原料、处理烟梗与烟草薄片、生产烟用香精及生物滤棒等方面的研究进展。

关键词：生物技术；烟草；发酵；烟用香精中图分类号：S572；文献标识码：A；文章篇号:1673-9078(2007)12-0090-05Research on the Application of Biotechnology in ModernCigarette IndustryRAO Guo-hua1, SHEN Guang-lin1, WEN Dong-qi1, ZHAO Mou-ming2（1.Technology Centre of China Tobacco Guangdong Industrial Corporation, Guangzhou 510145, China）（2.College of Light Industry and Food Sciences, South China University of Technology, Guangzhou 510640, China）Abstract: Biotechnology has been widely applied in modern tobacco industry, which could not only improve the quality of tobacco material, but also decrease the harm of cigarette to consumers. The applications of biotechnologies in tobacco fermentation, improvement of tobacco quality, treatment of tobacco pipe and slice, tobacco essence production and bio-filters are reviewed in this paper.Keywords: Bio-technology;, Tobacco; Fermentation; Tobacco essence我国是世界上最大的烟草生产国，近年来烟叶生产发展总体稳定，烟叶质量也在逐步提高，基本能满足卷烟工业生产需要和烟叶出口需求。

烟叶蛋白的分离纯化(1).

6.烟草蛋白的研究现状
对于烟草蛋白的分离纯化，最主要的问题在于如何控制提取液中的盐浓度以及多酚、色素、生物碱、碳水化合物等杂质的量，这将直接关系到烟草蛋白的纯度与产率。由于烟草FI蛋白和其他植物蛋白相比，可以通过结晶的方法得到，因此通常采用结晶法来获得高纯度的烟草FI蛋白。目前主要有一下几种方法：
•柱层析过滤结晶法
2.研究背景
我国烟草种植中，有不少数量的低残次烟草存在，这些低残次烟草往往都是因为蛋白质含量偏高，这对于制烟工业来说是有害的，会导致烟气中有害物质的增加，严重影响香烟品质。但如果将这些低残次烟叶用于蛋白质的提取，无疑将会是变废为宝。
3.烟草的化学成分
烟草的化学成分与其他植物一样，可分为两大类：一类为有机化合物，一类为无机化合物。糖、淀粉、糊精、纤维、色素、有机酸、蛋白质、烟碱、氨基酸等属有机化合物；氯、钾、磷、钙、镁、硫等无机盐类属无机化合物。
4.用前景
总的来说，烟草叶蛋白和其它植物蛋白相比至少有以下几个特点：①蛋白质含量丰富，烟草比水稻、小麦、玉米和大豆等作物的叶蛋白含量都高。自英国首次从苜蓿中提取蛋白质至今，所研究的植物叶蛋白中烟草含量是较高的。②烟草蛋白质可大量的结晶化提取，这就为烟草叶蛋白的提取利用开辟了广阔的前景。③烟草叶蛋白为高级营养物质，其含氨基酸种类多，最易被人体吸收利用。
•透析稀释结晶法
•直接稀释结晶法
•蛋白沉淀法
•双水相萃取法
主持人签字：日期：年月日
中国矿业大学研究生学术专题研讨会记录
第次
时间
2009.11.30
地点
化工学院B316
专题汇报人（1）
汇报主题
烟叶蛋白的分离纯化（1）
专题汇报人（2）
汇报主题
研讨会记录：

烟草蛋白质的利用及提取的研究进展

烟草蛋白质的利用及提取的研究进展刘旭强;李军;刘维娟;张艳林;郑甜田;王亚明【摘要】烟草在我国种植范围很广,近年来,其种植面积持续增长,据统计,仅2011年种植面积达123.87万m2.烟草含有众多有价值的成分,其中,蛋白质是含量最多的一种.烟草蛋白质在生化、饲用、食用、医药等方面都具有很高的应用价值.烟草蛋白质的提取工艺,在相关工作者的努力下也日趋成熟.作者综述了烟草蛋白质的提取以及综合利用,并展望了烟草蛋白质的发展前景.【期刊名称】《化工科技》【年(卷),期】2014(022)006【总页数】4页(P67-70)【关键词】烟草蛋白质;利用;提取;研究进展【作者】刘旭强;李军;刘维娟;张艳林;郑甜田;王亚明【作者单位】昆明理工大学化学工程学院,云南昆明650500;云南瑞升烟草技术(集团)有限公司,云南昆明650106;云南瑞升烟草技术(集团)有限公司,云南昆明650106;云南瑞升烟草技术(集团)有限公司,云南昆明650106;云南瑞升烟草技术(集团)有限公司,云南昆明650106;云南瑞升烟草技术(集团)有限公司,云南昆明650106;昆明理工大学化学工程学院,云南昆明650500【正文语种】中文【中图分类】TS41+1烟草(草烟)是一种多年生草本植物，它具有悠久的种植历史，生长在世界各地的多处地域，其主要用于商业生产香烟和相关的烟草产品。

由于吸烟有害健康和其它禁烟法规的出现，导致烟草的使用前景受到影响，并且对烟农的收入也产生了负面影响。

然而，烟草除了制烟吸食，还具有许多其它未开发的价值，尤其是从生化科技方面来看，烟草其实是一种极其丰富的生化资源。

蛋白质是烟草众多成分中含量最多的一种，其在白肋烟中的含量高达20.48%[1]。

随着人们对蛋白质的研究发现，植物蛋白是利用价值极高的一种蛋白资源，因此渐渐开始关注植物蛋白。

植物蛋白可以在医药、食用等方面产生巨大的效益，对饮食不足和医用蛋白昂贵等问题提供了崭新的解决思路。

烟叶品质分析实验报告

试验一原子吸收分光光度计、气质联用仪、紫外分光光度计的使用一、原子吸收分光光度计（一）、工作原理：原子吸收分光光度计又称为原子吸收光谱仪，是利用光源发出被测的特征光谱辐射，被经过原子化器后的样品蒸气中的待测元素基态原子所吸收，通过测定特征辐射被吸收的大小，来求出被测元素的含量。

原子吸收光谱仪主要由光源、原子化系统、光学系统、电学系统等四个基本部分组成，其工作原理：光源发出特征光谱辐射，经过原子化器室后，由分光系统得到单色光经过光电倍增管后到达检测器，终端电脑从检测器得到信号，进一步转化为数据进行处理，因为原子化器没有进样时，光通过原子化器时没有被吸收，透光率为100%，而当原子化器进样时，光通过原子化器时有一部分被吸收，透光率减小。

根据朗伯-比尔定律，吸光度与样品浓度成正比，因此参照标准，根据吸光度可得出样品的浓度。

（二）、操作过程（德国耶拿novAA400）1. 先启动计算机进入应用程序。

再打开主机电源。

打开空气压缩机风机和压缩机开关，将空气压缩机风机出口压力调整到0.5Mpa，打开乙炔钢瓶气阀门，使出口压力调至0.06～0.07Mpa。

2. 点击应用程序菜单“操作”→“编辑分析方法”。

出现对话框“操作说明”，点击“火焰原子吸收”和“创建新方法”(或“修改已有方法”)后点击“继续”。

(如已设定好分析条件可按老师指导直接点击应用程序菜单“文件”……)3. 出现对话框“创建新分析方法”，在“分析元素”项旁边周期表，点击所选择元素再点击“确定”→对话框“创建新分析方法”。

4.屏幕将出现分析条件选择画面(对话框)；应将“仪器条件”、“测量条件”、“工作曲线参数”三项在老师指导下按要求填写好；点击“确定”。

5.点击应用程序菜单“文件”→“新建”，弹出“分析光源”对话框，选择火焰原子吸收；点击“确定”。

弹出“分析任务设计”对话框，用鼠标在“元素”，“灯位置”选择所需元素灯(变蓝)，点击“选择方法”；弹出新对话框中，用鼠标在所选择“元素”及“方法”点击，点击“确定”。

农业工程学报2006年(第22卷)

喷头射程理论公式与试验研究 ………………………………………………………………… 脱云飞，杨路华，柴秦岭，等
水力侵蚀调控物理模拟试验相似律的初步确定
…………………………… …… …………… 高建恩，杨世伟，昊普特，等迪，李福祥 ……………………………… ……… 马福生，康绍忠，王密侠，等
…………………………………………………………… …… … 刘建瑞，施卫东，叶忠明，等
双吸式叶轮内流三维数值模拟及性能预测
………………………………………………… … 赵斌娟，袁寿其，李红，等
１（）９３
１（）９７
采用二分法计算链传动中心距（英） … ………………………… …………………………………… 荣长发，范顺成，高莉
………………………………………… … 何
若。东升，恒韬，等沈许
１（３）１４１（３）１８
封闭循环海湾扇贝育苗系统水处理工艺与运行效果研究
………………………………… … 冯志华。俞志明，刘鹰，等
………………………………………… 赵谋明，饶国华，林伟锋，等１（４）１２
珞，张志刚，冯琰，等
菜地土壤剖面上重金属元素含量随时闻的变化规律研究
离心泵射漉自吸装置的研究
………………………………… … 王国梁，周生路，赵其国。等１（）７９
１（８９）
番茄收获机械手奇异性分析与处理 ………………………………………… …………………………………用的弹性规划研究 … ……………… ……………… …… …………………………………… 尹
用”Ｃｓ示踪法研究密云水库周边土壤侵蚀与氮磷流失 …………………… ……………… … 华

烟草叶蛋白利用价值研究进展

阔的前景。 ③烟草叶蛋白为高级营养物质，其含氨基酸种类
多，最易被人体吸收利用。
烟草叶蛋白可分为组分一Ｉ（ｒｃｏＩ）白和组分一Ⅱ Ｆａｔｎ蛋ｉ（ｒｃｏＦａｔｎⅡ）白１。美国肯塔基大学的学者已从新鲜烟叶中ｉ蛋２－分离提取到这２种蛋白成分，并对它们的理化及生物特性进
０６ｏＬ１ｍｏＬａ１．ｌ－，ｌＮＣ比较合适，与过高均不利于组分一ｏｔ／５／过低Ｉ白的结晶。此项研究成果为工厂化大量提取组分一Ｉ蛋蛋
行了研究。组分一Ｉ蛋白是一种绿色植物光合作用固定二氧化
碳的关键酶，核酮糖１ —二磷酸羧化酶，全称，５其含量占烟叶可溶性蛋白的５％以上，晶为六角形、０其结十二面体，分子量为５００，８５，０含个大亚基和８０个小亚基全部由氨基酸组，
跨进一步。到２世纪９年代初，００美国建立了第一座烟草蛋白
质提炼厂。国内对烟草叶蛋白的研究主要始于２世纪８００年代末，目前在烟草叶蛋白的提取技术和烟草硒蛋白应用价值研究方面已取得很大进展。
分一蛋白的过程。 Ⅱ 将烟叶磨碎或在加有还原剂的情况下，将已
维普资讯
中国烟草科学
２０，１：－００６（）８１
烟草叶蛋白利用价值研究进展
郭俊成苏勇刘强ｓ彭黎明：程晓蕾，，，，
（．１中国科学技术大学烟草与健康中心，安徽合肥２０５；．３０２２楚雄卷烟厂技术中心，云南楚雄６５０；．７００３红塔烟草（团）集技术中心，云南玉溪６３０）５１０

响应曲面法优化低次烟叶可溶性蛋白提取工艺

值为５．８～８．０，Ｎａ２ＨＰＯ４一ＫＨ２ＰＯ４ｐＨ值为４．９～８．２。１．２．３总氮含量的测定试验中采用考马斯亮蓝法测定蛋白质含量，以牛血清蛋白溶液（ＢＳＡ）为标准试剂，测定溶液
在５９５ｎｍ处的吸光度。
收稿日期：２０１２—０７—１９
基金项目：国家国际科技合作计划（编号：２０１１ＤＦＢ４１６４０）；贵州省科
白质含量最为丰富，如白肋烟中蛋白质含量高达２０．４８％。
由于世界人口不断增加，许多地区的人们均有营养不良现象，因此，如何在经济的原则下生产大量可食性蛋白是目前发展
的主要方向。随着对蛋白质研究的不断深入，人们逐渐认识到叶蛋白是世界天然产物中最重要且丰富的蛋白质资源，尤其是烟草叶中，有研究显示，烟草蛋白质与其他蛋白质相比具
１．２．２烟草蛋白质的提取
干烟叶去除叶脉、叶梗，经粉碎
机粉碎，过筛，称适当重量的烟粉于烧杯中，加入适当比例的
提取缓冲溶液，经搅拌机搅拌混匀，在４ｏＣ、４８００ｒ／ａｒｉｎ条件
计（ＰＨＳ一３Ｃ型，上海精密科学仪器有限公司），粉碎机
域为：ＨＡｅ— ＮａＡｃｐＨ值为３．６— ５．８，Ｎａ２ＨＰＯ４一ＮａＨ２ＰＯ４ｐＨ
锅（ＴＨＳ一１０智能型超级恒温水槽，宁波天恒仪器厂），高速冷冻离心机（Ｈ一１８５０Ｒ型台式高速冷冻离心机，湖南省长沙

小麦麸皮蛋白质的提取及其氨基酸组分分析

小麦麸皮蛋白质的提取及其氨基酸组分分析郭娜;姜绍通;李兴江;潘丽军【摘要】The extraction of wheat bran protein by alkali and the amino acid composition analysis were conducted for hierarchical use of wheat bran which is rich in fiber,protein and starch.The effect of the alkali extraction method was evaluated by protein residual rate of the treated wheat bran.The results show that the largest amount of wheat bran protein extraction reaches 15.85 ％when the pH value is about 12,the solid-liquid ratio is 1 ∶ 15,the temperature is 50 ℃ and the time is 3 h,and the maximum precipitation is achieved with a pH value of 3.8.The amino acid composition analysis shows that there are 13 kinds of amino acids in those extracted proteins from wheat bran,and 20.4％ of extracted proteins is composed of eight essential amino acids,which shows wheat bran a good edible plant protein resource.%小麦麸皮主要含有纤维、蛋白质和淀粉,为实现其分层利用,提高其附加值,对小麦麸皮中的蛋白质分离工艺进行研究,并对其氨基酸组成进行分析.文章采用碱提酸沉方法提取小麦麸皮中的蛋白质,以小麦麸皮中蛋白质残留率为指标优化其提取效果.结果表明:在pH值为12左右、料液比为1∶15、温度为50℃、时间为3h时,小麦麸皮中蛋白质提取效果最佳,可达到小麦麸皮质量的15.85％,pH=3.8为最佳沉淀点；氨基酸组成分析表明小麦麸皮中含有13种氨基酸,其中8种必需氨基酸占提取蛋白质质量的20.4％o,是一种良好的食用植物蛋白质资源.【期刊名称】《合肥工业大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2013(036)002【总页数】4页(P224-227)【关键词】小麦麸皮;蛋白质;碱浸提;氨基酸组分分析【作者】郭娜;姜绍通;李兴江;潘丽军【作者单位】合肥工业大学生物与食品工程学院,安徽合肥230009;合肥工业大学安徽省农产品精深加工省级实验室,安徽合肥230009;合肥工业大学生物与食品工程学院,安徽合肥230009;合肥工业大学安徽省农产品精深加工省级实验室,安徽合肥230009;合肥工业大学生物与食品工程学院,安徽合肥230009;合肥工业大学安徽省农产品精深加工省级实验室,安徽合肥230009;合肥工业大学生物与食品工程学院,安徽合肥230009;合肥工业大学安徽省农产品精深加工省级实验室,安徽合肥230009【正文语种】中文【中图分类】S184我国每年生产小麦1亿多吨，制粉过程中产生约1700×104 t小麦麸皮，其开发利用深度直接关系到面粉全行业的经济效益与技术进步问题［1－5］。

烟叶FⅡ蛋白提取工艺研究

现代农业科技2021年第9期食品科学摘要本文在单因素试验(乙醇体积分数、提取时间、离心时间)的基础上进行了正交试验,以优化新鲜烟叶可溶性蛋白的提取工艺。

结果表明,烟叶F Ⅱ蛋白提取的最佳工艺条件为乙醇体积分数70%、提取时间2.0h 、离心时间15min 。

在此条件下,F Ⅱ蛋白提取率为75.96%。

试验结果为新鲜烟叶可溶性蛋白的提取及利用提供了参考。

关键词烟叶;F Ⅱ蛋白;提取工艺;单因素试验;正交试验中图分类号TS49文献标识码A 文章编号1007-5739(2021)09-0242-03DOI :10.3969/j.issn.1007-5739.2021.09.092开放科学(资源服务)标识码(OSID ):Study on Extraction Process of Tobacco F ⅡProteinYANG Hui ZHANG Yuanmei GUO Cui WANG Dan LUO Yi TAN Aijuan(College of Life Science,Guizhou University,Guiyang Guizhou 563200)Abstract In this paper,on the basis of single factor experiment (ethanol volume fraction,extraction time,centrifugal time),an orthogonal experiment was carried out to optimize the extraction process of soluble protein in fresh tobacco leaves.The results showed that the optimal process conditions for extracting tobacco F Ⅱprotein was ethanol volume fraction 70%,extraction time 2.0h,and centrifugal time 15min.Under these conditions,the extraction rate of F Ⅱprotein was 75.96%.The test results provide references for the extraction and utilization of soluble protein in fresh tobacco leaves.Keywords tobacco leaf;F Ⅱprotein;extraction process;single factor experiment;orthogonal experiment烟叶F Ⅱ蛋白提取工艺研究杨会张元梅郭翠王丹罗逸谭艾娟(贵州大学生命科学学院,贵州贵阳563200)烟草(Nicotiana tabacum L.)为管状花科目茄科一年生或有限多年生草本植物,烟草叶片中可溶性蛋白含量高,氨基酸含量丰富、均衡,具有较高的营养价值和药用价值。

烟草叶片蛋白3种提取方法的比较研究

烟草叶片蛋白3种提取方法的比较研究韦玉梅;李佳素;周杰;王春台;刘学群;程钢【摘要】Protein was extracted from tobacco (Nicotiana tabacum) leavesby three methods, phenol/SDS method, Tris-HC1 method andTCA/acetone precipitation method. The extracting efficiency of the three methods was evaluated through the color and form of product, extraction time, protein yield and SDS-PAGE. Furthermore, the extracted protein was detected by Western Blotting. The results showed that compared with the other two methods, phenol/SDS method was faster and more convenient, and the protein extracted was with high quality, rich in protein species, and suitable for Western Blotting, thus was an appropriate method for extracting protein from plant tissue.%使用酚/SDS法、Tris-HCl法及TCA/丙酮沉淀法提取烟草(Nicotiana tabacum)叶片蛋白,从终产物形式、颜色、提取时间、蛋白产量、SDS-PAGE电泳图谱等方面对3种方法进行比较,对提取的烟草叶片蛋白进行Western Blotting检测来评价3种方法提取蛋白的效果.结果表明,与2种常用方法相比,酚/SDS法具有快速、操作方便等特点,提取的蛋白纯度高、种类丰富,可用于Western Blotting检测,是一种合适的提取植物组织中蛋白的方法.【期刊名称】《湖北农业科学》【年(卷),期】2011(050)023【总页数】3页(P4968-4970)【关键词】烟草(Nicotiana tabacum)叶片;蛋白;Tris-HCl法;TCA/丙酮沉淀法;酚/SDS法【作者】韦玉梅;李佳素;周杰;王春台;刘学群;程钢【作者单位】中南民族大学生命科学学院,武汉430074;北京林业大学生物科学与技术学院,北京 100083;中南民族大学生命科学学院,武汉430074;中南民族大学生命科学学院,武汉430074;中南民族大学生命科学学院,武汉430074;中南民族大学生命科学学院,武汉430074;中南民族大学生命科学学院,武汉430074【正文语种】中文【中图分类】S572;Q51蛋白质组学（Proteomics）是随着基因组学发展而发展起来的、在整体水平上研究细胞内蛋白质的组成及其活动规律的学科。

三氯乙酸法测定烟叶中蛋白质含量

三氯乙酸法测定烟叶中蛋白质含量刘肖肖;樊新顺;施东青;田泱源;王艺霖;丁瑞红;王洪涛;王文领【摘要】烟叶中蛋白质的含量与烟草的品质息息相关.如何快速、准确地测定烟叶中蛋白质含量则显得尤为重要.本实验通过对烟叶蛋白质抽提液的最佳浓度、蛋白质沉淀剂的最佳浓度及加入量进行确定,探索出了一种适合于测定烟叶中蛋白质含量的方法:室温条件下,用浓度为8 mol·L-1的尿素溶液充分抽提烟叶中的蛋白质(抽提时间大于6 h),12000 r/min离心20 min后仅留上清液,将所得上清液稀释4倍后加入3％三氯乙酸,静置10 min,充分沉淀上清液中的蛋白质,之后再次12000 r/min离心20 min后弃上清,留沉淀,将沉淀加入丙酮清洗后烘干至恒重,达到恒重的沉淀质量即为该烟叶中蛋白质的质量.【期刊名称】《化学研究》【年(卷),期】2018(029)005【总页数】4页(P484-487)【关键词】烤烟;蛋白测定;尿素;三氯乙酸【作者】刘肖肖;樊新顺;施东青;田泱源;王艺霖;丁瑞红;王洪涛;王文领【作者单位】河南大学生命科学学院,河南开封 475004;河南卷烟工业(许昌)烟草薄片有限公司,河南许昌 461000;南京农业大学生命科学学院,江苏南京 210095;河南卷烟工业(许昌)烟草薄片有限公司,河南许昌 461000;南京农业大学生命科学学院,江苏南京 210095;河南大学生命科学学院,河南开封 475004;河南大学生命科学学院,河南开封 475004;河南卷烟工业(许昌)烟草薄片有限公司,河南许昌461000【正文语种】中文【中图分类】Q816卷烟品质的评定与烟叶中蛋白质的含量密切相关：蛋白质含量过高会使烟丝燃烧时产生烧焦羽毛的气息，致使卷烟产生难闻的味道；蛋白质含量过低又会使烟气有一种空洞的感觉，变得淡而无味[1]. 如何准确测定烟叶中蛋白质的含量，良好把控卷烟制品中蛋白质的含量，对于卷烟品质的提升来说至关重要.到目前为止，蛋白质的含量测定大致有以下5种方法：微量凯式定氮法、BIURET 法、LOWRY法、BRADFORD法和紫外吸收法. 这些方法都能够较好地测定植物新鲜组织中蛋白质含量，但是对于烟叶这类特殊原材料，由于其在采摘后期的加工处理过程中会产生大量游离氨基酸、烟碱等一系列含氮化合物，且不同类型的烟草其色调不同，各种类型烟草的色素含量和性质对烟叶的外观质量与内在品质均有不同程度的影响，致使以上5种方法都较难得到准确的结果. BIURET法、LOWRY 法、BRADFORD法、紫外吸收法都会因为色素含量较高而产生较大的偏差，微量凯式定氮法也会因为游离氨基酸、烟碱等一系列含氮化合物而使测定结果偏大. 因此如何能够快速而又准确地测定烟叶中蛋白质的含量就变得非常重要. 在生物化学、食品科学及其他研究领域中，人们经常用到蛋白质或多肽的沉淀剂，其中三氯乙酸(Trichloroacetic acid，TCA)的应用最为广泛[2-3]. 三氯乙酸能够沉淀蛋白质主要归功于3个氯原子的独特作用[4]. 本研究利用三氯乙酸能使蛋白质构象发生改变，暴露出较多的疏水基团，使之聚集沉淀的性质，建立了三氯乙酸法用于测定烟叶中蛋白质含量.1 仪器与材料1.1 仪器离心机(Eppendorf AG 22331 Hamburg Max 14000 min-1)；SHIMADZU电子天平(AY220，Max 220 g，d=0.1 mg)；高速多功能粉碎机(CX-100型，25 000 r/min，50～300目，上海市晟喜制药机械有限公司)；DJ-1大功率磁力搅拌器(江苏省金坛市金城教学仪器厂)；中兴鼓风干燥箱101型(北京中兴伟业仪器有限公司).1.2 材料与试剂本实验所取材料为河南C3K烟末；Kermel尿素AR级：H2NCONH2含量不少于99.0%，天津市科密欧化学试剂有限公司生产；三氯乙酸含量不少于99.0%，天津市光复精细化工研究所生产；丙酮：CH3COCH3含量不少于99.5%，洛阳昊华化学试剂有限公司生产. 本实验所用试剂均为分析纯，所用水均为三重蒸馏水.2 实验方法2.1 溶液的配制不同浓度的尿素溶液：分别称取240、120和60 g尿素，充分溶解并定容至500 mL，配制成浓度分别为8、4和2 mol·L-1的尿素溶液.质量分数为80%的TCA溶液：称取80 g三氯乙酸加入适量三蒸水充分溶解，至总质量为100 g.2.2 样品中蛋白质含量的测定将烟叶烘干至恒重，分装至自封袋中，每袋约为30 g，保存于干燥器内.称取3份烟叶，每份15 g，分别加入300 mL浓度为8、4和2 mol·L-1尿素溶液，匀浆，搅拌抽提过夜，过滤，12 000 r/min离心10 min去沉淀，上清液为烟叶蛋白质提取液，共计260 mL，摇匀后取200 mL加入不同浓度的三氯乙酸母液(见表1)进行沉淀. 静置10 min，12 000 r/min离心10 min取沉淀，迅速加入30 mL丙酮，轻微振荡后再次12 000 r/min离心10 min取沉淀，烘干至恒重，达到恒重的沉淀质量即为该烟叶中蛋白质的质量.表1 不同浓度TCA沉淀蛋白质需加入的量Table 1 The amount of TCA required to precipitate protein at different concentrations of TCATCA浓度80%的TCA溶液加入量/(mL/100mL)1%1.252%2.503%3.754%5.005%6.256%7.507%8.758%10.009%11.2510%12.50恒重，除另有规定外，系指供试品连续两次干燥或炽灼后的重量差异在0.3 mg以下的重量；干燥至恒重的第二次及以后各次称重均应在规定条件下继续干燥l h后进行；炽灼至恒重的第二次称重应在继续炽灼3 min后进行[5].3 结果与讨论3.1 尿素与三氯乙酸浓度范围的初步确定称取3份烟叶，每份20 g，分别加入400 mL浓度为8、4 和2 mol·L-1尿素溶液，匀浆，搅拌抽提(大于6 h)后过滤. 12 000 r/min离心10 min去沉淀，上清液为蛋白提取液. 取上清液300 mL，分为6份，每份50 mL，分别用5%、10%、15%、20%、25%、30%浓度的三氯乙酸进行沉淀. 静置10 min后，12 000r/min离心10 min弃上清留沉淀，迅速加入7.5 mL丙酮，轻微振荡后再次12 000 r/min离心10 min弃上清留沉淀，烘干至恒重. 蛋白质沉淀总质量如表2所示：表2 在不同浓度的尿素与TCA作用下蛋白质的沉淀量Table 2 The amount of precipitated protein under different concentrations of urea and TCA 尿素浓度TCA浓度8 mol·L-14 mol·L-12 mol·L-15%0.0650.0270.03510%0.0340.0200.01515%0.0300.0210.01520%0.0130.0 060.00925%0.0090.0080.00730%0.0090.0080.005结果显示：在8 mol·L-1尿素进行提取、质量分数为5% 的三氯乙酸沉淀作用下，烟叶中蛋白质的沉淀量最大.3.2 提取蛋白质所需尿素浓度的选择取7.5 g烟叶，加入8 mol·L-1尿素溶液150 mL，匀浆，搅拌抽提过夜后过滤.12 000 r/min离心10 min去沉淀，获得蛋白质提取液，备用.从蛋白质提取液中取50 mL记为8 mol·L-1尿素抽提液；取25 mL用三蒸水定容至50 mL，记为4 mol·L-1尿素抽提液；取12.5 mL用三蒸水定容至50 mL，记为2 mol·L-1尿素抽提液；取6.25 mL用三蒸水定容至50 mL，记为1 mol·L-1尿素抽提液. 将上述尿素抽提液分别用5%三氯乙酸进行沉淀，其蛋白质沉淀总质量如表3所示：表3 用5% TCA沉淀不同浓度的尿素抽提液中烟叶蛋白质Table 3 Precipitation of leaf protein in urea extracts with different concentrations by 5% TCA稀释浓度蛋白质沉淀量/(g/50 mL)50 mL 8 mol·L-1尿素抽提液中的蛋白质含量推算值/g稀释成8 mol·L-10.0640.064稀释成4 mol·L-10.0530.106稀释成2 mol·L-10.0390.156稀释成1 mol·L-10.0040.032结果显示：将8 mol·L-1尿素抽提烟叶蛋白质所得的上清液稀释至2 mol·L-1后加入5%三氯乙酸，蛋白质沉淀效果最佳.3.3 沉淀蛋白质所需三氯乙酸用量的优化称取10 g烟叶，加入8 mol·L-1尿素溶液200 mL，匀浆，搅拌过夜后过滤，12 000 r/min离心10 min去沉淀，上清液为蛋白质提取液，取150 mL，将其用三蒸水稀释至600 mL后分为10份，每份50 mL，分别用1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%三氯乙酸进行沉淀(如表4所示). 静置沉淀10 min后，12 000 r/min离心10 min弃上清留沉淀，迅速加入7.5mL丙酮，轻微振荡后再次12 000 r/min离心10 min取沉淀，烘干至恒重.表4 不同浓度的TCA沉淀烟叶蛋白质Table 4 Different concentrations of TCA precipitated tobacco proteinTCA浓度沉淀量/(g/50mL)1%0.0212%0.0303%0.0364%0.0285%0.0276%0.0257%0.0298%0.0309% 0.02510%0.025结果显示：将8 mol·L-1尿素抽提烟叶蛋白质所得的上清液稀释成2 mol·L-1后，加入3%三氯乙酸进行沉淀时，烟叶抽提液中蛋白质沉淀效果最佳.3.4 精密度食品安全国家标准食品中蛋白质的测定GB 5009.5-2010中精密度要求：在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%[5]. 3.4.1 精密度实验取2.5 g烟叶，加入8 mol·L-1尿素溶液50 mL，匀浆，搅拌提取(>6 h)后过滤.12 000 r/min离心10 min去沉淀，上清液为烟叶蛋白质提取液，取25 mL，将其稀释至100 mL后分为2份，每份50 mL，作为两个平行样，分别用3%三氯乙酸进行沉淀. 静置沉淀10 min后，12 000 r/min离心10 min弃上清留沉淀，迅速加入7.5 mL丙酮，轻微振荡后再次12 000 r/min离心10 min后弃上清留沉淀，烘干至恒重. 测定结果如表5所示：表5 重复条件下获得的两次独立测定结果Table 5 The results of two independent measurements obtained under repeated conditionsTCA浓度沉淀量沉淀量平均值3%0.033 0 g0.032 0 g0.032 5 g3.4.2 结果分析精密度计算方法：两次独立测定结果绝对差值/算术平均值=(0.033-0.032)/0.032 5×100% = 3.08% < 10%.因此该方法可行.3.5 准确度准确度系指该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率(%)表示. 准确度应在规定的范围内测试.3.5.1 回收率实验取2.5 g烟叶，加入8 mol·L-1尿素溶液50 mL，匀浆，搅拌提取(>6 h)后过滤. 12 000 r/min离心10 min去沉淀，获得蛋白质提取液，取30 mL，将其稀释至120 mL，作为2mol·L-1尿素抽提液备用.取50 mL 2 mol·L-1尿素抽提液加入3%三氯乙酸3.125 mL，12 000 r/min离心10 min取沉淀，迅速加入7.5mL丙酮，轻微振荡后再次12 000 r/min离心10min后弃上清留沉淀，烘干至恒重，该蛋白质沉淀量记为A.取0.01 g标准牛血清白蛋白(记为B)，使其充分溶解于50 mL 2 mol·L-1尿素抽提液中，加入3%三氯乙酸3.125 mL，12 000 r/min离心10 min取沉淀，迅速加入7.5 mL丙酮，轻微振荡后再次12 000 r/min离心10 min后弃上清留沉淀，烘干至恒重，该蛋白质沉淀量记为C.表6 加样回收实验测定结果Table 6 Results of sample recovery experimentABC0.031 g0.010 g0.040 g3.5.2 结果分析回收率式中：mA为供试品所含被测成分量，g；mB为加入对照品量，g；mC为实测值，g.回收率= [(0.040 g-0.031 g)/0.010 g]×100%= 90.0%.4 结论通过不同浓度尿素抽提、不同用量的三氯乙酸沉淀烟叶中蛋白质，将烟叶抽提液烘干至恒重后对比其中蛋白质含量，从而得到快速测定烟叶蛋白质含量的方法. 高浓度的尿素易使蛋白质变性，低浓度的尿素降低了蛋白质的活度系数使其溶解. 三氯乙酸能与蛋白质形成不溶性盐，并作为蛋白质变性剂使蛋白质构象发生改变，从而暴露出较多的疏水性基团使之聚集沉淀. 但蛋白质可能会在适宜的三氯乙酸的酸性条件下水解，造成其提取量的减少，过高的三氯乙酸也可以促使具有碱性的蛋白质溶解，因此需对三氯乙酸的用量进行优化. 实验结果表明，将8 mol·L-1尿素抽提烟叶蛋白质所得的上清液稀释成2 mol·L-1后，加入3%三氯乙酸进行沉淀时，烟叶抽提液中蛋白质沉淀效果最佳.参考文献：【相关文献】[1] 谢剑平, 张悠金, 刘百战. 烟草香料技术原理与应用[M]. 北京: 化学工业出版社, 2009: 160.XIE J P, ZHANG Y J, LIU B Z. Principle and application of tobacco flavor technology[M]. Beijing: Chemical Industry Press, 2009: 160.[2] 张建社, 陈韬. 蛋白质分离与纯化技术[M]. 北京: 军事医学科学出版社, 2009: 88-95. ZHANG J S, CHEN T. Protein separation and purification technology [M]. Beijing: Military Medical Sciences Press, 2009: 88-95.[3] 韩道财, 杨萍, 洪鹏志. 三氯乙酸沉淀罗非鱼肉蛋白酶解液的液相色谱分析[J]. 食品工业科技, 2012, 33(9): 92-94.HAN D C, YANG P, HONG P Z. Study on precipitating action of enzymatic hydrolysate of tilapia flesh protein by trichloroacetic acid through HPLC [J]. Science and Technology of Food Industry, 2012, 33(9): 92-94.[4] SIVARAMAN T, KUMAR T K, JAYARAMAN G, et al. The mechanism of 2, 2, 2-trichloroacetic acid-induced protein precipitation [J]. Journal of Protein Chemistry, 1997, 16(4): 291-297.[5] GB 5009.5-2016. 食品安全国家标准食品中蛋白质的测定[S].GB 5009.5-2016. National standard for food safety determination of proteins in foods [S].。

改善低次烟叶品质的生物发酵工艺优化

改善低次烟叶品质的生物发酵工艺优化刘洪坤;毛文龙;游敏;潘高伟;郭春生;乔学义;吴嘉楠;刘海龙;韩云龙;付金存【期刊名称】《中国烟草科学》【年(卷),期】2024(45)2【摘要】为改善低次烟叶吸食品质,提升烟叶可用性,优选3种酶系、菌系(蛋白多肽酶系、木质酶系、增香菌系)配制成复合生物发酵制剂,以品质改善程度为评价指标,采用单因素法和均匀设计法优化了烟叶生物发酵工艺。

结果表明:(1)最佳发酵工艺条件为,发酵制剂/烟丝质量比4%、物料含水量22%、发酵温度37℃、发酵时间42 h。

(2)发酵工艺各因素中,发酵温度对品质改善程度大于物料水分、发酵时间。

(3)在最佳发酵条件下,烟叶品质改善程度为1.04,杂气减少、刺激性降低,感官质量大幅提升,发酵后烟叶蛋白质、淀粉、果胶、木质素分别降低9.17%、15.59%、16.67%、7.84%,醛类、酮类、醇类等物质较原样分别增加了23.70%、15.33%、41.03%。

通过发酵工艺优化,烟叶化学成分更协调,烟叶可用性提升。

【总页数】9页(P99-107)【作者】刘洪坤;毛文龙;游敏;潘高伟;郭春生;乔学义;吴嘉楠;刘海龙;韩云龙;付金存【作者单位】江苏中烟工业有限责任公司技术中心;内蒙古昆明卷烟有限责任公司;中国烟草总公司郑州烟草研究院【正文语种】中文【中图分类】TS411【相关文献】1.响应曲面法优化低次烟叶可溶性蛋白提取工艺2.一种改善广西百色地区烟叶品质的混合微生物发酵技术3.混菌固态发酵低次烟叶工艺优化及挥发性致香成分分析4.基于微生物菌群调控的枯草芽孢杆菌改善低盐发酵鱼露品质作用机制5.冠突散囊菌GT-1固态发酵对低次烟叶品质的影响因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

BCA-TCA法快速测定烟草蛋白质的研究

BCA-TCA法快速测定烟草蛋白质的研究翟羽晨;王万能;项钢燎;张潇骏;刘钦;唐晓莲;戴亚;马扩彦;谭兰兰【摘要】For the rapid and accurate determination of the protein content in tobacco,an accurate and efficient BCA-TCA method was established and optimized.The optimum conditions for extracting tobacco protein were 0.05 mol/L PBS buffer at pH 7.0,and liquid-solid ratio was 40mL/g.Differential subtraction was used to accurately determine the sample protein content,through removing the impact of interfering substances by using TCA to precipitate proteins.The results showed that the coefficient of variation of protein content was less than 5％ and the reproducibility was good.The standard recovery rate of the samples were 96.39％,the coefficient of variation was 0.75％<2％ and the accuracy was high.The t test results of the BCA-TCA method and the Kedar method were t=1.554 5<t0.05,8=2.306,indicating that there was no significant difference between the two methods in the 95％ confidence interval,but the detection time of BCA-TCA method would be shortened to 2.5-3.5 h,and the steps were simple,the equipment used was simple.The established BCA-TCA method can quickly and accurately determine the protein content in tobacco.%为快速准确地测定烟草中的蛋白质含量,建立并优化了BCA-TCA法,即提取烟叶蛋白质的最佳体系条件为pH值7.0的0.05 mol/L PBS 缓冲液、液料比40 mL/g,使用TCA沉淀蛋白质,利用差减法去除烟叶中还原性物质对BCA方法准确性的影响,从而准确测定样品的蛋白质含量.结果表明:该方法测得的烟叶样品蛋白质含量变异系数小于5％,重复性较好;样品的加标回收率为96.39％,加标回收变异系数为0.75％<2％,准确度高;BCA-TCA法和克达尔法测定值的t检验结果为t=1.554 5<t0.05,8=2.306,说明2种方法在95％的置信区间内无显著差异,但建立的BCA-TCA法将耗时缩短至2.5～3.5 h,且操作步骤简捷、所用设备简单.可见,建立的BCA-TCA法能够快速准确地测定烟草中的蛋白质含量.【期刊名称】《河南农业科学》【年(卷),期】2017(046)009【总页数】5页(P156-160)【关键词】烟草;蛋白质;BCA-TCA法;测定【作者】翟羽晨;王万能;项钢燎;张潇骏;刘钦;唐晓莲;戴亚;马扩彦;谭兰兰【作者单位】重庆理工大学药学与生物工程学院,重庆 400054;重庆理工大学药学与生物工程学院,重庆 400054;重庆理工大学药学与生物工程学院,重庆 400054;重庆理工大学药学与生物工程学院,重庆 400054;重庆理工大学药学与生物工程学院,重庆 400054;重庆理工大学药学与生物工程学院,重庆 400054;重庆中烟工业有限责任公司, 重庆 400060;重庆中烟工业有限责任公司, 重庆 400060;四川中烟工业有限责任公司,四川成都 610000【正文语种】中文【中图分类】TS41+1烟草是我国重要的经济作物之一，在国民经济中占有举足轻重的地位。

1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。

÷碱溶提取出的总蛋白质 ×１００％
晒烟，Ｂ１Ｋ级（低次级）），广东产，取整片烟叶（去除叶梗、叶脉）用ＭＪ一１７６ＮＲ型搅拌机打碎，采用其碎
收稿日期：２００５ — ０４ — ２１修订日期；２００５ — １２－２１基金项目；广东省烟草专卖局重大科研项目（粤烟科Ｃ２００３Ｄ１７号）作者简介：赵谋明（１９６４一），男，教授。博士。博士生导师，主要从事
（ＪＢ２００一Ｄ型，上海标本模型厂），数显恒温水浴锅（上海仪表集团供销公司），高速冷冻离心机（ＣＲ２２Ｇ型，日本ＨＩＴＡＣＨＩ公司），全自动凯氏定氮仪（瑞士Ｂｕｃｈｉ
蛋白资源之一ｌ４］。据报道，植物叶蛋白尤以烟叶中可溶性蛋白含量较高，具有较高的营养价值和药用价值，并且逐步被作为一种食品蛋白来源应用到食品领域中Ｎ－７３。从食品和营养的角度来说，烟叶蛋白的氨基酸组成和含量相当丰富、均衡，通过多种高新技术精深加工后，可获得生物活性肽和氨基酸等高附加值产品］。前人都是以新鲜烟叶为原料，采用水浸提法或者专利技术提取其中的蛋白质。然而，在烟草种植和加工过程中，产生了大量的低次烟叶，占烟草总产量的２５左右，这部分低次烟叶除少量用于生产烟膏和农药外，大部分弃之无用，既浪费了资源，又污染了环境，但有关低次烟叶蛋白资源的综合利用很少报道ｊ。
维普资讯
第２２卷第１期
１４２２００６年１月
农业工程学报
ＴｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓｏｆｔｈｅＣＳＡＥ
Ｖｏ１．２２Ｎｏ．１
Ｊａｎ．２００６
不大了。
必须进行磨浆处理，减小烟叶颗粒的粒度。在磨浆工艺中，固液比（烟叶；水）、提取温度、提取液ｐＨ值和磨浆次数这４个因素对烟叶蛋白提取率均有直接影响＿１。因此，对磨浆工艺中固液比、提取温度、提取液ｐＨ
低次烟叶中蛋白质提取工艺优化及氨基酸分析研究
赵谋明，饶国华，林伟锋，杨晓泉
（华南理工大学轻工与食品学院，广州５１０６４０）
摘要：为了充分综合利用低次烟叶蛋白资源，采用碱溶酸沉法对低次烟叶中蛋白质的提取工艺进行了研究，并利用高效
经测定，晒烟ＢＩＫ级中蛋白质含量为８．０５９，６
４）计算方法
磨浆过程中蛋白提取率＝＝＝磨浆提取出的总蛋白质
÷烟叶原料中总蛋白质 ×１００
１材料与方法
１．１试验材料
碱溶过程中蛋白提取率一碱溶提取出的总蛋白质 ÷烟叶原料中总蛋白质Ｘ１００９，６酸沉过程中蛋白提取率＝酸沉提取出的总蛋白质
５）氨基酸分析方法：采用高效液相色谱和ＰＩＣＯ．ＴＡＧ氨基酸分析柱对经强酸处理和强碱处理的烟叶蛋
白分别进行测定，分析条件：３８ ℃、流速１ｍＬ／ｍｉｎ、检测波长２５４ｎｍ。
食品生物技术及资源综合利用研究广州华南理工大学轻工与食
ｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍｄｉｓｃａｒｄｅｄｔｏｂａｃｃｏｌｅａｆ［Ｊ］．ＴｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓｏｆｔｈｅＣＳＡＥ，２００６，２２（Ｉ）：１４２ —１４６．（ｉｎＣｈｉｎｅｓｅｗｉｔｈＥｎｇｌｉｓｈ
ｒ／ｍｉｎ，２Ｏ ℃，３０ｍｉｎ）除杂一酸沉一离心（４８００ｒ／ｍｉｎ，４Ｃ，３０ｍｉｎ）沉淀蛋白。２）总氮的测定：常量凯氏定氮法ｌ１。３）非蛋白氮（ＮＰＮ）的测定：三氯乙酸法＿１ “ ］。
本文以低次烟叶为原料，采用碱溶酸沉法从中提取蛋白质，优化其提取工艺，并对所提取出蛋白质的氨基酸组成进行了分析，旨在为低次烟叶蛋白资源的综合开发利用提供技术参数和理论指导。
ＬａｂｏｒｔｅｃｈｎｉｋＡＧ），高效液相色谱系统（美国Ｗａｔｅｒｓ公
从图１可以看出，烟叶蛋白磨浆提取率随固液比的增大而提高，当固液比为１：１８时，蛋白磨浆提取率最高为６８．３８％。当再增大固液比时，蛋白提取率变化不大。图２表明，磨浆工艺中提取温度对烟叶蛋白提取率影响比较明显。蛋白提取率随提取温度的升高而增大，在６５ ℃时，烟叶蛋白提取率达到最高为７Ｏ．８２。而当提取温度进一步升高时，蛋白提取率反而下降，原因是温度太高时，可能有部分烟叶蛋白发生变性沉淀而被离心除去。图３显示，提取液ｐＨ值对烟叶蛋白磨浆提取率的影响比较显著。当提取液ｐＨ值从６．０上升至８．０时，蛋白提取率随之上升并达到最高。提取液ｐＨ值通过影响蛋白质的水化作用而直接影响蛋白质在水中的溶解度，在ｐＨ８．０时，蛋白质的水化作用非常强，溶解度最大，因而烟叶蛋白磨浆提取率最高＿１。图４表明烟叶蛋白提取率随磨浆次数的增多而明显上升，但磨浆两次后，再增加磨浆次数时，蛋白提取率上升的幅度趋于平缓，可能是粒度足够小以后对烟叶蛋白提取率影响就
关键词：低次烟叶；蛋白质；提取率；氨基酸
中图分类号：Ｔ￥２０１．］
文献标识码：Ａ
文章编号：１００２ — ６８ｌ９（２００６）０１－０１４２－０５
赵谋明，饶国华，林伟锋，等．低次烟叶中蛋白质提取工艺优化及氨基酸分析研究［Ｊ］．农业工程学报，２００６，２２（１）：１４２ —１４６．
司）。
１．３试验方法
１）烟叶蛋白提取方法：碱溶酸沉法］，采用氢氧化
钾和磷酸调整ｐＨ值，主要流程如下：烟叶一捣碎一加水一胶体磨磨浆一碱溶第一次一２００目滤布过滤一再碱溶第二、第三次一离心（４８００
品学院，５１０６４０Ｅｍａｉｌ：ｆｅｍｍｚｈａｏ＠ｓｅｕｔ．ｅｄｕ．ｃｎ
２结果与分析
维普资讯
第１期
赵谋明等：低次烟叶中蛋白质提取工艺优化及氨基酸分析研究
２．１磨浆工艺研究为提高烟叶蛋白的提取率，在提取蛋白之前，烟叶
图１磨浆工艺中固液比时蛋白提取率的影响
Ｆｉｇ．１Ｅｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅｒａｔｉｏｏｆｔｏｂａｃｃｏｌｅａｆｔｏ
ａｂｓｔｒａｃｔ
０引言
烟草（ＮｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍＬ．），茄科烟草属植物，共有６Ｏ余种人类栽培多为红花种和黄花种Ｊ。烟叶中
片进行试验；ＫＯＨ，Ｈ。ＰＯ，Ｃ１。ＣＣＯＯＨ均为分析纯。
ＺｈａｏＭｏｕｍｉｎｇ，ＲａｏＧｕｏｈｕａ，ＬｉｎＷｅｉｆｅｎｇ，ｅｔａ１．Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙａｎｄａｍｉｎｏａｃｉｄａｎａｌｙｓｉｓｏｆｐｒｏｔｅｉｎ
值和磨浆次数４个因素分别进行试验，测定烟叶蛋白提取率，重复３次，确定最佳工艺参数。试验结果如图１、图２、图３、图４所示。
芝瓣警
皿
醐
固液比（提取温度５０ ℃，ｐＨ７．０，磨浆３次）
１．２主要设备