FITC标记鬼笔环肽使用说明
鬼笔环肽的操作方法
鬼笔环肽的操作方法鬼笔环肽是一种具有广泛生物活性的多肽化合物。
它是由多个氨基酸残基组成的链状结构，并且具有特定的氨基酸排列顺序。
鬼笔环肽是通过基因工程技术或化学合成方法制备的，常用于生物医学研究和药物开发领域。
下面将详细介绍鬼笔环肽的操作方法。
1. 鬼笔环肽的基因工程制备方法：a. 首先，确定目标鬼笔环肽的氨基酸序列，并设计相应的基因。
可以通过计算机软件进行序列分析和设计。
b. 合成目标基因的DNA序列，并将其克隆入合适的表达载体中，如质粒或病毒载体。
c. 转染适当的宿主细胞，如大肠杆菌或哺乳动物细胞。
宿主细胞将基因转录成mRNA，并将mRNA翻译成多肽链。
d. 将多肽链进行折叠和修饰，使其形成鬼笔环肽的空间结构。
e. 最后，通过适当的纯化和分离步骤，得到纯度较高的鬼笔环肽。
2. 鬼笔环肽的化学合成方法：a. 首先，选择适当的保护基策略，以保护氨基酸的活性官能团。
这有助于控制反应的位置和选择性。
b. 使用标准的化学合成方法，逐步将氨基酸残基加入到链中。
每一步添加氨基酸之后，需要进行脱保护和纯化的步骤。
c. 在所有氨基酸残基都添加完毕后，需要进行环化反应，将链的两端连接在一起，形成环状结构。
可以使用化学交联剂或求核反应来实现环化。
d. 最后，通过适当的纯化和分离步骤，得到纯度较高的鬼笔环肽。
3. 鬼笔环肽的操作注意事项：a. 在实验室中使用鬼笔环肽时，需要遵守相关的安全操作规程，并配戴个人防护装备，如手套、实验面罩等。
b. 鬼笔环肽是一种高度活性的化合物，对环境和人体都具有一定的危害性。
因此，在操作过程中需要严格控制其浓度和使用量。
c. 在溶液中使用鬼笔环肽时，需要注意pH、温度和溶剂的选择。
这些因素可能会影响鬼笔环肽的稳定性和溶解度。
d. 鬼笔环肽的储存条件必须低温保存，避免其分解和降解。
总的来说，鬼笔环肽的制备方法主要包括基因工程和化学合成两种。
基因工程制备鬼笔环肽主要是通过DNA合成和转染技术实现，而化学合成则是利用化学方法逐步合成鬼笔环肽。
蛋白FITC标记及葡聚糖凝胶柱使用
蛋白FITC标记及葡聚糖凝胶柱使用引言蛋白FITC标记以及葡聚糖凝胶柱是生物科学研究中常用的实验技术。
蛋白FITC标记可以通过将荧光染料FITC（荧光同种异构体）与蛋白质结合，实现对蛋白质的追踪、定位以及分析等应用，并广泛应用于分子生物学、细胞生物学、免疫学等领域。
葡聚糖凝胶柱则是一种常见的柱层析技术，可用于分离和纯化蛋白质、核酸以及其他生物大分子。
下面将详细介绍蛋白FITC标记的步骤以及葡聚糖凝胶柱的使用。
一、蛋白FITC标记步骤1.准备荧光染料FITC溶液：称取一定量的FITC粉末，加入适量的溶剂（如溶于碳酸氢钠缓冲液），使其溶解成一定浓度的FITC溶液。
2.准备蛋白质样品：选取需要标记的蛋白质样品，可以是纯化的蛋白质或者生物标志物。
3.标记蛋白质和FITC：将一定比例的FITC溶液与蛋白质样品混合，通常在暗处、低温水浴条件下反应一定时间（如1-2小时）。
注意控制反应温度和时间，不同的蛋白质可能需要不同的条件。
4.清除未反应的FITC：使用一种合适的方法（如柱层析、超滤等）将未反应的FITC分离出来。
5.测定标记效率：通过分光光度法测定FITC标记蛋白质的浓度和FITC的浓度，计算标记效率。
1.制备葡聚糖凝胶柱：按照柱层析的要求，准备合适大小的玻璃柱子，并将葡聚糖填充于柱子内。
葡聚糖填充量可根据样品的分离要求进行调整，通常在0.5-1.5倍柱子体积的范围内。
2.提前平衡柱子：将平衡缓冲液（可根据实验需求选择）加入柱子中，持续流通一定时间，达到柱子内外平衡。
3.样品加载：将待分离的样品溶液均匀地加入柱子上部，并加入一定量的平衡缓冲液，形成样品层。
4.柱洗脱：将平衡缓冲液加入柱子顶部，形成洗脱缓冲液流动，逐步冲洗样品。
5.收集分离后的样品：分离后的目标物质将会以不同时间点流出柱子，可以根据需要采集不同时间段的洗脱液。
6.分析和应用：通过分析采集的洗脱液，可以进一步对目标物质进行定性和定量的分析。
TRITC Phalloidin罗丹明标记鬼笔环肽使用说明
TRITC Phalloidin罗丹明标记鬼笔环肽使用说明货号:CA1610规格:300T（300μL）保存:-20℃避光干燥保存，1年有效。
产品说明:鬼笔环肽（Phalloidin）是一种来源于毒蕈类鬼笔鹅膏（Amanita phalloides）的环状七肽毒素，以高亲和力（Kd=20nM）选择性结合于丝状肌动蛋白F-actin，而不会与单体肌动蛋白G-actin结合，通常用来标记组织切片，细胞培养物或无细胞体系中的F-actin，从而对F-actin进行定性和定量分析。
另外，鬼笔环肽衍生物也以相近的亲和力结合于大小纤维，无论是动植物来源的肌肉细胞或非肌肉细胞，按照每一个肌动蛋白亚基约与一个鬼笔环肽分子的计量比结合。
且非特异性结合几乎可忽略，染色区域和非染色区域辨识度非常明显。
因此，鬼笔环肽衍生物特别适合替代肌动蛋白（Actin）抗体进行相关研究。
另外鬼笔环肽衍生物很小，直径约12-15Å，分子量＜2000Daltons，未标记肌动蛋白（Actin）的许多生理特性都得以维持，比如，同肌动蛋白结合蛋白如肌球蛋白，原肌球蛋白，DNase I等仍能发生反应；鬼笔环肽标记的纤维丝仍可穿透固相肌球蛋白基质；以及甘油抽提的肌纤维标记后仍可收缩等。
鬼笔环肽（Phalloidin）的结合阻止丝状肌动蛋白（微丝）的解离，稳定微丝结构，从而破坏微丝的聚合-去聚合的动态平衡。
此特性使得肌动蛋白聚合发生的临界浓度（CC）降至＜1µg/mL，因此，可用作一种聚合促进剂。
此外，鬼笔环肽还可抑制F-actin的ATP水解活性。
本品为TRITC（四甲基异硫氰酸罗丹明）标记的鬼笔环肽，染色反应特异性强，对比性高，具有比Actin抗体更好的染色效果，适合用作F-actin的定性和定量检测。
另外，经本品结合后的F-actin仍能维持actin自身具有的许多生物学特性。
且本品的结合没有物种差异性，适用性广泛。
需要自备材料:1.（可选）甲醇2.1×PBS缓冲液,pH7.4,细胞培养级别3.固定液4%多聚甲醛（溶于PBS缓冲液）4.丙酮或透化液0.5%Triton X-100（溶于PBS缓冲液）5.Fluoromount-G TM水溶性封片剂（不含DAPI），DAPI6.（可选）DAPI Fluoromount-GTM水溶性封片剂（含DAPI）7.（可选）BSA，标准级别8.载玻片和盖玻片9.盖玻片周围密封液（如透明指甲油）10.组装有TRITC激发/发射滤片，以及DAPI激发/发射滤片的荧光显微镜或共聚焦显微镜。
鬼笔环肽标记系列产品说明书
鬼笔环肽标记系列产品说明书保存：-20℃干燥、避光保存，有效期一年。
若配制成水溶液，请小量分装保存，避免反复冻融。
注意：本产品为冻干粉形式，使用前请瞬时离心，加适当溶剂溶解后使用。
产品介绍：鬼笔环肽是从致命的伞形毒蕈蘑菇中分离出来的一种毒素。
它是特异性结合于F-肌动蛋白的双环肽（1）。
因此用荧光染料标记的鬼笔环肽可以非常方便的研究F-肌动蛋白的分布。
鬼笔环肽内部，在半胱氨酸和色氨酸之间含有不常见的硫醚桥形成内环结构。
在pH 升高时，该硫醚被裂解，鬼笔环肽失去对肌动蛋白的亲和力。
荧光标记的鬼笔环肽可在纳摩尔水平染色F-肌动蛋白（1-3）。
在各种植物细胞或动物细胞中，标记的鬼笔环肽对大、小细丝具有相似的亲和力，平均每个肌动蛋白亚基结合一个鬼笔环肽分子。
不同于抗体，鬼笔环肽与肌动蛋白的结合亲和力在不同物种间没有显着变化。
非特异性染色可以忽略不计，染色和未染色区域之间的对比度非常大。
鬼笔环肽将单体/聚合物的平衡转向聚合状态，将聚合临界浓度降低至30倍（3,4）。
Phallotoxins 可通过抑制细胞松弛素的解聚，碘化钾和升高的温度，稳定F-肌动蛋白。
因为鬼笔环肽缀合物很小，大约直径12-15埃，分子量<2000道尔顿，多种肌动蛋白结合蛋白，包括肌球蛋白，原肌球蛋白和后肌钙蛋白依然可以和鬼笔环肽标记的肌动蛋白结合。
更重要的是，鬼笔环肽标记的肌动蛋白丝保持功能，标记甘油肌纤维仍然收缩，标记的肌动蛋白丝仍然可以继续移动（5,6）。
而且荧光标记的鬼笔环肽也可用于对细胞中F-肌动蛋白进行定量研究（7,8）。
实验方法：1.储液制备：荧光染料标记的鬼笔环肽：取适量甲醇或无菌水溶解棕色管中冻干的粉末，制备成200U/mL 的储液（300T 规格染料加入1.5mL 的液体）。
荧光标记的标记鬼笔环肽的一个单位（T ）的定义是染色一个加载细胞的载玻片所用染料的量。
使用时的推荐稀释比例为1:40-1:200，一个单位相当于200µL 总染色体积中加入1-5µL 200U /mL 储备溶液。
FITC标记鬼笔环肽说明书
FITC标记鬼笔环肽说明书货号:CA1620规格:300T保存:-20℃避光干燥保存，1年有效。
产品说明:鬼笔环肽（Phalloidin）是一种来源于毒蕈类鬼笔鹅膏（Amanita phalloides）的环状七肽毒素，以高亲和力（Kd=20nM）选择性结合于丝状肌动蛋白F-actin，而不会与单体肌动蛋白G-actin结合，通常用来标记组织切片，细胞培养物或无细胞体系中的F-actin，从而对F-actin进行定性和定量分析。
另外，鬼笔环肽衍生物也以相近的亲和力结合于大小纤维，无论是动植物来源的肌肉细胞或非肌肉细胞，按照每一个肌动蛋白亚基约与一个鬼笔环肽分子的计量比结合。
且非特异性结合几乎可忽略，染色区域和非染色区域辨识度非常明显。
因此，鬼笔环肽衍生物特别适合替代肌动蛋白（Actin）抗体进行相关研究。
另外鬼笔环肽衍生物很小，直径约12-15Å，分子量＜2000Daltons，未标记肌动蛋白（Actin）的许多生理特性都得以维持，比如，同肌动蛋白结合蛋白如肌球蛋白，原肌球蛋白，DNase I等仍能发生反应；鬼笔环肽标记的纤维丝仍可穿透固相肌球蛋白基质；以及甘油抽提的肌纤维标记后仍可收缩等。
鬼笔环肽（Phalloidin）的结合阻止丝状肌动蛋白（微丝）的解离，稳定微丝结构，从而破坏微丝的聚合-去聚合的动态平衡。
此特性使得肌动蛋白聚合发生的临界浓度（CC）降至＜1µg/mL，因此，可用作一种聚合促进剂。
此外，鬼笔环肽还可抑制F-actin的ATP水解活性。
产品性质:分子式（Molecular Formula）C56H60N10O15S2分子量（Molecular Weight）1177.3最大激发/发射波长（Ex/Em）495~496/513~516nm多肽序列（Sequence）FITC-bicyclic(Ala-DThr-Cys-cis-4-hydroxy-Pro-Ala-2-mercapto-Trp-4-hydroxy-5-amino-Leu)(S-3to6)外观（Appearance）黄色粉末（冻干粉）溶解性（Solubility）溶于DMSO、DMF、甲醇或者乙腈水溶液（20%）需要自备材料:1.（可选）甲醇2.1×PBS缓冲液,pH7.4,细胞培养级别3.固定液4%多聚甲醛（溶于PBS缓冲液）4.丙酮或透化液0.5%Triton X-100（溶于PBS缓冲液）5.Fluoromount-GTM水溶性封片剂（不含DAPI），DAPI6.（可选）DAPI Fluoromount-GTM水溶性封片剂（含DAPI）7.（可选）BSA，标准级别8.载玻片和盖玻片9.盖玻片周围密封液（如透明指甲油）10.组装有FITC激发/发射滤片，以及DAPI激发/发射滤片的荧光显微镜或共聚焦显微镜。
抗体FITC标记操作流程记录
抗体FITC标记操作流程记录1.准备实验材料和试剂：-使用双蒸水去离子水做媒介，保证无杂质。
-准备用于标记的FITC抗体和FITC标记试剂盒。
-合适的缓冲液（例如PBS）用于稀释抗体和洗涤样品。
2.准备样品：-如果需要标记的是细胞，将细胞培养在合适的培养基中，并将其接种在预处理好的玻片上。
-如果需要标记的是组织切片，将组织固定在适宜的固定剂中，切割成适当的厚度。
3.处理样品：-对于细胞样品，进行适当的固定和渗透，以保持细胞形状和抗原结构的完整。
-对于组织样品，进行适当的脱水、透明化和抗原修复等步骤。
4.准备标记试剂：-按照标记试剂盒的说明书，将FITC标记剂和稀释液按照特定比例混合，并充分搅拌均匀。
5.标记抗体：-将抗体与FITC标记试剂混合，然后在室温下孵育一段时间（通常为30-60分钟）。
-注意避免直接阳光照射，以免造成荧光剂失效。
6.洗涤样品：-使用PBS或合适的缓冲液对细胞或组织样品进行洗涤，以去除未与抗体结合的游离FITC。
7.孵育样品：-将标记好的抗体溶液滴加在样品上，使其充分覆盖样品表面，并在室温下孵育一段时间。
-孵育时间通常为1-2小时，以确保抗体与抗原结合充分。
8.再次洗涤样品：-使用PBS或合适的缓冲液对样品进行再次洗涤，以去除未与抗体结合的游离FITC。
9.固定样品：-对于细胞样本，使用适当的固定剂固定细胞并保存形态。
-对于组织切片，将标记好的样品用适当的固定剂进行固定。
10.显微观察和图像获取：-将标记好的样品放在显微镜下观察。
-使用适当的荧光滤光片来选择FITC的激发和发射波长，并记录图像。
11.数据分析：-根据显微观察到的荧光信号，分析抗体FITC标记的结果。
-可以通过计算荧光强度、分析荧光背景等进行数据分析。
12.结果的记录和表示：-将观察到的结果记录下来，并通过图表或图片等形式表示。
13.清洁和处理垃圾：-将使用过的试剂瓶、玻片和其他实验用具进行清洁和处理。
-将废弃物按照规定的程序进行垃圾处理，以确保实验室的安全和环境保护。
FITC-Phalloidin(鬼笔环肽)
联科生物技术有限公司 全国免费电话：400 6721 600 传真：0571-2882 8618全国免费电话：400 6721 600联科杭州：0571-2882 8608 联科上海：021-6413 2459 联科北京：010-8219 1878联科广州：020-3420 5572 联科南京：025-8453 0667 联科苏州：0512-6866 66231FITC-Phalloidin(鬼笔环肽)使用说明【产品】 产品名称产品编号 规格 生产商 Phalloidin (FITC) 9A-ALX-350-268-MC010.1 mg Enzo (Alexis/Biomol/Assay Designs)【贮存液配制】0.1mg FITC-Phalloidin 溶于0.5ml 无水甲醇 (或DMSO)，配成200 μg/ml 贮存液。
分装冻存于-20o C ，干燥、避光保存至少一年。
【染色方法】1. 细胞爬片生长24-48小时；2. 预温PBS(37 o C)清洗细胞2次，每次10分钟；3. 4%多聚甲醛室温固定5-10分钟，PBS 清洗细胞3次；注：也可用 3.7%的甲醛溶液固定，但甲醛中不能含有甲醇，因为在固定过程中甲醇可能会破坏肌动蛋白。
4. 0.1%Triton X-100/PBS 室温破膜3-5分钟，PBS 清洗细胞3次；注：该步骤可以省略，因为Phalloidin 分子量很小，多聚甲醛固定后细胞膜产生的孔洞足以让Phalloidin 进入细胞。
且经Triton 破膜后，Phalloidin 可能对细胞核有非特异性染色。
5. 5 μl FITC-Phalloidin 贮存液加入150 ul PBS 中配成工作液 (5 μg/ml )并用以染细胞，室温染色30-60分钟；注：1) FITC-Phalloidin 工作浓度范围为2-50 μg/ml ，一般使用浓度为5 μg/ml ；2) 为降低非特异性染色，配制FITC-Phalloidin 工作液时，可在PBS 中加入1% BSA(牛血清白蛋白)。
带你了解多种异硫氰酸荧光素（FITC）荧光抗体的标记
带你了解多种异硫氰酸荧光素（FITC）荧光抗体的标记1. 将待标记的抗体/蛋白（浓度≧1mg/ml）对标记反应液 (90mM NaHCO3，10mM Na2CO3，126mM NaCl,pH9.0) 于4℃透析三次。
2. 将FITC(Frdbio)溶于DMSO中，浓度为20mg/ml。
每次交联使用的FITC均应新鲜配制，避光。
3. （抗体/蛋白质：FITC）=1mg:150μg的比例将FITC缓慢加入于抗体溶液中，边加边轻轻晃动使其与抗体混合均匀，避光4℃反应8h。
4. 加入5M的NH4Cl至终浓度50mM，4℃终止反应2h。
5. 将标记产物在PBS中透析4次以上，至透析液清亮。
6. 交联物的鉴定蛋白浓度(mg/ml)=[A280–0.31×A495]/1.4抗体/蛋白质：FITC比例=3.1×A495/（A280–0.31×A495），该值应介于2.5～6.5之间。
7. FITC标记的蛋白应置于pH7.4的磷酸盐缓冲液中，加入0.1% NaN3、1% BSA，30%甘油，短期保存于4℃避光，长期应该-20℃避光保存。
荧光素FITC标记蛋白荧光素FITC标记的抗Brdu单克隆抗体异硫氰酸荧光素(FITC)标记胸腺五肽(TP5)FITC-TP5FITC标记的叶酸类衍生物FITC荧光标记糖FITC标记某一种药物FITC标记一种糖蛋白实验用FITC标记小分子化合物分子量400-500FITC-PhalloidinFITC标记鬼笔环肽FITC荧光素标记细菌FITC标记葡聚糖FITC标记重组灵芝免疫调节蛋白5'——FITC标记的PCNA反义寡核苷酸FITC标记的帕西瑞肽衍生物FITC标记糖肽类抗生素FITC标记的虾自斑综合症病毒FITC标记的维生素B12衍生物荧光素FITC标记甘氨酸FITC标记壳聚糖荧光浆料FITC标记红桂木凝集素小编YQ2021.1。
异硫氰酸荧光素(fitc)-葡聚糖法
异硫氰酸荧光素(fitc)-葡聚糖法异硫氰酸荧光素（FITC）-葡聚糖法是一种常用的荧光染色方法，主要用于标记葡聚糖以及其他聚糖类物质。
本文将详细介绍该方法的原理、步骤、优点和应用。
一、原理异硫氰酸荧光素（FITC）是一种荧光染料，它能与葡聚糖等聚糖发生共价键结合。
FITC在草酰胺环上有反应活性的异硫氰基，可以与聚糖的胺基反应形成络合物。
该法通过共价键结合的方式将FITC与聚糖分子连接起来，从而实现荧光标记。
二、步骤1.准备试样：将待标记的聚糖溶解在适当的缓冲液中，使其浓度在合适的范围内（一般为1-5 mg/mL）。
2.加入异硫氰酸荧光素(FITC)：将适量的FITC溶解在N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中，制备10-100倍稀释液。
将聚糖溶液与FITC稀释液按照一定比例混合，并在温暖的条件下搅拌反应，通常反应时间为2-4小时。
3.滤除未反应的FITC：使用分子量筛选膜（如离心凝胶柱）将反应液进行透析，去除未反应的FITC。
4.染色剂存储：将染色剂存储在阴暗、冷冻的条件下，避免光、热以及湿气的影响。
三、优点1.显著荧光信号：FITC具有强荧光特性，能够发出明亮的绿色荧光，易于观察和检测。
2.高灵敏度：FITC的共振频率在488 nm处，与常用的激光器相吻合，因此能够获得高信噪比的荧光信号。
3.稳定性：FITC标记的样品可以在不同条件下存储和使用，不易失活和褪色。
4.适用范围广：该方法适用于各种形态和结构的聚糖，包括线性聚合物、支化聚合物、天然聚糖等。
四、应用1.生物医学研究：在生物医学领域，FITC-葡聚糖法被广泛用于细胞标记、分子探针制备、免疫组织化学染色等方面。
通过标记聚糖，能够实现对特定细胞或组织的可视化观察和定量分析。
2.药物传递系统研究：聚糖在药物传递系统中具有良好的生物相容性和生物可降解性。
通过FITC-葡聚糖法，可以制备药物载体，实现对药物的靶向传递和释放。
3.环境监测：聚糖在环境监测中具有重要的应用价值。
FITC标记链霉亲和素使用说明
FITC标记链霉亲和素使用说明
规格：0.1mL/1.0mL
保存：-20℃保存，有效期至少一年。
产品介绍：
FITC标记链霉亲和素和生物素化抗体有较强的结合力。
链霉亲和素(SA)是Streptomyces avidinii的分泌物，其分子量及结合生物素的能力与鸡蛋清中的亲和素相似，等电点 6.0，非特异性结合远比亲和素低。
链霉亲和素是四聚体蛋白，大小为66KDa。
一分子链霉亲和素可以高度特异性地与四个分子的生物素结合，两者之间的亲和力极为强烈，链霉亲和素-生物素复合物的解离常数处于10mol/L数量级，这一性质常用于分子生物学用途。
其中一条完整的SA肽链中有159个氨基酸残基，分子量为16450。
储存液：0.01M PBS，防腐剂，50%甘油。
浓度：链霉亲和素的浓度为1mg/ml。
工作效价：
1:100-500，客户可根据实验的实际情况摸索最佳的稀释倍数，可用PBS(0.01mol/L,
pH7.4)稀释。
标记说明：
FITC为Sigma异构体I，浓度为100～140μg/mL，495nm为最大吸收峰，525nm为荧光发射峰。
相关试剂：
SPA8羊抗小鼠IgG(纯化)
SA27羊抗兔IgG(免疫血清)
SE16兔抗猪IgG-HRP
A1840荧光抗体稀释液SL2封闭山羊血清
SL4封闭用驴血清
S2100抗荧光衰减封片剂。
fitc-bsa荧光标记法
fitc-bsa荧光标记法
以下是使用荧光标记牛血清白蛋白（FITC-BSA）荧光标记法的简要步骤：
1. 将异硫氰酸荧光素（FITC）采用化学交联法标记到BSA分子上。
2. 对标记产物进行纯化，以确保其质量和荧光性能。
3. 进行蛋白定量、FITC浓度及效价鉴定，以确保标记的准确性和一致性。
4. 观察和检测荧光信号，以评估标记的效果。
此外，该方法具有以下优点：
1. 高度荧光稳定性：在光照和化学条件下具有较低的褪色率，因此荧光信号可以持久地保持较长时间。
2. 特异性标记：通过与BSA共价结合来特异性标记BSA分子，确保了标记的稳定性和特异性。
3. 生物相容性：BSA是一种常见的蛋白质，具有良好的生物相容性和低毒性，将荧光标记到BSA上可以提高荧光染料的稳定性和生物相容性，减少对样品或细胞的不良影响。
4. 灵敏度和检测性能：作为荧光标记物具有较高的灵敏度和检测性能，可以在相对低的浓度下进行检测和观察。
5. 多功能性：可以用于免疫荧光染色、细胞成像、蛋白质定位、细胞分析和分子相互作用研究等，其荧光信号可以与不同的实验技术和设备兼容，提供灵活和多样化的实验选择。
有关FITC标记的事项
免疫荧光技术是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素，制成荧光抗体，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检测组织或细胞内的相应抗原（或抗体）。
在组织或细胞内形成的抗原抗体复合物上含有标记的荧光素，利用荧光显微镜观察标本，荧光素受外来激发光的照射而发生明亮的荧光（黄绿色或橘红色），可以看见荧光所在的组织细胞，从而确定抗原或抗体的性质、定位，以及利用定量技术测定含量。
应用范围：其应用范围极其广泛，可以测定内分泌激素、蛋白质、多肽、核酸、神经递质、受体、细胞因子、细胞表面抗原、肿瘤标志物、血药浓度等各种生物活性物质。
根据诊断类别，又可分为传染性疾病、内分泌、肿瘤、药物检测、免疫学、血型鉴定等。
荧光的基本知识一、荧光现象（一）荧光的产生一此化学物质能从外界吸收并储存能量（如光能、化学能等）而进入激发态，当其从激发态再回复到基态时，过剩的能量可以电磁辐射的形式放射（即发光）。
荧光发射的特点是：可产生荧光的分子或原子在接受能量后即刻引起发光；而一旦停止供能，发光（荧光）现象也随之在瞬间内消失。
可以引起发荧光的能量种类很多，由光激发所引起的荧光称为光致荧光。
由化学应所引起的称为化学荧光，由X线或阴极射线引起的分别称为X线荧光或阴极射线荧光。
荧光免疫技术一般应用致荧光物质进行标记。
（二）荧光效率荧光分子不会将全部吸收的光能都转变成荧光，总或多或少地以其他形式释放。
荧光效率是指荧光分子将吸收的光能转变成荧光的百分率，与发射荧光光量子的数值成正比。
荧光效率＝发射荧光的光量分子数（荧光强度）／吸收光的光量子数（激发光强度）发射荧光的光量子数亦即荧光强度，除受激发光强度影响外，也与激发光的波长有关。
各个荧光分子有其特定的吸收光谱和发射光谱（荧光光谱），即在某一特定波长处有最大吸收峰和最大发射峰。
选择激发光波长量接近于荧光分子的最大吸收峰波长，且测定光波量接近于最大发射光波峰时，得到的荧光强度也最大。
（三）荧光的猝灭荧光分子的辐射能力在受到激发光较长时间的照射后会减弱甚至猝灭，这是由于激发态分子的电子不能回复到基态，所吸收的能量无法以荧光的形式发射。
鬼笔环肽
鬼笔环肽学术资料一二F- actin微丝蛋白简介肌动蛋白单体（又被称为G-Actin，全称为球状肌动蛋白，Globular Actin，下文简称G肌动蛋白）为球形，其表面上有一ATP结合位点。
肌动蛋白单体一个接一个连成一串肌动蛋白链，两串这样的肌动蛋白链互相缠绕扭曲成一股微丝。
这种肌动蛋白多聚体又被称为纤维形肌动蛋白（F-Actin，Fibrous Actin。
微丝(microfilaments)是由肌动蛋白分子螺旋状聚合成的纤丝，又称肌动蛋白丝(actin filament)，与微管和中间纤维共同组成细胞骨架，是一种所有真核细胞中均存在的分子量大约42kDa的蛋白质，也是一种高度保守的蛋白质，因物种差异（例如藻类与人类）的不同不会超过20%。
微丝对细胞贴附、铺展、运动、内吞、细胞分裂等许多细胞功能具有重要作用，做这些细胞功能实验时可以用到鬼笔环肽。
微丝的主要功能有：微丝聚集成束，沿平行于胞质环流的方向排列，控制细胞的胞质环流。
三标记荧光的鬼笔环肽的卖点1）与actin亚单位一比一结合，并且不与G-actin结合，具有比Actin抗体更好的染色效果，实验结果图鲜艳，美观；2）且本品的结合没有物种差异性，适用性广泛；3）鬼笔环肽标记的非特异性信号可忽略，因而图像的反差较好；4）染色与用于细胞分析的其他荧光染色完全兼容，包括荧光蛋白、Qdot® 纳米晶体和其他Alexa Fluor偶联物（包含Alexa Fluor偶联二抗）；5）经本品结合后的F-actin仍能维持actin自身具有的许多生物学特性。
五参考文献1. Lin G, Qiu X, Fandel TM, Albersen M, Wang Z, Lue TF, Lin CS. (2011) Improved penilehistology by phalloidin stain: circular and longitudinal cavernous smooth muscles,dual-endothelium arteries, and erectile dysfunction-associated changes. Urology, 78, 970 e1.2. Diensthuber RP, Muller M, Heissler SM, Taft MH, Chizhov I, Manstein DJ. (2011)Phalloidin perturbs the interaction of human non-muscle myosin isoforms 2A and 2C1 with F-actin. FEBS Lett, 585, 767.3. An M, Wijesinghe D, Andreev OA, Reshetnyak YK, Engelman DM. (2010)pH-(low)-insertion-peptide (pHLIP) translocation of membrane impermeable phalloidin toxin inhibits cancer cell proliferation. Proc Natl Acad Sci U S A, 107, 20246.4. Chazotte B. (2010) Labeling cytoskeletal F-actin with rhodamine phalloidin or fluoresceinphalloidin for imaging. Cold Spring Harb Protoc, 2010, pdb prot4947.5. Genikhovich G, Technau U. (2009) Anti-acetylated tubulin antibody staining and phalloidinstaining in the starlet sea anemone Nematostella vectensis. Cold Spring Harb Protoc, 2009, pdb prot5283.6. Herraez E, Macias RI, Vazquez-Tato J, Vicens M, Monte MJ, Marin JJ. (2009) In vitroinhibition of OATP-mediated uptake of phalloidin using bile acid derivatives. ToxicolAppl Pharmacol, 239, 13.7. Wollesen T, Loesel R, Wanninger A. (2009) Pygmy squids and giant brains: mapping thecomplex cephalopod CNS by phalloidin staining of vibratome sections andwhole-mount preparations. J Neurosci Methods, 179, 63.8. Herraez E, Macias RI, Vazquez-Tato J, Hierro C, Monte MJ, Marin JJ. (2009) Protectiveeffect of bile acid derivatives in phalloidin-induced rat liver toxicity. Toxicol ApplPharmacol, 239, 21.9. Luo H, Hallen-Adams HE, Walton JD. (2009) Processing of the phalloidin proprotein byprolyl oligopeptidase from the mushroom Conocybe albipes. J Biol Chem, 284, 18070.10. Vig A, Dudas R, Kupi T, Orban J, Hild G, Lorinczy D, Nyitrai M. (2009) Effect of Phalloidinon Filaments Polymerized from Heart Muscle Adp-Actin Monomers. J Therm AnalCalorim, 95, 721.。
fitc细胞荧光标记流程
fitc细胞荧光标记流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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FITC蛋白标记方法
FITC蛋白标记方法
1.溶液准备：0.15mol/L NaCl溶液，配法，称取8.775gNaCl溶解于
1L水中，
0.15mol/L NaHCO3-Na2CO3,PH9.0缓冲液，配法，取（1.59%）Na2CO3
10ml，（1.26%）NaHCO3 90ml,调PH到9.0
2.蛋白溶解液：按V0.15mol/L NaCl：V0.15mol/L NaHCO3-Na2CO3=9:1，溶解蛋白，使蛋白的终浓度为10mg/ml。
3.加入荧光素，加入的荧光素的质量按m蛋白：m荧光素=50~80mg:1mg,称取完成后加入事先配好的蛋白溶解液中，于4℃生化培养箱中，摇床混匀过夜。
注意加入荧光素后需要避光。
4.将混匀后的溶液转移到Millpore超滤管中，超滤管中滤膜可以拦截分子量大于3KD的分子，配平后以5000g的转速于日立高速离心机（型号？）离心至无荧光素滤出为止。
大约需离3次，每次离心需2-3h。
5.离心结束后，将超滤管中的标记液倒入用锡箔纸包裹的塑料管中，不加叠氮钠于4℃保存。
参考文献：MMP-3 Contribute to Nigrostriatal Dopaminergic Neuronal Loss,BBB Damage, and Neuroinflammation in an MPTP Mouse Model of Parkinson’s Disease.。
FITC蛋白标记方法
FITC蛋白标记方法FITC（fluorescein isothiocyanate）是一种常用的荧光染料，可用于蛋白标记。
蛋白标记是指将特定的蛋白质与荧光染料结合，使其能够在荧光显微镜下被观察到。
以下是一种常用的FITC蛋白标记方法：1.准备工作：-FITC染料：FITC染料可从商业供应商购买，也可以通过化学合成得到。
-蛋白质：选择需要标记的蛋白质。
常用的蛋白质包括抗体、酶、载体蛋白等。
-缓冲液：选择适当的缓冲液，如PBS（磷酸盐缓冲液）。
-处理液：选择适当的处理液，如甲醛或乙醛。
2.染色：-将蛋白质溶解在适当的缓冲液中，使其浓度达到所需浓度。
-将FITC染料溶解在适当的溶剂中，制备一定浓度的染料溶液。
-将蛋白质溶液与染料溶液按照一定比例混合，使其充分混合。
-在室温下孵育反应混合物，通常需要30分钟至1小时。
3.停止反应：-在反应结束后，加入一定浓度的停止剂，如甲醛或乙醛，停止反应。
-孵育反应混合物一段时间，通常需要10分钟至30分钟。
4.分离和清洗：-使用适当的方法，如离心或柱层析，将标记的蛋白质从混合物中分离出来。
-使用适当的缓冲液进行多次洗涤，以去除未结合的染料和其他杂质。
5.储存：-将标记的蛋白质溶解在适当的缓冲液中，制备一定浓度的溶液。
-将溶液储存在低温和避光的条件下，以延长其保存时间。
需要注意的是，FITC蛋白标记方法可以根据具体实验的需要进行调整和优化。
例如，可以根据蛋白质的性质和目标细胞的特点，选择适当的缓冲液、处理液和停止剂。
此外，在染色和清洗的过程中，需要注意避免蛋白质的降解和损失。
FITC蛋白标记方法广泛应用于生物学研究中，例如细胞标记、分子定位、蛋白质相互作用的研究等。
通过将FITC染料与蛋白质结合，可以实现对特定蛋白质在细胞或组织中的可视化观察，从而揭示其在细胞生物学和生物化学过程中的功能和调控机制。
fitc的标记方法
fitc的标记方法FITC的标记方法FITC，即Fluorescein Isothiocyanate（异硫氰荧光素），是一种常用的荧光染料，广泛应用于生物医学研究中。
FITC标记方法是将FITC与目标分子结合，以实现对目标分子的检测和定位。
本文将介绍FITC的标记方法及其在生物医学研究中的应用。
一、FITC的标记方法FITC的标记方法主要有两种：直接标记和间接标记。
1. 直接标记：直接将FITC与目标分子发生共价结合，形成FITC-目标分子复合物。
这种方法简单、快速，适用于一些小分子、低分子量的目标分子。
一般使用FITC的异硫氰酯官能团与目标分子中的氨基或羟基反应，生成共价结合。
直接标记的优点是标记效率高，标记物与目标分子的连接牢固，标记后目标分子的活性基本保持不变。
但也存在一些缺点，如荧光强度相对较弱，不适用于一些大分子的标记。
2. 间接标记：间接标记是通过先与目标分子结合一个中间分子，再将FITC与中间分子结合而实现标记。
这种方法适用于各种类型的目标分子，尤其适用于大分子或复杂的生物大分子的标记。
间接标记的优点是灵活性高，可以选择不同的中间分子来实现标记，同时可以选择不同的荧光染料进行标记，从而实现多重标记或多通道检测。
二、FITC的应用FITC标记的目标分子可以广泛应用于生物医学研究中的多个领域，如细胞生物学、免疫学、分子生物学等。
1. 细胞生物学：FITC标记的抗体可以用于细胞免疫染色，实现对特定细胞或细胞器的定位和检测。
通过与其他荧光染料的共标记，可以实现多通道检测，从而研究细胞内不同分子的相互作用和分布。
2. 免疫学：FITC标记的抗体可以用于免疫组织化学染色，实现对组织切片中的抗原的定位和检测。
这对于研究免疫反应的机制、疾病的发生和发展具有重要意义。
3. 分子生物学：FITC标记的探针可以用于DNA或RNA的检测和定位。
通过与其他标记物（如DAPI、Cy3等）共同使用，可以实现多重荧光染色，从而研究基因的表达、DNA的复制和修复等分子生物学过程。
实验烧脑，F-actin微丝蛋白研究选鬼笔环肽
实验烧脑，F-actin微丝蛋白研究选鬼笔环肽疫情影响+实验烧脑，生活有点躁！别着急...
为什么要选择鬼笔环肽？F-actin微丝蛋白研究
肌动蛋白是一种大约42 kDa的蛋白质，几乎在所有真核细胞中都有发现，它也是最丨高度保守
的蛋白质之一。
肌动蛋白的单体为球形分子，称为球形肌动蛋白G-actin，它的多聚体称为纤维
形肌动蛋白F-actin。
这两者对于细胞分裂过程中细胞的移动和收缩等重要的细胞功能都是必不
可少的。
鬼笔环肽是从致命的伞形毒蕈蘑菇中分离出来的一种毒素。
它是特异性结合于 F-肌动蛋白的双
环肽。
因此用荧光染料标记的鬼笔环肽可以非常方便的研究 F-肌动蛋白的分布。
AbFluor™ 488-鬼笔环肽，BMD00082；
AbFluor™ 555-鬼笔环肽，BMD00083；
TraKine™ F-actin染色试剂盒 (绿色荧光)，KTC4008；
TraKine™ F-actin染色试剂盒 (橙色荧光)，KTC4009
部分实验结果图片：
下图为使用AbFluor™ 488标记的鬼笔环肽对A594细胞进行染色，蓝色为DAPI染核。
荧光素FITC标记抗体的方法
荧光素FITC标记抗体的方法当FITC在碱性溶液中与抗体蛋白反应时，主要是蛋白质上赖氨酸的r氨基与荧光素的硫碳胺键(thiocarbmide)结合，形成FITC-蛋白质结合物，即荧光抗体或荧光结合物。
一个IgG分子中有86个赖氨酸残基，一般最多能结合15～20个，一个IgG分子可结合2～8个分子的FITC，其反应式如下FITC-N=C=S + N-H2-蛋白质→ FITC-NS-C-N-H2-蛋白质常用Marsshall(1958)法标记荧光抗体，也可以根据条件采用Chadwick等标记法或Clark等(1963)的透析标记法。
1．Marsshall法(1)材料抗体球蛋白溶液、0．5mol／L(pH9．0)碳酸盐缓冲液、无菌生理盐水、异硫氰酸荧光素、1％硫柳汞水溶液、50ml小烧杯、4℃冰箱、电磁搅拌器、透析袋、玻棒、pH7．2或3．0的0．01mol／LPBS等。
(2)方法及步骤①抗体的准备取适量已知浓度的球蛋白溶液于烧杯中，再加人生理盐水及碳酸盐缓冲液，使最后免疫球蛋白浓度为20mg／ml，碳酸盐缓冲液容量为总量的1／10，混匀，将烧瓴置电磁搅拌器上(速度适当以不起泡沫为宜)5～10min。
②荧光素的准备根据欲标记的蛋白质总量，按每毫克免疫球蛋白加0．01mg荧光色素，用分析天平准确称取所需的异硫氰酸荧光素粉末。
也可用下述公式计算出免疫球蛋白、荧光素的量，还可以算出需加缓冲液的量。
a．蛋白溶液：含量Amg／m1；容积Bml。
b．总蛋白量(AXB)＝Crag。
c．C／20～C／10＝Dmg(如蛋白含量低于20mg／ml，用C／10；如高于20mg／ml，用C／20)。
d．荧光素FITC的量：(1／50～2／100)XC＝Emg。
e．巳0．5mol／L(pH9．5)碳酸盐缓冲液D／10＝Fml。
f．PBS量D-(B+F)=Gml。
注：A为蛋白含量，mg／ml；B为蛋白质溶液的容积；C为蛋白总量，mg；D为常数，mg；正为荧光素的量，mg；F为碳酸盐缓冲液的容积，ml；G为PBS的容积，ml。
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FITC标记鬼笔环肽使用说明
货号:CA1620
规格:300T
保存:-20℃避光干燥保存，1年有效。
产品说明:
鬼笔环肽（Phalloidin）是一种来源于毒蕈类鬼笔鹅膏（Amanita phalloides）的环状七肽毒素，以高亲和力（Kd=20nM）选择性结合于丝状肌动蛋白F-actin，而不会与单体肌动蛋白G-actin结合，通常用来标记组织切片，细胞培养物或无细胞体系中的F-actin，从而对F-actin进行定性和定量分析。
另外，鬼笔环肽衍生物也以相近的亲和力结合于大小纤维，无论是动植物来源的肌肉细胞或非肌肉细胞，按照每一个肌动蛋白亚基约与一个鬼笔环肽分子的计量比结合。
且非特异性结合几乎可忽略，染色区域和非染色区域辨识度非常明显。
因此，鬼笔环肽衍生物特别适合替代肌动蛋白（Actin）抗体进行相关研究。
另外鬼笔环肽衍生物很小，直径约12-15Å，分子量＜2000Daltons，未标记肌动蛋白（Actin）的许多生理特性都得以维持，比如，同肌动蛋白结合蛋白如肌球蛋白，原肌球蛋白，DNase I等仍能发生反应；鬼笔环肽标记的纤维丝仍可穿透固相肌球蛋白基质；以及甘油抽提的肌纤维标记后仍可收缩等。
鬼笔环肽（Phalloidin）的结合阻止丝状肌动蛋白（微丝）的解离，稳定微丝结构，从而破坏微丝的聚合-去聚合的动态平衡。
此特性使得肌动蛋白聚合发生的临界浓度（CC）降至＜1µg/mL，因此，可用作一种聚合促进剂。
此外，鬼笔环肽还可抑制F-actin的ATP水解活性。
本品为FITC标记的鬼笔环肽，染色反应特异性强，对比性高，具有比Actin抗体更好的染色效果，适合用作F-actin的定性和定量检测。
另外，经本品结合后的F-actin仍能维持actin自身具有的许多生物学特性。
且本品的结合没有物种差异性，适用性广泛。
需要自备材料:
1.（可选）甲醇
2.1×PBS缓冲液,pH7.4,细胞培养级别
3.固定液4%多聚甲醛（溶于PBS缓冲液）
4.丙酮或透化液0.5%Triton X-100（溶于PBS缓冲液）
5.Fluoromount-G TM水溶性封片剂（不含DAPI），DAPI
6.（可选）DAPI Fluoromount-GTM水溶性封片剂（含DAPI）
7.（可选）BSA，标准级别
8.载玻片和盖玻片
9.盖玻片周围密封液（如透明指甲油）
10.组装有FITC激发/发射滤片，以及DAPI激发/发射滤片的荧光显微镜或共聚焦显微镜。
操作步骤:
1.工作液准备
本品以溶于甲醇的20µM储存液形式提供，总量为300µl。
按照100nM的工作液浓度来换算，可制备总量为60ml的工作液。
建议收到产品后，根据单次使用量，对母液进行小量
分装，-20℃避光冻存，一年稳定。
开始实验前，使用1×PBS缓冲液稀释储存液到需要的工作浓度。
推荐工作浓度为：80~200nM。
现配现用。
2.染色步骤
1）细胞爬片生长24h，使其密度达到50%汇合度。
2）吸掉培养液，37℃预热的1×PBS（pH7.4）清洗细胞2次。
3）使用溶于PBS的4%甲醛溶液进行细胞固定，室温固定10min。
注意：避免固定剂中含有甲醇成分，因为甲醇在固定过程中可能破坏肌动蛋白。
4）室温条件下，用PBS清洗细胞2~3次，每次10min。
5）室温条件下，用丙酮（≤-20℃）脱水或者用0.5%Triton X-100溶液透化处理5min。
6）室温条件下，用PBS清洗细胞2~3次，每次10min。
7）取200µl配制好的FITC标记鬼笔环肽工作液，覆盖住盖玻片上的细胞，室温避光孵育30min（通常情况下，4℃~37℃孵育皆可）。
注意：为了降低背景，可于FITC标记的鬼笔环肽工作液内加入1%BSA；另外，孵育过程中为了避免溶液挥发，可将盖玻片转移到一个密封的容器内。
8）用PBS清洗盖玻片3次，每次5min。
9）使用200µl DAPI溶液（浓度：100nM）对细胞核进行复染，约30s。
10)用PBS清洗盖玻片，然后倒置在已经滴有一滴Fluoromount-G TM水溶性封片剂的载玻片上。
使用纸巾轻轻檫掉多余封片剂，然后用指甲油永久封片。
此法制备的标本玻片可置于4℃避光保存，通常6个月内可继续做F-actin染色分析。
注意：也可以直接使用含有DAPI的抗荧光淬灭封片剂合并步骤9）10），简化步骤。
11)荧光显微镜或者共聚焦显微镜下进行荧光观察，选择FITC激发/发射滤片
（Ex/Em=496/516nm）和DAPI激发/发射滤片（Ex/Em=364/454nm）。