细胞传代-英文 Trypsinizing and subculturing mammalian cells from a monolayer
细胞传代操作步骤及注意事项
细胞传代操作步骤及注意事项细胞传代培养是细胞培养常规保种方法之一，也是几乎所有细胞生物学实验的基础。
当细胞随着培养时间的延长和细胞不断分裂，细胞之间相互接触而发生接触性抑制，生长速度减慢甚至停止，且也会因营养物不足和代谢物积累而不利于细胞生长或发生中毒。
因此，细胞在培养瓶中长满后就需要将其稀释，分种成多瓶，细胞才能继续生长。
这一过程就叫传代。
细胞传代作为一种常规的实验操作，不但可以扩大细胞培养的数量，同时也可以避免细胞因进入平台期乃至衰亡期而大量死亡的窘境。
所以为了让细胞保持在对数生长期，维持细胞旺盛的分裂能力，这时候就需要进行细胞传代。
细胞传代要在严格的无菌条件下进行，并且根据不同细胞采取不同的方法：☑贴壁生长的细胞用消化法传代；☑部分贴壁生长但贴壁不牢固的细胞可以采用直接吹打传代；☑悬浮生长的细胞可以采用直接吹打或离心沉淀后再分离传代，或直接用自然沉淀法吸除上清后，再吹打传代。
上次讲了细胞复苏操作，今天来讲讲细胞传代的操作（适用于贴壁细胞的传代培养）！细胞复苏流程图细胞传代流程图01细胞传代前准备➡实验开始前，将15mL离心管、移液管、枪头等实验需要用到的耗材放入无菌超净工作台，紫外线照射30min。
➡将完全培养基、PBS、胰酶预热至37℃。
➡倒置显微镜下观察细胞形态和生长密度，当细胞生长密度达到80%~90%汇合度即可进行传代。
02胰蛋白酶/EDTA消化➡弃去旧培养基，PBS洗去残留的旧培养基，重复洗两次。
注意：贴壁加入到培养皿的边缘，不能直接对着细胞加入PBS，容易把细胞都吹起来。
这一步的目的是为了去掉残余的培养基，残余的培养基会含有血清和一些离子等，不利于接下来的消化。
➡弃去PBS，加入0.25%Trypsin-0.04%EDTA（T25培养瓶加入约1.5mL，T75培养瓶加入约3mL），迅速铺匀，保证充分接触细胞表面（消化时间视具体细胞而定）。
➡显微镜下观察消化情况，约70%~80%细胞收缩变圆后，轻拍培养容器外壁，使细胞脱离培养表面。
细胞传代标准操作规程
细胞传代培养标准操作规程一、实验名称：细胞传代培养二、实验目的：传代培养细胞株三、背景知识：随着培养时间的延长和细胞不断分裂，一方面细胞之间相互接触而发生接触性抑制，生长速度减慢甚至停止；另一方面也会因营养物不足和代谢物积累而不利于生长或发生中毒。
此时就需要将培养物分割成小的部分，重新接种到另外的培养器皿（瓶）内，再进行培养。
这个过程就称为传代（passage）或者再培养（subculture）。
对单层培养而言，80%汇合或刚汇合的细胞是较理想的传代阶段。
细胞“一代”指从细胞接种到分离再培养的一段期间，与细胞世代或倍增不同。
在一代中，细胞倍增3～6次。
细胞传代后，一般经过三个阶段：游离期、指数增生期和停止期。
常用细胞分裂指数表示细胞增殖的旺盛程度，即细胞群的分裂相数／100个细胞。
一般细胞分裂指数介于0.2％～0.5％，肿瘤细胞可达3～5％。
细胞接种2～3天分裂增殖旺盛，是活力最好时期，称指数增生期(对数生长期)，适宜进行各种试验。
四、实验原理：细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代(再培养)。
传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。
同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。
悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。
五、实验材料和药品：（一）实验药品：DMEM培养基，小牛血清，0.25％胰蛋白酶，PBS缓冲液。
（二）实验仪器和材料：CO2培养箱，倒置显微镜，超净台；培养瓶，弯头吸管，废液缸，离心管；75％酒精棉球，酒精灯，培养细胞六、实验步骤：1．入无菌室之前用肥皂洗手，用75％酒精擦拭消毒双手。
2．倒置显微镜下观察细胞形态，确定细胞是否需要传代及细胞需要稀释的倍数。
将实验所需培养基置37℃下预热。
3．手在进入超净台前应消毒；超净台台面应整洁，用75％酒精溶液擦净。
4．打开超净台的紫外灯照射台面30min左右，打开抽风机，关闭超净台的紫外灯，清洁空气，除去臭氧。
细胞培养常规操作流程
细胞培养常规操作流程英文回答：Cell culture is a fundamental technique in biological research, allowing scientists to study and manipulate cells in a controlled environment. The standard procedure forcell culture involves several key steps.First, I need to prepare the culture medium. This is the nutrient-rich solution that provides cells with the necessary nutrients and growth factors to survive and multiply. The medium is usually composed of a basal medium, such as DMEM or RPMI, supplemented with fetal bovine serum, antibiotics, and other additives. I carefully measure and mix the components to ensure a proper balance of nutrients.Next, I sterilize all the equipment and materials that will come into contact with the cells. This includes the culture dishes, pipettes, and media bottles. Sterilization can be achieved by autoclaving, which uses high-pressuresteam to kill any microorganisms present. Alternatively, I can use a filter to remove bacteria and fungi from the media.Once everything is sterilized, I can start the cell culture process. I thaw frozen cells or obtain fresh cells from a tissue sample. I then count the cells using a hemocytometer or an automated cell counter. This step is important to determine the cell density and ensure that I seed the appropriate number of cells for the experiment.After counting the cells, I seed them into the culture dishes or flasks. The dishes are usually coated with a substance that promotes cell attachment, such as collagen or gelatin. I carefully distribute the cells evenly across the surface and place the dishes in an incubator set at the appropriate temperature and CO2 concentration. The incubator provides a controlled environment that mimics the conditions inside the body.Over the next few days, I regularly check the cells under a microscope to monitor their growth and health. Ialso change the culture medium every 2-3 days to provide fresh nutrients and remove waste products. This process is known as feeding the cells.Sometimes, I need to subculture the cells to maintain their health and prevent overcrowding. This involves detaching the cells from the culture dish using an enzyme called trypsin, and then transferring them to a new dish with fresh medium. Subculturing allows the cells to continue growing and dividing without becoming too dense.Throughout the cell culture process, I need to maintain aseptic technique to prevent contamination. This means working in a clean and sterile environment, wearing gloves, and using sterile tools. Contamination can lead to the growth of unwanted microorganisms and compromise the experiment.In conclusion, cell culture is a meticulous processthat involves preparing the culture medium, sterilizing equipment, seeding the cells, maintaining them in the incubator, and regularly feeding and monitoring theirgrowth. It requires attention to detail, patience, and aseptic technique to ensure successful cell culture experiments.中文回答：细胞培养是生物研究中的一项基本技术，允许科学家在受控环境中研究和操作细胞。
细胞传代过程及注意事项
细胞传代过程及注意事项
细胞传代是一种实验室中常用的技术，通过将培养细胞从一个培养皿转移到另一个培养皿，使细胞恢复生长。
细胞传代的步骤一般如下：
1. 选择好培养基和培养皿。
培养基应当根据实验需要进行选择，一般为普通培养基或特殊培养基，培养皿应该选择防止氧化的培养皿，如玻璃、金属、塑料等。
2. 将细胞活化，并尽快用无菌操作法处理细胞。
在活化之前，需要检查培养细胞的情况，如果检测出来有病毒污染，则应立即处理，以避免病毒对后续实验造成影响。
3. 分离细胞。
将培养基中的细胞分离出来，一般使用0.25-0.05%的胰蛋白酶溶液，但也可以根据实验需要选择不同的分离液。
4. 传代细胞。
将分离的细胞添加到新的培养皿中，然后放置于37℃的培养箱中，细胞传代完成。
传代时应注意事项：
1. 细胞传代过程中，应保持操作环境无菌，以防止细胞污染。
2. 分离细胞时，应尽量减少细胞损伤，以确保细胞处于活性状态。
3. 在添加分离细胞时，应小心操作，以防止细胞受到外界冲击而死亡。
4. 传代细胞时，应检查培养皿的清洁度，确保无污染物。
细胞传代培养
细胞继代培养1. 前言1.1 细胞生长至高密度时，即须收集细胞，分殖至新的培养瓶中，其稀释比例依细胞种类而异。
1.2 收集细胞方法可用trypsin-EDTA、cell scraper、离心处理等，处理方法依细胞种类而异。
1.3 Trypsin-EDTA为收集吸附型细胞常用之方法。
Trypsin为胰蛋白酵素，其作用为分解细胞与瓶壁之附着蛋白， EDTA为chelating agent，其作用为去除Ca2+、Mg2+等离子，trypsin与EDTA二者共同作用，可使附着之细胞自瓶壁脱落。
除了trypsin-EDTA，亦可使用cell scraper(细胞刮勺)刮落细胞。
1.4 Trypsin-EDTA作用时间勿太久，否则可能对细胞造成伤害或死亡。
敲拍培养瓶不可太过猛烈，避免对细胞造成伤害或造成培养瓶裂痕而污染。
2. 材料：2.1 Dulbecco's phosphate-buffered saline, Ca++/Mg++ free2.2 trypsin-EDTA solution (0.05% trypsin-0.53mM EDTA.4Na)：若为大体积包装，建议将其以少量分装于无菌试管中，保存于-20℃，避免反复冷冻解冻造成trypsin之活性降低，并可减少污染之机会。
使用前放在37℃水槽中回温。
2.3 新鲜培养基2.4 无菌吸管/离心管/培养瓶3. 步骤：3.1 附着型细胞(adherent cell)3.1.1 吸掉旧培养液。
3.1.2 用Dulbecco's phosphate-buffered saline洗涤细胞一至二次。
3.1.3 加入trypsin-EDTA溶液(1ml/T-25 flask, 2ml/T-75 flask)：3.1.3.1 方法一：37℃或室温作用数分钟，于倒立显微镜下观察，当细胞将要分离而呈现圆粒状时，吸掉trypsin-EDTA溶液，轻敲培养瓶边缘使细胞自瓶壁脱落，然后加入适量之新鲜培养基，与脱落之细胞或细胞团块混和均匀后，依稀释比例转移至新的培养瓶中，依正常条件继续培养之。
细胞培养—传代—冻存—western blot等实验相关步骤
围绕siRNAs的相关实验详细步骤及总结实验一: 细胞传代培养材料: 15ml离心管、枪（头1ml、200ul、10ul）、无菌吸管、培养瓶、含10%FBS 的RPMI—1640(OVCAR-3)、M5A(SKOV-3)、PBS、trypsin等1、步骤: （以下均在超净台内, 酒精灯旁操作）（SKOV-3）2、打开超净台, 将离心管、枪（头）、吸管等工具置于紫外线下照射30min；含10%FBS的RPMI—1640、trypsin、PBS放在37°C水浴恒温箱中预热。
取一个生长良好的细胞培养瓶（密度适中, 细胞成梭形连接, 贴壁良好）, 弃旧培养基, PBS 2ml 清洗2次（切勿用力吹打）。
用移液枪取trypsin 1ml沿细胞生长壁对侧壁注入, 然后放平培养瓶, 使贴壁细胞与trypsin充分接触, 置于CO2培养箱2min左右（时间不能太长, 以免损伤细胞）。
4.往培养瓶中加入1640 1~2ml, 随后用移液枪将悬液移到15ml离心管中, 离心1000 r/min, 5min。
5.弃上清液, 加入少量10%FBS的1640培养基使成细胞悬液。
6、分装, 按1:2~3传代, 每瓶4~5ml。
倒置显微镜下观察（细胞突起消失变圆形, 细胞间隙等距）, 标记。
7、放入CO2培养箱中培养, 第二天观察生长状况。
总结: 1.在用离心机时, 看清楚是RCF还是RPM；调节Temp.以及Time。
2.在用移液枪吸出trypsin充分消化后的细胞后, 须知用少量培养液清洗一下培养瓶, 并将清洗液移入离心管中。
3、每取用一个容器, 拧开或者拧上盖子时, 注意在酒精灯上旋转一圈。
另外, 记住用酒精棉球经常擦拭台面。
4、在用移液枪或者吸管混匀细胞悬液过程中, 动作轻柔, 避免产生气泡等。
实验二: 细胞冻存材料: 15ml离心管、枪（头1ml、200ul、10ul）、无菌吸管、冻存管、RPMI —1640(OVCAR-3)、M5A(SKOV-3)、FBS、PBS、trypsin、DMSO等步骤: （以下均在超净台内, 酒精灯旁操作）（OVCAR-3）1.打开超净台, 将离心管、枪（头）、吸管等工具置于紫外线下照射30min；FBS、RPMI—1640、trypsin、PBS放在37°C水浴恒温箱中预热。
细胞培养(英文版本)
• 1933: Gey developed the roller tube technique
Contd..
• 1940s: The use of the antibiotics penicillin and streptomycin in culture medium decreased the problem of contamination in cell culture.
• 1954: Abercrombie observed contact inhibition: motility of diploid cells in monolayer culture ceases when contact is made with adjacent cells.
• 1955: Eagle studied the nutrient requirements of selected cells in culture and established the first widely used chemically defined medium.
• Cell culture was first successfully undertaken by Ross Harrison in 1907
• Roux in 1885 for the first time maintained embryonic chick cells in a cell culture
connective tissue in serum • and plasma. • 1903: Jolly observed cell division of salamander leucocytes in vitro. • 1907: Harrison cultivated frog nerve cells in a lymph clot held by the
菌种传代的具体操作流程
菌种传代的具体操作流程英文回答：The specific operation process of strain subculture involves several key steps to ensure the successful transfer and maintenance of the microbial culture.Step 1: Preparation of Sterile Materials.The first step is to prepare all the necessary materials in a sterile environment. This includes autoclaving the media, sterile tubes or plates, and any other equipment that will come into contact with the culture.Step 2: Inoculation.Using aseptic techniques, the culture is transferred from the original stock to a new sterile medium. This can be done using a loop or pipette to transfer a small amountof the culture to the fresh medium.Step 3: Incubation.After inoculation, the culture is then placed in an appropriate incubation environment. This may involve specific temperature, pH, and oxygen conditions to support the growth of the microorganism.Step 4: Monitoring and Maintenance.The subculture is monitored for growth and any signs of contamination. It is important to regularly check the culture to ensure that it is growing as expected and is free from any unwanted microorganisms.Step 5: Subculturing.Once the culture has reached the desired growth phase, it can be subcultured again to maintain the strain. This process is repeated as needed to keep the culture viable and healthy for further study or use.中文回答：菌种传代的具体操作流程包括几个关键步骤，以确保微生物培养物的成功转移和维护。
细胞的传代
细胞的原代培养与传代一、原代培养：1 、概念：将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。
2、培养方法：最常用的原代培养有组织块培养和分散细胞培养。
组织块培养是将剪碎的组织块直接移植在培养瓶壁上，加入培养基后进行培养。
分散细胞培养则是将组织块用机械法或化学法使细胞分散。
如欲从胎儿或新生儿的组织分离到活性最好的游离细胞，经典的方法是用蛋白水解酶（如胰蛋白酶和胶原酶）消化细胞间的结合物，或用金属离子螯合剂（如EDTA）除去细胞互相粘着所依赖的Ca2+，再经机械轻度振荡，使之成为单细胞。
传代培养：1、概念：当原代培养成功以后，随着培养时间的延长和细胞不断分裂，一则细胞之间相互接触而发生接触性抑制，生长速度减慢甚至停止；另一方面也会因营养物不足和代谢物积累而不利于生长或发生中毒。
此时就需要将培养物分割成小的部分，重新接种到另外的培养器皿（瓶）内，再进行培养。
这个过程就称为传代（passage）或者再培养（subculture）。
对单层培养而言，80% 汇合或刚汇合的细胞是较理想的传代阶段。
2、传代方法：（1）悬浮生长细胞传代离心法传代：离心（1000 转/分）去上清，沉淀物加新培养液后再混匀传代。
（2）半悬浮生长细胞传代（Hela 细胞）此类细胞部分呈现贴壁生长现象，但贴壁不牢，可用直接吹打法使细胞从瓶壁脱落下来，进行传代。
（3）贴壁生长细胞传代采用酶消化法传代，常用的消化液有0.25%的胰蛋白酶液。
7二、冻存与复苏：1、原则：慢冻快融当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。
如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反，结晶就大，大结晶会造成细胞膜、纲胞器的损伤和破裂。
复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。
Vero细胞最标准的培养方法可以参考ATCC
Vero细胞最标准的培养方法可以参考ATCC：增殖培养：Propagation: ATCC complete growth medium: Minimum essential medium (Eagle) with 2 mM L-glutamine and Earle's BSS adjusted to contain 1.5 g/L sodium bicarbonate, 0.1 mM non-essential amino acids, and 1.0 mM sodium pyruvate, 90%; fetal bovine serum, 10%Temperature: 37.0CAtmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%传代：Subculturing: Protocol:Remove and discard culture medium.Briefly rinse the cell layer with 0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA solution to remove alltraces of serum that contains trypsin inhibitor.Add 2.0 to 3.0 ml of Trypsin-EDTA solution to flask and observe cells under an inverted microscope until cell layer is dispersed (usually within 5 to 15 minutes).Note: To avoid clumping do not agitate the cells by hitting or shaking the flask while waiting for the cells to detach. Cells that are difficult to detach may be placed at 37°C to facilitatedispersal.Add 6.0 to 8.0 ml of complete growth medium and aspirate cells by gently pipetting.Add appropriate aliquots of the cell suspension to new culture vessels.Incubate cultures at 37°C。
细胞培育经常使用术语及说明
细胞培育的经常使用术语及说明体外培育(in virto)：原意为在试管中，现常与组织培育一词通用，译为体外培育。
组织培育(tissue culture)：维持组织在体外生长、与泛指体外培育。
器官培育(organ culture)：在体外维持器官、器官的部份或器官的原基生存和生长的方式。
* 细胞培育(cell culture)：细胞（包括单个细胞）在体外条件下的生长称为细胞培育，在细胞培育中，细胞再也不形成组织。
细胞融合(cell fusion)：两个独立的细胞融合成一个细胞。
可用聚乙二醇（PEG）或仙台病毒诱发。
* 细胞杂交(cell hybridization)：两个或多个不同的细胞融合。
致使一个含核体（aynkaryon）的形成。
体外培育转化(in vitro transformation)：细胞在体外培育中发生与原细胞遗传性状不同的转变，但不必然具有致癌性。
单倍体(haploid)：正常细胞染色体大体数（每一染色体只有一种）。
整倍体(euploid)：具有两个以上单倍体数量的细胞。
非整倍体(aneuploid)：细胞核内染色体数为单倍染色体数的非整倍数时，称非整倍体。
二倍体(diploid)：具有两套染色单体数量的细胞（2n）* 原代培育(primary culure)：从体内掏出细胞或组织的第一次培育。
再培育(subculture)：同传代。
* 传代(passage)：不管是不是稀释，将细胞从一个培育瓶转移或移植到另一个培育瓶即称为传代或传代培育。
也称再培育。
单层培育(monolayer culture)：培育细胞在底物上长成单层。
悬浮培育(suspension culture)：细胞在培育液中呈悬浮状态生长。
* 贴壁依托性(anchorage-dependent)：为细胞需贴附于底物或支持物上才能生长的性质。
贴壁依托性细胞(anchorage dependent cell)：由它们繁衍出来的细胞（或培育物）只有贴附于不起化学作用的物体（如玻璃或塑料等无活物体）的表面时，才能生长，生存或维持其功能。
细胞传代
将细胞分装入冻存管中，每管1ml；
在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及 操作者；
冻存：标准的冻存程序为降温速率-1～2℃/ min；当温度达-25℃以下时，可增 至-5℃～-10℃/ min；到-100℃时，则可 迅速浸入液氮中。
细胞冻存
细胞培养的传代及日常维持过程中，在培养器具、 培养液及各种准备工作方面都需大量的耗费，而 且细胞一旦离开活体开始原代培养，它的各种生 物特性都将逐渐发生变化并随着传代次数的增加 和体外环境条件的变化而不断有新的变化。因此 及时进行细胞冻存十分必要。细胞冷冻储存在70℃冰箱中可以保存一年之久；细胞储存在液氮 中，温度达-196℃，理论上储存时间是无限的。 细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证 明这样可以最大限度的保存细胞活力。
冻存（ 4 ℃30min -20℃30min -70℃过 夜 移入液氮内 ）
操作流程
• 选择生长良好的A549细胞一瓶，去旧培养液，加入D-Hanks1ml洗一次，去液体。
• 加入5滴消化液消化5～10分钟（镜下观察掌握），加入3mlD-Hanks液制成细胞悬液
•
将细胞悬液移入15ml离心管中离心（1000rpm 5min)
也可将装有细胞的冻存管放入4 ℃ 冰箱 30min,-20℃冰箱30min ，然后放入70℃冰箱中过夜，最后移入液氮容器内
注意事项
1.待冻存的细胞应具有较高的活力。从增殖期到形 成致密的单层细胞以前的培养细胞都可以用于冻 存，但最好为对数生长期细胞。在冻存前一天最 好换一次培养液；
2.细胞不同，冻存效果不同。通常存活率可达90% 以上。
细胞的换液与传代培养1
动 物 细 胞 传 代 培 养
2．半悬浮生长细胞传代（Hela细胞）
此类细胞部分呈现贴壁生长现象，但贴壁不 进行传代。 3．贴壁生长细胞传代
牢，可用直接吹打法使细胞从瓶壁脱落下来，
采用酶消化法传代。常用的消化液有0.10.25％的胰蛋白酶液。
五、消化法传代培养的步骤
动 物 细 胞 传 代 培 养
PBS洗涤胰蛋白酶消化来自倾出消化液 加入培养液
稀释
计数
吹散细胞
三、原代培养物需要换液和传代 (subculture)的指标
动 物 细 胞 传 代 培 养
1.pH值下降（红变黄色）； 2.细胞浓度； 3.细胞类型；
4.细胞形态学；细胞核四周充满颗 粒，细胞质呈空泡化，细胞变圆， 或出现细胞与底物脱离时。
细胞的换液与传代培养1细胞传代培养细胞的传代培养动物传代细胞培养细胞传代步骤成纤维细胞传代细胞传代传代培养悬浮细胞传代细胞传代视频细胞传代表示方法
细胞的换液与传代培养
细胞系cell line：原代培养物经首次传代后即成。
有限细胞系finite cell line: 不能继续传代或传代数有限。
连续细胞系continuous cell line：可连续传代的细胞系，
看细胞传代小视频,排序并挑出毛病
即已建成的细胞系。
细胞株cell strain：通过选择法和克隆形成法从原代培 养物或细胞系中获得的具有特殊性质和标志的培养物。
一、传代培养（passage）
无论是否稀释，将细胞从一个培养
瓶转移或移植到另一个培养瓶，也 称再培养（subculture）
二、单层培养细胞的一般传代步骤:
倒出旧液 培养
四、细胞传代方法
动 物 细 胞 传 代 培 养
细胞培养英文版
? 1964: Littlefield introduced the HAT medium for cell selection.
? 1965: Ham introduced the first serum-free medium which was able to support the growth of some cells.
cell in plasma clots. He made detailed observation of mitosis.
Contd..
? 1911: Lewis and Lewis made the first liquid media
consisted of sea water, serum, embryo extract, salts and peptones. They observed limited monolayer growth. ? 1913: Carrel introduced strict aseptic techniques so that cells could be cultured for long periods.
Contd….
? Virology
Cultivation of virus for vaccine production, also
used to study there infectious cycle .
? Genetic Engineering
Production of commercial proteins, large scale production of viruses for use in vaccine production e.g. polio, rabies, chicken pox, hepatitis B & measles
细胞培养英文术语
细胞培养英文术语细胞培养是现代生物学研究的重要手段，它在实验室中支持了许多生物和医学研究项目。
以下是一些常见的细胞培养英文术语及其解释，它们有助于了解细胞培养的基本原理和实验流程。
细胞培养基（Cell Culture Medium）细胞培养基由多种化学成分组成，可以提供营养、生长因子和必需物质，使细胞得以在体外生长和繁殖。
培养基的选择取决于细胞类型和所需的研究目的。
无血清培养基（Serum-free Medium）无血清培养基不含胎牛血清，在研究中被广泛使用。
这种培养基可以提供更一致的生长条件，避免因血清来源不同而导致的实验变异性。
细胞株（Cell Line）细胞株既可以是从组织中制备的原代细胞，也可以是从原代培养物中建立的细胞系。
使用相同的培养条件，细胞株可以生长和扩增多代，并可以在多个实验中使用。
细胞密度（Cell Density）细胞密度指在培养基中存在的细胞数量。
为了获得准确的实验数据，控制细胞密度是非常重要的，因为细胞数量的变化会影响生长因子浓度、细胞凋亡率等多种因素。
细胞传代（Cell Passaging）细胞传代是一种细胞分裂的过程，它将细胞从一个培养瓶中移植到另一个培养瓶中。
在传代过程中，细胞会减少接触面积和增加生长空间，因此对于长时间的细胞培养来说，传代是必不可少的。
细胞培养条件（Cell Culture Condition）细胞培养条件包括温度、CO2浓度、湿度、氧气浓度等多种环境因素。
在不同的细胞类型和研究中，不同的细胞培养条件会影响细胞生长、分化和转录表达等关键生物功能。
细胞凋亡（Cell Apoptosis）细胞凋亡指由于成熟细胞受到各种压力刺激或病毒感染而死亡的自然过程。
在细胞培养过程中，细胞凋亡的发生率可以通过细胞密度和培养条件的优化来控制。
细胞冻存（Cell Cryopreservation）细胞冻存是将细胞存储在低温下以便长时间保存的技术。
通过注入特定的保存液和快速降温，细胞可以冻存并在需要时解冻使用。
传代培养中的细胞传代培养-推荐下载
传代培养中的细胞传代培养（subculture），当原代培养成功以后，随着培养时间的延长和细胞不断分裂，一则细胞之间相互接触而发生接触性抑制，生长速度减慢甚至停止；另一方面也会因营养物不足和代谢物积累而不利于生长或发生中毒。
此时就需要将培养物分割成小的部分，重新接种到另外的培养器皿（瓶）内，再进行培养。
这个过程就称为传代（passage）或者再培养（subculture）。
对单层培养而言，80%汇合或刚汇合的细胞是较理想的传代阶段。
1．悬浮生长细胞传代离心法传代：离心（1000转/分）去上清，沉淀物加新培养液后再混匀传代。
2．半悬浮生长细胞传代（Hela细胞）此类细胞部分呈现贴壁生长现象，但贴壁不牢，可用直接吹打法使细胞从瓶壁脱落下来，进行传代。
3．贴壁生长细胞传代采用酶消化法传代。
常用的消化液有0.25%的胰蛋白酶液。
1、附着型胞(adherentcell)（1）吸掉旧培养液。
（2）用D-PBS洗涤细胞一至二次。
（3）加入trypsin-EDTA溶液(1ml/25cm2,2ml/75cm2)，37℃作用数分钟，于倒立显微镜下观察，当细胞将要分离而呈现圆粒状时，吸掉trypsin-EDTA溶液。
(若不移去trypsin-EDTA，则在trypsin-EDTA作用后，加入适量含血清之新鲜培养基终止trypsin作用，离心后再吸掉上清液。
（4）轻拍培养瓶使细胞自瓶壁脱落，加入适量之新鲜培养基，以吸管上下吸放数次以打散细胞团块，混和均匀后，依稀释比例转移至新的培养瓶中，以正常培养条件培养。
2、悬浮型细胞(suspensioncell)（1）吸出细胞培养液，放入离心管中，离心1000rpm5分钟。
（2）吸掉上清液，加入适量之新鲜培养基，混和均匀后，依稀释比例转移至新的培养瓶中，以正常培养条件培养。
3、融合瘤(hybridoma)（1）有些hybridomacell需培养三天以上才会产生抗体，若是更换培养基，则可能会失去抗体。
beas-2b细胞传代步骤
beas-2b细胞传代步骤Beas-2B细胞传代步骤Beas-2B细胞是一种人鳞状肺上皮细胞系，常用于研究呼吸道疾病和肺部疾病相关的生物学过程。
在进行Beas-2B细胞的研究时，常常需要对细胞进行传代，以获取足够的细胞数量进行后续实验。
本文将介绍Beas-2B细胞的传代步骤。
一、细胞培养基的准备1. 准备DMEM/F12培养基，添加10%胎牛血清(FBS)和1%青霉素/链霉素(PS)。
2. 将培养基加热至37摄氏度，使其达到体温。
二、细胞的分离1. 用PBS缓冲液洗涤细胞，将细胞从培养瓶中收集到离心管中。
2. 将细胞离心，去除上清液，用PBS缓冲液洗涤细胞。
3. 加入适量的胰蛋白酶(0.25% trypsin)，使其充分覆盖细胞，放置于37摄氏度恒温培养箱中，进行消化。
4. 定时观察细胞的形态变化，当细胞与胰蛋白酶完全分离后，停止消化。
三、细胞的传代1. 将被胰蛋白酶消化的细胞转移至离心管中，加入适量的培养基，轻轻悬浮细胞，使其均匀分散。
2. 采用细胞计数板或倒置显微镜，计数细胞数目，计算细胞的浓度。
3. 根据需要的细胞数量，计算所需的细胞体积。
4. 将细胞体积和培养基的体积按照比例混合，将混合液加入新的培养瓶中。
5. 放置细胞培养瓶在恒温培养箱中，培养细胞至80%的密度。
四、细胞的观察和记录1. 定期观察细胞的形态变化，记录细胞的生长情况。
2. 注意观察细胞的污染情况，如发现污染应及时更换培养基和培养瓶。
五、细胞的冻存1. 当细胞达到足够数量时，可以进行细胞的冻存以备将来使用。
2. 用PBS缓冲液洗涤细胞，离心去除上清液。
3. 加入适量的冻存液(DMSO和FBS混合液)，使其充分覆盖细胞，轻轻混匀。
4. 将混合液转移到冷冻管中，放置于-80摄氏度冷冻库中保存。
六、细胞的复苏1. 从冷冻库中取出冻存管，迅速将其放置在37摄氏度的水浴中，使其迅速解冻。
2. 将细胞转移到离心管中，加入适量的培养基，轻轻悬浮细胞。
传代细胞的常规培养
当原代培养成功以后，随着培养时间的延长和细胞不断分裂，一方面由于细胞密度过大，细胞与细胞之间相互接触而发生接触性抑制，生长速度减慢甚至停止；另一方面也会因营养物枯竭和代谢物积累而不利于生长或发生中毒。
因此需要将培养细胞进行分离扩大培养，细胞由原培养瓶内分离稀释后传到新的培养瓶的这个过程称为传代(passage)或者再培养(subculture)。
1)传代标准传代时间一般通过两个方面进行确定：一是在细胞培养过程中，当培养液由于pH值下降而呈现黄色时，表明细胞已经达到最大密度，需要换液或进行传代培养；二是观察细胞形态，健康细胞形态饱满，折光性好，生长致密时即可传代。
初代培养的首次传代很重要，是建立细胞系的关键时期。
在首次传代时一般要特别注意以下3点：①细胞没有生长到足以覆盖瓶底壁的大部分表面之前，不要急于传代。
②原代培养时细胞多为混杂生长，上皮样细胞和成纤维样细胞并存的情况很常见。
传代时不同的细胞有不同的消化时间，因此要根据需要，注意观察及时进行处理，并可根据不同细胞对胰蛋白酶的耐受时间不同而分离和纯化所需要的细胞。
另外早期传代的培养细胞较已经建系的培养消化时间相对较长。
吹打细胞时动作要轻巧，尽可能减少对细胞的损伤。
③首次传代时细胞接种数量要多一些，使细胞能尽快适应新环境有利于细胞生存和增殖。
随消化分离而脱落的组织块也可一并传人新的培养瓶。
2)生长周期和传代比例体外培养技术中所谓的传“代”概念并不等于细胞生物学中“亲代细胞”与“子代细胞”中“代”的概念。
传代培养的实质就是分离后再次培养，进行一次分离再培养称之为传一代，传代数可以衡量培养物的培养年龄。
传代是细胞分裂造成的结果，细胞从一次分裂结束到下一次分裂结束为一个细胞周期，分为间期与分裂期两个阶段。
细胞周期能准确表示细胞增殖速度。
两次细胞分裂之间的时间也可以用细胞世代时间来表示，所以细胞周期指细胞一个世代所经历的时间。
正常细胞培养的世代数有限，只有癌细胞和发生转化的细胞才能无限生长下去。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
Trypsinizing and subculturing mammalian cells from a monolayer
As I major in molecular biology, there are losts of experiments I need to do every day. Here I will demonstrate a fundamental experiment, cell passaging. Passaging or subculturing of cells is a common procedure wherein cells from a given culture are divided, or “split”, into new cultures and fed with fresh medium to facilitate further expansion. While the concept itself is relatively simple, it is quite complex in practical. The steps are described below.
To passage a plate of cell, it means to start from a primary culture grown to confluency in 6 mm dish containing 5 ml tissue culture medium.
First of all, remove all of the medium from the primary culture with the pipettor. Then wash the inherent cell monolayer once or twice with the small volume of 37℃PBS solution to remove residual fetal bovine that may inhibit the action of trypsin enzyme that will add in next step.
Next add enough warm trypsin EDTA solution to the culture so that it cover inherent cell layer. Place the plate on 37℃warming tray for one to two minutes. After the incubation, tap the bottom of the plate on the flat surface to dislodge the cells. And check the culture with inverted microscope to be sure that the cells are rounded up which indicates they are detached from the surface.
After looking through the scope, wrings a dish in complete medium and pipette the suspension into a 15 ml conical tube containing 2 ml of complete medium. Spin cells down and resuspend the cell in medium.
After that, add equal volume of cell suspension to each of the fresh plates that have been appropriately labelled. Place 2 ml of fresh medium to each new culture. Finally, incubate the plates in 37℃5% CO2 incubator.。