新疆甘草多糖的超声提取及含量测定
甘草有效成分的提取分离实验方案
甘草有效成分的提取分离实验方案实验目的：通过对甘草中甘草黄酮、甘草酸和甘草多糖的提取分离，进一步理解他们的理化性质，并且初步掌握提取分离的方法。
实验原理：黄酮类化合物则泛指两个苯环（A环与B环）通过中央三碳相互联接而成的一系列化合物。
根据中央三碳的氧化程度、是否成环、B 环的联接位点等特点，可将该类化合物分为多种结构类型。
代表化合物有甘草黄酮、甘草素、异甘草素、甘草甙、异甘草甙、甘草查尔酮等。
甘草中已经发现的黄酮类化合物有一百多种，本实验只对其进行粗提，并且测定其总含量。
甘草酸是一类三萜类皂苷，主要以甘草酸钾、钙盐的形式存在，是甘草次酸的二葡萄糖醛酸甙，含量在4-20%之间；甘草酸水解脱去糖酸链变形成了甘草次酸。
超临界CO2萃取甘草总黄酮的萃取率是1. 35%，含量32. 45%，是索氏提取法提取甘草总黄酮的提取率的2.2倍，索氏提取溶剂用量是超临界CO2萃取的6倍。
本实验采取超临界CO2萃取法提取甘草黄酮。
【1】大孔树脂适于物质水溶液的分离纯化，超临界C02萃取提取的甘草总黄酮中乙醇含量过高，即使对萃取液进行浓缩处理，其中乙醇的含量仍然很高，所以大孔树脂的吸附、解吸附的效果不好。
萃取液浓缩近干加入水后，所要分离的物质析出变混浊，也不适合用大孔树脂进行分离纯化。
与大孔树脂层析比较，硅胶柱层析可以更有效的分离纯化甘草黄酮。
使用硅胶柱层析可以有效地使甘草黄酮类物质的含量达到55%以上，收率1. 12%，符合国家中药二类新药的原料要求。
【1】综合考虑，本实验选择硅胶柱层析对甘草黄酮进行分离纯化。
甘草酸和甘草次酸的极性比黄酮类物质的极性大，更易溶于极性大的低浓度乙醇中，采用85%乙醇作为夹带剂，使得在二氧化碳超临界萃取甘草黄酮类物质过程中，大部分甘草酸和甘草多糖仍然留在残渣中。
鉴于甘草酸和甘草多糖都溶于水的性质，本实验采用超声或微波辅助法对它们同时进行提取[3]。
对于提取后的甘草酸和甘草多糖的分离，可查阅到的方法包括醇沉酸沉法[3]。
甘草多糖提取工艺条件的研究
多糖是指由许多单糖分子以糖苷键结合而成 的高分子碳 水 化 合 物，是 除 核 酸 和 蛋 白 质 之 外，存 在于所有生命有机体的重要组成部分之一。近年 来，已有多 种 植 物 的 多 糖［1］ 被 提 取 分 离 鉴 定 出 来， 此类多糖来 源 广 泛、无 细 胞 毒 性，应 用 于 生 物 体 毒 副作用小，因此多糖生物资源的开发利用和研究日 益活跃。糖生物学也被称为“生物化学最后的巨大 前沿之一”。
取苯酚 5 g，加水 100 mL 溶解，置棕色瓶中，备用。 二、实验方法 1． 葡萄糖标准曲线［5］的绘制： 精确量取葡萄糖
标准溶液 0． 2、0． 4、0． 6、0． 8、1． 0 mL，置干燥具塞的 试管中，分别加蒸馏水至 1． 0 mL，加入 5% 苯酚溶液 1． 0 mL，摇匀，再滴加浓硫酸 5． 0 mL，充分摇匀后， 25 ℃ 水浴放置 25 min。另以蒸馏水 1． 0 mL 加 5% 苯酚和浓硫酸同上述操作作空白对照，于 490 nm 处 测吸光度。以吸光度为纵坐标、浓度为横坐标绘制 标准曲线。
·234·
世界中西医结合杂志 2011 年第 6 卷第 3 期 World Journal of Integrated Traditional and Western Medicine 2011，Vol. 6，No. 3
·药物研究·
甘草多糖提取工艺条件的研究
韩荣生1 李鹏2
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
【摘要】 目的 在超声条件下提取甘草中有效成分甘草多糖（ GPS） 并测定其含量，以筛选获得 适宜的甘草多糖提取工艺条件。方法 采用正交试验设计，选取提取时间、提取温度及料液比作为工 艺因素，每个因素采用 3 个水平，选择 L9 （ 34 ） 正交表进行实验，同时用硫酸 － 苯酚法测定甘草多糖的 含量来作为综合评价指标。结果 在超声条件下提取甘草多糖的适宜条件为： 提取次数为 3 次，提取 时间为 20 min，提取温度为 45 ℃ ，料液比为 1 ∶ 20 （ g · mL －1 ） ，该提取 条 件 下 甘 草 多 糖 的 含 量 为 2． 39% 。结论 利用超声提取多糖相对其他提取方法有较大优势，可缩短提取时间、提高提取效率， 且操作方便、自动化程度高，便 于 大 规 模 工 业 生 产，为 从 药 材 或 制 剂 中 提 取 甘 草 多 糖 提 供 了 依 据 及 参考。
超声提取高效液相色谱法测定甘草中甘草酸含量
中，且与其他物质色谱峰分离较好，同时ＨＯＡｃ的 加入避免了甘草酸色谱峰的拖尾现象。采用此方
１．９５５ ８％，ＲＳＤ为０．１３％。
法测得甘草中甘草酸含量１．９５７％，平均加样回收
２．７回收率的测定
率１００．２０％，相对标准偏差为１７７％。可见该方法
精密称取已测含量的甘草粉样品３份，分别加 入一定量甘草酸铵标准品，按前面所确定的方法提
测定甘草中甘草酸具有简便、快速、精密度高和重 现性好的特点，适于测定甘草及其制剂产品中的甘
取有效成分，ＨＰＬＣ测定含量，甘草酸加样回收率 草酸含量。
为１００．２０％，相对标准偏差为１．７７％。以上试验结 果回收率较高，且相对标准偏差较小，表明以上分
参考文献
析样品制备方法准确度高，可靠性强。 ３讨论
１．吕欣，付玉杰，王微，等．紫外分光光度法测定甘草黄酮 含量．植物研究，２００３，２３（２）：１９２～１９４
ＯＤＳ色谱柱（４．６ ｍｍ×２５ ｃｍ，５恤ｍ），检测波 长２５４ ｎｍ，流动相为ＣＨ，０Ｈ／３％ＨＯＡｃ（Ｖ／Ｖ）为 ７５／２５，检测温度为室温，流速１ ｍＬ·ｍｉｎ～，进样量
超声辅助低共熔溶剂提取甘草多糖的研究
2021年1月第42卷第2期应用技术—84D01：10.12161/j.issn.l005-6521.2021.02.014超声辅助低共熔溶剂提取甘草多糖的研究孙悦1,何莲芝U苏卓文U李志田U刘娅心（1.石河子大学食品学院，新疆石河子832000；2.新疆植物药资源利用教育部重点实验室，新疆石河子832000）摘要：以甘草为原料,采用超+辅助低共熔溶剂法，研究低共熔溶剂的种类、摩尔比、含水量以及提取温度、料液比、超+时间、超+功率对甘草多糖提取率的影响，并通过响应面试验设计，优化提取甘草中多糖的工艺条件。
结果表明，以含水量40%,摩尔比为1:3的氯化胆碱-异丙醇体系为提取剂，提取温度39"、料液比1:50（g/iL）、超+时间30min、超+功率250W，此时多糖的提取率达8.31%。
关键词：低共熔溶剂q超+波辅助；甘草；多糖;提取Ultrasonic-assisted Eutectic Solvent Extraction of Glycyrrhiza PolysaccharideSUN Yue1,HE Lian-zhi1,SU Zhuo-wen1,LI Zhi-tian1,LIU Ya1,2F(1.College of Food Science,Shihezi University,Shihezi832000,Xinjiang,China;2.Key Laboratory ofXinjiang Phytomedicine Resource and Utilization,Ministry of Education,Shihezi832000,Xinjiang,China) Abstract:Using licorice as raw material,using ultrasonic-assisted eutectic solvent method,the effects of eutectic solvent types,molar ratio,water content,extraction temperature,material-liquid ratio,ultrasonic time,ultrasonic power on the extraction rate of glycyrrhizin polysaccharide were studied,and through the design of response surface experiment,the technological conditions for extracting polysaccharides from licorice were optimized.The results showed that the choline chloride-isopropanol system with a water content of40% and a molar ratio of1:3was used as the extractant.The extraction temperature was39°C,the material-liquid ratio was1:50(g/mL),the ultrasonic time was30min,and the ultrasonic power250W,the extraction rate of polysaccharide reached8.31%.Key words:low eutectic solvent;ultrasonic wave;glycyrrhiza;polysaccharide;extraction引文格式：孙悦，何莲芝，苏卓文，等.超+辅助低共熔溶剂提取甘草多糖的研究[几食品研究与开发,2021,42(2):84-91.SUN Yue,HE Lianzhi,SU Zhuowen,et al.Ultrasonic-assisted Eutectic Solvent Extraction of Glycyrrhiza Polysaccharide[J].Food Research and Development,2021,42(2):84-91.甘草为豆科、甘草属多年生草本植物，全世界有13种甘草，主要分布于亚洲、美洲中部、北非等地。
甘草多糖的分离提取及含量测定研究
甘草多糖的分离提取及含量测定研究引言甘草（Glycyrrhiza）是一种广泛分布于亚洲和欧洲的植物，其根部含有丰富的生物活性成分。
其中甘草多糖是一种具有重要药理活性的化合物，已被广泛应用于中药领域。
为了深入研究甘草多糖的含量以及提取方法，本文进行了一系列实验并对结果进行了统计分析。
材料与方法材料•甘草根部•甘草提取液•离心管•蒸馏水•甘草多糖标准品•硫酸•硝酸•灰色硫酸铁•磷钼酸铵•高速离心机•紫外分光光度计方法1.甘草分离提取：–甘草根部切成小片，并用蒸馏水洗净。
–将甘草根部片放入离心管中，用甘草提取液浸泡。
–在室温下提取24小时后，将提取液离心分离。
–将提取液转移到干燥的离心管中，用高速离心机离心15分钟，取上清液备用。
2.含量测定：–取一定量的甘草多糖标准品和未知甘草多糖提取液，分别制备浓度为0.1 mg/mL的溶液。
–分别将甘草多糖标准品和未知提取液的溶液转移到离心管中。
–加入硫酸，硝酸和灰色硫酸铁，混匀，并在室温下反应20分钟。
–分别加入磷钼酸铵溶液并混匀。
–用紫外分光光度计测定吸光度，并根据标准曲线计算甘草多糖的浓度。
结果与分析在进行甘草多糖的分离提取实验后，我们成功得到了甘草提取液。
在含量测定实验中，我们利用甘草多糖标准品和未知提取液制备了浓度为0.1 mg/mL的溶液，并进行了一系列反应和测定。
通过紫外分光光度计测定吸光度并根据标准曲线计算甘草多糖的浓度，我们得到了未知提取液中甘草多糖的含量。
根据统计分析，我们可以得出以下结论：1.甘草多糖的分离提取方法相对简单且有效，能够得到高纯度的甘草多糖提取液。
2.通过含量测定实验，我们确定了未知提取液中甘草多糖的含量为X mg/mL。
结论本研究成功地进行了甘草多糖的分离提取实验，并通过含量测定方法测定了其含量。
我们得出的结论是未知提取液中甘草多糖的含量为X mg/mL。
这些结果对于进一步研究甘草多糖的药理活性及其应用具有重要意义。
参考文献[1] 张三, 李四. 甘草多糖的提取与含量测定方法研究[J]. 中草药, 20XX, 10(1): 123-135.[2] 王五, 赵六. 甘草多糖的生物活性及应用研究进展[J]. 中药学杂志, 20XX, 25(3): 456-468.。
新疆产甘草品质评价及甘草多糖提取工艺研究
ｐ ｌ ａ ｃ ａｉ ， ｈｃ ｒ ｈｇ ｅ ａ ｏ ｅ ｎｔ ｎ ｓ ｇ ｃ ｒ ｉ ｉ － ａ ｄｇ ｃ ｒ ｉ ｌ ａｃ ａ ｄ ． ．ｎ ｈ ｌ ｇｙ ｙｒ ｉ ， ｏｙ ｃ ｈ ｒ ｅ ｗ ｉ ｗｅｅ ｉ ｒｈ ｔ ｓ ｅ ｒ ｋ （ｌ ｙｒ ｚ ａ ｄ２ ％ ｎ ｌ ｙ ｒ ｚ ｐ ｙ ｃｈ ｒ ｅ ５ Ｉ ｅ ｄ ｌ ｒ ｚ ｓ ｄ ｈ ｈ ｔｎ ｈ ｉ ｈ ｔ ｕ ｙ ｈａｃ ２ ｙ ｈ ａｏ ｓ ｉ ３ ％） ｔ ｗｉ ｃ ｈ ａ
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Ｍ ｏ ｅ ｎＦ ｏ ｃ ｎ ｅ ｎ ｅｈ ｏｏ ｙ ｄ ｒ ｏ ｄＳ ｉ ｃ ｄＴ ｃ ｎ ｌ ｅ ａ ｇ
２ ０ ， ｏ．４ Ｎｏ ０８Ｖ １ ， ． ２ ２
新疆产甘草 品质评价 及甘草 多糖提取工艺（ 天津科技大学食品工程与生物技术学院，天津 ３０ ５ ） ０４ ７
摘要 ：本文通过测定样品 中甘草酸和甘草多糖 的含量，比较 不同新疆产甘草切 片品质；并通过单因素和正交实验研究甘草多糖
甘草多糖提取纯化工艺研究
甘草多糖提取纯化工艺研究甘草多糖是一种天然多糖，具有很多药理学特性，被广泛应用于中药、食品、保健品等领域。
然而，由于甘草多糖在天然状态下含量较低，提取纯化工艺成为了研究重点。
本文将针对甘草多糖提取纯化工艺进行探讨。
一、甘草多糖的结构和特性甘草多糖是一种天然多糖，由葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖等单糖组成。
其分子量较大，具有多种生物活性，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤、降血糖等。
甘草多糖的结构特点是分支程度高，分子链长度不一，具有多种单糖组分。
二、甘草多糖的提取方法目前，甘草多糖的提取方法主要有水提法、酸提法、碱提法、超声波提取法、微波提取法等。
其中，水提法是最常用的提取方法，其具体步骤包括：将甘草粉末加入水中，加热至一定温度，过滤得到甘草多糖溶液，再经过浓缩、沉淀、洗涤等步骤，最终得到甘草多糖粉末。
三、甘草多糖的纯化方法甘草多糖在提取过程中容易受到杂质、色素等的干扰，因此需要进行纯化处理。
目前，甘草多糖的纯化方法主要有凝胶过滤法、离子交换法、超滤法、逆流色谱法等。
其中，凝胶过滤法是最常用的纯化方法，其具体步骤包括：将甘草多糖溶液经过过滤膜过滤，将过滤液加入凝胶柱中，通过洗涤、洗脱等步骤，最终得到纯化后的甘草多糖。
四、甘草多糖提取纯化工艺的优化甘草多糖提取纯化工艺的优化是提高甘草多糖产率和纯度的重要途径。
目前，甘草多糖提取纯化工艺的优化主要从以下几个方面入手：（1）提高提取效率。
可通过改变提取温度、提取时间、提取溶剂、提取pH值等因素，来提高甘草多糖的提取效率。
（2）降低成本。
可通过改变提取方法、减少中间步骤、优化设备等措施，来降低甘草多糖的生产成本。
（3）提高纯度。
可通过改变纯化方法、加强对杂质的去除等措施，来提高甘草多糖的纯度。
五、结论甘草多糖是一种具有广泛应用前景的天然多糖，其提取纯化工艺的研究对其应用价值的发挥至关重要。
通过优化提取纯化工艺，可以提高甘草多糖的产量和纯度，降低生产成本，为其在中药、食品、保健品等领域的应用提供了有力支持。
甘草多糖的提取及纯化
甘草表面红棕色或灰棕色，具显著的纵皱纹、沟纹、皮孔及稀疏的细根痕。
质坚实，断面略显纤维性，黄白色，粉性，形成层环明显，射线放射状，有的有裂隙。
根茎呈圆柱形，表面有芽痕，断面中部有髓。
栽培要点：喜阳光充沛，日照长，气温低的干燥气候。
宜选土层深厚，排水良好的砂质壤土栽培。
用种子或根茎繁殖，但以根茎繁殖生长快。
药材特性：甘草，系豆科多年生草本植物。
深秋，荚果裂开，籽粒随风散步大地上，天然繁殖。
茎挺拔直立；根如圆柱，直径三四厘米，大的五六厘米，长一米多，最长者达三四米。
具体用处：甘草是临床最常应用的药品。
生甘草能清热解毒，润肺止咳，调和诸药性；炙甘草能补脾益气，临床用量特大，出口量大。
除药用之外，食品上也大量用甘草做糕点添加剂，它的甜度是蔗糖的百倍。
西方国家大量进口甘草，从中提取甘草次酸，治艾滋病。
甘草退耕还林，水土保持作用更强。
陕北农民和西部人们反映，把甘草种子随便撤到地上即可出苗，抗旱性特强。
糖类物质是地球上数量最多的一类有机化合物，是生命物质的组成成分之一。
糖类物质广泛地存在于生物界，特别是植物界。
糖类物质按干重计占植物的83％～90％，占细菌的10％～30％，动物的小于2％。
大量药理及临床研究证实：多糖有调节免疫、抗癌、抗肥胖、控制血糖、降胆固醇、降血脂等生理功能，可广泛应用于医药、保健品及功能食品，作为绿色生物医药产品具有广阔的市场前景［2］。
多糖又称多聚糖。
其存在于动物、高等植物、微生物(细菌和真菌)及海藻等机体中。
多糖具有复杂、多方面的生物活性和功能，可作为广谱免疫促进剂，具有免疫调节功能，如多糖能治疗风湿病、慢性病毒性肝炎、癌症等免疫系统疾病，甚至能抗AIDS病毒［3］；还具有抗感染、抗放射、抗凝血、降血糖、降血脂作用；促进核酸与蛋白质的生物合成作用；能控制细胞分裂和分化，调节细胞的生长与衰老，而且多糖作为药物其毒性极小，因而多糖的研究已引起人们的极大兴趣。
尽管我国对多糖的研究起步较晚，但近十几年来的工作取得了较大的进展，愈来多的多糖被发现，并证实它们具有广泛的生物活性［4］。
响应面法优化超声波辅助提取甘草多糖工艺的研究
响应面法优化超声波辅助提取甘草多糖工艺的研究张琳，樊金玲，朱文学，马海乐，范翠英（河南科技大学食品与生物工程学院，河南洛阳 471003）摘要：试验研究了乌拉尔甘草多糖的超声波辅助提取工艺。
在单因素实验的基础上，选定超声功率、提取时间和提取温度三个因素的三个水平进行中心组合实验，建立了甘草多糖提取率和纯度的二次回归方程，其决定系数分别为98.98%和91.67%。
通过响应面分析及岭嵴分析得到优化提取工艺条件为：超声功率580W、提取时间64.5min、提取温度64.6℃，该条件下多糖提取率预测值为9.62%，验证值为9.56%，此值为相同条件下传统水浴浸提法的三倍多；多糖纯度预测值为71.36%，验证值为65.65%。
红外光谱检测结果显示，超声波提取法与传统浸提法所得甘草粗多糖基本构成相同。
关键词：乌拉尔甘草；多糖；超声波辅助提取；响应面分析；岭嵴分析；红外光谱检测中图分类号：Q949.9文献标识码：BOptimization of the ultrasound-assisted extraction of polysaccharides from Glycyrrhiza uralensis Fish. using response surface analysisZhang Lin ，Fan Jinling , Zhu Wenxue , Ma Haile , Fan Cuiying (College of Food and Bioengineering , Henan University of Science and Technology, Luoyang 471003, China)Abstract: A three-level Box-Behnken design, combined with the canonical and ridge analyses, was employed to optimise the process parameters for polysaccharides ultrasound-assisted extraction from the Glycyrrhiza uralensis Fish., one of the most valued traditional Chinese medicines. The critical factors selected for the investigation were actual sonic power, duration of time and extraction temperature. The experimental results were fitted with a second-order polynomial equation by a multiple regression analysis and more than 98.98% and 91.67% of the variation could be predicted by the yield and the purity of polysaccharides models. The canonical analysis of surface responses revealed that the three eigenvalues had different signs, indicating a saddle stationary surface. The optimal conditions for extraction of polysaccharides from the Glycyrrhiza uralensis Fish. were determined, using the ridge analysis, as extraction time, 64.5 min; extraction temperature, 64.6 °C; at actual sonic power of 580W. Under these conditions, the highest yield and the purity of polysaccharides reached with estimated value and verified value being of 9.62%、9.56% and 71.36%、65.65% , respectively. It is three times higher than the classical extraction yield and the structure of polysaccharides from the two methods are the same through IR.Key words: Glycyrrhiza uralensis Fish; polysaccharides; the ultrasound-assisted extraction technology; response surface analysis; ridge analysis_______________________作者简介：张琳（1981-），女，硕士研究生，研究方向为天然产物化学。
新疆甘草多糖的超声提取及含量测定
１ ２ 材 料 与 试 剂 胀 果 甘 草 Ｇ ￣ ｒｌａ ｚ ｌｔ ． ｃｒｈｚ ａａ Ｂ ｔ （ 自新疆 巴音郭 楞蒙古 自治 区尉 犁县 ， ａ． 产 为新疆
甘 草 制 品 工 业 普 通 用 原 料 。 石 河 子 医药 公 司 购 买 ， 从 烘 干后粉 碎备 用 ） ；葡 萄 糖 对 照 品 （ 析 纯 ） 苯 酚 试 分 ；
天平 ；Ｚ Ｄ ＫＷ — 电 子 恒 温 水 浴 （ 京 光 明 医 疗 仪 器 Ｃ 北
量 瓶 中 ， 少量 水 溶 解 并 稀 释 至 刻 度 ， 匀 作贮 备 加 摇
液 。精 密吸取 贮备液 ２ ０ ， ． ０ｍｌ 照标 准曲线制 备项 下 的 方 法 测 定 吸 光 度 ， 下 式 计 算 换 算 因 素 ：＝ Ｗ ／ 按 ｆ
ｍｌ 酚 溶 液 和 ３ 苯 ＯｍＩ 硫 酸 ，０ｃ恒 温 ０ ５ｈ 冷 水 浓 ３ ． ． 浴 冷 却 至 室 温 ， 容 ５ ， ４ ０ｎ 处 测 定 吸 定 ０ｍｊ 在 ９ ｍ 光 度 以不 加 样 为 空 白 。 浓 度 ｃ 对 吸 光 度 Ａ 回 归 ， 以
得 方 程 Ａ一 ３ ５ ５×１ ” ０ ０ ３ ， ＝０ ９ ９５（ ２ ０。 Ｃ＋ ． ｌ ６ ｒ ３ ． ９
称 取 甘 草 粉 末 ｌ ０ｇ， 石 油 醚 （ ０ ９ Ｃ） ０ ０ 经 ６～ ０ ５０
多糖 ＧＰ Ｓ具 有 抗病 毒活 性“ ， 对其 多糖 的提 取工 而
艺及 应用新 技术 方面 的研究 少见报 道 。
ｍＩ 回流 脱 ． － 次 ， 次 １ｈ 再 用 ８ 乙 醇 回 流 提 Ｎ 每 Ｏ 取 ２次 ， 次 ２ｈ 以 除 去 单 糖 和 低 聚 糖 ，将 药 渣 加 每 ， ５ ０ｍｌ ９ ０ 水 ０ Ｃ水 浴 提 取 二 次 ， 并 二 次 提 取 液 。 合 旋 转 薄 膜 蒸 发 仪 上 碱 压 浓 缩 至 １ ＯｍＩ加 少 量 活 性 炭 ， ５ 脱 色 ， 滤 滤 液 加 ５倍 量 ９ 乙 醇 ， 置 过 夜 ， 过 ５ 放 抽
一种低温超声波提取甘草多糖的方法[发明专利]
![一种低温超声波提取甘草多糖的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/ab3c3ba2c850ad02df804180.png)
专利名称：一种低温超声波提取甘草多糖的方法专利类型：发明专利
发明人：赖作刚,宋飞
申请号：CN202010262089.4
申请日：20200406
公开号：CN111253499A
公开日：
20200609
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种低温超声波提取甘草多糖的方法，包括以下步骤：步骤一：提取：将原料放入超声波提取机中，放入蒸馏水，控制温度50‑70℃。
步骤二：分离：将步骤一中上清液以15％三氯乙酸溶液除蛋白，在加入1mol/L氢氧化钠进行中和，在加入80％乙醇溶液进行沉淀；步骤三：超声波干燥：将步骤二中沉淀物放入超声波机进行低压干燥，控制温度40‑60℃；步骤四：微博干燥：将步骤三中初步干燥的原料放入烘箱中再次进行微波烘干，然后取出。
本发明与现有技术相比的优点在于：提取效率较高，同时提取纯度也较高。
申请人：康奇(天津)生物技术股份有限公司
地址：300385 天津市滨海新区经济技术开发区微电子工业区微三路5号综合楼
国籍：CN
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代理人：尚欣
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新疆胀果甘草多糖的分离纯化、结构分析和生物活性研究
新疆胀果甘草多糖的分离纯化、结构分析和生物活性研究甘草(Glycyrrhiza spp.)是传统常用中草药,具有清热解毒、健脾补气、润肺止咳之功效,民间用于治疗乳腺炎、胃及十二指肠溃疡、慢性气管炎、咳嗽、气喘、慢性咽喉炎、食物中毒等症。
甘草也是新疆具有区域特色的民族药资源和重要的大宗药材之一。
甘草的现代化学及药理活性研究重点多集中在甘草酸、甘草次酸等三萜皂苷类化合物和甘草苷等黄酮类化合物上,而对甘草中另一类重要的生物活性物质甘草多糖(Glycyrrhiza Polysacchiade,GPS)的研究报道相对较少。
本文以新疆甘草中资源最为丰富的主要原料草-胀果甘草(Glycyrrhiza inflata Bat.)为研究对象,首次系统研究胀果甘草多糖的提取、分离、纯化、理化性质、一级结构,对不同结构多糖的免疫活性、抗氧化活性以及抗肿瘤活性进行研究,并探讨活性多糖的构效关系。
目的对新疆胀果甘草多糖进行系统的研究,阐明新疆胀果甘草多糖的化学结构和生物活性,探讨其构效关系,为研发多糖类新药和开发利用甘草多糖提供科学依据。
方法1.胀果甘草多糖的提取分离和纯化:采用水提醇沉方法从胀果甘草中提取粗多糖,透析后经DEAE纤维素离子交换柱色谱分级,各级分采用Sephadex、Sepharose等凝胶色谱填料进行分离纯化,HPGPC法检测纯度并测定平均分子量。
2.胀果甘草多糖的结构鉴定:采用GC、HPLC、GC-MS、IR、NMR、MS等现代色谱、光谱技术,结合酸水解、部分酸水解、甲基化、酶解等经典化学方法进行多糖的结构鉴定。
3.胀果甘草多糖的生物活性研究:通过小鼠脾细胞体外增殖实验,对各多糖组分的免疫活性进行比较研究;通过4种肿瘤细胞株的体外抑制实验对胀果甘草粗多糖及其分离纯化得到的均一多糖进行抗肿瘤活性实验;运用化学发光体系产生自由基模型研究胀果甘草多糖清除自由基的能力,以评价其抗氧化活性。
4.胀果甘草多糖的构效关系研究:采用部分酸水解、酶解及糖醛酸还原方法处理胀果甘草活性多糖,对各结构片断进行活性研究,确定活性片段,阐明构效关系。
甘草碱溶性多糖超声提取法的研究
DOI：10.19904/14-1160/s.2022.04.009甘草碱溶性多糖超声提取法的研究唐世明（新疆和田师范专科学校，新疆和田848000）摘要：以NaOH浓度、料液比、提取时间、提取温度为考察因素，通过单因素试验确定各因素最佳水平。
试验结果表明，单因素试验确定各因素最佳水平为NaOH浓度40mg/mL、料液比1∶20（vol）、提取时间25min、提取温度45℃。
关键词：甘草；碱溶性多糖；提取法文章编号：1005-2690（2022）04-0025-03中国图书分类号：O657.5文献标志码：B甘草为多年生草本植物，其根茎具有药用价值，有缓解咳嗽、清热解毒、祛痰止咳、消炎等作用，有效成分是甘草酸、多糖和黄酮类化合物[1]。
甘草多糖（GPS）具有毒性小、抵抗毒素、提高机体免疫力等优点[2]，提取方法涉及化学、物理、生物、医药等技术手段，包括传统提取法、复合酶法、微波提取法、超声提取法等。
超声提取法是在超声场中极大的压强下，使整个细胞壁破裂而释放胞内物质，整个过程属于物理变化，可保障胞内物质在一定时间内不发生任何变化，并且使用成本低、自动化率较高，可用于大规模的工业生产，同时避免了对环境和产品的污染[3]。
目前，药理活性研究主要集中在甘草黄酮、三萜类化合物（甘草酸）及甘草水溶性多糖上，而在甘草碱溶性多糖方面的研究报道比较少。
本研究以超声法提取甘草碱溶性多糖工艺参数，主要考察NaOH浓度（mg/mL）、料液比、提取时间（min）、提取温度（℃）这4个因素对多糖提取率的影响，为确定超声法提取甘草碱溶性多糖提供理论依据。
1材料与方法1.1材料1.1.1试材甘草购于和田市欣明维吾尔医药材交易市场，烘干粉碎。
1.1.2试剂石油醚（分析纯）、无水乙醇（分析纯）、正丁醇（分析纯）、三氯甲烷（分析纯）、丙酮（分析纯）、浓硫酸（分析纯）、苯酚（分析纯）、NaOH（分析纯）、葡萄糖（分析纯）。
1.1.3仪器可见分光光度计722S（上海精密科学仪器有限公司制造），台式离心机TDL—40B9（上海安亭科学仪器厂制造），数显恒温水浴锅HH—Z（国华电器有限公司），超声波清洗仪KQ-250DB（昆山市超声波仪器有限责任公司）。
新疆甘草多糖的超声提取及含量测定
新疆甘草多糖的超声提取及含量测定
王航宇;刘金荣;江发寿;赵文斌;但建明
【期刊名称】《现代中药研究与实践》
【年(卷),期】2002(016)001
【摘要】目的从甘草中提取多糖并测定其含量.方法采用超声法提取,分光光度法测定多糖含量.结果用超声法提取测得甘草多糖含量为3.26%,较常规法高出36%.结论甘草多糖提取可优选超声法.
【总页数】2页(P7-8)
【作者】王航宇;刘金荣;江发寿;赵文斌;但建明
【作者单位】石河子大学药学院,新疆,石河子,832002;石河子大学药学院,新疆,石河子,832002;石河子大学药学院,新疆,石河子,832002;石河子大学药学院,新疆,石河子,832002;石河子大学药学院,新疆,石河子,832002
【正文语种】中文
【中图分类】R284.2
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属多年生 草本 植 物 ， 其药 用历 史悠久 ， 具有 极高 的药
用 价 值 自 １ ４ 年 荷 兰 Ｒ ｖ ｒ 表 论 文 证 明 甘 ６ ９ ｅ ｅｓ发 草 提 取 物 对 医 治 胃 溃 疡 有 较 好 疗 效 以 来 ， 草 的 研 甘 究 引 起 了 国 内外 学 者 的 广 泛 重 视 。但 研 究 热 点 均 集
剂 （ 蒸 ） 重 。
５ 回 收 率 测 定
精密称 取样 品粉末 ０ １ ９８ｇ 加人 一 定量 的甘 ． ， ４
草 多 糖 ， ８ 的 乙 醇 液 ５ ， ＫＨｚ超 声 提 取 加 Ｏ ０ｍｌ４ ５ 两 次 ， 次 ３ ｎ 过 滤 ， 渣 加 水 ５ 于 ４ 每 ０ ｍｉ。 滤 Ｏｍｌ ５ＫＨｚ 超 声 提 取 ２ ｎ后 过 滤 ， 加 水 ５ 重 复 超 声 提 ５ｍｉ 再 ０ｍｌ
糖 的 分 解 。 甘 草 多 糖 的 回 收 率 实 验 来 看 ． 声 提 取 从 超 没 有 破 坏 甘 草 多 糖 的 结 构 。超 声 波 破 碎 过 程 是 一 个
每 次 ２ｈ， 残渣 用 ８ 乙醇 洗至 无 色 ， ｏ 继续 用 水 １ ０ ０
ｍ【回流 ２ｈ 反 复 洗 置 ２ ０ｍｌ 量 瓶 中 定 容 备 用 。 ， ５ 容
滤 后 的 沉 淀 １ ０ｍｌ 溶 解 重 复 醇 沉 一 次 沉 淀 以 ０ 水
超 声技 术 已经 广 泛 应用 于有 教 成 分 的提 取 ， 技 术 的优 点 是 可 以大 幅 度 地 提 高有 效 成 分 的提 取 率 ， 短提取 时 间 ， 缩 提高工 作效率 ， 省溶剂 ， 节 简化 提
取 的 进 行 。 （ ） 取 全 过 程 无 须 加 热 ， 免 甘 草 多 ２提 避
６ 甘草 多糖含 量测定 ６ １ 常 规 方法 精 密 称 取 甘 草 粉 末 ０ ２ ９５ｇ 置 ． ９ ， 索 氏 提 取 器 中 ， ８ 乙 醇 １ ０ｍｌ回 流 提 取 ２次 ， 加 ０ ０ ，
９ 乙 醇 、 水 乙 醇 、 酮 、 醚 多 次 洗 涤 ， ０ Ｃ干 ｊ 无 丙 乙 ６ 燥， 即得 甘 草 多 糖 。 ４ 换 算 因素的测定
精 密 称 取 甘 草 多糖 ２ ． ０ｍｇ 置 １ ０ｍｌ ０ ０ ， ０ 的容
计 ： ７ ０超声 波仪 （ ５ ＤＩ ２ ４ ＫＨｚ ） Ｔ ２ Ｂ分析 ±５ ｝ Ｇ３ ８
Ｃ Ｄ。Ｗ 为 多 糖 重 量 （ ）Ｃ 为 多 糖 溶 液 中 葡 萄 糖 的 ｇ ， 浓 度 （ｇ ｍ１ ， 为 甘 草 多 糖 的稀 释 因 素 。 测 得 ｆ ｇ ／ ）Ｄ ＝
３ ８２ ． ９ ４。
厂 ） Ｒ一０ 旋 转 薄 膜蒸 发 仪 （ 海 申胜 生物 技 术有 ２１ 上
物 理过 程 ， 浸提 过程 中无化 学 反应 ， 被浸提 的生物 活
性 物 质 在 一 定 时 间 内 保 持 不 变 ， 物 活 性 不 减 法 生 该 对 于 某 些 热 敏 成 分 的 提 取 ， 疑 是 最 合 适 的 一 种 方 无
精 密 吸取各 供试 液 ３ ０ｍ１照标 准 曲线 制各 项 下 的 ． ． 方法 测定 吸光 度 。按 下 式计算 多糖 含量 多糖 含量
３ 。 ９
所 用仪 器简单 ， 操作 方便 超 声波 仪结 构简 单 ， 自 且 动 化程 度极 高 ， 于大规 模 工业生 产 超 声提取 甘 便 对
草多糖 的最 优化条 件及 应 用超声 技术 大规 模工业化
６ ２ 超声 方法 ．
精 密 称 取 甘 草 粉 末 ０ ３ ０８ｇ 加 ． ０ ，
称 取 甘 草 粉 末 ｌ ０ｇ， 石 油 醚 （ ０ ９ Ｃ） ０ ０ 经 ６～ ０ ５０
多糖 ＧＰ Ｓ具 有 抗病 毒活 性“ ， 对其 多糖 的提 取工 而
艺及 应用新 技术 方面 的研究 少见报 道 。
ｍＩ 回流 脱 ． － 次 ， 次 １ｈ 再 用 ８ 乙 醇 回 流 提 Ｎ 每 Ｏ 取 ２次 ， 次 ２ｈ 以 除 去 单 糖 和 低 聚 糖 ，将 药 渣 加 每 ， ５ ０ｍｌ ９ ０ 水 ０ Ｃ水 浴 提 取 二 次 ， 并 二 次 提 取 液 。 合 旋 转 薄 膜 蒸 发 仪 上 碱 压 浓 缩 至 １ ＯｍＩ加 少 量 活 性 炭 ， ５ 脱 色 ， 滤 滤 液 加 ５倍 量 ９ 乙 醇 ， 置 过 夜 ， 过 ５ 放 抽
的 方法测 定 吸光度 ， 算 回收 率 ， 计 结果 为 １ ］ １ ０ ． ３
ＲＳ Ｄ一 １ ５ ％ （ 一 ５ 。 ．８ ｎ ）
应， 如乳化 、 扩散 、 粉碎 、 学效应 等 也都有 利 于使植 化
物 中 的有 效 成 分 的 转 移 ， 充 分 和 溶 剂 混 合 ， 进 提 重 的 葡 萄 糖 ０ ９ ９ ６ｇ 配 成 ． ９ ，
１０ ０ 溶 液 ， 度 为 ｌ ０ ｕ ／ ， 中 精 密 吸 取 ０ ． ０ｍｌ 浓 ０ ２， ｍｌ从 ｇ ０ １ ， ． ０ ０ ４ ， ． ０ ０ ８ ， ． ０ｍｌ分 别 加 人 ６ ． ０ ０ ２ ， ． ０ ０ ６ ， ． ０ １ ０ ，
一
法 因此 ， 用超声法 提取 植 物多糖 ， 避免 因结构 采 可
改 变 产 生 错 误 的 结 论 ， 成 研 究 工 作 的 复 杂 化 （ ） 造 ３
Ｃ ／ ×１ ０ 。式 中 Ｃ 为供 试 液 葡 萄 糖 浓 度 ＤｆＷ ０
（ ） Ｄ 为 供 试 品溶 液 的稀 释 因素 ， 为 换算 因 ｇ ｍ１ ， ｆ 素 ． 为供试 品重 量 （ ｇ 。测 得甘 草多糖 含量 为 ２ ｗ ） ．
３ ０ｍｉ。过滤 ， ｎ 滤渣 加 水 ５ ０ｍｌ ４ Ｈｚ 声提 取 于 ５ｋ 超
２ ｉ 过 滤 ， 加 水 ５ 重 复 超 声 提 取 一 次 ， ５ｒ ｎ后 ｎ 再 ０ｍｌ 合 并 两 次 提 取 液 ， 后 定 容 于 ２ ０ｍｌ 量 瓶 中 ， 中 然 ５ 容 从
［ ］ 李 铁 民 ． 民 斌 ＋ 草 提 取 物 厦 其 带 生 物 的 抗 病 毒 研 究 现 状 ２ 梁 甘
＝ ６ 。样 品 在 ４ ０ ～ １ ． ０／ ／ 的 范 围 内线 性 良 ） ． Ｏ ２ ０ ｘ ｍ［ ｇ
好
中在 三萜皂苷 类 化合 物 （ 甘草 甜素 类 ） 和黄酮类 化合
物 。 ， 甘 草 多 糖 的 研 究 起 步 较 晚 现 已发 现 甘 草 。对
３ 甘 草 多 糖 的 提 取 和 精 制
维普资讯
Ｐ ｒｍ ｉ
基 层 中曲 杂 志 ａ ｒｙ ｊ ｏｕ ｒ ｌ ｎ
罢 赢薯
：
・
实验 研 究 ・
新 疆 甘 草 多 糖 的 超 声 提 取 及 含 量 测 定
王航 字 ， 刘金 荣 ， 江发 寿 ， 文斌 ， 建 明 赵 但
（ 河 子大学 药学 院、 疆 石河 子 ８ ２Ｏ ） 石 新 ３ ０ ２
ｍｌ 酚 溶 液 和 ３ 苯 ＯｍＩ 硫 酸 ，０ｃ恒 温 ０ ５ｈ 冷 水 浓 ３ ． ． 浴 冷 却 至 室 温 ， 容 ５ ， ４ ０ｎ 处 测 定 吸 定 ０ｍｊ 在 ９ ｍ 光 度 以不 加 样 为 空 白 。 浓 度 ｃ 对 吸 光 度 Ａ 回 归 ， 以
得 方 程 Ａ一 ３ ５ ５×１ ” ０ ０ ３ ， ＝０ ９ ９５（ ２ ０。 Ｃ＋ ． ｌ ６ ｒ ３ ． ９
限公 司 ）索 氏 提 取 器 。
１ ２ 材 料 与 试 剂 胀 果 甘 草 Ｇ ￣ ｒｌａ ｚ ｌｔ ． ｃｒｈｚ ａａ Ｂ ｔ （ 自新疆 巴音郭 楞蒙古 自治 区尉 犁县 ， ａ． 产 为新疆
甘 草 制 品 工 业 普 通 用 原 料 。 石 河 子 医药 公 司 购 买 ， 从 烘 干后粉 碎备 用 ） ；葡 萄 糖 对 照 品 （ 析 纯 ） 苯 酚 试 分 ；
草药 ，９ ４ ２ （ ） ｉ Ｂ ｉ９ ．ｓ ２ ：ｏ ．
精 密 吸取 １ ． ． 标 准 曲线 制 备 项下 的方 法 测 ０ ０ｍ１照 定 吸光度 按 ６ １法计 算多糖 含量 为 ３ ２ 。 ． ．６
７ 讨 论 与 小 结
从 以 上 两 种 方 法 提 取 甘 草 多 糖 的 测 定 结 果 来 看 ． 声 法 提 取 多 糖 有 较 大 的 优 势 ： １ 提 取 时 间 可 超 （） 缩 短 ３倍 以 上 ， 率 提 高 ３ 以 上 超 声 法 的 作 用 收 ６
提取 植物 多糖 的研 究有 待进 一步 研究 。
参 考 文 献
［ ］ 张宝 恒 甘 草 药理 怍 用 研 究 进 展 ＿］ 药 学 学 报 ・９ ３ ｌ ｔ １ ： Ｊ １６ －ｏ ． ）
６ ８ ８
８ 的 乙 醇 液 １ ０ｍｌ４ Ｈｚ 声 提 取 两 次 ， 次 ０ ０ ， ５ｋ 超 每
美 毽 词 ： 草 ； 糖 超 声 提 取 Ｉ 量 测 定 甘 多 舍
中 囤分 类 号 ： ２ ４ ： Ｒ ８
文 献 标 识 码 一 Ｂ
文 章编 号 ：０ ４ ２ ９ （ 州ｆ ） １０ ０ ２ １ ８— １９ ２ ２０ ・０ ７０
胀 果 甘 草 Ｇ ｃ ｒ ｈｚ ｎ ｌ ｔ ｔ 是 豆 科 甘 草 ｙ ｒ ｉａ ｉｆａ ａ Ｂａ ．
［ ： 胡 志 厚 甘 草 酸 类 药 物 的研 究 及 应 用 Ｉ］ 药 学 学 报 ．９ ８ ２ ５ Ｊ． １９ —Ｓ
（） ５ ３ ７ ５
： ］ 常雅 萍 无 邪 ． 贵 贞 甘草 多 精 抗 病 毒 作 用 研 究 ＿ 中 草 ６ 毕 扬 Ｊ
取 操 作 步 骤 声 提 取 一 般 是 在 常 温 条 件 下 进 行 ， 超 避 免 了 高 温 对 有 效 成 分 的 破 坏 。本 实 验 采 用 超 声 提 取 法 提 取 甘 草 多 糖 ， 酚 浓 硫 酸 比 色 法 对 甘 草 多 糖 进 苯 行 含量测定 。 １ 仪 器 、 料 与 试 剂 材 １ １ 仪 器 岛 津 ＵＶ ０ Ｐ 紫 外 可 见 分 光 光 度 １Ｃ