免疫学检验问答题

1、改良Neubauer计数板的结构优质厚玻璃制成的改良牛鲍计数板被H形凹槽分为2个相同的计数池，计数池两侧各有一条盖片支持堤，比计数池高出0.1mm。

将特制的专用盖玻片覆盖其上，形成高0.10mm的计数池。

计数池为边长3.0mm的方格，平均分为9个大方格，每个大方格面积为1.0mm2，容积为0.1mm3(ul)。

在9个大方格中，中央大方格用双线分成25个中方格，其中位于正中及四角的五个中方格是红细胞和血小板计数区域。

每个中方格又用单线划分为16个小方格。

位于四角的四个大方格是白细胞计数区域，用单线划分为16个中方格。

2、白细胞计数原理、操作及计算
原理血液经白细胞稀释液以一定的倍数稀释，同时破坏溶解成熟红细胞。

将稀释的血液注入白细胞计数板，在显微镜下计数一定体积内的白细胞数，经换算即可求出每升血液中的白细胞数量
操作1、加稀释液用吸管吸取白细胞稀释液0.38ml于小试管中。

2、采血及稀释用微量吸管吸取抗凝血或采取末梢血20ul,擦去管尖外部余血。

将吸管插入小试管中白细胞稀释液的底部，轻轻放出血液，并吸取上层白细胞稀释液清洗吸管2~3次。

3、混匀将试管中的血液与稀释液混匀，待细胞悬液完全变为棕褐色。

4、充池再次将小试管中的细胞悬液混匀。

用微量吸管吸取细胞悬液适量或玻璃棒蘸取细胞悬液1滴，注入改良Neubauer计数板的计数池中，室温下静置2~3分钟，待白细胞完全下沉后再做白细胞计数。

5、计数在低倍镜下计数四角4个大方格内的白细胞总数。

6、计算白细胞/L=N/4*10*20*10^6=N/20*10^9式中：N：表示4个大方格内数得得白细胞数/4：每个大方格的白细胞平均数量*4：将1个大方格白细胞数换算成1ul血液内白细胞数*20：血液的稀释倍数*10^6:1ul换算成1L
3、血小板计数原理、操作及计算
原理血液经稀释液按一定比例稀释和破坏红细胞后，混匀滴入血细胞计数板内，在显微镜下计数一定范围内的血小板数量，经过换算求出每升血液中血小板的数量。

操作1、取稀释液准确吸取稀释液0.38ml，置于清洁小试管中。

2、采血及稀释常规末梢采血，让血液自然流出，擦去第1滴血，准确取血20ul，或取已备抗凝血20ul，置于稀释液中，立即充分混匀，3、充池取混匀的血小板悬液1滴充入计数池内，静置10~15分钟，使血小板充分下沉。

4、计数用高倍镜计数中央大方格的四角和中央5个中方格内血小板数量。

5、计算血小板数/L=N*5*10*20*10^6=N*10^9/L 式中：N：表示5个中方格内数得的血小板数。

*5将5个中方格血小板数换算成1个大方格血小板数。

*10：将1个大方格血小板数换算成1ul血液内血小板数。

*20血液的稀释倍数。

*10^6:由1ul换算成1L
4、抗凝血的种类及应用
1、枸橼酸钠：1:9（V:V）的比例用于血栓与止血检验，1:4（V:V）的比例用于魏氏法血沉测定。

2、乙二酸四醋酸盐：用于全血细胞分析，尤其适用于血小板计数
3、肝素：用于血细胞比容测定和临床生化的多项检查，但不适合凝血功能和白细胞计数和分类计数检查
4、草酸钠：用于血栓于止血检查
5、氰化高铁血红蛋白法测定血红蛋白的原理及注意事项
原理血红蛋白中的亚铁离子被高铁氰化钾氧化成高铁离子，血红蛋白转化成高铁血红蛋白。

高铁血红蛋白与氰根离子结合，生成稳定的氰化高铁血红蛋白。

血红蛋白多在5分钟内完全转化为高铁血红蛋白。

氰化高铁血红蛋白在波长540nm处的吸光度同它在溶液中的浓度成正比。

注意事项1、试剂应贮存在棕色硼硅有塞玻璃瓶中，不能贮存在塑料瓶中，否则会使CN-丢失，造成测定结果偏低；试剂应置于4~10℃保存，不能放0℃以下保存，因为结冰可引起试剂失效；试剂应保持新鲜，至少一个月配制一次；氰化钾是剧毒品，须妥善保存，配试剂时要严格按剧毒品管理程序操作。

2、脂血症或标本中存在大量脂质可产生浑浊，可引起血
红蛋白假性升高。

白细胞数>20*10^9/L、血小板计数>700*10^9/L及异常球蛋白增高也可出现浑浊，均可使血红蛋白假性升高；煤气中毒或大量吸烟引起血液内碳氧血红蛋白增多，也可使测定值增高。

若因白细胞数过多引起的浑浊，可离心后取上清液比色；若因球蛋白异常增高引起的浑浊，可向比色液中加入少许固体氯化钠或碳酸钾，混匀后可使溶液澄清；标准曲线或K值应定期检查、校准。

3、测定后的HiCN比色液不能与酸性溶液混合，因为氰化钾遇酸可产生剧毒的氢氰酸气体。

为防止氰化钾污染环境，比色测定后的废液应集中于广口瓶中处理。

4、HiCN参考液的纯度检查。