藏药镰形棘豆鼠李柠檬素对免疫抑制小鼠非特异性免疫功能的影响

藏药镰形棘豆鼠李柠檬素对免疫抑制小鼠非特异性免疫功能的影响
作者：郭敏张丽姜华
来源：《中国中医药信息》2015年第05期
摘要：目的探讨藏药镰形棘豆提取物鼠李柠檬素增强免疫的作用机制。

方法选用昆明种小鼠，随机分为空白组、模型组、阳性药组及中药高、中、低剂量组，各给药组给予相应药物灌胃，连续10 d。

第8日起，除空白组腹腔注射生理盐水外，其他各组均腹腔注射环磷酰胺，连续3 d。

通过巨噬细胞炭粒廓清试验、巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验、免疫抑制小鼠器官指数测定，观察鼠李柠檬素对免疫抑制小鼠非特异性免疫功能的影响。

结果与模型组和空白组比较，中药各剂量组能提高免疫抑制小鼠的吞噬活性、廓清指数和吞噬系数（P
关键词：镰形棘豆；鼠李柠檬素；免疫抑制；非特异性免疫；小鼠
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2015.05.016
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2015）05-0057-03
Abstract：Objective To study action mechanism of rhamnocitrin in Oxytropis Falcata on enhance the immune function. Methods Kunming mice were randomly divided into blank control group， model group， positive control group， traditional Chinese medicine high， medium， and low dose groups. All treatment groups received gavage with relevant medicine for 10 days. From the 8th day， blank control group received intraperitoneal injection with normal saline， while other groups received intraperitoneal injection with cyclophosphamide for 3 days. Through macrophages carbon clearance test， macrophage phagocytosis of chicken erythrocytes test， and immunosuppressive mice organ index detection， effects of rhamnocitrin in Oxytropis Falcata on nonspecific immune function of immunosuppressive mice were observed. Results Compared with model group and blank control group， traditional Chinese medicine high， medium， and low dose groups could improve the phagocytic activity of immunosuppressive mice， clearance index， and phagocytic coefficient （P
Key words：Oxytropis Falcata；rhamnocitrin；immunosuppression；nonspecific immunity；mice
镰形棘豆来源于藏药豆科植物镰形棘豆Oxytropis falcata Bunge和轮叶棘豆O.chiliophylla Royle的干燥全草，具有清热解毒、生肌愈疮、涩脉止血、通便等作用。

主要用于治疗中毒病、黄水病、便秘、炭疽、疮疖痈肿等疾病，是藏医“三抗炎药”之一，收载于《晶珠本草》及《中华人民共和国卫生部药品标准（藏药）》（第一册）[1]。

研究表明，镰形棘豆中含有黄酮类、生物碱类等多种活性成分，具有抗炎、抗菌、抗肿瘤等药理作用[2-7]。

目前对镰形棘豆
的抗炎作用研究较多，主要为黄酮类成分的抗炎作用。

为了进一步确定该药材抗炎作用的有效活性成分，本实验采用提取、酸化、柱层析等方法制备了镰形棘豆黄酮中的主要成分鼠李柠檬素，观察镰形棘豆提取物鼠李柠檬素对免疫抑制小鼠的非特异性免疫功能的影响，为镰形棘豆黄酮的药效活性物质的利用及以后的剂型改革和临床用药提供多方面的实验依据。

1 实验材料
1.1 动物
SPF级昆明种小鼠，8周龄，雌雄各半，体质量20～22 g，购于兰州大学实验动物中心，许可证号SCXK（甘）2009-0004。

实验前，所有小鼠被分组放入塑料鼠笼，适应性饲养7 d （温度23～25 ℃，湿度50%～60%），喂食普通鼠饲料和蒸馏水。

1.2 药物
镰形棘豆，采自甘肃省甘南藏族自治州合作地区，经兰州大学药学院马志刚教授鉴定为镰形棘豆Oxytropis falcata Bunge；镰形棘豆鼠李柠檬素，甘肃省中医药研究院中药研究所制备[8-9]；盐酸左旋咪唑片，南京白敬宇制药有限责任公司，批号100101）；环磷酰胺注射液（Cy），山西普德药业有限公司，批号0412076。

1.3 主要仪器与试剂
岛津UV-1800紫外可见分光光度计，ARⅡ40/C电子天平（上海奥豪斯仪器有限公司），显微镜，离心机，温箱。

二甲基亚砜（DMSO）、鸡红细胞、印度墨汁及补体，青岛绿谷有限公司，批号20080122。

鸡红细胞悬液制备：抽取鸡血于烧杯中，立即用毛刷搅拌出纤维蛋白，倒入离心管中，加入生理盐水，摇匀，1500 r/min离心10 min，冲洗3次，用生理盐水配制成2%鸡红细胞悬液，4 ℃冰箱保存备用。

2 实验方法
2.1 分组与给药
取小鼠60只，随机分为空白组、模型组、阳性药组和中药高、中、低剂量组。

空白组予生理盐水，模型组予5%吐温-80溶液，阳性药组予左旋咪唑25 mg/kg，中药高、中、低剂量组分别予42、21、11 mg/kg鼠李柠檬素（以5%吐温-80制成混悬液），每日1次，连续10 d。

2.2 巨噬细胞炭粒廓清实验
各组按“2.1”项剂量给药，末次给药1 h后，分别由尾静脉准确注入用生理盐水5倍稀释的印度墨汁10 mL/kg，于2、20 min分别自眼眶后静脉丛取血，吸取20 µL，加入0.1%碳酸钠溶
液2.5 mL中，充分混匀，以0.1%碳酸钠溶液为空白，在分光光度计680 nm处测定光密度（OD）值，采血后脱颈处死小鼠，取其肝脏、脾脏，并称重。

计算廓清指数（K）和吞噬系数（α）。

K=（lgOD1-lgOD2）÷（t2-t1），α=K1/3W/WLS。

其中WLS为肝脾合重，W为体质量，t1、t2为注射墨汁采血后的时间，ODl、OD2为采血后分别所测的OD值。

2.3 巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验
各组按“2.1”项剂量给药，第3日起开始，给药后每只小鼠腹腔注射2%鸡红细胞悬液1.0 mL，1次/d，连续5 d。

末次给药1 h后，摘眼球取血，并分离血清，取血清用生理盐水稀释100倍，取稀释血清1 mL，加2%鸡红细胞生理盐水悬液，与10%补体0.5 mL混匀，于37 ℃孵箱温育30 min后，0 ℃冰箱终止反应。

离心，取上清液，于紫外可见分光光度计540 nm处比色，测定OD值，设不加血清的空白做对照，计算巨噬细胞吞噬率。

吞噬率（%）=（空白组OD值-吞噬后OD值）÷空白组OD值×100%。

2.4 免疫抑制小鼠免疫器官指数测定
各组按“2.1”项剂量给药，在给药第1、2、3、7日，除空白组外，其余各组小鼠均腹腔注射50 mL/kg Cy，诱导免疫功能低下模型。

末次给药1 h后称重，脱颈处死大鼠，取胸腺和脾脏，用生理盐水洗净，除去筋膜称重，计算胸腺指数和脾脏指数。

器官指数=器官质量÷体质量。

3 统计学方法
采用SPSS17.0统计软件进行分析。

实验数据用—x±s表示，组间比较采用独立样本t检验。

P
4 结果
4.1 巨噬细胞炭粒廓清实验结果
与空白组比较，其他组廓清指数和吞噬系数明显下降（P
4.2 巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验结果
与空白组比较，各给药组腹腔巨噬细胞的吞噬率明显提高，阳性药组吞噬率最高。

结果见表2。

4.3 免疫抑制小鼠免疫器官指数测定结果
与空白组比较，其他组胸腺指数均明显下降，除阳性药组外其他组脾脏指数均明显下降（P
5 讨论
巨噬细胞是一种免疫细胞，在机体的免疫应答中具有重要作用，其功能的强弱可由巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数直接反映。

胸腺与脾脏为体内主要的免疫器官，胸腺为初级淋巴器官，游走的造血干细胞进入胸腺原基，在此分化增殖成T淋巴细胞，与细胞免疫有关。

脾脏为次级淋巴器官，免疫活性细胞移行于此，并在此因受免疫过程中抗原刺激而进一步增殖分化和成熟，脾脏中的T淋巴细胞、B淋巴细胞、巨噬细胞与体液免疫、细胞免疫均有密切关系，免疫抑制剂如环磷酰胺、氢化可的松等均可使胸腺、脾脏明显萎缩，免疫增强剂如一些免疫多糖则使胸腺或脾脏增重。

本实验结果表明，镰形棘豆鼠李柠檬素具有一定的免疫增强作用，可以促进小鼠脾脏及胸腺细胞的增殖，增加小鼠抗体生成器官脾脏及胸腺的质量，提高小鼠巨噬细胞的吞噬活性，促进小鼠鸡红细胞免疫后脾细胞血清溶血素的形成。

参考文献：
[1] 姜华，胡君茹，刘霞，等.藏药镰形棘豆的研究进展[J].中草药，2006， 37（2）：314-315.
[2] H Jiang， JR Hu， WQ Zhan， et al. Screening for fractions of Oxytropis falcata Bunge with antibacterial activity[J]. Natural Product Research，2009，23（10）：953-959.
[3] 王栋，杨欢，童丽，等.藏药镰形棘豆的镇痛抗炎活性[J].药学与临床研究，2008，16（2）：91-93.
[4] 代现平，张光辉，班翠红，等.镰形棘豆总提取物的镇痛抗炎作用[J].中国生化药物杂志，2010，31（5）：313-315.
[5] 瞿敏明，陈志鹏，蔡宝昌.镰形棘豆经皮给药后抗炎镇痛活性有效部位的筛选[J].安徽医药，2011，15（1）：14-16.
[6] 楼成华，王明艳，杨欢.镰形棘豆中黄酮类化合物抗肿瘤活性的体外实验研究[J].南京中医药大学学报，2009，25（1）：46-50.
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[8] 姜华，胡君茹，刘霞.HPLC法测定藏药镰形棘豆中鼠李柠檬素的含量[J].中国中医药信息杂志，2010，17（1）：44-45.
[9] 姜华，郭敏，沈敏娟.藏药镰形棘豆中鼠李柠檬素对照品的制备[J].中国实验方剂学杂志，2012，18（17）：124-126.
（收稿日期：2014-09-10；编辑：华强）。