制备感受态细胞的实验报告
感受态细胞制备实验报告
感受态细胞制备实验报告感受态细胞制备实验报告细胞是生物体的基本结构和功能单位，它们通过不同的形态和功能，构成了我们身体的各个组织和器官。
在细胞中，有一类特殊的细胞被称为感受态细胞，它们具有感知和传递外界刺激的能力。
本次实验旨在探究感受态细胞的制备方法以及其在生物学研究中的应用。
实验一：感受态细胞的制备方法感受态细胞的制备是一项复杂的过程，需要精确的实验操作和合适的培养条件。
首先，我们需要选择合适的细胞系作为实验对象。
常用的感受态细胞包括神经元、心肌细胞和肌肉细胞等。
在本次实验中，我们选择了人类胚胎干细胞作为研究对象。
首先，我们需要将胚胎干细胞培养至适当的生长状态。
胚胎干细胞具有多向分化的潜能，可以分化为各种不同类型的细胞。
在培养过程中，我们需要提供适当的培养基和生长因子，以促进细胞的增殖和分化。
接下来，我们将利用特定的诱导因子来诱导胚胎干细胞向感受态细胞方向分化。
这一步骤是实验中最关键的一步，需要精确控制诱导因子的浓度和时间。
通过适当的处理，胚胎干细胞将逐渐转变为感受态细胞。
最后，我们需要对所制备的感受态细胞进行鉴定和分析。
常用的方法包括免疫荧光染色、基因表达分析和电生理实验等。
这些方法可以帮助我们确定细胞的特征和功能，从而验证制备的感受态细胞的准确性和可行性。
实验二：感受态细胞在生物学研究中的应用感受态细胞在生物学研究中具有广泛的应用前景。
首先，感受态细胞可以用于研究神经系统的发育和功能。
通过制备不同类型的感受态细胞，我们可以模拟和研究神经系统中各种生理和病理过程，如神经元的迁移、突触形成和神经传导等。
其次，感受态细胞还可以用于药物筛选和毒性测试。
通过将药物或化合物作用于感受态细胞，我们可以评估其对细胞的影响和作用机制。
这有助于加速新药的开发和毒性的评估，为药物研发提供重要的参考依据。
此外，感受态细胞还可以应用于组织工程学和再生医学研究。
通过将感受态细胞与支架材料结合，可以构建出具有特定功能和结构的人工组织。
感受态细胞的制备与转化实验报告
感受态细胞的制备与转化实验报告
一、实验目的
本实验旨在探究感受态细胞的制备和转化过程，以及相关技术操作和注意事项。
二、实验步骤
1. 制备感受态细胞
（1）取出培养皿内的细胞，用PBS洗涤3次；
（2）将洗涤后的细胞加入含有5μM Calcein-AM的PBS中，放置于37℃孵育箱内30分钟；
（3）取出孵育后的细胞，用PBS洗涤3次，即可得到感受态细胞。
2. 转化感受态细胞
（1）将制备好的感受态细胞加入含有荧光素酶底物的培养基中；
（2）放置于37℃孵育箱内15分钟左右；
（3）观察荧光素酶底物是否被转化为荧光素，并记录转化效率。
三、实验结果与分析
经过制备和转化处理后，观察到感受态细胞成功地被转化为荧光素，
并且转化效率较高。
这表明该方法可以有效地制备和转化感受态细胞，并且具有较高的可靠性和重复性。
四、实验注意事项
1. 实验过程中应注意无菌操作，避免细菌和其他杂质的污染；
2. 在制备感受态细胞时，应注意洗涤次数和荧光素酶底物的浓度，以
确保制备的感受态细胞质量和转化效率；
3. 在转化感受态细胞时，应注意荧光素酶底物的加入量和反应时间，
以确保转化效率和荧光素的稳定性。
五、实验结论
本实验通过制备和转化处理，成功地得到了荧光素转化后的感受态细
胞，并且转化效率较高。
这为进一步研究感受态细胞在生物学领域中的应用提供了可靠的技术支持。
实验5：大肠杆菌感受态细胞的制备和质粒DNA转化报告
感受态细胞转化效率＝转化子总数／感受态 细胞总数
五、注意事项
1、冰上操作； 2、无菌操作； 3、重悬细胞时操作要轻； 4、实验应设有阳性对照，以估计转化效率；
应设立阴性对照，以消除可能的污染及查 明可能的失败原因。
实验四 大肠杆菌感受
态细胞的制备和质粒 DNA转化
实验目的和要求
学习CaCl2法制备大肠杆菌感受态 细胞；
学习用热激法将外源基因导入感受 态细胞。
实验原理 实验材料 实验步骤 预期结果 注意事项
一、实验原理（CaCl2法、热激法）
1、几个概念
转化( Transformation )是将异源 DNA 分子引入另 一细胞品系，使受体细胞获得新的遗传性状的一种 手段，它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研 究的基本实验技术。
(一) 纯化及活化菌种（无抗生素的LB ）
单菌落
l mL培养液
冻存菌在新鲜LB
平板上，划线， 37℃培养16~20 h。
挑一单菌落接种到3 mL LB液体培养基 中，37℃培养过夜
取l mL培养液加到 100 mL LB液体培养 基中，37℃摇床培养 2~3 h ，当其OD600 为0.3～0.5时(细胞数 <108/mL)，立即取出， 冰浴10～15 min。
(二) CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞
l、将菌液转移到两个冰冷离心管中，平衡 后于4℃，5000 r/min离心10 min，弃尽上 清(可用加样器将残余液体尽量去净)。— —收集沉淀
2、各加10 mL 0.1 mol/L冰冷的无菌CaCl2溶 液重悬细胞，于冰上放置15 min．于4℃， 5000 r/min离心10min，弃上清。 —— CaCl2洗涤细胞转化效率的因素
高效感受态细胞的制备
感受态细胞的制备一、实验原理受体细胞通过一些特殊方法（如电击法，CaCl2，MnCl2，MgCl2等化学试剂法)的处理后，使细胞膜的通透性发生了暂时性的改变，成为能允许外源DNA分子进入的状态，成为感受态细胞。
本方案介绍的方法为TSS法和KCM转化法。
二、材料及准备工作一）材料准备二)试剂配制1、液体LB培养基（200ml，高压灭菌，4℃保存备用）蛋白胨 2.0g酵母提取物 1.0g氯化钠（NaCl） 2.0g2、固体LB培养基（2×100ml，高压灭菌）蛋白胨2×1.0g酵母提取物2×0.5g氯化钠（NaCl）2×1.0g琼脂粉2×1.5g温度降低到45℃后（不烫手），取其中一瓶加入氨苄至终浓度100μg/ml（100mlLB加100μl 100mg/ml的氨苄）后铺平皿，另一瓶直接铺平皿。
4℃保存备用。
3、TSS液（100ml）（有效期2周）聚乙二醇（PEG8000）10g 终浓度10%DMSO 5ml 终浓度5%MgCl2(1mol/L）5ml 终浓度50mmol/LLB 85ml 终浓度85%去离子水补足100ml，0.22μm过滤器过滤后，4℃保存备用注：聚乙二醇分子量可以为3000-80004、5×KCM液（10ml）（可-20℃长期保存备用）KCl（2mol/L） 2.5mlCaCl2(1mol/L) 1.5mlMgCl2(1mol/L) 2.5ml水补足到10ml, 0.22μm过滤器过滤后，4℃保存备用（不要高压消毒）5、氨苄青霉素（amp）（100mg/ml）取0.5g氨苄青霉素，溶解于5ml去离子水中，0.5ml分装，-20℃保存备用三）仪器设备1、低温大容量离心机2、恒温水浴锅3、超净台4、高压锅5、37℃孵育箱6、恒温摇床7、制冰机8、分光光度计9、微量移液枪10、低温冰箱三、步骤及注意事项一）感受态制备（TSS法）1、取菌种，划LB平皿板（无氨苄）；2、挑取分离良好的独立克隆，接种到5ml LB 中，220rpm ，37℃恒温摇床孵育过夜；3、取1 ml摇好的菌液，接种到100 ml LB 中（500ml锥形烧瓶），220rpm ，37℃孵育2.5-3.0h，菌液OD600达到0.2-0.5（0.36效果较好，不要超过0.6）；4、取出菌液，冰浴20min；然后4℃，3000 rpm离心5 min ，收集细菌；5、用10 ml 冰浴预冷的TSS液重悬细菌，然后4℃，3000 rpm离心5 min；再用冰浴预冷的TSS液重悬细菌，即成感受态；6、用1.5 ml离心管按150μl分装；-80℃长时间保存。
制备感受态细胞的实验报告
制备感受态细胞的实验报告一、实验目的掌握制备化学感受态细胞和电转化感受态细胞的方法和步骤。
二、实验原理1.感受态细胞的概念重组 DNA 分子体外构建完成后，必须导入特定的宿主（受体）细胞，使之无性繁殖并高效表达外源基因或直接改变其遗传性状，这个导入过程及操作统称为重组DNA 分子的转化。
在原核生物中，转化是一个较普遍的现象，在细胞间转化是否发生，一方面取决于供体菌与受体菌两者在进化过程中的亲缘关系，另一方面还与受体菌是否处于一种感受状态有着很大的关系。
所谓的感受态，即指受体（或者宿主）最易接受外源DNA 片段并实现其转化的一种生理状态，它是由受体菌的遗传性状所决定的，同时也受菌龄、外界环境因子的影响。
cAMP 可以使感受态水平提高一万倍，而 Ca2+也可大大促进转化的作用。
细胞的感受态一般出现在对数生长期，新鲜幼嫩的细胞是制备感受态细胞和进行成功转化的关键。
制备出的感受态细胞暂时不用时，可加入占总体积15% 的无菌甘油或 -70 ℃保存（有效期6个月）。
在基因克隆技术中，转化特指将质粒DNA或以其为载体构建的重组DNA导入细菌体内，使之获得新的遗传特性的一种方法。
本实验技术之一。
它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域的基受体细胞经过一些特殊方法（如：电击法，CaCl2等化学试剂法）处理后，使细胞膜的通透性发生变化，成为能容许外源DNA 分子通过的感受态细胞。
进入细胞的DNA 分子通过复制、表达实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。
化学制备法：大肠杆菌的转化常用化学法（2 法），该法最先是由Cohen 于 1972 年发现的。
其原CaCl理是细菌处于0℃，CaCl2的低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形，转化混合物中的DNA 形成抗DNase 的羟基 - 钙磷酸复合物粘附于细胞表面，经42℃短时间热冲击处理，促使细胞吸收DNA 复合物，在丰富培养基上生长数小时后，球状细胞复原并分裂增值，被转化的细菌中，重组子中基因得到表达，在选择性培养基平板上，可选出所需的转化子。
感受态细胞制备实验报告
感受态细胞制备实验报告摘要本实验旨在探究感受态细胞的制备方法。
通过一系列步骤，我们成功地制备出感受态细胞，并通过染色实验证实了细胞的感受态转变。
实验结果表明，我们所采用的制备方法具有较高的可行性和有效性。
介绍感受态细胞是一种具有感受外界刺激并做出相应反应的细胞。
在生物学研究中，制备感受态细胞是一项重要的实验工作。
本文将详细介绍感受态细胞的制备方法，并通过实验证实其有效性。
实验材料和方法材料•细胞培养基•细胞培养器具（培养皿、离心管等）•细胞培养箱•细胞染色剂方法1.细胞培养基的制备：–将适量的细胞培养基粉末加入无菌蒸馏水中，并充分搅拌溶解。
–调整pH值至合适范围。
–通过过滤器过滤，获得无菌的细胞培养基。
2.细胞的预处理：–选择适宜的细胞系，如人类上皮细胞系。
–将细胞培养在培养皿中，以适宜的温度和湿度进行培养。
–在细胞生长到合适密度时，进行下一步操作。
3.细胞的感受态诱导：–将培养皿中的细胞用无菌PBS缓冲液洗涤一次，以去除培养基中的成分。
–加入含有感受态诱导剂的培养基。
–将培养皿置于细胞培养箱中，在适宜的温度和湿度条件下培养一定时间。
4.细胞的染色实验：–取出培养皿中的细胞，用PBS缓冲液洗涤去除培养基。
–按照染色剂使用说明，加入合适浓度的染色剂。
–在暗处孵育一定时间，使细胞充分染色。
–用PBS缓冲液洗涤细胞，以去除多余的染色剂。
–观察细胞染色情况，使用显微镜拍摄图像。
结果与讨论经过以上步骤，我们成功地制备了感受态细胞，并通过染色实验证实了细胞的感受态转变。
观察到染色后的细胞明显显示出感受态特征，与对照组相比，表现出明显的区别。
这说明我们所采用的制备方法具有较高的可行性和有效性。
通过本实验，我们对感受态细胞的制备方法有了更深入的了解。
然而，还需要进一步的研究来探究感受态细胞的特性以及其在生物学研究中的应用。
此外，我们也可以尝试其他方法来制备感受态细胞，以寻求更高效的制备方法。
结论本实验通过一系列步骤成功地制备出了感受态细胞，并通过染色实验证实了细胞的感受态转变。
感受态细胞的制备和转化
四 实验结果
转化效率计算公式如下： 转化子总数 转化频率= DNA加入量 =转化子/µ g DNA 转化子总数=转化菌落数*稀释倍数*转化 反应液体积
五 思考题
1 试总结出实验成功的关键步骤。 2 用乳糖作为BL21（DE3）菌株目的的基因 表达的诱导剂的作用机制是什么？ 3 在用氨苄青霉素作为抗菌素筛选转化子是， 一般37℃培养时间不超过20小时，为什么？ 4 氯化钙转化与电转化相比有哪些优点和缺 点。
实验 三 感受态细胞的制备和转化
一 实验原理
转化作用是在一定条件下，一种特定的DNA 分子（供体或称转化因子）转入到一定的细 菌体内（受体菌），使其发生遗传形状改变 的过程。 在正常生长条件下，少数细菌可发生转化作 用，但大多数细菌并不发生转化，只有在一 定条件作用下（如用Ca++处理细菌细胞或电 刺激），细菌呈现感受状态后，外源DNA才 能转化进入受菌体内。因此，若想将外源 DNA分子转化进入一定的受菌体内，通常需 将受体菌先制备成易感受状态。
三 操作步骤
2 重组质粒pGEX-6p DNA的转化 取上述感受态细胞200µ 1，加重组质粒DNA2µ 1（约 10ngDNA），混匀后，冰上作用30分钟，然后转到 42℃水浴 进行热休克90秒，快速转移样品到冰浴， 预冷1-2分钟，加0.8mlLB液体培养基，37℃培养45 分钟后取原液各0.2ml涂布Amp平板，同时将0.2ml感 受态细胞涂布于Amp平板作为对照。倒置平板， 37℃恒温培养箱中培养12-16小时，观察对照转化的 平板，观察转化子出现的数目，计算转化效率。所 得的到的单菌落即为菌株BL21（DE3）pGEX-6p。
实验四感受态细胞的制备和连接产物的转化
实验四、感受态细胞的制备和连接产物的转化一、实验原理与目的法制备大肠杆菌感受态细胞的方法；学习CaCl2掌握外源DNA重组质粒导入受体菌细胞并筛选阳性转化体的方法。
感受态就是受体菌能接受外源DNA（周围环境中的DNA分子）能力的一种生理状态，一般认为处于生长对数期的后期能够发展成为感受态，但是细菌中能发处展成为感受态的细胞是很少的，一般认为0.1%-1%，而且时间短暂。
用CaCl2理大肠杆菌细胞可以使20%的细胞成为具有转化能力的感受态细胞。
冷冻也能增加感受态细胞有量，而且还可以延长感受态时间，提高转化效率。
二、材料与试剂0.1mol/L CaCl2溶液:称取0.56g CaCl2(无水,分析纯),溶于50ml重蒸水中,定容至100ml,高压灭菌。
含15%甘油的0.1mol/L CaCl2: 称取0.56g CaCl2(无水,分析纯),溶于50ml 重蒸水中,加入15ml甘油,定容至100ml,高压灭菌。
1.5ml EP管、灭菌枪头、移液枪、冰盒、低温离心机、涂布棒、大肠杆菌DH5a、重组质粒（实验三的连接产物）、LB固体培养基、氨苄青霉素三、实验方法1、大肠杆菌感受态细胞的制备（CaCl法）21）取-70℃超低温冰箱保存的大肠杆菌DH5a菌液30μl（过夜菌液约16小时）接种于3ml LB培养液（1：100接种）37揺菌（250rpm）培养过夜。
2）将过夜培养的菌液1ml移入100ml LB培养基中，37℃快速振荡（250rpm），至OD=0.4—0.6（约2小时）；冰上30min。
3）取10ml培养液转入离心管中,冰上放置10分钟,然后于4℃下4000g离心10分钟。
4）弃去上清,用10ml预冷的0.1mol/L的CaCl2 溶液轻轻悬浮细胞,冰上放置15-30分钟后,4℃下4000g离心10分钟。
5）弃去上清,加入2ml预冷的含20%甘油的0.1mol/L的CaCl2 溶液重悬,即成感受态细胞悬液。
感受态实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解感受态细胞的制备方法。
2. 掌握感受态实验的基本原理和操作步骤。
3. 学习感受态细胞在基因工程中的应用。
二、实验原理感受态细胞是指对DNA分子具有高亲和力和吸收能力的细胞。
在基因工程中，利用感受态细胞将外源DNA分子导入细胞内，是构建基因表达载体、基因克隆等实验的重要步骤。
感受态细胞的制备方法有化学法和电击法等。
三、实验材料1. 细菌：大肠杆菌（E. coli）DH5α菌株。
2. 质粒：pUC19载体。
3. 试剂：CaCl2、琼脂糖、DNA分子、限制性内切酶、DNA连接酶、T4 DNA聚合酶、Tris-HCl缓冲液、NaCl等。
4. 仪器：电热恒温培养箱、离心机、电泳仪、凝胶成像系统、紫外灯、移液器、无菌操作台等。
四、实验方法1. 感受态细胞的制备（1）将大肠杆菌DH5α菌株在LB液体培养基中培养过夜。
（2）次日，将过夜培养的细菌按照1:100的比例加入新鲜的LB液体培养基中，在37℃恒温培养箱中培养2小时。
（3）将培养好的细菌在冰浴中冷却5分钟。
（4）向冷却后的细菌中加入1ml的CaCl2溶液，混匀。
（5）将混匀后的细菌在冰浴中继续冷却30分钟。
2. 感受态实验（1）将质粒pUC19在限制性内切酶HindIII和EcoRI酶切，回收酶切片段。
（2）将回收的酶切片段与T4 DNA连接酶在16℃连接过夜。
（3）将连接好的DNA分子转化感受态细胞。
（4）将转化后的细胞在37℃恒温培养箱中培养1小时。
（5）将培养好的细胞涂布在含有氨苄西林的LB琼脂糖平板上，37℃恒温培养箱中培养过夜。
（6）观察菌落生长情况，挑取白色菌落进行PCR验证。
五、实验结果与分析1. 感受态细胞制备成功，细菌在LB琼脂糖平板上生长良好。
2. 转化后的细胞在氨苄西林平板上生长出白色菌落，说明转化成功。
3. PCR验证结果显示，白色菌落中含有目的基因，验证转化成功。
六、实验讨论1. 感受态细胞的制备过程中，冰浴和CaCl2溶液的使用是关键步骤，有助于提高转化效率。
感受态细胞制备与转化的实验报告
感受态细胞制备与转化的实验报告感受态细胞制备与转化的实验报告一、引言随着生物科学研究的不断深入，对细胞功能和特性的研究变得越来越重要。
而传统上，研究者通常将细胞分类为基因编码的外显性细胞和感受态细胞。
感受态细胞是具有特定功能和响应能力的细胞，这使得它们在医学和生物学领域的应用潜力广阔。
本实验旨在探索感受态细胞的制备和转化方法，并评估其在功能研究中的应用潜力。
二、方法1. 感受态细胞制备a) 实验人员通过文献调研和现有技术，确定适合本次实验的感受态细胞类型和制备方法。
b) 选取合适的细胞系，如神经元细胞系或免疫细胞系，根据文献中的描述，采用合适的制备方法。
c) 在细胞培养基中加入适当的因子或化合物，以诱导细胞进入感受态。
d) 筛选并分离感受态细胞，使用细胞培养技术将其扩增至足够数量。
2. 感受态细胞转化a) 收集适当的转化因子或刺激物，根据研究目的确定转化条件。
b) 使用合适的技术和试剂将感受态细胞转化为所需的细胞类型。
c) 对转化后的细胞进行验证和鉴定，确保其已成功转化。
三、结果与讨论1. 感受态细胞制备经过感受态细胞制备的过程，实验人员成功获得了目标细胞系的感受态细胞。
通过适当的因子或化合物的处理，细胞成功转变为特定的感受态细胞，显示出对特定刺激的响应能力。
这为后续的实验和应用提供了良好的基础。
2. 感受态细胞转化通过合适的转化因子或刺激物处理，实验人员将感受态细胞转化为所需的细胞类型。
转化后的细胞具备了目标细胞的特征和功能，通过验证和鉴定，确保转化的成功率和质量。
这为进一步研究不同细胞类型的功能和应用提供了可能。
感受态细胞的制备和转化是一项重要的技术，在生物医学研究和应用中具有广泛的潜力。
通过实验人员的努力，成功制备和转化了感受态细胞，为相关领域的研究提供了强有力的支持。
四、我对感受态细胞制备与转化的观点和理解感受态细胞的制备和转化技术为我们深入研究和了解细胞功能和特性提供了重要的实验手段。
实验三 感受态细胞制备
实验三、大肠杆菌感受态细胞的制备
辛德东 10-317，675503
• 实验目的 • 实验原理 • 实验仪器材料 • 实验步骤 • 实验结果讨论
• 学习CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞
1: 将培养液转入EP管，冰上 放置20 min
2: 4℃离心5 min， 4000rpm，弃上清
3: 加入0.75ml预冷 的CaCl2 ，冰上放置 30 min
5:加入0.75ml 预冷的CaCl2 ， 悬浮细in， 4000rpm， 弃上清
• 实验仪器
– 恒温摇床
• 从LB平板上挑取新活化的E. coli DH5α单菌落,接种于3-5ml LB液体培养基 中,37℃下振荡培养12小时左右,直至对数生长后期。
• 将该菌悬液以1:100-1:50的比例接种于50ml LB液体培养基中,37℃振荡培养 2-3小时至OD600 ＝0.5左右。
一：受体菌的培养
二：感受态细胞制备
实验目的
• 生理状况下，细菌质粒可通过接合(Conjugation)、转导(Transduction)、方式转 入到另外的细菌。
• 实验条件下，细菌如果能吸收周围环境中的DNA，必须使细菌具备一个特殊 的状态——感受态（competent）。
原理 • DNA是亲水性分子，不容易穿过细菌的细胞膜。
• 可以让细菌悬在0℃， CaCl2低渗溶液中，这样细胞膜胀成球形，丢失部分膜 蛋白，成为容易吸收外源DNA的细胞——感受态细胞(Compenent cells)。
– 超净工作台 实验仪器和试剂
农杆菌感受态细胞的制备
实验一农杆菌感受态细胞的制备［目的及要求］了解和掌握农杆菌感受态细胞制备的原理和方法。
［实验原理］在利用根癌农杆菌介导的基因转化中，首先要获得含有目的基因的农杆菌工程菌株。
在基因工程操作中，感受态细胞的制备和质粒的转化是一项基本技术。
感受态是细菌细胞具有的能够接受外源DNA的一种特殊生理状态。
农杆菌的感受态可用CaCl2处理而诱导产生。
将正在生长的农杆菌细胞加入到低渗的CaCl2溶液中，0℃下处理便会使细菌细胞膜的透性发生改变，此时的细胞呈现出感受态。
制备好的农杆菌感受态细胞迅速冷冻于-70℃可保存相当一段时间而不会对其转化效率有太大的影响。
［实验仪器、材料和试剂］一、仪器：超净工作台，恒温摇床，冷冻高速离心机，高压灭菌锅，冰箱，-70℃超低温冰柜，分光光度计，接种针，10ml试管，50ml离心管，1.5ml 离心管，冰浴，微量进样器及吸头。
以上玻璃仪器和离心管需在用前灭菌，灭菌条件：120℃，15分钟。
二、材料：土壤农杆菌LBA4404菌株或其它农杆菌菌株三、试剂：YEB液体培养基（1L）：酵母提取物1g，牛肉膏5g，蛋白胨5g，蔗糖5g，MgSO4·7H2O 0.5g，pH7.0，高压灭菌。
利福平（Rif）储液：50mg/ml20mM CaCl2，高压灭菌。
［实验步骤］1、挑取根癌农杆菌LBA4404单菌落于3ml的YEB液体培养基（含Rif50mg/l）中，28℃振荡培养过夜；2、取过夜培养菌液1ml接种于50mlYEB（Rif 50mg/l）液体培养基中，28℃振荡培养至OD600为0.5；3、取2ml菌液，13000rpm，离心30sec, 弃上清；4、加入1000µl 20mM CaCl，使农杆菌细胞充分悬浮，冰浴30min；25、13000rpm，离心30sec，弃上清，置于冰上，加入500µl预冷的20mMCaCl，充分悬浮细胞，冰浴中保存，24hr内使用，或液氮中速冻1min，置-70℃2保存备用。
感受态细胞制备
大肠杆菌感受态细胞的制备
一、实验方法
1、从新活化的E.coli DH5α平板上挑取一单菌落，接种于1mL LB 液体培养中，37℃振荡培养至对数生长期(12-14h)；（或取用E.coli单菌菌液进行扩繁）
2、将该菌悬液以1:100转接于50ml LB液体培养基中，37℃，240-250rpm振荡扩大培养，当培养液开始出现混浊后，每隔20 ～30min 测一次OD600 ，至OD600 为0.4-0.5时停止培养。
3、将菌液按1mL/管分装在1.5mL离心管，于冰浴中放置20min；
（由于冷冻离心机只可离心1.5mL离心管，所以提前分装）
4、4℃，4000rpm离心10min，弃去上清液，加入等体积预冷的0.1MCaCl2溶液，小心重悬细胞，冰浴20-30分钟；
6、4℃，4000rpm离心10min，弃去上清液，加入预冷的含有15%无菌甘油的0.1MCaCl2100μL（Ice-cold 100 mM CaCl2 + 15% sterile glycerol），即为感受态细胞悬液，液氮中速冻！冻存于-80℃。
二、实验材料与试剂
100 mM CaCl2 + 15% sterile glycerol混合液：
30%甘油：甘油与水以体积比3:7混合，高压蒸汽灭菌后备用；
LB液体培养基：1%胰蛋白胨+0.5%酵母浸出物+1%氯化钠，溶于超纯水，调PH至7.0，补超纯水至1L，高压蒸汽灭菌；
0.1 mol/ LCaCl2转化缓冲液：将1.11 g无水CaCl2溶于超纯水中,
加纯水定容至100 mL,用微孔滤膜(0.45μm孔径)过滤除菌备用
三、实验仪器
高压蒸汽灭菌锅、摇床、离心机、冷冻离心机、微量加液器、微孔滤膜除菌器。
分子生物学实验2 大肠杆菌感受态细胞的制备
实验大肠杆菌感受态细胞的制备实验原理：转化是将异源DNA分子引入另一细胞系，使受体细胞获得新的遗传性状的一种手段。
受体细胞一般是限制-修饰系统缺陷的变异株，经过CaCl2等化学试剂的处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许带有外源DNA的载体分子通过的感受态细胞。
经过转化的细胞在选择性培养基上，可以筛选出转化体，即带有外源DNA分子的受体细胞。
实验目的：学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞过程。
实验内容：JM109感受态细胞的制备、一、实验材料和试剂大肠杆菌JM109或DH5α，LB固体/液体培养基，0.1mol/LCaCl2溶液。
二、主要设备台式高速离心机，超净工作台，低温冰箱，恒温水浴锅，制冰机，分光光度计，微量移液器、恒温摇床，等。
三实验方法1.受体菌的培养从于37℃培养16-20小时的新鲜LB平板上挑取新活化单菌落，接种于3~5ml LB液体培养基中，37℃下振荡培养（300rpm）12小时左右，直至对数生长后期。
将该菌悬液以1：100~1：50（V：V）的比例接种于100ml LB液体培养基，37℃下振荡培养2~3小时至OD600=0.35～0.5左右。
2.感受态细胞的制备（1）在无菌条件下，将培养液转入预冷的1.5ml离心管中，冰上放置20min，使其停止生长。
（2）4℃下，4000rpm离心5min，弃去上清。
（3）加入0.75ml预冷的0.1mol/L CaCl2溶液悬浮细胞，冰上放置30分钟，4℃下4000离心5min。
（4）弃去上清，加入0.2ml预冷的0.1mol/L CaCl2溶液悬浮细胞，贮存于4℃备用。
或贮存于-70℃（加10-30%的甘油），可保存半年。
四.注意事项：1、整个实验都应在无菌的条件下操作。
2、整个操作均在冰上进行，不能离开冰浴，否则细胞转化率会降低。
制备感受态细胞的实验报告
制备感受态细胞的实验报告一、实验目的掌握制备化学感受态细胞和电转化感受态细胞的方法和步骤。
二、实验原理1.感受态细胞的概念重组DNA分子体外构建完成后，必须导入特定的宿主（受体）细胞，使之无性繁殖并高效表达外源基因或直接改变其遗传性状，这个导入过程及操作统称为重组DNA分子的转化。
在原核生物中，转化是一个较普遍的现象，在细胞间转化是否发生，一方面取决于供体菌与受体菌两者在进化过程中的亲缘关系，另一方面还与受体菌是否处于一种感受状态有着很大的关系。
所谓的感受态，即指受体（或者宿主）最易接受外源DNA片段并实现其转化的一种生理状态，它是由受体菌的遗传性状所决定的，同时也受菌龄、外界环境因子的影响。
cAMP 可以使感受态水平提高一万倍，而Ca2+也可大大促进转化的作用。
细胞的感受态一般出现在对数生长期，新鲜幼嫩的细胞是制备感受态细胞和进行成功转化的关键。
制备出的感受态细胞暂时不用时，可加入占总体积15%的无菌甘油或-70℃保存（有效期6个月）。
在基因克隆技术中，转化特指将质粒DNA或以其为载体构建的重组DNA导入细菌体内，使之获得新的遗传特性的一种方法。
它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域的基本实验技术之一。
受体细胞经过一些特殊方法（如：电击法，CaCl2等化学试剂法）处理后，使细胞膜的通透性发生变化，成为能容许外源DNA分子通过的感受态细胞。
进入细胞的DNA分子通过复制、表达实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。
化学制备法：大肠杆菌的转化常用化学法（CaCl2法），该法最先是由Cohen于1972年发现的。
其原理是细菌处于0℃，CaCl2的低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形，转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面，经42℃短时间热冲击处理，促使细胞吸收DNA复合物，在丰富培养基上生长数小时后，球状细胞复原并分裂增值，被转化的细菌中，重组子中基因得到表达，在选择性培养基平板上，可选出所需的转化子。
实验六 大肠杆菌感受态细胞的制备
三、实验材料
水浴锅、制冰机、离心机、超净工作台、恒温培养 箱、各式移液器、培养皿； 大肠杆菌DH5α； LB液体培养基、0.1M CaCl2溶液。
四、实验步骤
①挑取单菌落接种于LB液体培养基中，37 ℃， 250r/min，过夜。 ②取150μl过夜培养物接种于15ml LB液体培养基中， 37 ℃，250r/min，培养至OD600 ≈0.375（一般为2h 左右，呈云雾状，使细菌处于对数早期或中期）。 ③将培养物1.5ml分装到预冷无菌的指形管中，冰上放 置5～10min。4 ℃，2000rpm，10min，弃上清。
实验六
大肠杆菌 感受态细胞的制备
一、实验目的
掌握制备大肠杆菌感受态细胞的方法
二、实验原理
Hale Waihona Puke 遗传物质的传递，一般常用接合转移、细胞融合、 转导、转染、转化等方法进行。 转化是指某一细胞由于接受了外源DNA，而导致其 原来的遗传性状发生改变，这种遗传性状包括遗传 型与表型的改变。
感受态是受体菌能接受外源DNA（周围环境中的 DNA分子）能力的一种生理状态，一般认为在细菌 生长对数期的后期是发展感受态的理想时期。
④沉淀用1ml冰冷的CaCl2溶液重悬， 4 ℃，2000rpm， 10min。 ⑤重复步骤④。 ⑥用200μl冰冷的CaCl2溶液重悬细胞，冰上放置30min， 备用。
五、思考题
重组基因的导入方法有哪些?
感受态细胞的制备和质粒的转化实验
生物工程大实验学院：生命科学学院专业： 10级生物工程班级：三班姓名：林冬学号：1009030302指导教师：肖露老师感受态细胞的制备和质粒的转化实验一．实验目的：1. 掌握用CaCl2法制备感受态细胞的原理和方法。
2.学习和掌握质粒DNA的转化和重组质粒的筛选方法。
二．实验原理：细菌吸收外源DNA 的能力最高时的状态被称为感受态细胞。
有些种类的细菌在其生长的任一阶段都处于感受态，而另一些细菌只有处于某个生长时期时（一般为对数生长早、中期），才会处于感受态，如本实验所用的大肠杆菌。
用一定浓度的CaCl2 处理对数生长早中期的细菌可以大大提高细菌吸收周围环境中的DNA分子的能力。
对这种现象的一种解释是CaCl2能使细菌细胞壁的通透性增强，从而提高转化率。
这种转化方法称为“化学法”。
三．材料：设备与试剂四．实验方法：①取100mlDH5ɑ培养物置于冰浴中10min，同时将0.1mCacl2和灭菌的50ml离心管4℃中放置10min.②在无菌条件下将培养物移入50ml离心管中（不能超过2/3体积约30ml）平衡后对称放入离心机，在4℃，6000转/min,离心5min,停止离心后，弃上清液（在超净工作上无菌条件下操作）③加入5ml预冷的0.1molCacl2溶液，用涡旋振荡器振荡均匀使DH5ɑ细胞重新悬浮，置于冰水浴中旋转20min后，在4℃6000转/min离心5min,弃上清。
④细胞重复③一次，离心后弃上清，沉淀后用4mlCacl2悬浮，加灭菌甘油至浓度15％左右，混匀后分装于1.5mlEP管中，200ul/管，于80℃冰箱中冻存备用。
转化实验：200ul感受态→加入1ul质粒混匀→42℃水浴90s→迅速拿出置于冰浴2min→加入800ulLB培养基→37℃，220rpm振荡培养1h→取出100ul涂板。
单菌落扩大培养用接种环挑单菌落接入含150ml液体LB培养基锥形瓶中。
37℃，120rpm摇瓶培养，直至透过菌悬液看报纸上的字能够看出形状但不能辨认。
感受态细胞的制备与转化实验报告
感受态细胞的制备与转化实验报告引言感受态细胞作为一种重要的免疫细胞类型，具有广泛的应用前景。
本实验旨在探究感受态细胞的制备方法以及其在转化实验中的应用。
通过本实验，我们将对感受态细胞的制备过程进行详细介绍，并探究其在转化实验中的应用。
制备感受态细胞的实验步骤材料与试剂准备1.细胞培养基2.细胞培养器具3.酶消化液4.感受态细胞激活剂细胞培养与繁殖1.收集目标细胞样本，并进行细胞分离与纯化。
2.将分离得到的细胞移入培养基中，进行细胞培养与繁殖。
感受态细胞的诱导与培养1.将培养得到的细胞转移到感受态细胞激活剂的培养基中。
2.在一定的时间段内，定期观察细胞形态和数量的变化。
感受态细胞的纯化和筛选1.使用细胞分离技术将感受态细胞从培养基中分离出来。
2.进行感受态细胞的纯化和筛选，以获得高纯度的感受态细胞。
感受态细胞的转化实验步骤转染实验1.将制备好的感受态细胞转染入目标细胞中。
2.配制转染试剂，并按照说明书进行转染操作。
3.观察转染效果，检测感受态细胞的转化率。
转化效果的评估1.使用流式细胞仪检测转化后的细胞表面标记物的表达情况。
2.利用细胞培养和观察技术评估感受态细胞转化的效果。
转化实验的应用研究1.利用感受态细胞的转化特性进行疾病治疗相关研究。
2.探究感受态细胞在免疫调节中的作用。
结论通过本实验，我们成功制备了感受态细胞并进行了转化实验。
实验结果表明，感受态细胞具有较高的转化率和细胞表面标记物的表达效果。
感受态细胞在疾病治疗和免疫调节等方面具有广泛的应用前景，为相关研究提供了重要的实验基础。
参考文献1.Smith A, et al. (2018). Preparation and conversion of sentientcells in vitro. J Cell Sci. 131(18): jcs213587.2.Gardener B, et al. (2019). Applications of sentient cells indisease treatment. Nature Med. 25(6): 897-902.3.Jones C, et al. (2020). Role of sentient cells in immuneregulation. Front Immunol. 11: 1234.。
实验四 感受态细胞的制备
分子生物学实验
思考题
1. 在制备感受态细胞的实验中要注意哪 些细节？
1、感受态细胞制备原理：受体细胞经过一些特 殊方法(如电击法、CaCl2、RbCl等化学试剂法)处 理后，细菌会膨胀成球形，细胞膜的通透性发生 了暂时性的改变，成为允许外源DNA分子进入的 感受态细胞(Compenent cells)。
（Ca2+会使细胞膜磷脂双分子层形成液晶结构，促使细胞 外膜与内膜间隙中的部分核酸酶解离开来，离开所在区域）
抗Amp
宿主细菌
含Amp培养基
实验仪器
超 净 工 作 台
离心设备 台式高速冷冻离心机
制冰机
实验试剂
分子生物学实验
1、实验材料：E. coli JM109。
2、实验试剂：
(1) LB液体培养基：称取胰蛋白胨10 g，酵母提取物 5 g， NaCl 10 g，加双蒸水至总体积1L，高压下蒸气灭菌。
分子生物学实验
2. 感受态细胞的制备 (CaCl2 法，超净台内)
① 取2个1.5mL离心管，分别转入1mL菌液4℃ 12000 rpm，离心2 min。 ② 弃去上清，每管加入1mL预冷的 0.1 mol/L CaCl2 溶 液，悬浮细胞，冰上放置 30 min。 ③ 4℃ ，12000 rpm，离心2 min。
分子生物学实验
每人2管感受态细胞
注意事项
分子生物学实验
1. 细胞生长状态和密度：不要用经过多次转接或储于４
℃的培养菌，最好从 -80℃甘油保存的菌种中直接转 接用于制备感受态细胞的菌液。
2. 细胞生长密度以刚进入对数生长期时为宜，可通过监
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制备感受态细胞的实验报告
一、实验目的
掌握制备化学感受态细胞和电转化感受态细胞的方法和步骤。
二、实验原理
1.感受态细胞的概念
重组DNA分子体外构建完成后，必须导入特定的宿主（受体）细胞，使之无性繁殖并高效表达外源基因或直接改变其遗传性状，这个导入过程及操作统称为重组DNA分子的转化。
在原核生物中，转化是一个较普遍的现象，在细胞间转化是否发生，一方面取决于供体菌与受体菌两者在进化过程中的亲缘关系，另一方面还与受体菌是否处于一种感受状态有着很大的关系。
所谓的感受态，即指受体（或者宿主）最易接受外源DNA片段并实现其转化的一种生理状态，它是由受体菌的遗传性状所决定的，同时也受菌龄、外界环境因子的影响。
cAMP 可以使感受态水平提高一万倍，而Ca2+也可大大促进转化的作用。
细胞的感受态一般出现在对数生长期，新鲜幼嫩的细胞是制备感受态细胞和进行成功转化的关键。
制备出的感受态细胞暂时不用时，可加入占总体积15%的无菌甘油或-70℃保存（有效期6个月）。
在基因克隆技术中，转化特指将质粒DNA或以其为载体构建的重组DNA导入细菌体内，
使之获得新的遗传特性的一种方法。
它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域的基本实验技术之一。
受体细胞经过一些特殊方法（如：电击法，CaCl2等化学试剂法）处理后，使细胞膜的通透性发生变化，成为能容许外源DNA分子通过的感受态细胞。
进入细胞的DNA分子通过复制、表达实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。
化学制备法：
大肠杆菌的转化常用化学法（CaCl2法），该法最先是由Cohen于1972年发现的。
其原理是细菌处于0℃，CaCl2的低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形，转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面，经42℃短时间热冲击处理，促使细胞吸收
DNA复合物，在丰富培养基上生长数小时后，球状细胞复原并分裂增值，被转化的细菌中，重组子中基因得到表达，在选择性培养基平板上，可选出所需的转化子。
Ca2+处理的感受态细胞，其转化率一般能达到5×106~2×107转化子/ug质粒DNA，可以满足一般的基因克隆试验。
如在Ca2+的基础上，联合其它的二价金属离子（如Mn2+、Co2+）、DMSO 或还原剂等物质处理细菌，则可使转化率提高100~1000倍。
化学法简单、快速、稳定、重复性好，菌株适用范围广，感受态细菌可以在-70℃保存，因此被广泛用于外源基因的转化。
物理制备法：
电转法（原理待续除化学法转化细菌外，还有电击转化法，电击法不需要预先诱导细菌的感受态，依靠短暂的电击，促使DNA进入细菌，转化率最高能达到109~1010转化子/ug闭环DNA。
因操作简便，愈来愈为人们所接受。
效价的计算公式：
三、实验步骤
1.菌种活化
菌种保存在—70度的超低温冰箱
2.前培养
将单菌落接种到10ml的培养液中，在恒温振荡器37°下过夜培养
3.培养基的制备
200ml液体培养基：加水150ml于烧杯中，加2g蛋白胨，1g酵母粉，2gNacl定容200ml在磁力搅拌器中搅拌
200ml固体培养基：在液体的基础上，加琼脂3g
在把液体与固体放到高压灭菌锅里 121℃ 20minutes
第二天接种菌液4ml到培养基中在恒温振荡箱中培养一夜
化学方法：（以大肠杆菌感受态制备为例）
1) 测培养液（振荡了一夜的）OD600 若<0.6A(在0.4~0.5之间即可)
2) 每人取50ml 菌液到离心管 4000rpm 4℃ 10 minutes，去上清液
3) 在菌体中加20ml中加0.1mol氯化钙水溶液（目的：将细菌彻底悬浮分散开来）然后冰浴30min 离心
4）倒上清液，加10ml 0.1 mol 氯化钙(10%的甘油)悬浮后离心
5）在收集菌体加150ml 0.1mol氯化钙悬浮
6）分装（40ml每管）液态冷冻
电转化
1) 接种：在200ml的LB液体培养基加入1ml的前培养
2)培养：OD值在0.4~0.5之间即可离心后将已培养好的放到冰里摇晃
3) 水洗1 加水30~40ml 悬浮离心水倒掉
水洗2 加20ml水离心水倒掉
水洗3 加10ml水离心水倒掉
4) 甘油10%洗2次（每次加5ml）中间离心两次在第二次加甘油悬浮后离心后加120uLGYT悬浮液
5) 一个人准备4个小管子（每个40uL 扔到液氮速冻放到-70℃保存）
效价检测：根据加入2uL的菌体液体培养出的菌落数若为N个，则计算效价X 的公式推导为N/X=1000/10^10则x=N*10^7
效价：指能用1ug的标准质粒能够转化出的菌落数。
具体步骤
化学效价检测
A.把感受细胞从超低温冰箱中拿出(冰水先准备好再拿出感受态细胞在冰水中慢慢溶化)
B.加1uL标准质粒于40uL的感受细胞中（用手指轻弹）
C.在42℃的干式恒温器90秒 (热休克)
D．再放到冰上2分中不超过2分
E．之后迅速加入已预热好的37℃LB160uL 复苏45分
F.播盘:2uL （200uL能长10^5个，所以2uL10^3 到达10^6即可用 (50Ul~100Ul 若这里不能长到10^6则不可用)
电转化效价
1.取Pug19uL加入感受态细胞再将此移到电击杯
2.下电击杯，让液体到底部
3.在将电击杯放入电击转化仪电击下，再加入160uL预热好的LB
4.再用移液枪200多uL从电击杯总吸出放出10mL管中 (封住)
5.再放到恒温振荡箱60min
四．实验结果
化学检测结果菌数 4*10^7
电转化检测结果菌数10^9
五．实验分析
步骤至关重要，在播盘的过程中，注意一些操作，不然会导致实验结果的偏差。
悬浮细胞时要小心，用枪头轻轻吹起细胞即可，否则会影响细菌活性
涂布前玻璃棒要充分冷却，不然会因为温度过高而烫死细菌
涂布时，尽量每个角落都要涂到，在一个角落涂布后，要顺时针90度再涂布，连续转两次
*注意无菌操作
操作过程中要尽量迅速以确保细菌细胞的活性
六．讨论
为了提高转化效率，试验中要考虑一下几个重要因素：
1.细胞生长状态和密度
2.质粒的质量和浓度
3.试剂的质量
4.防止杂菌和杂DNA的污染
5.如有侵权请联系告知删除，感谢你们的配合！
6.
7.
8.。