黑曲霉生产糖化酶及酶活测定

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糖化酶发酵、提取及活力测定

SHANDONGＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＯＦＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ发酵工艺学实验报告糖化酶发酵、提取及活力测定实验学院：生命科学学院专业班级：生物工程1602项目组成员：刘松良、张金中、蔡超、何建雨、周钻钻指导教师：王丽娟2018年6月糖化酶发酵、提取及活力测定实验何健雨王丽娟生命科学学院生工1602班1. 实验目的(1)了解黑曲霉生长特性,学习糖化酶发酵工艺；(2)了解黑曲霉生长特性,学习糖化酶发酵工艺。

(3)学习并掌握糖化酶活力测定方法2. 实验原理葡萄糖淀粉酶( glucoamylase,EC.3.3.13)系统名为淀粉a-1,4-葡聚糖葡萄糖水解酶,俗称糖化酶,是国内酶制剂中产量最大的品种。

糖化酶对淀粉分子的作用是从非还原性末端切开a-1,4键,也能切开a-1,3键和a-1,6键,生成葡萄糖。

生产糖化酶常用的菌种是黑曲霉,将活化好的黑曲霉制成孢子悬浮液,转接接到三角瓶直接进行发酵,或转接到三角瓶作为种子,进行一次扩大培养后,再转接到发酵罐进行糖化酶发酵。

黑曲霉糖化酶是一种胞外酶。

首先采用过滤法将菌体等杂质除去,继而对滤液进行浓缩,最后用有机溶剂如乙醇将酶沉淀出来,对沉淀物进行干燥,加工成成品。

糖化酶有催化淀粉水解的作用,能从淀粉分子非还原性末端开始,分解a-1,4键,生成葡萄糖。

葡萄糖分子中含有的醛基能被次碘酸钠氧化,过量的次碘酸钠钠,酸化后析出碘,再用硫代硫酸钠标准溶液标定,计算酶活力。

酶活力定义:1g固体酶粉(或1mL液体酶),于559CpH4.6的条件下,1h分解可溶性淀粉产生1mg葡萄糖,即为一个酶活力单位,以U/mL(U/g)表示。

3. 实验材料优质大麦芽粉、大米粉、酒花；耐高温-α淀粉酶、糖化酶；乳酸（磷酸）；0.025 mol/L碘液；温度计（100℃）、恒温水浴锅、糖度计、布氏漏斗、分析天平、纱布、玻璃仪器。

4. 方法步骤待测酶液的制备:称取酶粉1-2g,精确至0.0002g,先用少量的乙酸缓冲液溶解,并用玻璃棒捣研,将上请液小心倾入容量瓶中。

糖化酶的制备工艺流程

糖化酶的制备工艺流程
糖化酶的制备工艺流程主要包括以下几个步骤：
1.菌株活体及扩大培养：
（1）制备PDA培养基使用去皮马铃薯、蔗糖和琼脂等成分，煮沸后过滤，加入其他成分定容，然后灭菌。

（2）接种：将黑曲霉菌种接种到PDA培养基上，在28摄氏度下培养3天。

2.摇瓶发酵培养：
（1）制备发酵培养基：使用玉米粉、米糠、麸皮等成分，加水搅拌均匀后装于锥形瓶中，灭菌。

（2）接种与产酶培养：将黑曲霉平板上的菌种打孔接种到锥形瓶中，在28摄氏度下培养96小时。

3.离心：
将培养好的黑曲霉发酵液通过4层纱布过滤后离心，以除菌体，得到上清液，即糖化酶粗酶液。

4.酶提取：
（1）通过采用离心、过滤、超声波及加料等方式进行酶的分离和提取。

（2）酶的稳定性也是关键问题，需要考虑加适量的抗氧化剂和保护剂，以防止酶的讲解个损失。

黑曲霉生产糖化酶及酶活测定

第19卷第7期牡丹江大学学报 Vol.19 No.7 2010年7月 Journal of Mudanjiang University Jul. 201092 文章编号：1008-8717（2010）07-0092-03黑曲霉生产糖化酶及酶活测定单海艳（牡丹江大学，黑龙江牡丹江 157000）摘要：本文对黑曲霉突变株Uv11－48生产糖化酶液体深层发酵进行了全程生产工艺的研究，证实了黑曲霉突变株是一种产孢力强、抗污染能力强、易培养的糖化酶生产菌，经液体深层通风发酵可得出：只要充分利用突变株的有利条件，掌握好菌种特性，合理配制营养，控制好发酵条件，便可获得高酶活力的高产糖化酶。

本实验还运用了几种酶活力测定方法，以资进行优劣探讨。

关键词：黑曲霉；液体通风发酵；糖化酶；酶活力中图分类号：Q-331 文献标识码：B 一、前言（一）黑曲霉菌种特性 1．黑曲霉的分类地位黑曲霉在分类学上处于：真菌门、半知菌亚门、丝孢纲、丝孢目、丛梗孢科、曲霉属、黑曲霉群，拉丁学名：Aspergillus niger 。

2．黑曲霉形态、生理、生态特性孢子头呈暗黑色，菌丝体由具横隔的分枝菌丝构成，菌丝黑褐色，顶囊球形，小梗双层，分生孢子球形，平滑或粗糙。

一般进行无性生殖，其可育细胞称足细胞。

3．黑曲霉突变株的形态、生理、生态、特征在查氏培养基上菌落曲型为炭黑色，有辐射沟纹，从菌落边缘向中心，分化为伸长部位，活性部位，成熟部位，老化部位几个区域即孢子萌发最早出现于中心部位是伸展部位，并逐渐形成密生部位，分生孢子部位，最后在中心出现的是成熟部位，菌落背面无色或稍黄。

（二）糖化酶的分类、地位、性质及用途 1．糖化酶在国际酶学委员会，在系统命名法中的地位糖化酶是淀粉酶，在系统命名法中属水解酶类。

2．糖化酶的性质糖化酶（glucamylase ）又名糖化型淀粉酶（glueoamylase ）或淀粉葡萄糖苷酶。

其系统名称为淀粉α1.4-葡萄聚糖水解酶。

黑曲霉诱变产糖化酶

诱变黑曲霉提高糖化酶的生物合成摘要现今，筛选黑曲霉主要通过物理和化学突变。

用溴化乙錠和甲基磺酸乙脂（EMS）轮流处理亲代菌株。

这株突变菌株M4能产生更多的糖化酶。

简介糖化酶时淀粉工业中最重要的一种酶。

它能将淀粉水解成葡萄糖。

葡萄糖在各种食品行业中是一种必要的合成原料。

糖化酶广泛地应用于酿造，造纸，食品，制药，纺织行业中。

黑曲霉通过液态或固态发酵生产糖化酶中，食物残渣也能被利用到。

同时，食物残渣也能用于葡萄糖和啤酒行业中。

糖化酶是一种微生物的胞外酶，并且，它典型的性质是水解a-1，4和a-1，6糖苷键，通过其他酶作用于淀粉合成糖类。

糖化酶能水解非还原端的a-1，4葡萄糖苷键。

糖化酶能被成倍的生成，通过引起野生菌株突变。

据报道，黑曲霉的突变菌株能更好地生产糖化酶。

这种黑曲霉菌株能被紫外线照射或者化学的方法诸如N-甲基，N-硝基，N-亚硝基胍，硫酸二甲脂，甲基磺酸乙脂，溴化乙錠和亚硝酸来引诱突变，提高糖化酶产量。

突变菌株产糖化酶的特性能更好地影响对生淀粉的处理。

生产糖化酶的突变菌株在r-射线的处理下，亲代菌株的特性被改善并且产物乙醇的产量也被提高了。

这个突变黑曲霉是用联合诱变处理的，它产的糖化酶能将麦芽糊精转变为葡萄糖。

多重的轮流突变对葡萄糖的生成有着很好的影响。

糖化酶的比活度和它的热稳定性被提高。

并且，结果通常是提高葡萄糖产量。

对比几种黑曲霉突变株的酶产量和它们的特性，相比于野生株，突变株能更高水平地生产糖化酶。

但是，不管使用怎样的菌株，对所有糖化酶来说，酶的组成和特性都是类似的。

Britly进行本研究的目的是为了证明以小颗粒的形式增长有利于糖化酶生产，而大颗粒的形式则降低了糖化酶的生产量，导致结果不匹配。

现今研究这些的目的是为了激发菌株的潜能，通过化学或者无力突变来增加糖化酶的产量。

原料和方法改善菌株：黑曲霉能通过紫外线和诱变剂得以改善。

用溴化乙錠和甲基磺酸乙脂轮流处理亲代菌株。

两种诱变剂同时使用。

黑曲霉糖化酶的生产流程设计方案

糖化酶的生产流程设计方案糖化酶的生产流程设计方案根据题意，某厂期望利用黑曲霉工程菌有氧发酵大量生产糖化酶，年产320吨，一个生产周期约40天，场地可容纳4个发酵罐及其附属设备。

所以，每个发酵罐的工程菌要在每年至少进行9次发酵且每次发酵要达到9吨才能满足题意。

可现有的工程菌TH5只能使每吨发酵液中提取0.04吨糖化酶不能满足生产要求，所以改进现有菌株开始到可销售的产品产出为止的生产流程如下：黑曲霉工程菌TH5改良黑曲霉工程菌TH5筛选优良种子扩大培养发酵罐发酵提炼产品第一步、诱变黑曲霉工程菌，并筛选出优良的、所需黑曲霉工程菌（一）同步培养将黑曲霉菌株接到适合的斜面培养基上，然后在培养基中进行培养。

再将斜面上的菌株进行下列处理。

(二) 黑曲霉菌株悬液制备菌悬液制备取出发菌株转接至缓冲液的三角瓶中(内装玻璃珠，装量以大致铺满瓶底为宜)，30℃～35℃振荡30min，用垫有脱脂棉的灭菌漏斗过滤，制成孢子悬液，在细胞计数板上计数并将其调浓度至106～108个/mL，冷冻保藏备用。

(三) 诱变处理用物理方法或化学方法，所用诱变剂种类及剂量的选择可视具体情况决定，有时还可采用复合处理，可获得更好的结果。

1．紫外线处理打开紫外灯(30W)预热20min。

取5mL 菌悬液放在无菌的培养皿(9cm)中，同时制作5 份。

逐一操作，将培养皿平放在离紫外灯30cm(垂直距离)处的磁力搅拌器上，照射l min 后打开培养皿盖，开始照射，与照射处理开始的同时打开磁力搅拌器进行搅拌，即时计算时间，照射时间分别为l min、3min、5 min。

照射后，诱变菌液在红灯下稀释涂菌进行初筛。

2．稀释菌悬液按10 倍稀释至10-6，从10-5 和10-6 中各取出0.lmL 加入到培养基平板中，然后涂菌并静置，待菌液渗入培养基后倒置，恒温培养2～3d。

记录H/C的数值并观察。

3．优良菌株的筛选选出优良的、所需的黑曲霉工程菌株。

第二步、把筛选好的优良的工程菌株进行扩大培养菌种扩大培养的目的就是为每次发酵罐的投料提供相当数量的、代谢旺盛的种子。

黑曲霉固态发酵产糖化酶的研究

Abstract: Taking glucoamylase activity as assessment standard, the medium of solid-state fermentation and fermentation conditions of an Aspergillus niger mutant were studied. The effects of carbon sources, nitrogen sources, smash degree of raw material, water content of medium, temperature, initial pH, fermentation time and inoculum on glucoamylase production during solid fermentation were investigated respectively. It was shown that the optimal conditions for glucoamylase production by the A. niger mutant were as follows: bran: soybean cake meal=3:1; (NH4)2SO4 3%; K2HPO4 0.1%; the raw materials was granulated through 60-mesh sieve; initial pH 5.0; water content of culture medium 120% ; fermentation temperature 32℃; inoculum of spore suspension (108/ml) 2.5 ml/bottle; fermentation time 72 h. Under above conditions, the highest glucoamylase activity was detected as 17800 U/g. Key words: Aspergillus niger; glucoamylase; solid-state fermentation

黑曲霉糖化酶分离纯化与酶学性质研究

黑曲霉糖化酶分离纯化与酶学性质研究梁新红,孙俊良,唐玉,郭祖峰（河南科技学院,河南新乡453003）摘要：纯化了黑曲霉Aspergillus niger FJL 0801糖化酶,并对其酶学性质进行研究.粗酶液经纯化后,较粗酶液纯化了38.42倍,酶活回收率达到17.45%.酶最适作用温度为60℃；最适反应pH 值为4.5；在60℃下,保温2h 后,相对酶活42%±2.8%.在pH4.5,60℃下,作用时间在60min 以内,其酶活保存89%±2.56%；其酶学性质符合淀粉糖化工业化过程中对酶的要求,该酶比较适合应用于淀粉糖化工业.关键词：糖化酶；黑曲霉；分离纯化；酶学性质中图分类号：TS201.3文献标志码：A 文章编号：1008-7516（2011）04-0024-04Purification and properties of a glucoamylase from Aspergillus nigerLiang Xinhong,Sun Junliang,Tang Yu,Guo Zufeng（Henan Institute of Science and Technology,Xinxiang 453003,China ）Abstract:A glucoamylase produced by Aspergillus niger FJL 0801was purified and the properties wassubsequently measured.The crude amylase was purified 38.42times with 17.45%recovery of enzyme activity.The enzyme proerties showed that the optimum pH and temperature was 4.5and 60℃,respectively.After a further reaction at pH 4.5for 2h,the relative enzyme activity is 42%±2.8%；and within 60minutes,the relative enzyme activity is 89%±2.56%.The glucoamylase is suitable for applying in starch sugar industry.Key words:glucoamylase,Aspergillus niger ,purification,properties糖化酶又称葡萄糖淀粉酶（Glucoamylase EC 3.2.1.3）,是一种外切型糖苷酶,从淀粉的非还原性末端依次水解α-1,4糖苷键,水解下一个个葡萄糖单元,工业上用于将淀粉转化为葡萄糖,因而广泛地用于制药、制酒及氨基酸、有机酸行业,是最重要的工业酶制剂之一[1-2].黑曲霉（Aspergillus niger ）是生产葡萄糖淀粉酶重要菌株之一[3-4].发酵液中糖化酶的分离纯化及酶学性质研究对糖化酶在工业中应用至关重要[5].本研究拟对已筛选到的A.niger FJL 0801进行分离纯化,并研究其酶学性质,以丰富糖化酶研究内容,为可能的工业应用开发新的糖化酶资源.1试验材料与方法1.1试验材料菌种：黑曲霉（Aspergillus niger FJL 0801）,河南科技学院食品学院微生物实验室冷藏保存.DEAE-Fast Flow 阴离子交换柱（16mm ×100mm ）,Superdex-75层析柱（26mm ×600mm ）,美国惠普公司.1.2试验方法1.2.1发酵产酶条件发酵摇瓶培养基：淀粉10g ；NaNO 32g ；K 2HPO 41g ；KCl 0.5g ；M gSO 4·7H 2O 0.5g ；FeSO 4·7H 2O 0.01g ；蒸馏水1000mL,自然pH.doi:10.3969/j.issn.1008-7516.2011.04.007第39卷第4期394Vol.No.河南科技学院学报Journal of Henan Institute of Science and Technology2011年8月2011Aug.收稿日期：2011-05-18基金项目：河南省教育厅自然科学研究资助计划项目（2010A550004）；河南科技学院博士基金资助项目（08001）作者简介：梁新红（1971-）,女,河南新乡人,副教授,博士.研究方向为食品生物技术.发酵摇瓶培养：把发酵摇瓶培养基装入250mL 三角瓶中,装液量为80mL.按5%接种量把半干体培养基接种于发酵摇瓶培养基中,于33℃下恒温摇床培养,转速为210r/min.1.2.2糖化酶的分离纯化发酵液6000r/min 离心15min 去菌体,所得上清液为粗酶液,总量为200mL.粗酶液进行80%饱和的硫酸铵盐析沉淀,8000r/min 离心30min,沉淀经去离子水透析,进行冷冻干燥.冻干后,用3mL 柠檬酸-磷酸氢二钠（pH4.5）缓冲液溶解后,上DEAE-52阴离子交换柱（16mm ×100mm ）,采用10mmol 的Tris-HCl 缓冲液（含2mmol CaCl 2,pH8.4）进行平衡,上样后使用含有0~1mol NaCl 的同样缓冲液进行梯度洗脱,洗脱速度为2mL/min,收集合并酶活峰后,上预先经10mmol 的Tris-HCl （pH6.5）缓冲液平衡好的Superdex-50层析柱（26mm ×600mm ）进行洗脱,洗脱速度2mL/min,收集合并酶活峰,经去离子水透析,冻干,用于酶学性质研究.1.2.3糖化酶活力测定方法粗酶液活力按照GB/T 1805.2-93测定[6].1.2.4蛋白含量测定按Bradford 方法测定[7],以牛血清白蛋白绘制标准曲线.1.3酶学性质1.3.1最适反应温度及热稳定性在不同温度下按照标准方法测定酶活,以酶活最高者为100%.热稳定性试验中测残余酶相对活力,以未保温的酶液的酶活为100%.1.3.2酶的最适反应pH 值及pH 值稳定性将酶液分别用pH3.0~6.0柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液,pH6.0~8.0磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液稀释,按标准方法测酶活力.1.4数据处理试验平行重复4次.采用DPSv7.55数据处理软件对试验数据的方差显著性进行分析.2结果与分析2.1酶的分离纯化黑曲霉糖化酶粗酶液经硫酸铵盐析、DEAE-52阴离子交换柱和Sephadex G-50凝胶层析后,酶蛋白得到明显纯化.糖化酶的纯化结果如表1.表1糖化酶纯化结果回收率（%）10083.3349.2117.45纯化倍数1.0010.6423.4438.42比酶活（U/mg ）1.5216.1735.6358.40总蛋白含量（mg ）78174.206123.691367.58145.60总酶活（U ）118825.3199020.3748727.058502.86纯化步骤粗酶液盐析DEAE-52Superdex-50由表1可知,纯化后酶的比活力达到了58.40U/mg,较粗酶液纯化了38.42倍.但在纯化过程中,酶活回收率达到17.45%,酶蛋白的损失主要在DEAE-52阴离子交换柱及Sephadex G-50凝胶层析.2.2酶的最适反应温度把经分离纯化的糖化酶在不同温度下测定酶的活力,以探索糖化酶最适作用温度,结果如图1.由图1可知,A.niger FJL 0801糖化酶在30~60℃的温度范围内随着温度升高,相对酶活力（相对酶活规定方法：在一定温度下所测最高酶活,其相对酶活为100%）逐渐升高,在温度为60℃时,相对酶活达最高100%.反应温度高于60℃后,相对酶活急剧下降,温度为70℃时,相对酶活只有16.57%±0.94%,当温度达到90℃时,酶活为零.因此,糖化酶最适作图1温度对A.niger FJL 0801糖化酶活性的影响梁新红等：黑曲霉糖化酶分离纯化与酶学性质研究第4期用温度为60℃.2.3酶的温度稳定性把经分离纯化的糖化酶分别在30~60℃下保温2h,然后测定其残留酶活,即为糖化酶在此温度下稳定性,结果如图2.图2 A.niger FJL 0801糖化酶的温度稳定性图3pH 值对A.niger FJL 0801糖化酶活性的影响由图2可知,糖化酶经2h 保温后,在30~60℃温度范围内其酶活均有损失,温度越高,酶活损失越多.在30℃下,保温2h 后,相对酶活（在不同温度下未保温前测定酶活力的相对酶活力为100%.然后在同样温度下保温2h,再次进行酶活力的测定,测定残留酶活与未保温酶活之比为保温后的相对酶活）为92%±3.2%；在最适作用温度60℃下,保温2h 后,相对酶活只有42%±2.8%.因此,在糖化酶应用时,应同时考虑酶的最适作用温度及应用温度的稳定性,以达到最优糖化效果.2.4酶最适作用pH 值考察在pH 值范围为3.5~7.5的经分离纯化的A.niger FJL 0801糖化酶的最适反应pH 值.结果如图3.由图3可知,该酶的的最适反应pH 值为4.5,在pH4.5~5.5有较高的活力,其相对酶活（规定0h 测定酶活值的相对酶活为100%,其它时间相对酶活为测定酶活值与0h 酶活值之比）为100%±4.13%~76.23%±3.25%.在pH 为3.5和6.5时,酶活极低,相对酶活分别只有5.1%±0.26%和6.59%±0.36%,在pH 为7.0时,检测不到酶活,酶活为0.因此,糖化酶最适作用pH 值为4.5,酶应用中,溶液pH 值应高于4.0及低于6.0.2.5酶的pH 值稳定性在pH 值为4.5时60℃保存一定时间,考察最适作用pH 值稳定性.保存时间设定为0~2h,结果如图4.由图4可知,糖化酶在最适作用pH 值下,60℃作用糊精溶液0~120min,其相对酶活从100%±3.19%降至42%±2.8%,表明在最适作用温度及pH 值下,其酶活力逐渐下降.作用时间在60min 以内,其酶活保存89%±2.56%；继续增加作用时间,其酶活保存率较低,从89%±2.56%降至42%±2.8%.因此,在糖化酶应用中,在酶的最适温度和pH 值下,应掌握好酶的作用时间.3结论黑曲霉糖化酶粗酶液经硫酸铵盐析、DEAE-52阴离子交换柱和Sephadex G-50凝胶层析后,酶的比活力达到了58.40U/mg,较粗酶液纯化了38.42倍,酶活回收率达到17.45%.图4 A.niger FJL 0801糖化酶的pH 值稳定性2011年河南科技学院学报（自然科学版）梁新红等：黑曲霉糖化酶分离纯化与酶学性质研究第4期经分离纯化的糖化酶其最适作用温度为60℃；糖化酶在30℃下,保温2h后,相对酶活为92±3.2%；在最适作用温度60℃下,保温2h后,相对酶活只有42%±2.8%.酶的的最适反应pH值为4.5,在pH4.5下,60℃作用糊精溶液作用时间在60min以内,其酶活保存89%±2.56%；继续增加作用时间,其酶活保存率较低,从89%±2.56%降至42%±2.8%.通过糖化酶的最适作用温度、pH及其稳定性研究,其酶学性质基本符合淀粉糖化工业化过程中对酶的要求,该酶比较适合应用于淀粉糖化工业.参考文献：[1]Giordano R L,Trovati J,Schmidell W.Continuous production of ethanol from starch using glucoamylase and yeast co-immobilizedin pectin gel[J].Applied Biochemistry and Biotechnology,2008,147（1-3）：47-61.[2]李旺军,方华,谢广发,等.RSM法优化Aspergillus oryzae AO-01产糖化酶条件的研究[J].食品科学,2007,28（11）：322-327.[3]孙俊良,李新华,梁新红.不同碳源对黑曲霉产糖化酶活力的影响[J].食品科学,2008,29（8）：433-436.[4]Wang Q H,Wang X Q,Wang X M.Glucoamylase production from food waste by Aspergillus niger under submerged fermentation[J].Process Biochemistry,2008,43（3）：280-286.[5]Kumar P,Satyanarayana T.Optimization of culture variables for improving glucoamylase production by alginate-entrappedThermomucor indicae-seudaticae using statistical methods[J].Bioresource Technology,2007,98（6）：1252-1259.[6]田栖静,吴炳炎,侯炳炎,等.工业酶制剂通用试验方法[M].北京：中国轻工业出版社,1994：122-127.[7]韦平和.生物化学实验与指导[M].北京：中国医药科技出版社,2003：25-26.（责任编辑：邓天福）（上接23页）3结论根据单因素试验和正交试验所得的数据,确定柠檬蜡伞多糖的最佳提取工艺为：液料比40∶1,提取温度85℃,提取时间90min,提取2次,在此条件下,多糖含量达4.412g/100g；各种因素对提取效果影响的主次顺序依次为：提取温度＞液料比＞提取时间；提取温度、提取时间对多糖得率的影响显著（P<0.05）；液料比对多糖得率的影响不显著（P>0.05）.本实验结果可为柠檬蜡伞多糖的分离纯化及活性研究提供科学的理论依据.参考文献：[1]万宇,包金刚,图力古尔.阿尔山野生商品菌类资源[J].中国食用菌,2009,28（2）：11-13.[2]戴玉成,图力古尔.中国东北野生食药用真菌图志[M].北京：科学出版社,2007：89.[3]董爱文,符星辉,黄美娥,等.野生松乳菇和野生红汁乳菇蛋白多糖的研究[J].园艺学报,2006,33（2）：408-410.[4]杨立红,黄清荣,冯培勇,等.榛蘑多糖的分离鉴定及其清除氧自由基作用研究[J].食品科学,2007,28（1）：309-313.[5]李志洲.美味牛肝菌多糖的抗氧化性[J].食品与发酵工业,2007,33（4）：49-51.[6]田金强,朱克瑞,李新明,等.阿魏菇多糖的抗氧化功能及其对果蝇寿命的影响[J].食品科学,2006,27（4）：223-226.[7]程光宇,刘俊,王峰,等.鸡腿菇子实体多糖对小鼠血液和肝脏的抗氧化作用[J].食品科学,2010,31（13）：267-272.[8]Sun Y X,Li X,Yang J C,et al.Water-soluble polysaccharide from the fruiting bodies of Chroogomphis rutilus（Schaeff.：Fr.）O.K.M iller：Isolation,structural features and its scavenging effect on hydroxyl radical[J].Carbohydrate Polymers,2010,80（3）：720-724.[9]董群,邓丽伊,方积年.改良的苯酚-硫酸法测定多醣和寡糖含量的研究[J].中国药学杂志,1996,31（9）：550-553.[10]袁志发,周静芋.试验设计与分析[M].北京：高等教育出版社,2000：467.（责任编辑：邓天福）。

黑曲霉AS3.4309产糖化酶培养条件的研究

题目：黑曲霉AS3.4309产糖化酶培养条件的研究学院：生命科学院专业：生物技术姓名：学号：指导教师：毕业设计（论文）时间：2010年3月1 日～6月25日共17 周中文摘要对黑曲霉AS3.4309产糖化酶的培养条件进行了研究。

采用糖化力较强的黑曲霉进行液态培养，在单因素实验的基础上，采用4因素3水平正交实验对其产糖化酶的培养条件进行优化。

结果表明，该菌株产糖化酶的最优培养基组成为：玉米粉15%，玉米浆7%，麸皮5%，豆粕粉2%，(NH4)2SO40.15%；培养条件为：接种量10%，发酵液起始pH4.5，30℃，200r/min，摇瓶培养4d，最高酶活力达到382.734U/ml。

关键词：黑曲霉；糖化酶；发酵AbstractThe liquid fermentation conditions for the glucoamylase production by Aspergillus niger AS3.4309 were studied. Based on single factor test, the glucoamylase production conditions were optimized by L9(34)orthogonal test. The results indicated that the optimal medium contained 12% corn starch,1%corn steep liquor,3%bran,2%soybean flour and 0.15%(NH4)2SO4.The culture conditions were as follows: inoculum size 10%,initial pH 4.5,temperature 30℃,shaker speed 200 r/min and culture time 4d. Under above conditions ,the highest glucoamylase activity reached382.734U/ml.Key words: Aspergillus niger ;glucoamylase ; fermentation目录中文摘要 (2)ABSTRACT ...................................................................................................... 错误!未定义书签。

黑曲霉发酵生产糖化酶的工艺流程

黑曲霉发酵生产糖化酶的工艺流程English Answer:Black Aspergillus Fermentation for the Production of Cellulase.Process Flow Diagram:1. Strain Selection and Preparation: Select a suitable strain of Black Aspergillus for cellulase production. Prepare the inoculum by culturing the strain in a suitable growth medium.2. Substrate Preparation: Prepare a substrate containing cellulosic materials, such as agricultural residues (e.g., corn stover, wheat straw), or industrial byproducts (e.g., paper pulp, wood chips).3. Fermentation: Inoculate the prepared substrate with the Black Aspergillus inoculum. Conduct fermentation underoptimal conditions for cellulase production, including temperature, pH, aeration, and agitation.4. Enzymatic Extraction: After fermentation, extract the cellulase enzymes from the fermented substrate using suitable extraction techniques, such as mechanical disruption, solvent extraction, or enzymatic hydrolysis.5. Enzyme Purification: Optionally, purify the extracted cellulases to improve their activity and specificity. This can be achieved through techniques such as chromatography, precipitation, or membrane filtration.6. Formulation and Application: Formulate the cellulase enzymes into a suitable product form for specific applications, such as in the paper and pulp industry, biofuel production, or textile manufacturing.Factors Influencing Cellulase Production:Substrate Composition: The composition and structure of the cellulosic substrate significantly impact cellulaseproduction. Factors such as crystallinity, surface area, and availability of cellulose and hemicellulose influence the enzyme's accessibility and efficiency.Fermentation Parameters: Optimal fermentation conditions, including temperature, pH, aeration, and agitation, are crucial for maximizing cellulase production.Strain Selection: The choice of Black Aspergillus strain plays a significant role in determining the yield and activity of cellulases produced.Nutrient Optimization: Providing essential nutrients, such as nitrogen, phosphorus, and vitamins, during fermentation supports cell growth and enzyme production.Enzyme Induction: The presence of inducers in the fermentation medium can induce higher cellulase production by Black Aspergillus. Inducers can be cellulosic materials themselves or other compounds that stimulate enzyme synthesis.Applications of Cellulases from Black Aspergillus:Pulp and Paper Industry: Cellulases are used in the pulp and paper industry to improve paper quality, brightness, and yield by breaking down cellulose fibers.Biofuel Production: Cellulases play a crucial role in the enzymatic hydrolysis of lignocellulosic biomass for biofuel production.Textile Manufacturing: Cellulases are used in the textile industry to improve fabric quality, reduce dyeing costs, and enhance the feel and appearance of fabrics.Food Industry: Cellulases are employed in the food industry to improve the nutritional value and digestibility of plant-based foods.中文回答：黑曲霉发酵生产糖化酶的工艺流程。

黑曲霉液态发酵产糖化酶条件的研究

３．ＡｎｈｕｉＳｏｌｉｄ－ｓｔａｔｅｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｆＥｎｇｉｎｅｅｉｒｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｙｇＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒ，Ｂｏｚｈｏｕ，Ａｎｈｕｉ２３６８２０，Ｃｈｉｎａ）
ｍａｔｅｒｉｌａｄｏｐｅｐｔｏｎｅ，２９℃ ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ，Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒｃａｌｌｂｅｕｓｅｄａｓｈｅｔｏｐｔｉｍａｌｃｕｌｔｕｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｆｏｒｍａｘｉｍｕｍｇｌｕｃｏａｍｙｌａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ；ｌｉｑｕｉｄ；ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ；ｇｌｕｃｏａｍｙｌａｓｅ
葡萄糖淀粉酶简称糖化酶，可水解淀粉、糊精、
黑曲霉。１．１．２实验试剂可溶性淀粉、葡萄糖、酵母膏、琼脂、蛋白胨、硫酸铜、次甲基蓝、亚铁氰化钾、氢氧化钠、硫酸亚铁、
１．１－３实验主要仪器恒温培养箱、立式自动电热压力蒸气灭菌锅、数
糖原等物质，产物为葡萄糖。在工业发酵生产酒精、有机酸、氨基酸等过程中淀粉液化后的糖化酶作用

黑曲霉纯种补料发酵法生产糖化酶及其分离浓缩技术[发明专利]

专利名称：黑曲霉纯种补料发酵法生产糖化酶及其分离浓缩技术
专利类型：发明专利
发明人：(请求不公开姓名)
申请号：CN200710029115.3
申请日：20070711
公开号：CN101343628A
公开日：
20090114
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：一种利用纯种优良高产黑曲霉菌株，以薯类淀粉为原料，采用多级补料发酵法生产糖化酶并采用过滤、絮凝、超滤多项技术结合法分离提纯糖酶的产业化生产工艺技术。

利用该技术糖化酶发酵水平可达45000u/mL、糖化酶回收率在90％以上，经浓缩后的成品糖化酶酶活力高达
130000u/mL。

申请人：广东省广宁县顺宁葡萄糖药业有限公司
地址：526341 广东省广宁县排沙镇春水顺宁葡萄糖药业有限公司
国籍：CN
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糖化酶综合实验

实验四糖化酶综合实验（一）糖化酶摇瓶实验一、实验目的掌握糖化酶摇瓶实验的基本操作。

二、实验原理摇瓶培养是实验室常用的通风培养方法，通过将装有液体培养物的三角瓶放在摇床上振荡培养，以满足生物生长、繁殖及产生许多代谢产物对氧的需求。

三、实验材料1.菌种：黑曲霉（糖化酶生产常用菌种）2.培养基：玉米粉、豆饼粉、麸皮、水3.器材：500ml三角瓶、玻片四、方法步骤1. 配制培养基玉米粉 6%，豆饼粉 2%，麸皮 1%。

补足水分，原料浸入水中。

8层纱布+牛皮纸包扎，0.1MPa下灭菌30min。

500ml三角瓶 1瓶/小组，装液量分别为100ml 2个小组、200ml 2个小组2. 接种成熟斜面，在无菌条件下，注入10ml无菌水，振荡成孢子悬浮液。

待发酵培养基灭菌后冷却到30～32℃时，分别将孢子悬浮液接入三角瓶中，接种量为2ml，做好标记3. 培养将三角瓶固定在摇床上，培养温度为31℃，转速为200rpm，培养时间为96h4. 显微镜观察菌丝形状，测量发酵液pH，测定糖化酶活力五、实验结果1.比较两种不同装液量条件下的菌体形状特征、酶活力，将结果填入分析：由于摇瓶培养的时间未达到96小时。

所以，培养瓶内壁只出现少量黑色菌落。

但相对于100ml培养基中的菌体要多一些。

说明培养基量的多少会影响菌体的生长，培养基量多则营养多更有利于菌体快速旺盛生长，增殖。

因此，观察到的菌丝相对于100ml培养基中的菌丝多而粗。

培养时间一定要遵循菌体的生长曲线时间，不能过早或过晚结束培养。

应按照各种菌体与产物的模式，适时停止培养收集产物酶。

本实验摇瓶培养才72小时，未能使菌体充分生长，即菌数少，产酶量低，或培养时间还未达到菌体大量产酶的时段，这将影响后续酶的分离提取及活力测定。

培养基应适量，在不浪费原料的同时有能使菌体快速生长，并且控制培养基的量，将减轻酶分里提取的工作量。

（二）糖化酶活力测定一、实验目的掌握糖化酶活力测定的原理与方法。

产高活性糖化酶黑曲霉的筛选工艺研究

[2] 杨丹丹 , 钱志伟 , 陈茂彬 , 等 . 高糖化力菌种的筛选及诱变育种 [J]. 中国酿造 ,2010(1):36-38.
1 实验材料
1.1 实验原料及试剂
本实验室保藏的菌株；试剂均为分析纯，由中科生物工程有限公司提供。 1.2 培养基
筛选培养基：硝酸钠 0.3%、硫酸亚铁 0.001%、硫酸镁 0.05%、磷酸氢二钾 0.1%、氯化钾 0.05%、蔗糖 3%、玉米淀粉 1.0%、琼脂 1.5% ～ 2%，自然 pH。
关键词：突变株；酶活力；筛选
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
黑曲霉（Aspergillus niger）属于子囊菌门，散囊菌纲，散囊菌目，发菌科，曲霉属的一种丝状真菌，由于其强大的蛋白分泌能力，已被广泛应用于发酵工业中 [1]。
糖化酶属于糖苷水解酶类蛋白，大多数动植物以及微生物都能在细胞中合成糖化酶，其中真核微生物如丝状真菌和酵母菌由于在生产和分泌方面的优势使其成为微生物生产糖化酶的重要来源 [2]。从 20 世纪 50 年代开始，已有大量关于黑曲霉产糖化酶的研究 [3]。
子都已死亡。选取透明圈 / 菌株比值直接最大
的菌株（紫外线照射 11 min），保存，命名为 SK-2。与最初菌株进行摇瓶对照实验，结果表明 SK-2 比原菌株的产酶能力提高 10.8%，摇瓶活力达 2 604.2 U/mL。
3.2.2 DES 诱变测量后，计算比值。诱变 0~ 15 min 时，随时间的增加，致死率上升；在 20 min 以后，致死率达到 87% 左右。选取致死率在 70%~80%、透明圈 / 菌株比值直接最大的菌株（DES 诱变处理 15min），说明诱变效果最好，突变菌株产酶最多，保存，命名为 SK-3。与最初菌株进行摇瓶对照实验，结果表明 SK-3 比原菌株的产酶能力提高 9%，摇瓶活力达 2 562.0 U/mL。 3.2.3 遗传稳定性实验由测定结果可知，经过 8 次传代实验以后，突变菌株的 8 代所表现的产酶能力较为稳定，测得的酶活在 2 336~ 2 773 U/mL。其中第 6 代菌株的酶活最高，为 2 773 U/mL，与最初菌株进行摇瓶对照实验，结果表明比原菌株的产酶能力提高 17.98%，命名为 SK-4。

山西老陈醋高产糖化酶霉菌的筛选、鉴定及产酶条件优化

山西老陈醋高产糖化酶霉菌的筛选、鉴定及产酶条件优化王佳丽;朗繁繁;陈旭峰;王如福;许女【摘要】从山西老陈醋大曲中共分离出75株霉菌,对高产糖化酶霉菌进行筛选、鉴定及产酶条件优化.结果表明,筛选出1株优良黑曲霉(Aspergillus niger)186,在麸皮固态培养基中其糖化酶、蛋白酶和纤维素酶酶活分别为3 963.79 U/g、368.80 U/g和4 476.60 U/g.糖化酶基因聚合酶链反应(PCR)测序结果显示,该酶脱氧核糖核酸(DNA)序列编码区长1 449 bp,共编码482个氨基酸,预测酶的分子质量为51.75 kDa,等电点为3.99.最佳产酶条件为:麸皮4％,硫酸铵0.5％,初始pH 值为7.0,接种量8％,装液量100 mL/250 mL,转速145 r/min,培养7 d.在此优化条件下,黑曲霉186糖化酶活力可达892.98 U/mL,是优化前的1.77倍.%75 mold strains were isolated from Shanxi mature vinegar Daqu, the molds with high-yield saccharifying enzyme were screened and identified,and the enzyme production conditions were optimized. The results showed that a dominate strain Aspergillus niger 186 was screened, and the activity of saccharifying enzyme, protease and cellulase in bran solid medium was 3 963.79 U/g, 368.80 U/g, and 4 476.60 U/g, respectively. The sequencing result of polymerase chain reaction (PCR) of saccharifying enzyme gene showed that the sequences length of coding region for DNA of glycosylase gene was 1 449 bp, which encoded a total of 482 amino acids. The calculated molecular weight and isoelectric point of the enzyme were 51.75 kDa and pH 3.99, respectively. The optimal enzyme production conditions for the A. niger 186 were bran 4％, ammonium sulfate 0.5％, initial pH 7.0, inoculum 8％, liquid loading volume 100 ml/250 ml, rotationspeed 145 r/min and fermentation time 7 d. Under the optimal conditions, the saccharifing enzyme activity could reach 892.98 U/ml, which was 1.77 times higher than that of before optimization.【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2019(038)004【总页数】6页(P100-105)【关键词】山西老陈醋;霉菌;筛选;鉴定;糖化酶;条件优化【作者】王佳丽;朗繁繁;陈旭峰;王如福;许女【作者单位】山西农业大学食品科学与工程学院,山西晋中 030801;山西紫林醋业股份有限公司,山西太原 030400;山西农业大学实验教学中心,山西晋中 030801;山西农业大学食品科学与工程学院,山西晋中 030801;山西农业大学食品科学与工程学院,山西晋中 030801【正文语种】中文【中图分类】TS201.3山西老陈醋素有“天下第一醋”的盛誉[1]，以其“酸醇厚、味清香、回味绵、质浓稠、色紫檀和久贮不变质”的特色深受广大消费者喜爱[2]。

【免费下载】两种曲霉糖化性质的比较

两种曲酶糖化性质的比较研究在国内传统的制酒行业中，由于黑曲霉含有丰富的酶系如液化酶、糖化酶、纤维素酶和蛋白酶等，自70年代大多都由米曲霉改为黑曲霉作糖化用菌种。

但在日本迄今仍在采用米曲霉做糖化菌，说明其中必有原因。

鉴于此，本实验以黑曲霉和米曲霉为研究对象，研究比较它们的液化酶和糖化酶（葡萄糖淀粉酶）生产性质。

黑曲霉是一种常见的真菌, 属于半知菌类曲霉属。

黑曲霉对营养要求较低, 只要培养基中含有碳源、氮源及磷、钾、镁、硫等元素即能生长良好。

黑曲霉可以产生许多种酶, 现已成为工业应用常见的菌种之一。

根据bigelis1989年的统计, 25种主要商品酶制剂中就有15种来源于黑曲霉仁, 。

它们分别是α-淀粉酶、过氧化氢酶、纤维素酶、葡萄糖酶、糖化酶、葡萄糖氧化酶、半纤维素酶、橙皮昔酶、脂肪酶、果胶酶、蛋白酶、单宁酶。

美国准许使用的食品工业用酶生产菌种只有黑曲霉、酵母、枯草杆菌等约20种, 其中以黑曲霉所产酶类最多。

我国酶制剂工业生产用菌种中, 黑曲霉占了17种中3种, 即黑曲霉变异株和,它们分别用于糖化酶、果胶酶和酸性蛋白酶的生产[1]。

黑曲霉酶类在工业上具有重要的作用, 例如, 柠檬酸等有机酸的发酵生产、食品及饮料加工以及用于轻化工业、纺织工业、饲料加工和废物的处理等等。

总之, 黑曲霉生产的酶制剂具有用量大、应用范围广、安全性好的特点, 已愈来愈受到人们的重视。

米曲霉的菌丝由多细胞组成，是一类产复合酶的菌株，除产蛋白酶外，还可产淀粉酶、糖化酶、纤维素酶、植酸酶等。

在淀粉酶的作用下，将原料中的直链、支链淀粉降解为糊精及各种低分子糖类，如麦芽糖、葡萄糖等；在蛋白酶的作用下，将不易消化的大分子蛋白质降解为蛋白胨、多肽及各种氨基酸，而且可以使辅料中粗纤维、植酸等难吸收的物质降解，提高营养价值、保健功效和消化率，广泛应用于食品、饲料、生产曲酸、酿酒等发酵工业。

1 材料与方法1．1材料菌种：黑曲霉UV-48；米曲霉-41．2培养基种子培养基（土豆汁培养基；察式培养基）；发酵培养基（麸皮培养基；液体深层发酵液）1．3试剂1．33%可溶性淀粉；碘液；0.01MNacl-HAC缓冲液；6NHCL；DNS试剂；葡萄糖标准溶液1．4实验仪器电热恒温水槽（上海精宏实验设备有限公司，DK-8D）；721型分光光度计（上海欣茂仪器有限公司，2C409035）；立式压力蒸汽灭菌器(上海申安医疗器械厂，LDZX-75KB)；恒温培养箱(上海实验仪器厂有限公司，DHP060)；气浴恒温摇床（太仓市实验设备厂，TCYQ）。

黑曲霉β-甘露聚糖酶的纯化和活力测定试验指导

黑曲霉β-甘露聚糖酶的纯化和活力测定实验指导（综设实验）一．实验目的及要求1、掌握黑曲霉ASP.Niger的固体发酵工艺2、掌握粗酶浸提、硫酸铵分级沉淀的原理和操作3、掌握透析原理、脱盐及透析袋的处理方法和使用4、掌握β-甘露聚糖水解各种甘露聚糖之间β-糖苷键的机制和理论5、掌握以魔芋精粉为底物DNS光度法（3,5－二硝基水杨酸法）测定发酵制品中β-甘露聚糖酶活力的操作方法二．实验原理1、微生物的β-甘露聚糖酶都是诱导酶，只有在培养基中含有β-甘露聚糖时才进行β-甘露聚糖酶的合成，产酶最适培养基除需要一定的碳氮源，还加入一定诱导物魔芋粉。

2、硫酸铵分级沉淀（盐析）原理中性盐浓度增高到一定数值时，使水活度降低，进而导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和，水化层逐渐被破坏，最终引起蛋白质分子间相互聚集并从溶液中析出。

3、透析原理、脱盐：酸性β-甘露聚糖酶相对分子质量为39000和40000，选择MWCO（切割分子量或截留分子量）14000的透析袋，透过掉分子量小于10000的蛋白质；并借助分子扩散脱盐。

4、DNS光度法测定还原糖：β-甘露聚糖酶能水解含β-1，4甘露糖苷键的甘露多糖（包括甘露聚糖、半乳甘露聚糖、葡萄甘露聚糖等），以魔芋精粉为底物主要得到含还原性端基的甘露寡糖，还原性端基与DNS试剂共热后被还原生成氨基化合物。

在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈棕（桔）红色，在520nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量，由此测定出酶的活力。

三．实验试剂和器材菌种：黑曲霉(Aspergillus niger)JXW12-1，生物工程发酵实验室保藏。

斜面培养基:马铃薯20.0%，蔗糖2.0%，琼脂 2.0%，pH自然，此培养基用于菌种保藏、斜面种子和平板分离。

二级种子培养基：250 mL三角瓶装麸皮10g，水12mL，121℃灭菌30 min；接种一菌耳斜面种子，32±1℃静置培养96h，其间翻曲2～3次。

黑曲霉诱变产糖化酶

诱变黑曲霉提高糖化酶的生物合成摘要现今，筛选黑曲霉主要通过物理和化学突变。

用溴化乙錠和甲基磺酸乙脂（EMS）轮流处理亲代菌株。

这株突变菌株M4能产生更多的糖化酶。

简介糖化酶时淀粉工业中最重要的一种酶。

它能将淀粉水解成葡萄糖。

葡萄糖在各种食品行业中是一种必要的合成原料。

糖化酶广泛地应用于酿造，造纸，食品，制药，纺织行业中。

黑曲霉通过液态或固态发酵生产糖化酶中，食物残渣也能被利用到。

同时，食物残渣也能用于葡萄糖和啤酒行业中。

糖化酶是一种微生物的胞外酶，并且，它典型的性质是水解a-1，4和a-1，6糖苷键，通过其他酶作用于淀粉合成糖类。

糖化酶能水解非还原端的a-1，4葡萄糖苷键。

糖化酶能被成倍的生成，通过引起野生菌株突变。

据报道，黑曲霉的突变菌株能更好地生产糖化酶。

突变菌株产糖化酶的特性能更好地影响对生淀粉的处理。

生产糖化酶的突变菌株在r-射线的处理下，亲代菌株的特性被改善并且产物乙醇的产量也被提高了。

这个突变黑曲霉是用联合诱变处理的，它产的糖化酶能将麦芽糊精转变为葡萄糖。

多重的轮流突变对葡萄糖的生成有着很好的影响。

糖化酶的比活度和它的热稳定性被提高。

并且，结果通常是提高葡萄糖产量。

对比几种黑曲霉突变株的酶产量和它们的特性，相比于野生株，突变株能更高水平地生产糖化酶。

但是，不管使用怎样的菌株，对所有糖化酶来说，酶的组成和特性都是类似的。

Britly进行本研究的目的是为了证明以小颗粒的形式增长有利于糖化酶生产，而大颗粒的形式则降低了糖化酶的生产量，导致结果不匹配。

现今研究这些的目的是为了激发菌株的潜能，通过化学或者无力突变来增加糖化酶的产量。

原料和方法改善菌株：黑曲霉能通过紫外线和诱变剂得以改善。

用溴化乙錠和甲基磺酸乙脂轮流处理亲代菌株。

两种诱变剂同时使用。

黑曲霉发酵生产α-淀粉酶微生物实验报告

黑曲霉发酵生产α-淀粉酶前言：α-淀粉酶能随机地作用于淀粉的非还原端，生成麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，所得产物的还原性末端葡萄糖单位碳原子为α构型，同时该酶能使淀粉浆的粘度下降，因此又称为液化酶。

耐酸性α-淀粉酶是在酸性条件下水解淀粉的酶类，其最适pH在4.0左右。

自从日本研究者YasujiMinoda等人用黑曲霉生产耐酸性α-淀粉酶以来，各国都对耐酸性α-淀粉酶进行了研究。

通过黑曲霉发酵生产α-淀粉酶的实验过程，熟悉发酵罐的构造和使用方法。

初步了解发酵生产的原理和常规发酵参数的检测方法。

整个实验按照“菌种的培养空消实消接种发酵放罐”的发酵过程进行。

在整个发酵的过程中，每隔6h取一次发酵液样品检测其pH值、酶活、残糖量及生物量四个生理指标。

最后将所测数据进行整理、分析，可以得出整个发酵过程各物质的生成和消耗的变化规律以及如何调整培养条件来提高发酵生产的效率，对大工业生产具有重要的指导意义。

正文：一、实验目的1．了解发酵罐的几大系统组成，即空气系统、蒸汽系统、补料系统、进出料系统、温度系统、在线控制系统。

2．掌握发酵罐空消的具体方法及步骤3．掌握发酵罐进料及实消的具体方法及步骤4．掌握发酵罐各系统的控制操作方法二、实验原理1.蒸汽系统：蒸汽发生器：主要用于灭菌，分为自动加水和手动加水两种方式。

2.温度系统：(1) 夹套升温：蒸汽通入夹套。

(2) 夹套降温：冷水通入夹套，下进水，上出水。

(3) 发酵过程自动控温系统3.空气系统：空气除菌设备：空压机贮气罐油水分离器空气流量计空气过滤器发酵罐4.补料系统：补加培养基、消泡剂、酸碱等。

5.在线控制系统6.进出料系统：进料口（接种口）、出料口（取样口）7.管道：包括水流通管道和气流通管道水流通：冷却用水：水经过进水管道发酵罐夹套出水口保温用水：关闭进出水管道阀门（水注满后）进入夹套气流通：蒸汽发生器蒸汽管道空气过滤器/发酵罐进入罐内空气：空压机贮气罐油水分离器空气流量计空气过滤器发酵罐三、方法与注意事项㈠原则1.通蒸汽前先关闭所有阀门2．粗过滤器不空消也不实消，要定期处理，所以必须关闭通向粗过滤器的阀门。

黑曲霉生产糖化酶及酶活测定

糖化酶发酵、提取及活力测定

糖化酶的制备工艺流程

黑曲霉生产糖化酶及酶活测定

黑曲霉诱变产糖化酶

黑曲霉 糖化酶的生产流程设计方案

黑曲霉固态发酵产糖化酶的研究

黑曲霉糖化酶分离纯化与酶学性质研究

黑曲霉AS3.4309产糖化酶培养条件的研究

黑曲霉发酵生产糖化酶的工艺流程

黑曲霉液态发酵产糖化酶条件的研究

黑曲霉纯种补料发酵法生产糖化酶及其分离浓缩技术[发明专利]

糖化酶综合实验

产高活性糖化酶黑曲霉的筛选工艺研究

山西老陈醋高产糖化酶霉菌的筛选、鉴定及产酶条件优化

【免费下载】两种曲霉糖化性质的比较

黑曲霉β-甘露聚糖酶的纯化和活力测定试验指导

黑曲霉诱变产糖化酶

黑曲霉发酵生产α-淀粉酶微生物实验报告

黑曲霉糖化酶的生产流程设计方案