黄瓜种子DNA快速提取新方法及其在SSR检测种子纯度中的应用

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SSR标记荧光毛细管电泳在种子检测中常见问题分析

SSR标记荧光毛细管电泳在种子检测中常见问题分析李巧英（山西省种业发展中心，太原030006）摘要：SSR分子标记荧光毛细管电泳在农作物种子质量检测中常用于种子真实性检测、种子纯度鉴定和指纹数据库的构建。

试验过程中模板DNA浓度、特异峰型的统计分析以及仪器设备运行和维护、试验结果与指纹数据库的比对等关键环节都直接影响待测样品的结果判定。

就检测中遇到的问题进行分析，并提出相应的解决方法，以期为农作物种子质量检测荧光毛细管电泳技术平台提供参考。

关键词：SSR标记；荧光毛细管电泳；种子检测；问题；分析分子标记技术是近年来发展较快的基因检测技术，随着新标记方法的开发和试验技术的改进，在基因水平上检测农作物种子信息逐渐成为监控种子质量的一个重要手段。

由于分子标记法不受自然条件和表现性状的约束，实现了种子品种遗传信息室内快速检测，受到大家的青睐。

SSR作为第2代分子标记方法，是一种共显性标记，具有重复性好、等位变异多、数据分析简便、易操作等优点，在农作物种子质量检测中被广泛使用。

荧光毛细管电泳技术将荧光检测的高灵敏度和毛细管电泳的高效性结合，利用电泳和电渗流的电动力学原理，在毛细管中灌满胶分离PCR产物，检测荧光信号，数据软件分析系统将其转化成峰图，显示试验结果。

该技术自动化程度高，检测通量高，试验操作简单，数据统计程序化，避免人为估算的主观性，结果精确到1bp[1]，直接显示扩增产物片段的大小，实现了指纹图谱与碱基序列长短之间的对应转换，易于实验室间结果比对，常用GeneMapper 和GeneMarker分析SSR扩增片段[2]。

本文就试验中遇到的荧光信号强度、特异峰型的统计分析以及毛细管电泳仪运行和维护、试验结果与数据库比对等问题进行分析，为SSR分子标记荧光毛细管电泳检测农作物种子质量试验技术标准化提供参考。

拟，为所有专业方提供可控管、无破坏性、性价比高、低风险并允许反复运用的可行性方法。

BIM技术可以有效地提高施工技术水准，预防施工事故，减少施工成本浪费并缩短时程，强化施工过程中决策、控管能力。

利用SSR技术对黄瓜新品种津优35号进行种子纯度鉴定

纯度鉴定一直是各育种单位采用的方法，但是田间种子纯度鉴定需要等到结瓜期才能看到结果，期长、作周工
量大；受环境因素影响，致表型特征会有一定程度易导偏差；者由于不可抗拒的自然因素，连阴雨或冰雹或如
收稿日期：２１ —Ｏ～１ＯＯ４６
ＴｈｔｂｉｈｎｆＴｉｓｅＣｕｔｒｆＳｂｒｅｌｎｔｍｏｅｏｉｐｓＬ．ｅＥｓａｌｍｅｔｏｓｕｌｕｅｏｕｍｅｇｄＰａｔＰｏａｇｔｎＣｒｓｕｓ
等恶劣天气，导致观察不到结果。以上种种不足都直接
影响到了种子的及时推广和销售，成种子积压。造
分子标记技术的快速发展为种子的纯度鉴定提供
第一作者简介：张桂华（９２）女，士，１７，博现从事黄瓜分子标记辅
摘要：利用天津科润公司建立并优化了的黄瓜种子纯度鉴定技术体系，筛选黄瓜新品种津优３号特异分子标记。试验选用８５０多对ＳＲ引物中，２对引物（５号和２２号）Ｓ有８１在杂交种和
亲本间表现多态性，杂交种条带为父母本的互补型，且特异性强，适合做杂交种纯度鉴定。用这２对引物对津优３５号５Ｏ粒种子进行了ＳＲ鉴定。结果表明：２引物鉴定结果相同，Ｓ这对且与田间
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ＡｂｔａｔＩｉｅｙｉｐｏａｔｔｅｔｒｔｎａｄｐｙｏｅｅｉｔｎｏｑａｉｌｎｓｔａｉｓｅｃｌｕｅｏｔｍｏｅｏｓｒｃ：ｔｓｖｒｍｒｔｎｏｒｓｏａｉｎｈｔｒｍｄａｉｆａｕｔｃｐａｔｈｔｔｓｕｕｔｒｆＰｏａｇｔｎｏｏＣｒｓｓＩ．ｗａｓａｌｈｄＴｈｘｅｉｅｔｌｒｓｌｓｓｗｅｈｔｔｅｏｔａｙｔｔｒｌａｉｎｆｉｓｅｃｌｕｅｏｉｐｕｓｅｔｂｉｅ．ｓｅｅｐｒｍｎａｅｕｔｈｏｄｔａｈｐｉｌｗａｏｓｅｉｉｔｏｏｔｕｕｔｒｆｍｚｓ

SSR分析技术的原理及案例介绍

SSR分析技术的原理及案例介绍微卫星标记（microsatellite），又称为短串联重复序列(short tandem repeats，STR)或简单重复序列（simple sequence repeats，SSR），是均匀分布于真核生物基因组中的简单重复序列，由2~6个核苷酸的串联重复片段构成。

由于重复单位的重复次数在个体间呈高度变异性并且数量丰富，因此微卫星标记的应用非常广泛。

微卫星位点通常通过PCR扩增，扩增产物通过电泳分析，并根据大小分离等位基因进行检测。

由于单个微卫星位点重复单元在数量上的变异，个体的扩增产物在长度上的变化就产生长度的多态性，这一多态性称为简单序列重复长度多态性(SSLP)，每一扩增位点就代表了这一位点的一对等位基因。

由于SSR重复数目变化很大，所以SSR标记能揭示比RFLP（限制性内切酶片段长度多态性）高得多的多态性，这就是SSR标记的原理。

技术特点（1）数量丰富，覆盖整个基因组，揭示的多态性高；（2）具有多等位基因的特性，提供的信息量高；（3）以孟德尔方式遗传，呈共显性（如果双亲的性状同时在F1个体上表现出来，即一对等位基因的两个成员在杂合体中都表达的遗传现象称为共显性），可鉴定出纯合子和杂合子；（4）实验重复性好，结果可靠。

每个位点由设计的引物顺序决定，便于不同的实验室相互交流合作开发引物。

应用范围（1）遗传杂交育种（2）绘制染色体遗传图谱（3）DNA指纹和品种鉴定（4）种质资源保存和利用（5）基因组关联分析经典案例案例一题目：SSR linkage map construction and QTL identification for plant height and ear height in Maize（玉米SSR连锁图谱构建与株高及穗位高QTL定位）主要技术：SSR分型技术流程：文章摘要：用玉米自交系组合R15×掖478的F2群体构建连锁图谱，并通过1年2点随机区组试验设计，考察玉米229个F2：4家系成株期的株高和穗位高。

基于SSR分子标记的普通丝瓜杂交种子纯度鉴定

基于SSR分子标记的普通丝瓜杂交种子纯度鉴定普通丝瓜（Cucumis sativus L.）是一种重要的瓜类蔬菜，其品种杂交育种是实现丝瓜生产高产、优质和抗逆的重要手段之一。

种子纯度是种子质量的重要指标之一，直接关系到杂交种和品种的推广和应用。

目前，种子纯度的鉴定主要依赖于形态特征和生物学特性。

随着分子生物学技术的发展，分子标记技术已经成为种子纯度鉴定的重要手段之一。

SSR（Simple Sequence Repeat）分子标记是一种微卫星分子标记，具有多态性高、稳定性好、重复性强等特点，广泛应用于植物种质资源鉴定、遗传多样性分析、遗传图谱构建、种质资源DNA指纹图谱鉴定等领域。

本文旨在利用SSR分子标记技术对普通丝瓜杂交种子纯度进行鉴定，为丝瓜种子质量的评价和品种杂交育种提供参考。

一、材料与方法1.1 实验材料本试验选用了3份普通丝瓜杂交种子样品进行研究，分别为A、B和C。

A和B为纯种杂交种子，C为混杂种子。

1.2 DNA提取与PCR扩增采用CTAB法提取普通丝瓜种子的总DNA。

PCR扩增选取了10对SSR引物进行扩增反应，扩增产物通过聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。

1.3 数据分析PCR扩增产物的SSR分型数据采用二进制矩阵进行编码，分别为1（存在）和0（缺失）。

利用NTSYSpc软件进行聚类分析和构建聚类树，计算遗传相似系数，绘制聚类图。

二、结果与分析2.1 SSR-PCR扩增结果通过SSR引物进行PCR扩增得到了普通丝瓜种子的SSR位点多态图谱。

以其中的一对引物SSR-1为例，扩增产物呈现出了多态性特征，其中A和B纯杂交种子的扩增产物呈现出了不同的条带模式，而混杂种子C则表现出了A和B的扩增产物的混合模式（图1）。

2.2 遗传相似系数及聚类分析2.3 种子纯度鉴定通过SSR分子标记技术对普通丝瓜杂交种子进行纯度鉴定，得到了A和B两个单独的聚类分支，而混杂种子C则独立成一类。

这表明，SSR分子标记技术可以有效地区分普通丝瓜杂交种子的纯度，对种子纯度进行可靠的鉴定。

利用SSR分子标记技术快速鉴定津甜100甜瓜种子纯度

收稿日期：2020-05-08；修回日期：2020-09-08基金项目：天津市科技计划项目（17ZXBFNC00200）作者简介：武云鹏，男，助理研究员，研究方向为甜瓜遗传育种。

E-mail ：*********************通信作者：张若纬，女，副研究员，研究方向为甜瓜遗传育种。

E-mail ：***********************甜瓜（Cucumis melo L.）是葫芦科黄瓜属一年生蔓生植物，香甜可口，肉质酥脆多汁，深受消费者喜爱。

随着人们生活水平的提高，对高品质甜瓜的需求也逐年增加[1]，因此促进了甜瓜产业的快速发展。

众所周知，市场销售的甜瓜种子大多数为杂交种，在甜瓜杂交种商品化繁殖过程中，由于去雄不彻底或人工失误掺入杂种，使得杂交种纯度下降，给种植户造成不可挽回的经济损失，因此也制约了产业的快速发展[2]。

当前，对于甜瓜杂交种纯度的鉴定多采用田间形态鉴定，不仅费工、耗时，还易受环境等外界因素的影响，从而降低鉴定结果的可靠性[3]。

综上所述，制定一套简单、快速、准确的甜瓜杂交种种子真实性的检测方法，对提高种子质量、降低种子检测成本和缩短检测周期具有重要意义。

近些年来，随着分子生物学技术不断发展，DNA 分子标记技术已广泛应用于作物杂交种子纯度鉴定工作中[4]，前人已经将RAPD 标记应用于甜瓜品种鉴定中，但多数RAPD 标记表现为显性，不能区分杂合子[5]。

而SSR 标记为共显性标记，对DNA 质量要求较低，能很好地区分杂交种与父、母本条带的差异，因此SSR 标记可广泛应用于甜瓜杂交种纯度和真实性的鉴定工作中。

前人研究结果显示，应用SSR 标记技术鉴定甜瓜杂交种真实性主要应用于厚皮甜瓜中，而在薄皮甜瓜中还少有报利用SSR 分子标记技术快速鉴定津甜100甜瓜种子纯度武云鹏，李肯，张若纬，彭冬秀（蔬菜种质创新国家重点实验室·天津市蔬菜遗传育种企业重点实验室·天津科润农业科技股份有限公司蔬菜研究所天津300381）摘要：利用SSR 分子标记技术鉴定甜瓜种子纯度，是甜瓜种子生产、销售过程中的关键环节，对甜瓜产业发展具有重要意义。

SSR法鉴定黄瓜品种津优406的种子纯度

3结论与讨论试验结果表明,在大喇叭口期亩追施常规施肥量的0.05%的力谋仕增效尿素,具有提高玉米产量、提高玉米氮肥利用率、增加玉米净收入、提高产投比的作用。

此结论只是一季的试验数据分析,其效果有待以后继续试验验证。

参考文献[1]惠振宝,史金立.力谋仕增效尿素提高氮肥利用率效果研究[J].现代化农业,2017(12).[2]史金立,惠振宝.力谋仕增效尿素在玉米上的应用效果[J].现代化农业,2016(8).[3]赵凯.力谋仕增效尿素在玉米上的应用效果研究[J].基层农技推广,2016(9).[4]盖亚波.玉米应用力谋仕田间试验结果初报[J].农民致富之友,2015(1).[5]姬朝峰.渑池县氮肥增效剂“力谋仕”玉米田间试验总结[J].河南农业,2015(9).黄瓜也称胡瓜、青瓜,是葫芦科黄瓜属植物,由西汉时期张骞出使西域带回中原地区。

黄瓜果实呈油绿色或翠绿色,表面分布有柔软的小刺。

我国各地普遍栽培,且许多地区均有温室或塑料大棚栽培,因为黄瓜为我国的主要菜蔬之一[1],所以黄瓜种子质量需进行严格把控。

种子纯度鉴定是保证种子质量的关键环节[2]。

以往常规的纯度鉴定都是在结瓜期由专家到田间观察品种的特征特性及其一致性,但是需要占用土地,并且鉴定周期长、工作量大,容易受季节、栽培措施及环境因素的影响。

随着育种进程的加快,SSR 法鉴定黄瓜品种津优406的种子纯度基金项目:天津市自然科学基金重点项目(16JCZDJC33200);天津市蔬菜现代化产业技术体系创新团队(ITTVRS2017001);青年科研人员创新研究与试验项目(2018006)。

作者简介:赵海燕(1990-),女,本科,研究实习员,主要从事黄瓜分子标记辅助育种研究。

通讯作者:刘楠。

E-mail:liunan_820427@赵海燕李静刘楠崔兴华杜胜利崔洪宇房文文(天津科润黄瓜研究所/蔬菜种质创新国家重点实验室/天津市蔬菜遗传育种企业重点实验室天津300192)摘要:黄瓜是我国重要的蔬菜作物之一,可四季栽培,周年供应,同时其品种资源也较为丰富。

EST-SSR标记在黄瓜F_1种子纯度鉴定中的应用

叶片基因组ＤＡ。称取黄瓜叶片于预冷的研钵中，Ｎ加入
液氮研磨成粉末，移至一２冷的１５ｍＩ离心管转ＯＣ预．
态性，并得出ｌ个黄瓜品种问遗传多样性值在０１～１．８
第一作者简介：（９２）女，读硕士，从事黄瓜杂交种子卢锐１８一，在现
为种子的纯度鉴定提供了一种更为快速、效的方高法［，中ＳＲ标记技术是最为简便、其Ｓ可靠的鉴定方法
之一。
瓜ＥＴ或ｅＮＡ序列，过ＳＲＴ（ｔ：／ｗ．ＳＤ通ＳＩｈｔ／ｗｗｐｇａｍｅｏｇｇａｅｅｓａｈｓｓｒＯ）线搜索具有ｒｍ．ｒ／ｒｎｎ／ｅｒｅｓｔ１在ｃ／ＯＳＲ序列的ＥＴ序列。根据侧翼保守序列，ＳＳ应用引物设
引物设计原则为：ＳＥＴ序列长度大于１０ｂ；０ｐ引物长度为１￣２ｐＧ８５ｂ；Ｃ含量４０Ａ～６；Ｃｏｂ。同时，免错配、避引物二聚体或发夹结
构的形成ｕ。共设计１２对ＥＴＳＲ引物，０Ｓ－Ｓ引物由上
计软件Ｐｉｅｒｍｅ５０（ｉ６设计合成引物］ｒｒｅｉ．，）ｇｍＰｒｌｏ。
ＳＲ标记由于具有数量丰富、Ｓ多态性高、遗传上呈共显性、实验操作简单、结果稳定可靠、引物序列易交流等优点，已成为杂交种子纯度鉴定的一种理想分子标记。ＥＴＳＲ标记是基于表达序列标签数据信息，Ｓ－Ｓ并结合ＳＲ标记特点开发出的一种新型分子标记。具有Ｓ

黄瓜新品种京研冬美9_号的SSR_纯度鉴定

中国瓜菜2023，36（6）：23-27收稿日期：2022-06-10；修回日期：2023-01-29基金项目：北京市农林科学院蔬菜研究中心改革与发展项目（KYCX202005-02）；北京市农林科学院科技创新能力建设专项（KJCX20230214；KJCX20200113）作者简介：孟淑春，女，副研究员，主要从事蔬菜品种纯度分子鉴定研究。

E-mail ：*********************通信作者，张峰，男，高级农艺师，主要从事黄瓜遗传育种研究。

E-mail ：*******************黄瓜（Cucumis sativus L.）别名胡瓜，是葫芦科黄瓜属黄瓜亚属中的一个种，一年生攀缘性草本植物，染色体数2n =2x =14，多为雌雄同株，少量其他性型。

雄花常数朵在叶腋簇生；雌花单生或稀簇生。

黄瓜果实棒状、长圆形或圆柱形，嫩果呈绿色、黄色、白色等，富含蛋白质、维生素C 、尼克酸、胡萝卜素、铁、磷、钙等营养成分。

黄瓜通常以嫩果供食用，蒸炒炖煮、凉拌生食或加工腌制皆可。

黄瓜的热量仅67kJ ·100g -1，是低热量的蔬菜。

黄瓜含有丙醇二酸，又名羟丙二酸，在不妨碍糖类物质向人体提供热量和能量的情况下，能够抑制糖类在人体内转化为脂肪，因此，有减肥健美的功效[1]。

黄瓜茎蔓可入药，能镇痉、祛痰、消炎，对降血压、降胆固醇有疗效。

大约3000年前，印度开始栽培黄瓜，后经黄瓜新品种京研冬美9号的SSR 纯度鉴定孟淑春1，刘立功1，宋晓玉1，2，宋顺华1，张峰1（1.蔬菜生物育种全国重点实验室/国家蔬菜工程技术研究中心·农业农村部蔬菜种子质量监督检验测试中心·北京市农林科学院蔬菜研究所北京100097；2.安徽农业大学园艺学院合肥230036）摘要：种子纯度鉴定是保证种子质量的关键环节。

田间小区种植鉴定法，周期长、费用高，无法满足种子贸易中快速鉴定的要求，且受环境影响大，结果不够准确。

生物技术用于黄瓜遗传育种

生物技术用于黄瓜遗传育种张圣平1　顾兴芳1　许文连2　王烨1(1中国农业科学院蔬菜花卉研究所,北京　100081;2山东省成武县蔬菜局,成武　274200)摘　要:　“十五”期间,生物技术在黄瓜遗传育种上的应用更加广泛,分子标记辅助育种、单倍体育种以及黄瓜基因工程改良取得了重要进展。

本文综述了黄瓜基因分子标记、遗传图谱构建、基因定位、基因克隆与表达、品种DNA 指纹图谱分析、分子技术鉴定病害、单倍体和三倍体培养、遗传转化体系建立及基因工程改良方面的最新进展,并讨论了存在的问题和前景。

关键词:　生物技术　黄瓜　遗传育种Application of Biotechnology on G enetics and B reeding of CucumberZhang Shengping Gu Xingfang Xu Wenlian Wang Ye(1I nstit ute of V egetables and Flowers ,Chinese A cadem y of A g ricult ural S ciences Bei j i ng 100081;2V egetable B ureau of Chengw u Count y in S handong Province ,Chengw u 274200)Abstract :　The application of biotechnology on genetics and breeding research of Cucumber during "The Tenth Five 2years Plan"went deeper into.Molecular marker 2assisted breeding ,haploid breeding and genetic engineering improvement in cucumber were gained significant development.The recent progress of gene molecular markers ,mo 2lecular genetic map construction ,gene locating ,gene clone and expression ,DNA fingerprinting analysis ,identifying diseases using molecular technology ,haploid and triploid culture ,genetic transformation system and genetic engi 2neering improvement in cucumber were summed up.And the problems to be solved and prospects of were discussed.K ey words :　Biotechnology Cucumber Genetics and breedieg “十五”期间,黄瓜育种研究首次被列入国家“863”项目,育种方法和技术得到了快速发展。

应用SSR_分子标记分析烟台地区黄瓜种质资源遗传多样性

中国瓜菜收稿日期：2023-04-23；修回日期：2023-08-15基金项目：国家重点研发计划项目子课题（2018YFD1000805-03）；中国农业大学烟台研究院政策引导性项目（Z202206）；中国农业大学本科生URP 项目（U2022067）作者简介：满孝源，男，在读本科生，研究方向为设施农业科学与工程。

E-mail ：*****************通信作者：陈晓峰，男，副教授，研究方向为作物遗传育种。

E-mail ：*****************黄瓜（Cucumis sativus L.，2n =14）是葫芦科黄瓜属一年生蔓生植物，是一种世界性蔬菜，又名王瓜、胡瓜、青瓜，在果菜类蔬菜中具有很高的地位[1]。

我国是黄瓜生产大国，其栽培面积占世界黄瓜栽培总面积的一半以上，产量和规模均居世界第一位。

山东黄瓜地方品种由于栽培历史较久和引入途径不同，加之山东省不同地区气候差异较大，在长期自然和人工定向选择下，形成类型多、品种资源丰富的特点[2-3]。

以白黄瓜和地黄瓜为代表的烟台地方黄瓜，因其具有品质优良、营养丰富、口感鲜脆等特点，市场地位不断提高[4-5]。

随着市场需求扩大，黄瓜栽培及其选育品种逐渐增多，原优良品种在选育过程中纯度逐渐降低，在生产中重名现象普遍，烟台地区种质资源研究相对落后，导致优质种质流失严重[6]。

21世纪以来，分子生物学得到了突飞猛进的发展，越来越多的分子标记技术相继出现，并逐渐广泛应用于作物遗传育种、植物亲缘关系鉴别、基因库构建等各个领域，例如RFLP 、ISSR 、RAPD 、AFLP 、SSR 等[7-10]。

SSR （Simple Sequence Repeat ）称应用SSR 分子标记分析烟台地区黄瓜种质资源遗传多样性满孝源，王湘懿，张凯歌，胡凌，陈晓峰（中国农业大学烟台研究院山东烟台264670）摘要：以22份黄瓜为材料，利用SSR 分子标记技术进行遗传分析，构建22份黄瓜种质的指纹图谱和分子身份证。

SSR分子标记技术在生物遗传学领域的应用

SSR分子标记技术在生物遗传学领域的应用杨文柱;焦燕【摘要】SSR(simple sequence repeats)分子标记技术作为一种新世纪遗传学研究工具,已被广泛应用于生物遗传多样性、遗传图谱构建、基因定位、分子标记辅助育种、种质真伪和纯度鉴定等研究中,成为生物资源利用、开发和保护常用的方法和技术.%As a genetic research tool in the new century, SSR molecular markers technique has been widely adopted in the research on diversity of biogenetics, construction of the genetic linkage map, location of genes, molecular mark-assisted selection and purity controlling of cultivars, it has been commonly used for the utilization, development and protection of biological resources.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2012(040)002【总页数】3页(P640-642)【关键词】SSR;分子标记;生物遗传学;应用【作者】杨文柱;焦燕【作者单位】内蒙古农业大学农学院,内蒙古呼和浩特010019;内蒙古师范大学化学与环境科学学院,内蒙古呼和浩特010022【正文语种】中文【中图分类】Q756简单重复序列(simple sequence repeats，SSRs)又称短串联重复序列(short tandem repeats，STRs)或微卫星DNA(Microsatellite DNA)，主要由串联重复单元组成，每个单元长度一般在1～6 bp之间。

SSR分子标记技术在种子纯度检测中的应用

２．２．２ＰＣＲ扩增反应体系。通常ＰＣＲ扩增在１０Ｌ反应体
积下进行．包含ＤＮＡ聚合酶０．２Ｕ、ＳＳＲ标记弓１物１Ｉｘｍｏｌ、模板ＤＮＡ２－１０ｎｇ、ｄＮＴＰｌｔｘｍｏｌ、１０倍ＰＣＲ反应液（含ＭｇＣ１２）
分重要。
中ＤＮＡ，提取的ＤＮＡ质量应符合ＰＣＲ扩增的要求，常见的ＤＮＡ提取方法主要有以下几种：ＣＴＡＢ提取法、ＳＤＳ提取法、磁珠提取法、碱煮法。ＣＴＡＢ提取法：ＤＮＡ质量高、得率高，储存时间长，成本低，但程序复杂；ＳＤＳ提取法：ＤＮＡ质量高，储存时间长，程序较复杂；磁珠提取法：ＤＮＡ质量高、得率较低，储存时间长，程序较简单；碱煮法：质量较低，存储
现代农业科技
２０１７年第ｌ３期
农艺学
ＳＳＲ分子标记技术在种子纯度检测中的应用
刘奇燕
（安徽荃银高科种业股份有限公司，安徽合肥２３００００）
摘要概述了ＳＳＲ分子标记原理和特点，阐述了ＳＳＲ分子标记鉴定杂交水稻种子纯度技术要点，对其应用前景进行了展望，以期为该技术在种子纯度检测中的应用提供参考。
增强、非特异性扩增少、弓１物扩增稳定、重复性好）。

基于SSR_分子标记的‘汇丰2_号’辣椒杂交种子纯度和真实性鉴定

收稿日期：2023-10-03基金项目：国家自然科学基金（32072598）；广东省教育厅重点学科建设-基础研究重大项目（2021ZDJS004）；贵州省毕节市科学技术揭榜挂帅项目（毕科合重大专项〔2022〕3号）；广州市科技计划项目（2023B03J1082）；广东省农业厅种业振兴与科技兴农项目（2022-NPY-00-024）作者简介：赵威（1999-），男，在读硕士生，研究方向为蔬菜生物技术及分子育种，E-mail：*****************通信作者：吴智明（1981—），男，博士，教授，研究方向为蔬菜生物技术与遗传育种，E-mail：wuzm2012@广东农业科学2023，50（11）：59-65Guangdong Agricultural SciencesDOI:10.16768/j.issn.1004-874X.2023.11.006赵威，徐晓美，徐小万，衡周，王恒明，陈金金，吴智明. 基于SSR 分子标记的‘汇丰2号’辣椒杂交种子纯度和真实性鉴定［J］. 广东农业科学，2023，50（11）：59-65.基于SSR 分子标记的‘汇丰2号’辣椒杂交种子纯度和真实性鉴定赵威1，徐晓美2，徐小万2，衡周2，王恒明2，陈金金1，吴智明1（1. 仲恺农业工程学院园艺园林学院，广东广州 510225；2. 广东省农业科学院蔬菜研究所/广东省蔬菜新技术研究重点实验室，广东广州 510640）摘要：【目的】‘汇丰2号’辣椒为杂交一代新品种，具有中早熟、抗病性强、耐储运和品质佳等特性，深受农户和消费者喜爱。

为保障种子质量，拟建立一套快速、简便的种子纯度和真实性鉴定方法。

【方法】基于辣椒基因组已公开的SSR 分子标记资源，以‘汇丰2号’父、母本为材料，筛选多态明显、条带清晰且扩增稳定的SSR 标记，对‘汇丰2号’杂交种子进行纯度鉴定，并结合田间形态鉴定验证分子标记鉴定的准确性。

此外，利用筛选出的SSR 标记对‘粤红1号’、‘汇丰1号’、‘汇丰2号’和‘汇丰5号’4个品种进行真实性鉴定。

种子企业应用SSR分子标记鉴定棉花品种真实性和种子纯度

利用SSR分子标记鉴定棉花品种真实性和种子纯度在企业中的应用黄殿成1王飞2刘建功1,2 刘金海1 周关印1,2 李根源1 张西岭1(1中国农业科学院棉花研究所，河南安阳455001；2中棉种业科技股份有限公司，郑州450001)中文摘要：本文阐述利用SSR分子标记鉴定品种真实性和种子纯度的基本原理，剖析中棉种业科技股份有限公司利用SSR分子标记鉴定品种真实性和种子纯度的实践过程，指出利用SSR分子标记鉴定品种真实性和种子纯度在企业中发挥的作用。

品种真实性和种子纯度是种子质量最重要的指标。

传统的通过田间小区种植利用形态特征鉴定种子纯度的方法，具有周期长、易受环境和人为因素影响、属于事后控制等缺陷，与种子企业需要快速检验结果的要求不相适应，难以有效消除种子企业的质量风险。

近年来，随着分子生物学技术的迅速发展，利用SSR分子标记鉴定品种真实性和种子纯度的技术逐步成熟，中棉种业科技股份有限公司（以下简称中棉种业）在利用分子标记鉴定棉花品种真实性和种子纯度的反复实践中，逐步形成了自己的检验规程，在企业经营中发挥了较好作用。

1 利用SSR分子标记鉴定品种真实性和种子纯度的基本原理生物的基因组中，特别是高等生物的基因组中含有大量的重复序列，根据重复序列在基因组中的分布形式可将其分为串联重复序列和散布重复序列。

其中，串联重复序列是由相关的重复单位首位相连、串联排列而成的。

目前发现的串联重复序列主要有两类：一类是由功能基因组成(如编码rRNA和组蛋白基因)；另一类是由无功能的序列组成。

根据重复序列的重复单位的长度，可将串联重复序列分为卫星DNA、微卫星DNA、小卫星DNA等。

微卫星DNA又叫简单重复序列，指的是基因组中由1～6个核苷酸组成的基本单位重复多次构成的一段DNA，广泛分布于基因组的不同位置，长度一般在200bp以下。

研究发现，微卫星中重复单位的数目存在高度变异，这些变异表现为微卫星数目的整倍性变异或重复单位序列中的序列不完全相同，可表现出多个位点的多态性。

利用SSR技术鉴定西瓜甜瓜种子纯度

利用SSR技术鉴定西瓜甜瓜种子纯度SSR技术是单态重复序列（simple sequence repeat）技术的缩写，也称微卫星分析技术。

它是一种分子生物学技术，可以通过检测DNA序列中的微卫星序列来确定基因型。

SSR 技术已被广泛应用于种子纯度鉴定、遗传标记筛选等领域。

本文将介绍如何利用SSR技术鉴定西瓜甜瓜种子的纯度，以及其在农业生产中的应用前景。

西瓜甜瓜是世界上广泛栽培的水果，其种子纯度对植株的生长发育和果实的品质产量具有重要影响。

传统的种子纯度鉴定方法通常是通过外观、生理学和生化学性状进行评估，然而这些方法存在鉴定周期长、鉴定准确性差、耗时耗力等缺点。

而SSR技术凭借其高度重复性、多态性以及易操作性，成为了种子纯度鉴定的有力工具。

利用SSR技术鉴定西瓜甜瓜种子的纯度需要进行样品的DNA提取。

一般来说，可以选择新鲜叶片或种子作为提取DNA的原料。

接着进行PCR扩增，通过选择相应的引物来扩增目标位点的DNA片段。

在扩增后，利用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行片段分析，最后进行数据解读和分析。

通过比较不同样品的DNA条带模式，可以确定不同种子的遗传特征，从而实现种子纯度鉴定。

与传统鉴定方法相比，利用SSR技术鉴定西瓜甜瓜种子的纯度具有如下优势：SSR技术的操作简便、快速、准确，可以大大提高鉴定效率；该技术对样品的处理要求不高，可以应用于多种类型的样品；SSR技术可以通过多种引物对不同位点进行扩增，可以获得更多DNA信息，提高了鉴定的准确性和可靠性。

在农业生产中，利用SSR技术鉴定西瓜甜瓜种子的纯度具有重要意义。

可以帮助种子生产企业对种子品质进行评估，及时发现和淘汰低纯度的种子，保证种子品质和生产效益。

可以帮助农民选择高质量的种子进行种植，提高产量和品质，促进农业生产的可持续发展。

SSR技术还可以用于品种鉴定和遗传背景分析，为优良品种的选育和推广提供科学依据。

随着生物技术的不断发展，SSR技术在农业领域的应用前景十分广阔。

利用SSR技术鉴定西瓜甜瓜种子纯度

利用SSR技术鉴定西瓜甜瓜种子纯度SSR技术是一种用于遗传多样性和种群结构研究的分子标记技术，它可以通过检测DNA 中的简单重复序列（Simple Sequence Repeat, SSR）来鉴定不同品种间的遗传差异。

在农业领域，SSR技术常被用于鉴定种子纯度和品种纯度，以确保种子的质量和品种的纯正性。

本文将探讨利用SSR技术鉴定西瓜甜瓜种子纯度的方法和意义。

1. 核酸提取和PCR扩增在利用SSR技术鉴定西瓜甜瓜种子纯度时，首先需要从种子样本中提取DNA核酸。

常用的核酸提取方法包括CTAB法和酚/氯仿提取法。

提取得到的DNA样本经过纯化和稀释后，即可用于PCR扩增。

PCR扩增是SSR技术的关键步骤，通过引入含有特定SSR位点的引物对DNA进行扩增，从而获得所需的DNA序列片段。

2. 扩增产品分析和数据解读经过PCR扩增后，需要对扩增产物进行分析和数据解读。

常用的分析方法包括聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）和毛细管电泳等。

通过对扩增产物的大小和数量进行分析，可以得出不同品种间的遗传差异和种子纯度情况。

数据解读主要包括扩增产品的图谱分析和基因型鉴定，以确定具体的品种和纯度程度。

3. 结果验证和品种确认利用SSR技术鉴定所得的数据结果进行验证和品种确认。

通过与已有的品种特征数据库进行比对，可以确定被鉴定种子的品种和纯度情况。

也可以通过再次扩增和分析，以确保结果的准确性和可靠性。

1. 提高种子质量和存储价值利用SSR技术鉴定西瓜甜瓜种子纯度，可以有效提高种子的质量和存储价值。

通过鉴定种子的纯度和品种特征，可以排除杂交或混杂种子，保证种子的纯正性和品质稳定性。

也可以为种子的有效储存和管理提供科学依据，延长种子的有效存储期限。

2. 促进良种繁育和保护SSR技术的应用可以促进良种的繁育和保护工作。

通过对种子品种的鉴定和确认，可以保护良种的遗传特征，防止其被杂交或污染。

也可以为新品种的选育和推广提供科学依据，促进西瓜甜瓜产业的发展和壮大。

黄瓜瓜类蚜传黄化病毒的检测与分析

黄瓜瓜类蚜传黄化病毒的检测与分析作者：张广荣孙述俊文朝慧何苏琴来源：《寒旱农业科学》2023年第11期摘要：黃瓜是我国重要的蔬菜种类之一，目前已报道约36种病毒可侵染黄瓜，其中瓜类蚜传黄化病毒（Cucurbit aphid-borne yellows virus，CABYV）平均检出率为0.65%。

2021年9月在甘肃省白银地区发生病毒病的黄瓜田，发现叶片呈现黄化、明脉症状黄瓜病株。

为明确其病原，采集病株后，采用分子生物学方法对病样进行了检测。

RT-PCR及病毒CP基因序列测定分析结果表明，该病样受到瓜类蚜传黄化病毒Cucurbit aphid-borne yellows virus（CABYV）的感染。

这是继2017年在甘肃酒泉市瓜州县的甜瓜上检测到CABYV后，在甘肃白银市靖远县的黄瓜上再次检测到该病毒。

关键词：黄瓜；瓜类蚜传黄化病毒；病毒病；白银市中图分类号：S436.42 文献标志码：A 文章编号：2097-2172（2023）11-1074-05doi：10.3969/j.issn.2097-2172.2023.11.018Report of Cucurbit Aphid-borne Yellows Virus Infecting Cucumbersin Baiyin， Gansu ProvinceZHANG Guangrong 1， SUN Shujun 1， WEN Zhaohui 2， HE Suqin 3（1. Baiyin Station of Plant Protection and Quarantine， Baiyin Gansu 730900， China; 2. Technical Centre of LanzhouCustoms District， Lanzhou Gansu 730010， China; 3. Institute of Plant Protection， Gansu Academy ofAgricultural Sciences， Lanzhou Gansu 730070， China）Abstract： Cucumis sativus is one of the important vegetable species in China. To date， nearly 36 viruses have been reported to be able to infect cucumber. Among them， the average detection rate of cucurbit aphid-borne yellows virus（CABYV） is 0.65%. In September 2021， a cucumber plot with viral disease occurred in the Baiyin， Gansu Province， and there was symptoms of yellowing and vein clearing on the leaves from cucumber-diseased plant. The disease strains were collected and tested using molecular biology methods to verify the pathogen. RT-PCR and viral CP gene sequencing analysis showed that the disease sample was infected by the CABYV. CABYV on melons was discovered firstly in Guazhou County， Jiuquan in 2017， which was noticed secondly on cucumbers in Baiyin of Gansu Province in September 2021.Key words： Cucumis sativus; Cucurbit aphid-borne yellows virus; Virus disease; Baiyin 收稿日期：2023 - 05 - 09；修订日期：2023 - 06 - 06基金项目：兰州海关科研项目（LK-2022-004）。

玉米种子DNA快速提取及杂交种纯度的快速鉴定ARapidMethodofDNA

分子植物育种，2009年，第7卷，第4期，第811-816页Molecular Plant Breeding,2009,Vol.7,No.4,811-816新思路、新技术、新方法Novel Thinking &Technology玉米种子DNA 快速提取及杂交种纯度的快速鉴定谭君杨俊品*四川省农业科学院作物研究所,国家玉米改良中心成都分中心,成都,610066*通讯作者,****************摘要本研究用玉米杂交种渝单8号及其双亲的干种子作为材料，使用NaOH 溶液研磨玉米种子胚，提取基因组DNA ，并利用多重PCR 扩增进行玉米杂交种子的纯度鉴定。

结果表明，利用玉米种子快速提取方法获得的DNA 可进行正常的SSR 扩增，并且从20对玉米核心引物中筛选出了8对扩增谱带呈双亲互补型的引物，将其中3对引物YISSR 、phi072和phi299852组合起来扩增，扩增谱带清晰可辨，对渝单8号杂交种子的纯度进行准确鉴定。

初步表明利用多重PCR 技术鉴定玉米种子纯度是可行的，不仅简便快速，而且降低了检测成本。

关键词玉米种子,DNA 提取,SSR,纯度鉴定A Rapid Method of DNA Extraction from Maize Seeds and Purity Identifi-cation of Maize HybridsTan Jun Yang Junpin *Chengdu National Corn Improvement Sub-center,Crop Institute,Sichuan Academy of Agricultural Sciences,Chengdu,610066*Corresponding author,****************DOI:10.3969/mpb.007.000811Abstract A rapid DNA extraction method of genome DNA from maize seeds was established in this study.Dryseeds of Yudan8and its parents were adopted as testing materials,NaOH solution was used as an abrasive for breaking embryo,and multiplex PCR amplification was made use of purity identification of maize hybrids.Test re-sults showed that the resultant DNA was very suitable for SSR.And the core of corn from 20primers were screened out of eight pairs of parents were amplified bands primers complementary.Eight pairs of primers which could make the amplified bands of parents complementary were screened out of 20maize core primers,and three primers of which (YISSR,phi072and phi299852)were combined together to amplify and identify the purity of maize hybrids Yudan8.The amplified bands were clear and discernible.The results preliminarily indicated it is feasible,simple and effective,and expenditure-saving in maize hybrids identification.Keywords Maize seed,DNA extraction,SSR,Purity identification/doi/10.3969/mpb.007.000811基金项目：本研究由国家863计划(2006AA100103;2007AA10Z172-S)、国家科技支撑计划(2006BAD01A03;2006BAD13B03)、农业部转基因生物新品种培育重大专项(2008ZX08003-001)、北京农业育种基础研究创新平台项目(YZPT02-06)、四川省科技支撑计划(2008NZ0004)、四川省国际合作项目(2007HH021)、四川省农作物育种攻关项目和四川省农科院青年科技基金项目共同资助SSR 标记具有快速、准确，信息含量高、呈共显性遗传、易于分析和重复可靠等特点，因此，自1989年该技术产生以来，已被广泛应用于玉米基因定位和QTL 分析(刘福霞等,2005;李凌雨等,2005;杨华等,2005,科学通报,50(8):772-776)、玉米品种DNA 指纹图谱构建(吴渝生等,2003;王凤格等,2003;李晓辉等,2005)、自交系遗传多样性分析(李新海等,2003;王凤格等,2005;聂永心等,2005;肖木辑等,2006;Yao et al.,2007;陈发波等,2007)和分子标记辅助育种等(田清震等,2004;杨华等,2005,科学通报,50(8):分子植物育种Molecular Plant Breeding772-776)。