棋盘法检测复治新方案核心药物对MDR-Mtb和XDR-Mtb的体外联合作用研究

合集下载

棋盘法检测复治新方案核心药物对MDR-Mtb和XDR-Mtb的体外联合作用研究

棋盘法检测复治新方案核心药物对MDR-Mtb和XDR-Mtb的体外联合作用研究结核病是严重危害人类健康的呼吸道传染病,是全球关注的公共卫生问题和社会问题。

早期有效治疗是减少结核病传染源、控制结核病流行的核心环节。

然而由于不合理的联合用药、不规律用药、管理不善及免疫损害宿主的增多等原因,出现大量的复治患者,耐药结核病的发病率逐年上升,尤其在我国结核病患者中,耐药者所占的比例高达28%-41%,主要为复治患者。

由于初治失败导致的复治患者对一线抗结核药物耐药风险的增加,以及治疗疗程延长,必须引入二、三线药等因素,均导致复治肺结核的治疗效果不佳。

复治标准方案复发率较高,治疗效果仍需要极大的提高,因此急需治疗方案的改进。

国家传染病重大专项课题“复治肺结核化学治疗新方案的研究”是在临床上收集大量样本来验证新方案Pa Rfb(Rft)Mfx EZ的疗效。

本研究采用三维棋盘法对所选40株临床分离耐药菌株及标准株H37Rv进行对Mfx Pa、Mfx Pa Rfb和Mfx Pa Rft三种组合药物的联合药敏检测,分析三种组合方案的联合抑菌效果,为临床上制订有效的化疗方案提供参考依据。

目的::针对国家传染病重大专项课题“复治肺结核病化学治疗新方案的研究”,采用三维棋盘法检测治疗方案中四种核心药物对MDR-Mtb和XDR-Mtb的体外联合作用效果,为复治肺结核病化学治疗新方案的研究提供部分基础参考数据。

方法::分别检测四种抗结核药物—莫西沙星(Mfx)、对氨基水杨酸异烟肼(Pa)、利福布汀(Rfb)、利福喷丁(Rft)对40株已知药敏结果临床分离耐药株及H37Rv标准株的MIC值,比较四种药物对不同耐药类型Mtb的MIC值。

然后使用棋盘法分别检测Mfx Pa、Mfx Pa Rfb、Mfx Pa Rft三种联合方案对40株临床分离耐药Mtb和标准株H37Rv在体外联合作用时的最低抑菌浓度,通过计算部分抑菌浓度指数(fractional inhibitory concentration index,FICI)来判断药物联合作用效果,以FICI≤0.5和FICI≤0.75分别作为判断两种药物和三种药物具有协同作用的依据。

多靶标基因并行检测技术为肿瘤个体化治疗提供新模式

多靶标基因并行检测技术为肿瘤个体化治疗提供新模式蔡贞;郑磊【摘要】Along with the development of human genomics and pharmacogenomics, the personalized diagnosis and treatment of cancer has translated from vision into reality. The occurrence and development of malignant tumors is a complicated biological process involving multiple genes and signaling pathways. Parallel detection technologies are capability of detection of multiple target genes simultaneously, which provide more comprehensive information for clinical doctors to make personalized treatment program. This article will briefly introduce the new developed multiple target genes parallel detection technology, liquidchip technology and next-generation sequencing technology and discuss the basic principles of quality control involved in these technologies.%随着人类基因组学和药物基因组学的发展，肿瘤个体化诊疗已由愿景变成了现实。

基因芯片方法快速检测MDR-TB及利福平和异烟肼耐药基因的研究

基因芯片方法快速检测MDR-TB及利福平和异烟肼耐药基因的研究张海英;高会霞;许怡【摘要】目的使用基因芯片结合仪器法液体快速培养分析耐多药(multidrug resistant,MDR)结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)的耐药基因和表型特征.方法应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增-基因芯片杂交法检测耐多药结核分枝杆菌(multidrug resistant tuberculosis,MDR-TB)菌株中利福平(rifampin,RFP)和异烟肼(isoniazid,INH)耐药基因的突变位点及类型,平行用BD MGIT960系统检测所选菌株对RFP和INH的敏感性.结果以MGIT960药敏结果作为参考标准,34株MDR-TB中,基因芯片检测MTB对RFP、INH药的符合率分别为85.29%和94.11%;32株RFP耐药突变株中22株为rpoB 基因531位密码子突变,29株INH耐药突变株中24株为katG基因315位密码子突变.结论基因芯片技术可快速、有效地检出MDR-TB,可以在未获得传统细菌表型药敏结果前指导临床用药治疗.%Objective To analyze the characteristics of phenotype and genotype of multidrug resistant tuberculosis ( MDR - TB ) by gene chip and liquid culture. Methods Gene chip MDR - TB kits were used for identifying the types of rifampin ( RFP ) and isoniazid( INH )antituberculosis drug resistant genes partly and BD MGIT960 was used for detecting the drug susceptibility. Results Compared withMGIT960,the coincidence rate of gene chip MTBDR plus was 85. 29% and 94. 11% in RFP - resistant strain and INH resistant strain in 34 MDR - TB strains; Among 32 RFP - resistant mutation strains, S531L of rpoB gene accounted for 22 strains. MTB resistant to INH was caused by the mutationof katG chiefly and the S315T1 accounted for 24 strains in 29 INH - resistant strains. Conclusion Gene chip might be a rapid and effective method for the detection of MDR -TB. So,it could be used as an assistant method to guide the therapy on clinic.【期刊名称】《河北医科大学学报》【年(卷),期】2012(033)012【总页数】4页(P1421-1424)【关键词】分枝杆菌,结核;利福平;异烟肼;寡核苷酸序列分析【作者】张海英;高会霞;许怡【作者单位】河北省石家庄市第五医院皮肤科,河北,石家庄,050021;河北省石家庄市第五医院检验科,河北,石家庄,050021;河北省石家庄市第五医院检验科,河北,石家庄,050021【正文语种】中文【中图分类】R378.911中国每年发生耐多药（multidrug resistant， MDR）结核病患者为全球最高，约占全球病例的1/4。

MDRTB诊断与治疗教学课件ppt

抗结核药物：如异烟肼、利福平、乙胺丁醇等，可有效杀灭结核杆菌，是治疗mdrtb的基础用药。
药物治疗
手术治疗可作为mdrtb治疗的辅助手段，在mdrtb病变局限、包块较大或出现并发症时，可考虑手术治疗。
手术方式包括肺叶切除、全肺切除、肺切除等，具体手术方式需根据患者病情和医生建议来确定。
手术治疗
放射治疗可作为mdrtb治疗的辅助手段，通过放射线照射病变部位，达到缩小病变、减轻症状的目的。
根据患者病情及细菌耐药性，选择合适的抗生素，同时进行对症治疗，并密切观察病情变化
03
病例三：罕见mdrtb病例
02
01
05
展望
深入探究mdrtb的致病菌、传播途径和感染机制。
病原学研究
研究mdrtb的临床表现、并发症和耐药情况，以提高诊断准确性和治疗效果。
临床研究
调查mdrtb的流行趋势、危险因素和高发人群，为防控提供科学依据。
MDR-TB是指感染的结核分枝杆菌同时对利福平（R）和异烟肼（H）两种或两种以上的一线抗结核药物产生耐药性的结核病。
mdrtb定义
单耐药性结核病（Mono-drug resistant tuberculosis，简称MDR-TB）：感染的结核分枝杆菌只对单一抗结核药物产生耐药性，如异烟肼耐药性结核病（H-resistant tuberculosis，简称HRT）。
流行病学研究
mdrtb研究现状
03
诊疗技术的研究
针对mdrtb的诊断、病情评估和疗效监测等领域，开展新技术、新方法的研究和应用。
mdrtb未来研究方向
01
加强耐药结核病疫苗研究
通过新型疫苗的研发，提高人群免疫防御能力，降低mdrtb的发病率和传播风险。

结核分枝杆菌(MTB)异质性耐药研究进展

结核分枝杆菌(MTB)异质性耐药研究进展柳清云;孙刚;高谦【摘要】异质性耐药,是指在同一样本中同时存在耐药菌和敏感菌的现象,这体现了细菌群体从部分耐药向完全耐药转变的过程.研究异质性耐药对于认识耐药结核病的发展过程,以及评估治疗方案和指导临床用药具有重要的意义.本文对结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis,MTB)异质性耐药的产生及其对临床的影响进行了综述.%Hetero-resistance is the coexistence of both sensitive and resistant bacteria in the same specimen,which indicates the transition from partially resistant to fully resistant bacterium population. Studying hetero-resistance is of great significance in understanding the genesis of drug-resistant tuberculosis,accessing the treatment schedule,and guiding the prescription of drugs. In this article,we summarized recent progresses on hereto-resistance of Mycobacterium tuberculosis (MTB).【期刊名称】《复旦学报（医学版）》【年(卷),期】2013(040)001【总页数】4页(P1-4)【关键词】结核分枝杆菌(MTB);异质性耐药;耐药结核病【作者】柳清云;孙刚;高谦【作者单位】复旦大学上海医学院生物医学研究院-医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032;复旦大学上海医学院生物医学研究院-医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032;复旦大学上海医学院生物医学研究院-医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032【正文语种】中文【中图分类】R378.91+120世纪40年代以来，链霉素、异烟肼、利福平等抗结核药物的广泛使用，使结核病的发病率和死亡率一度大幅下降［1］。

mdr-世卫指南-文档资料36页

M+ (高& 中等) C+ M+ (低) C+ M– C+ 所有C+
Xpert MTB/RIF 结果
Xpert +
Xpert –
合计
33
0
33
52
2
54
31
12
43
116
14
130
灵敏度
100% 96,3%
97,7%
72,1%
89,2%
Marlowe, J Clin Microbiology 2019
快速药敏试验的使用
WHO 2019
2019 世卫指南建议2
MDR-TB患者治疗期间，建议使用痰涂片和培养进行治疗监测，而不是单独应用痰涂片。
- 最好的实施：每月监测 - 培养：比单独应用痰涂片更早发现治疗失败 - 治疗初期痰涂片阴性：每月进行涂片监测（与培养比较）导致治疗失败发现延迟的风险在统计学上显著高于痰涂片阳性患者
均数：中位数
均数：中位数
涂片（503）
液体培养（946）
固体培养（539）
Migliori, ERS-online course, 2019
GeneXpert – 检测利福平耐药的时间
均数：中位数
均数：中位数
均数：中位数
分子生物学 DST（19）
传统DST （110）
Migliori, ERS-online course, 2019
在治疗MDR-TB患者时，应使用乙硫异烟胺（或丙硫异烟胺）
2019 世卫指南建议6
在治疗MDR-TB患者时，强化期（治疗的初始阶段，即应用注射剂阶段）应包括四种可能有效的二线抗结核药品（包括二线注射用药卡那霉素，阿米卡星或者卷曲霉素中的一种）以及吡嗪酰胺

结核分枝杆菌耐药性检测专家共识.pdf.pdf

结核分枝杆菌耐药性检测专家共识.pdf.pdf 的分析。

（3）尽管WHO建议MDR-TB与XDR-TB患者的治疗应根据对⼀、⼆线抗结核药物的DST结果进⾏个体化治疗，但对⼆线抗结核药物进⾏DST的临床意义尚存在争议，⽅法还需标准化以使其结果更可靠。

应进⼀步确定或修订表型DST⽅法的药物临界浓度，如Mfx、Gfx、Cm、Eto、Cs和PZA等。

⽤于治疗MDR-TB的新药或具有抗结核作⽤的抗⽣素，如Bdq、Dlm、Lzd等的表型DST⽅法尚需进⼀步进⾏验证和推⼴应⽤。

由于定义MTB对⼆线抗结核药物耐受的关键药物临界浓度⾮常接近MICs，应进⼀步研究各类耐药基因型与药物MICs、表型DST、临床疗效之间的关系，开展耐药基因功能的遗传学研究。

鉴于⽬前⽤于临床对⼆线抗结核药物的分⼦DST检测试剂尚不能完全满⾜临床DR-TB诊断和治疗的需求，仍有许多对⼆线抗结核药物的耐受性检测⽅法尚未建⽴。

因此，⽆论是表型还是基因型检测对⼆线抗结核药物的DST检测结果均需慎重解读；需进⼀步阐明其耐药机制，并深⼊研究以提⾼对⼆线药物采⽤DST预测临床敏感或耐药TB的诊断效能，开发新的耐药性快速检测试剂。

（4）⽬前，缺乏⾜够的临床研究数据证明耐药基因型指导临床治疗的价值，这是因为TB采⽤多药联合化疗的模式，使得这项研究⾮常困难。

实验室检验⼈员与临床医师需紧密合作，开拓新思路，开展不同耐药基因型与TB化疗效果的相关性研究，深⼊探讨耐药基因型指导化疗的临床意义及其对流⾏病学的影响。

（5）⽬前，在临床应⽤的分⼦DST检测试剂主要⽤于直接检测处理后的痰标本和间接检测MTB 培养分离物。

在检测其他呼吸道内、外标本（如⽀⽓管肺泡灌洗液、胃液、⽀⽓管肺活检组织、胸腔积液、脑脊液、腹腔积液、肺外病灶组织）时的敏感度仍不够理想，需建⽴更多⾼敏感度的耐药性检测新技术（如数字PCR），并转化为产品应⽤于临床。

（6）⽬前，只有实时荧光定量PCR技术实现了模块封闭性⾃动化检测，尚需进⼀步研发将MTB分⼦DST和对⼀、⼆线药物耐药基因型检测⾃动化、⼀体化和智能化的产品，以解决分⼦DST检验项⽬分散、⼿⼯操作多、⼈⼒投⼊多和⼯作量⼤的问题。

中药逆转肿瘤多药耐药的研究进展

中药逆转肿瘤多药耐药的研究进展程涛;宋霞;马园园;姜远英;曹永兵【摘要】Objective To review the research advance about the reversal of multidrug resistance (MDR) .Methods Herbal extracts and traditional Chinese medicine combined with chemotherapy drugs to reverse MDR were analyzed .Results Some herbal extracts or traditional Chinese medicine can improve the MDR strains sensitivity to chemotherapy ,and decrease the resistance protein trans-porter activity .Conclusion Some Chinese medicine has a reversing MDR tumor activity ,and its mechanism is mostly associated with the multidrug resistance-associated protein .%目的：综述逆转肿瘤多药耐药（MDR）的研究进展。

方法检索中药提取物或中药单体联合化疗药物逆转肿瘤MDR的研究。

结果一些中药提取物或中药单体能使耐药株对化疗药物变得敏感，使耐药蛋白的转运活性下降。

结论中药具有逆转肿瘤MDR的活性，其作用机制大多是与耐药相关蛋白相关的。

【期刊名称】《西北药学杂志》【年(卷),期】2014(000)003【总页数】5页(P324-328)【关键词】中药;多药耐药逆转;P-糖蛋白;多药耐药结合蛋白1;乳腺癌耐药蛋白【作者】程涛;宋霞;马园园;姜远英;曹永兵【作者单位】福建中医药大学，福州 350108;福建中医药大学，福州 350108;中国药科大学，南京 210009;福建中医药大学，福州 350108; 第二军医大学，上海200433;福建中医药大学，福州 350108; 第二军医大学，上海 200433【正文语种】中文【中图分类】R282据美国癌症协会估计，死于不同程度耐药的肿瘤患者占90%以上，肿瘤的多药耐药(multidrug resistance，MDR)已成为肿瘤化疗成功与否的关键因素[1-2]。

《耐药结核病化学治疗指南(2019年简版)》要点汇总

《耐药结核病化学治疗指南（2019年简版）》要点第一章总论一、耐药结核病的定义1. 单耐药结核病（MR-TB）：结核病患者感染的结核分枝杆菌(MTB)经体外药物敏感性试验(DST)证实仅对1种一线抗结核药物耐药。

2. 多耐药结核病（PDR-TB）：结核病患者感染的MTB经体外DST证实对1种以上一线抗结核药物耐药(但不包括同时对异烟肼和利福平耐药)。

3. 耐多药结核病（MDR-TB）：结核病患者感染的MTB经体外DST证实至少同时对异烟肼和利福平耐药。

4. 准广泛耐药结核病（Pre-XDR-TB）：结核病患者感染的MTB经体外DST证实在耐多药的基础上对1种氟喹诺酮类或1种二线注射类抗结核药物耐药。

5. 广泛耐药结核病（XDR-TB）：结核病患者感染的MTB经体外DST证实在耐多药的基础上至少同时对1种氟喹诺酮类和1种二线注射类抗结核药物耐药。

6. 利福平耐药结核病（RR-TB）：结核病患者感染的MTB经体外DST证实对利福平耐药,二、耐药结核病产生的原因三、我国CEF的耐药疫情特征（一）我国耐药结核病的流行现状（二）交叉耐药交叉耐药病原体对某种药品耐药后，对于结构近似或作用性质相同的药品也可显示耐药性，称之为交叉耐药；根据程度的不同，又有完全交叉耐药和部分交叉耐药之分（表1）。

1. 单向交叉耐药： MTB对A药品耐药时,对B药品并不耐药；但对B药品耐药时,对A药品也同时耐药。

2. 双向交叉耐药： MTB对A药品耐药的同时对B药品也耐药，而对B药品耐药的同时也对A药品耐药。

（三）耐药的稳定性MTB产生耐药后其耐药的稳定性并非一成不变，随着MTB菌株的传代,耐药性会产生或多或少的变化，不同药品、不同程度的耐药性将表现出不同程度的稳定性或易变性。

1. 耐药稳定性强类：（1）链霉素。

MTB对链霉素产生的耐药性比较稳定。

（2）氨硫脲,其耐药稳定性很好，少见有复敏现象。

（3）环丝氨酸和乙（丙）硫异烟胺，一旦耐药则不易恢复，稳定性强，停药后亦是如此。

结核分枝杆菌耐药性检测

四、MTB DST检测结果的判读
初治TB患者的耐药性检测与结果判读
（1）初治TB患者1次分子DST检测为对RFP、INH和FQs耐药时可判断为耐药，并同时进行表型DST，以了解耐药水平及对其他药物的耐药情况，以供临床医生进行综合分析。
（2）初治TB患者1次分子DST检测为对RFP、INH和FQs以外抗结核药物耐药时，建议复查，并同时进行表型DST；如果复查分子DST或表型DST 仍为耐药时，DR-TB的结论成立；如果分子DST复查结果为对被检测药物敏感，则建议等待表型DST结果；若表型DST结果为耐药，则判断为耐药；若表型DST结果为敏感，应结合临床资料进行综合判断。
二、常用的MTB DST检测方法
（五）基因测序技术
采用PCR-Sanger测序方法检测MTB对 RFP和INH耐药的常见基因型，可了解突变的位点和性质，但目前尚未在临床广泛开展。
三、MTB耐药性检测策略
目前，采用任何单一形式的DST方法均无法完全满足临床需求，而采用多种方法联合检测虽能提高耐药MTB的检出率、缩短诊断时间，但同时也增加了TB患者的检测费用，而且若不同检测方法的结果不一致，也给医生的诊断和化疗方案的制定带来许多困扰。
二、常用的MTB DST检测方法
（三）基因芯片技术
采用基因芯片技术较简便、快速地检测MTB对 RFP和INH耐药的常见基因型，可了解突变的位点和性质，辅助诊断MDR-TB，整个检测过程只需24～48 h；其缺点是杂交、检测过程较繁琐。
二、常用的MTB DST检测方法
（四）反向杂交技术
采用反向杂交技术可同时快速检测对RFP、INH、EMB、FQs、Am、Km 和Cm耐药的常见基因型，可了解突变的位点和性质，辅助诊断MDR-TB 和pre-XDR-TB、XDR-TB，整个检测过程只需1～2 d时间；但其为开放性检测，可能会污染扩增产物而导致假耐药的报告，并且杂交、显色过程较繁琐。

recist中英文对照全文

New response evaluation criteria in solid tumours: Revised RECIST guideline (version 1。

1）新版实体瘤疗效评价标准：修订的RECIST指南（1。

1版本）Abstract摘要Background背景介绍Assessment of the change in tumour burden is an important feature of the clinical evaluation of cancer therapeutics：both tumour shrinkage （objective response) and disease progression are useful endpoints in clinical trials. Since RECIST was published in 2000，many investigators，cooperative groups，industry and government authorities have adopted these criteria in the assessment of treatment outcomes. However，a number of questions and issues have arisen which have led to the development of a revised RECIST guideline （version 1。

1). Evidence for changes, summarised in separate papers in this special issue，has come from assessment of a large data warehouse (〉6500 patients）, simulation studies and literature reviews。

以棋盘法测定汉防己甲素与伊曲康唑的体外联合抗烟曲霉作用

ｃｏｎａｚｏｌｅ（ＩＴＣ）ａｇａｉｎｓｔＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｆｕｍｉｇａｔｕｓ．ＡｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅＣｌｉｎｉｃａｌａｎｄＬａｂｏｒａｔｏｒｙＳｔａｎｄａｒｄｓＩｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＣＩＳＩ）Ｍ３８一Ａ２
以棋盘法测定汉防己甲素与伊曲康唑的体外联合抗烟曲霉作用
吴锐，刁文琦，宋延君，李水秀，吕霞琳，王露霞。，刘维达。，张宏
摘要：目的探讨汉防己甲素在体外对伊曲康唑抗烟曲霉活性是否有增效作用。方法参照美国临床和实验室标准
中国人兽共患病学报
７８
ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａ１ｏｆＺｏｏｎｏｓｅｓ
２０１３，２９（８）
ＤＯＩ：１０．３９６９／ｃｊｚ．ｊ．ｉｓｓｎ．１００２—２６９４．２０１３．０８．００３
Ｉｎｖｉｔｒｏｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓｂｅｔｗｅｅｎｔｅｔｒａｎｄｒｉｎｅａｎｄｉｔｒａｃｏｎａｚｏｌｅａｇａｉｎｓｔ
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｆｕｍｉｇａｔｕｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｔｈｅ，ｃｈｅｃｋｅｒｂｏａｒｄｍｅｔｈｏｄ

结核病的治疗解读

对氨基水杨酸钠〔PAS〕：1946年创造，具有较弱的抑制结核菌作用，但能增强INH等抗结核药物的作用和预防耐药性的产生。目前国内主要使用注射剂、静脉滴注，一般成人日用量溶于5%葡萄糖液500ml中静滴。注意避光，口服数量多，胃肠道反响明显，一般不用。儿童每日150-200mg/kg。主要不良反响为肝毒性，其他如过敏反响、低钾、低钙，多发性神经炎、甲状腺功能减低等。
氟喹诺酮类〔FQ〕
包括氧氟沙星〔oflx〕、左氧氟沙星〔Lvfx〕、莫西沙星〔Mxfx〕，对结核菌具有不同程度的杀菌活性，通过阻止DNA的复制，转录而杀菌，莫西沙星优于左氧氟沙星、氧氟沙星。它们之间具有不同程度的交叉耐药，用于对一线药耐药病人。不良反响主要有头痛、失眠，可诱发癫痫病、精神病发作、肾损害和对关节软骨的损害。因此对18岁以下青少年、儿童、孕妇不宜使用，有精神病史、癫痫病史、肾病史慎用。
1.结核病化疗的现代观点
(1)病变中结核菌的代谢状态
结核菌为需氧菌，繁殖周期为每14-22 小时分裂一次，最好生长环境为pH 7.40, PO2 为100-140mmHg 。
在人体病变中存在三种菌群 ①空洞壁内大量分裂繁殖活泼、代谢旺盛的结核菌。 ②闭合干酪病灶内的细菌，数量很少。 ③巨噬细胞内的结核菌:数量少，仅偶尔分裂繁殖。以上①称分裂活泼菌( dividing bacilli) ，②及③称
ELISPOT〔酶联免疫斑点试验〕
体外测定分泌IFN-γ的T淋巴细胞数量，机制为致敏的T淋巴细胞接受特异性抗原如 ESAT-6和CFP10 ，即释放出IFN-γ ，使T淋巴细胞出现黑班，计数带黑班的T淋巴细胞数目，协助诊断。
5. 潜伏结核感染 (latent tuberculosis infection)的治疗

浅析XDR-TB的快速检测方法

浅析XDR-TB的快速检测方法作者：杨柳黎敏聂庆英来源：《健康必读·下旬刊》2011年第10期【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1672－3783(2011)10－0022－01【摘要】据《耐多药结核病和广泛耐药结核病：2010年全球监测与反应报告》估计，中国在全球27个耐多药结核高负担国家中排行第2，仅次于印度。

近年来MDR-TB使我国结核病疫情更趋严重，WHO 已将中国列为耐药结核病“特别引起警示的国家和地区”之一。

结核病耐药率高和MTB临床耐药株的不断传播已成为我国结核病控制工作中最棘手的问题。

笔者通过实践研究，对XDR-TB的快速检测方法谈了几点自己的看法。

【关键词】XDR-TB 快速检测方法耐药结核病的有效控制是一个系统性的过程，涉及及时准确的早期诊断、规范正确的化疗、有效的化疗管理措施等多个环节；其中，早期耐药性诊断技术的突破是当前控制耐药结核病的关键。

1 研究资料与方法（1）研究资料:留自本院 2010年6月 -2010年 12月住院肺结核患者100例，多为复治病人，痰菌涂片阳性。

（2）研究方法:将受试痰标本转移到无菌玻璃瓶中，根据痰标本粘稠度加入2倍至 5 倍标本体积的2%NaOH 溶液，用小玻棒仔细搅拌，处理20min。

然后各取0.15ml处理液分别接种对照斜面、PNB 琼脂培基鉴定斜面和各含药斜面，置 36℃温箱培养。

2 结果分析（1）痰结核菌分离培养与菌型鉴定:100例涂阳痰标本，抗酸杆菌培养阳性 61 例(66.3%)。

痰结核菌经匡氏 PNB 琼脂培基直接分型鉴定，并结合其生长物菌落形态与特征，判定为结核菌分支杆菌生长物55例 (92.2%)，结核分枝杆菌与非肺结核分枝杆菌混合生长物 4 例(5.2%) ；非结核非分枝杆菌生长物 2 例 (2.6%)。

（2）匡式双相琼脂培基痰菌直接药敏试验:临床痰结核菌生长物对二线抗痨药物氧氟沙星的耐药率高达90%，且显著高于对其余 3 种二线抗痨药物的耐药率 (P（3）临床 XDR-TB 快速检测:55例结核菌生长物中共检测到 9 例 XDR-TB，XDR-TB 发生率为 12%。

棋盘法和倍比微量稀释法在体外联合抗真菌活性药物筛选中的应用研究

棋盘法和倍比微量稀释法在体外联合抗真菌活性药物筛选中的应用研究尹光美;苏刘艳;李俊;李加秀;胡金玲;张祎;王睿睿【摘要】通过对氟康唑和盐酸小檗碱体外联合抗白色念珠菌活性检测,比较棋盘法和倍比微量稀释法在体外联合抗真菌药物筛选研究中的应用,优选更适合实验室体外联合抗真菌药物通量筛选的方法.分别用2种药物筛选方法检测氟康唑和盐酸小檗碱联合对白色念珠菌的活性,计算抑菌联合指数,其抑菌联合指数(FICI) ＜0.5,则表明两药具有协同作用.棋盘法和倍比微量稀释法均能验证氟康唑和盐酸小檗碱联用具有协同作用,但倍比微量稀释法操作更简单,抑菌联合指数的计算更直观,更适用于大批量药物的筛选.倍比微量稀释法更适合于实验室体外联合抗真菌药物的通量筛选.【期刊名称】《云南民族大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2019(028)003【总页数】5页(P246-250)【关键词】棋盘法;倍比微量稀释法;抗真菌;联合用药;药物筛选【作者】尹光美;苏刘艳;李俊;李加秀;胡金玲;张祎;王睿睿【作者单位】云南中医药大学中药学院,云南昆明650500;云南中医药大学中药学院,云南昆明650500;云南中医药大学中药学院,云南昆明650500;云南中医药大学中药学院,云南昆明650500;云南中医药大学中药学院,云南昆明650500;云南中医药大学中药学院,云南昆明650500;云南中医药大学中药学院,云南昆明650500【正文语种】中文【中图分类】R914近年来，广谱抗菌药物、免疫抑制剂等药物的广泛使用，以及器官移植、导管插管等技术的普遍应用，导致临床上真菌感染病例不断增多.其中以白色念珠菌为主的致病性真菌感染较为常见，在条件致病真菌感染中位居第2[1-3]，随着临床上抗真菌药物氟康唑长期大量使用导致白色念珠菌耐药性普遍产生，临床治疗越发困难[4-6].目前，耐药性是临床治疗真菌感染失败的主要原因[7-8].由于新药研发的投入高、周期长、进展缓慢[9-10]，联合用药可以发挥药物的协同抗真菌作用，提高疗效，并减少真菌耐药性的产生[11]，因此寻找与现有抗真菌药物联合应用效果较好的药物也是行之有效的方法之一[12].体外抗真菌药物敏感性实验是指导制定合理的临床诊疗方案重要的参考依据[13].对于大批量联合抗真菌药物的筛选来说，建立快速通量筛选药物的方法非常必要.棋盘法是最为常用的联合用药筛选方法，但操作较为复杂，其MIC值的判定常规用肉眼观察，在一定程度上受主观因素影响较大，缺乏客观性和准确性；倍比微量稀释法常用于单药抗菌活性筛选，实验数据的处理具有客观性，如在单药基础上改为两药联合，操作比棋盘法简单，但其数据信息量较棋盘法少.根据权华等[16]的研究，氟康唑与盐酸小檗碱联合使用具有协同抗耐药白色念珠菌的作用，故本文分别采用2种方法检测氟康唑和盐酸小檗碱对耐药白色念珠菌的抗菌活性，计算FICI值对比分析后选出操作更加为简便、准确、可行的方法作为实验室大批量联合抗真菌药物筛选的首选方法.1 主要实验药品及仪器氟康唑(南昌弘益药业有限公司，50 mg，171128)；盐酸小檗碱(成都锦华药业有限责任公司，0.1 g，180401)；沙氏液体培养基(广东环凯微生物科技有限公司，250 g，1069251)；DMSO 溶剂(MP Biomedicals，LLC，100 mL，Q6949)；念珠菌临床耐药株 23#(由昆明医科大学第一附属医院李玉叶教授赠送)按常规方法复苏，划板培养，于4 ℃下保存.酶标仪(M200 PRO 多功能酶标仪).2 实验方法2.1 药液配制氟康唑和盐酸小檗碱均用DMSO溶解，氟康唑配制成50 mg/mL的药物储备液，小檗碱配制成100 mg/mL的药物储备液，4 ℃下保存.2.2 棋盘法2.2.1 操作步骤参照CLSI M27-A(酵母菌液体培养基稀释法抗真菌药物敏感实验)方案[17]，将药物储备液用沙氏液体培养基稀释为2倍倍比质量浓度(药物终质量浓度范围为氟康唑0.25～128 μg/mL，盐酸小檗碱1～64 μg/mL).按照如下方法进行操作：由高浓度到低浓度的顺序，取50 μL倍比稀释的氟康唑，依次加96孔板的第2～11列；由低浓度到高浓度的顺序，取50 μL 倍比稀释的盐酸小檗碱药液，依次加入96孔板的第 B～H 行.除A12孔之外，向其他各孔加入100 μL菌悬液，并加沙氏培养液于少于200 μL 液体的孔.其中，H1孔为生长对照孔，A12孔为空白对照孔.实验重复3次，调节菌浓度为1×105 CFU/mL，37 ℃恒温恒湿培养24 h，以OD值测定法判读结果.上述各药物孔中溶剂DMSO 终浓度均不超过1%，可忽略其对菌体的影响.实验重复3次.2.2.2 OD值测定法用酶标仪读取各孔在波长 625 nm 处的OD值[18].真菌生长抑制百分数的计算方法为：真菌生长抑制百分数=1-(各孔中的OD值-空白对照孔中的OD值)/(生长对照孔中的OD值-空白对照孔中的OD值)×100%.MIC80值的判定 MIC80=10^(log(A)+(a-80)/(a-b)×log(1/N))，其中A为真菌生长抑制百分数大于80%对应上述梯度浓度中的最小浓度，a为A对应的真菌生长抑菌百分数，b为仅小于a的真菌生长抑制百分数，N为稀释倍数.2.2.3 2种药物联合作用效果评价方法本实验采用 FICI法对结果进行评价.该法是以 Loewe additivity(LA)理论为基础发展出的非参数法模型.其公式为FICI=MICA/A+MICB/B (FICI：部分抑菌联合指数). 式中A和B分别为两药单用时的MIC值，MICA和MICB为两药联合时的MIC 值. 当MIC值高于检测最高限时以做高限浓度的两倍值用以计算FICI.本实验中MIC80值的计算以氟康唑的最小真菌生长80%时的抑制百分数来计算.FICI法则是最为常用的解释抗真菌药物相互作用的模型，但不同文献对于FICI值的解读尚存在多种标准，我们在本文中采用“FICI≤0.5为协同作用,0.5<FICI≤4为无相互作用,FICI>4为拮抗作用的标准对实验结果进行判定[14-15,19-20].2.3 倍比微量稀释法2.3.1 操作步骤将氟康唑和盐酸小檗碱储备液用沙氏液体培养基分别稀释至终质量浓度为128μg/mL和64 μg/mL，取无菌96孔板，第1排不加沙氏液体培养基，其余每排中加入100 μL的沙氏液体培养基，于A行加入256 μg/mL的氟康唑药液和128 μg/mL的盐酸小檗碱药液，各3个重复孔，每孔125 μL；联合用药组每孔加入512 μg/mL的氟康唑和256 μg/mL的盐酸小檗碱药液各62.5 μL，终体积125 μL，各3个重复孔；A行每孔吸取25 μL加到B行中，混匀后吸取25 μL到C行中，以此类推到F行，混匀后弃掉25 μL，在A-F行间形成5倍倍比稀释.最后每孔加入100 μL的菌悬液，使菌液浓度为1×105 CFU/mL.另设只加菌液和培养液为阳性对照和只加沙氏培养液为阴性对照，各3个重复孔.上述各药物孔中溶剂DMSO 终浓度均不超过1%，可忽略其对菌体的影响.37 ℃恒温恒湿培养24 h，以OD值测定法判读结果.实验重复3次.其MIC80计算同上述棋盘法.2.3.2 2种药物联合作用效果评价方法同上述棋盘法.3 实验结果3.1 棋盘法实验结果棋盘法实验结果表明：氟康唑和盐酸小檗碱对白色念珠菌耐药株23# 单独运用时，其MIC80大于药物的最大浓度，联合运用时，降低了氟康唑和盐酸小檗碱的MIC80，菌株对氟康唑的敏感性增强，由耐药(MIC80≥128)变得敏感，联用后氟康唑的MIC80在0.5到1之间，同时盐酸小檗碱的MIC80降到了25 μg/mL以下(表1).以MIC80值为基础两药联合后其FICI值均小于0.5，两药之间为协同作用.表1 氟康唑和盐酸小檗碱对白色念珠菌的MIC80和FICI MIC80(μg/mL)单独MIC80(μg/mL)联合氟康唑盐酸小檗碱氟康唑盐酸小檗碱FICI相互作用>128>640.5717.420.14协同作用>128>640.8223.180.18协同作用>128>640.9514.940.12协同作用3.2 倍比微量稀释法实验结果倍比微量稀释法实验结果表明：氟康唑和盐酸小檗碱对白色念珠菌耐药株23# 单独用药时，氟康唑和小檗碱的MIC80均大于药物的最大浓度，两药联合之后，菌株对氟康唑的敏感性增强，联合后氟康唑和盐酸小檗碱的MIC80均降低(表2). 以MIC80为基础，药物的FICI值小于0.5，两药之间为协同作用.表2 氟康唑和盐酸小檗碱对白色念珠菌的MIC50和FICI MIC80(μg/mL)单独MIC80(μg/mL)联合氟康唑盐酸小檗碱氟康唑盐酸小檗碱FICI相互作用>128>6416.538.270.13协同作用>128>6415.517.750.12协同作用>128>6413.896.950.11协同作用注：2种方法实验结果一致，与文献报道相吻合.4 讨论棋盘法和倍比微量稀释法均是根据真菌在不同药物浓度配比中生长程度不同，来获得MIC80，并计算FICI值，从而判断两药之间的相互作用.棋盘法是目前国际上测定并评价药物体外联合作用效果时使用最广泛、最公认的方法，浓度组合多，能精确测定2种抗菌药物在在适当浓度的比例下的相互作用，数据较多，信息较全，更适合全面评价两药之间的相互作用，较为适用于未知MIC值两药联合用药的筛选，但其MIC值判定多用肉眼观察法，受主观因素影响较大，且不能定量地记录结果，使实验结果缺乏一定的准确性和客观性.故本实验中以酶标仪测定OD值的方法对结果进行判读，通过透光率来反映真菌的生长情况，具有客观、定量、迅速简便、重复性好的优点，使实验结果更准确[21].倍比微量稀释法操作简单，浓度组合少，虽然数据量较小，但可减少工作量.我们实验中用棋盘法和倍比微量稀释法检测氟康唑和盐酸小檗碱联合应用对白色念珠菌耐药株23# 的活性，2种方法均能验证氟康唑和盐酸小檗碱联合应用具有协同作用，与文献报道相吻合，说明2种方法均能作为抗真菌药物联合应用的筛选方法.我们发现对棋盘法所得实验结果进行MIC80的计算时，真菌生长抑制百分数的选择会受到主观因素的影响，存在多重标准，如图1 中3组圈内数据均可分别用来计算两药的MIC80值，不同的真菌生长抑制百分数对应的MIC80值结果差距很大，其FICI值(部分抑菌联合指数)也会有很大的不同，存在多重标准，使得实验结果可重复性较差.同时棋盘法中每个浓度组合只有一个孔，操作误差也会影响实验结果的判定.而倍比微量稀释法中MIC80的计算只有一种标准(见图2中圈内数据)，其FICI值的结果也就更具有客观性和准确性；且倍比微量稀释法中每个质量浓度配合有3个孔，可减小操作误差.本实验中规定以氟康唑的真菌生长抑制百分数大于80%所对应的最小浓度来计算其MIC80值.综上所述，棋盘法和倍比微量稀释法均能用于抗真菌药物联合应用的筛选，但2个方法相比较，倍比微量稀释法具有以下优点：①操作简单，节省时间；②在选择MIC80计算FICI值时只有一种标准，实验结果更为客观；③每个浓度组合有3个重复孔，可有效减小误差.故我们认为倍比微量稀释法更适合用于与已知抗真菌药物联合应用药物的快速通量筛选.参考文献:【相关文献】[1] 姜路路. 重楼皂苷Ⅶ抑制白色念珠菌生物被膜形成的作用机制[D]. 大连: 辽宁师范大学, 2018.[2] 方甜甜，宋沧桑，李兴德，等. 阿司匹林与两性霉素B对白色念珠菌生物膜的体外联合作用研究[J]. 中国药物评价, 2014,31(04): 202-204.[3] 谷鹏飞，石宇奇，刘洋. 中药抗白色念珠菌作用的研究进展[J]. 世界最新医学信息文摘, 2016,16(42): 29.[4] 陈作忠，刘萍，马慧萍. 联合用药抗真菌感染的现状与分析[J]. 抗感染药学, 2013, 10(03): 166-169.[5] 汪承英，马超瑜，尹笋君，等. 三种生物碱与氟康唑体外协同抗白色念珠菌活性研究[J]. 解放军药学学报, 2015,31(04): 310-312.[6] 马晓丽. 氟康唑和黄芩苷联合对耐氟康唑的白念珠菌ABC转运蛋白的影响[D]. 昆明: 昆明医科大学, 2013.[7] 石红茁. 临床白色念珠菌的耐药特性研究及唑类耐药菌选择性抑制剂的发现[D]. 济南: 山东大学, 2018.[8] 叶招浇. 具有协同抗真菌作用中药的筛选及其活性成分研究[D]. 福州: 福建中医药大学, 2014.[9] 禄梦娇. 质子泵抑制剂联合氟康唑抗耐药白色念珠菌的体内外作用及机制研究[D]. 济南: 山东大学, 2018.[10] 李颖. 两类天然产物的抗真菌活性及作用机制研究[D]. 济南: 山东大学, 2016.[11] 滕芳芳. 酮康唑-姜黄素载药纳米系统抗菌活性协同作用的研究[D]. 济南:济南大学, 2017.[12] 王玉连. 利福喷丁对氟康唑体外抗耐药白念珠菌增效作用及机制研究[D].上海: 第二军医大学, 2017.[13] 邓稀仁. 白念珠菌耐药基因的筛选[D]. 南昌: 南昌大学, 2018.[14] 于金龙. 以多种方法对照研究环孢菌素A与唑类药物的体外联合抗真菌作用[D].济南：山东大学，2008.[15] 吴伟伟，王千，龚杰，等. 不同分数抑菌浓度解读标准评估抗真菌药物体外联合效应比较[J]. 中国真菌学杂志, 2016,11(02): 85-89.[16] 权华. 小檗碱与氟康唑协同抗耐药白念珠菌的作用及作用机制研究[D]. 上海：第二军医大学, 2006.[17] Clinical and Laboratory Standards Institute(CLSI).Reference method for broth dilution antifungal susceptibility testing of yeasts; Approved Standard-Third edition[S]. CLSI document M27-A3. Clinical and Laboratory Standards Institute, Wayne PA, 2008.[18] 吴锐，刁文琦，宋延君，等. 以棋盘法测定汉防己甲素与伊曲康唑的体外联合抗烟曲霉作用[J]. 中国人兽共患病学报, 2013, 29(08): 748-752.[19] 傅瑞春. 8种植物抗菌成分与抗菌剂联用抗耐药菌作用的研究[D]. 昆明: 昆明医科大学, 2013.[20] 傅子晋. 小檗碱与咪康唑协同抗耐药白念珠菌作用及其机制研究[D]. 上海:第二军医大学, 2012.[21] 宋延君，张宏，李水秀，等. 以棋盘法测定并评价汉防己甲素与酮康唑联合对白念珠菌的体外抗真菌活性[J]. 中国人兽共患病学报, 2012,28(09): 890-893.。

棋盘法对复治耐多药和广泛耐药结核患者的近期疗效及免疫功能影响

棋盘法对复治耐多药和广泛耐药结核患者的近期疗效及免疫功能影响王文胜【摘要】目的观察棋盘法对复治耐多药和广泛耐药结核患者的近期疗效及免疫功能的影响.方法选取2016年1月至2018年12月收治60例复治耐多药和广泛耐药结核患者为研究对象,分为干预组和对照组,每组患者30例.干预组使用棋盘法监测选择莫西沙星-对氨基水杨酸异烟肼-利福喷丁治疗;对照组行常规抗结核治疗.治疗3个月后观察临床疗效及外周血T细胞亚群CD3+、CD4+及CD4+/CD8+的水平.结果治疗1、2、3个月后干预组患者痰菌阴转率分别为43.3％、50.0％、83.3％,优于对照组(16.7％、23.3％、40.0％),差异具有统计学意义(P＜0.05).治疗1、2、3个月后x线片肺部病灶吸收率分别为50.0％、66.7％、86.7％,均优于对照组(16.7％、26.7％、36.7％),差异具有统计学意义(P＜0.05).治疗3个月后外周血中CD3+、CD4+及CD4+/CD8+显著高于对照组,CD8+低于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论棋盘法对复治耐多药和广泛耐药结核患者的近期疗效较好,可增强患者的细胞免疫功能,值得在临床上推广.【期刊名称】《中国医学工程》【年(卷),期】2019(027)006【总页数】4页(P61-64)【关键词】肺结核;耐多药;广泛耐药;棋盘法;免疫【作者】王文胜【作者单位】山东省菏泽市传染病医院结核科,山东菏泽274000【正文语种】中文【中图分类】R521结核病严重危害人们的身体健康，成为全球卫生问题。

1992年美国疾病防控中心提出耐多药结核病的概念。

2006年10月世界卫生组织修订了广泛耐药性结核病[1]。

复治结核患者是耐多药结核病的主要人群，严重影响控制结核病的疫情[2]。

对于广泛耐药性和耐多药结核病患者来说研究更为有效的复治结核病的方案至关重要[3]。

棋盘法是常用的定量方法，棋盘稀释法分别测定拟联合抗菌药物对结核杆菌的最小抑菌浓度，应用的药物最高浓度是最小抑菌浓度的两倍，几种联合药物的稀释分别在方阵获得，计算部分抑菌浓度的指数。

抗真菌药物联合应用的体外药效评价方法

抗真菌药物联合应用的体外药效评价方法
李妍;郭琼杰;孙淑娟
【期刊名称】《抗感染药学》
【年(卷),期】2007(4)2
【摘要】目的:介绍目前实验室应用的几种抗真菌药物联用的体外药效评价方法。

方法:通过查阅文献,综述各种方法的具体操作及优缺点。

结果:多种方法可评价抗真菌药物联用的体外药效,如棋盘法、时间-杀菌曲线法、E-test法、双纸片扩散法等。

结论:用于评价抗真菌药联用效果的各方法均有其优点及不足之处,且有良好的一致性,目前实验室中最为普遍应用的方法是棋盘法。

【总页数】5页(P51-55)
【关键词】抗真菌药物;棋盘法;时间-杀菌曲线;体外药效
【作者】李妍;郭琼杰;孙淑娟
【作者单位】山东省千佛山医院
【正文语种】中文
【中图分类】R978.5
【相关文献】
1.低浓度他克莫司与抗真菌药物联合的体外抗真菌效应 [J], 陈淳;陈启红;孙毅;高
露娟;曾同祥
2.6种抗真菌药物对皮肤癣菌体外抗真菌活性评价 [J], 万喆;王爱平;陈伟;李若瑜
3.棋盘法和倍比微量稀释法在体外联合抗真菌活性药物筛选中的应用研究 [J], 尹
光美;苏刘艳;李俊;李加秀;胡金玲;张祎;王睿睿
4.抗真菌药物单用与联合应用他克莫司对镰刀菌体外抑菌作用的比较 [J], 陈晓莲;丁辉;刘红山;何宏;吴娇婵;胡献铝;钟兴武
5.抗真菌药物单用与联合应用他克莫司对镰刀菌体外抑菌作用的比较 [J], 陈晓莲;丁辉;刘红山;何宏;吴娇婵;胡献铝;钟兴武
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

中效原理在体外抗癌药物定量分析中的应用

中效原理在体外抗癌药物定量分析中的应用
陈姝;汤为学;娄世锋
【期刊名称】《肿瘤防治研究》
【年(卷),期】2004(31)5
【摘要】目的在体外利用中效原理定量分析抗癌药物联合应用过程中的协同、
相加或拮抗作用。

方法采用MTT法 ,利用中效原理判断联合用药 (阿糖胞苷 ,长
春新碱 )对HL 6 0细胞的效应。

结果两种药物单用及联合应用时随药物剂量增加,其效应也随之增加。

两药大剂量合用时为拮抗效应,小剂量合用时为协同效应。

两药合用时给药次序不同不会影响合用效应 ,两药合用时药物浓度比例变化会影响合用效应。

结论两种药物合用时大剂量为拮抗 ,小剂量为协同 ,其效应大小与两
种药物浓度比例有关 ,而与给药时间次序无关。

【总页数】3页(P270-272)
【关键词】中效原理;抗癌药物;定量分析;长春新碱;白血病
【作者】陈姝;汤为学;娄世锋
【作者单位】重庆医科大学附属第二医院血液科;重庆医科大学病理生理教研室【正文语种】中文
【中图分类】R733.7;R730.53
【相关文献】
1.药物重新定位在新抗癌药物研发中的应用进展 [J], 郑筱玮;燕赛英;王菁蕊
2.全新药物设计方法与常用软件及其在抗癌药物设计中的应用 [J], 殷丽;陈临溪
3.抗癌化疗药物治疗中应用留置针预防药物外渗的护理研究 [J], 刘新
4.中效原理在胃癌联合化疗中的应用及药物抗癌机制的初步探索 [J], 胡金喜;林赛锋;曾呈军;刘磊;周磊;葛小刚;郑志强
5.利用中效原理观察抗癌药物的相互作用 [J], 何松;沈薇;沈鼎明
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。