Chapter7液相色谱
液相色谱PPT课件
溶剂等级
水的等级
纯化水 蒸馏水 去离子水
吸 光
去离子水
率 纯化水
波长 (nm) 因为不纯物的存在，去离子的吸光率较高
纯化水中去除了无机和有机的污染物
12
HPLC用水可以通过以下几个方面来得到：
• 1 专门的纯水机或超纯水机； • 2 去离子水重蒸； • 3 二次或三次重蒸水； • 4 采用类似家用的纯水机； • 5 市场上瓶装的纯净水或蒸馏水； • 6 其它途径；
Modified Si
9
反相HPLC 色谱柱
C18 (ODS) type
C8 (octyl) type Non-polar property
C4 (butyl) type Phenyl type
-Si-C18H37
TMS type
Si
Cyano type
10
流动相
流动相选择注意事项： ▪纯度：采用“ HPLC ”级溶剂 ▪避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂 ▪对试样有适宜的溶解度 ▪溶剂粘度要小 ▪与检测器相匹配 ▪流动相配制时的顺序
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进样体积与响应值关系
检
测
器
响 应
部分注入
值
定量管体积的一半
18
进样器
▪ 自动进样器 ▪ 手动进样器
原理：（六通阀） 注入方式：
1）全量注入 2）部分注入
返回
19
HPLC六通阀进样器的使用及保养
• 六通阀进样器是高效液相色谱系统中最理想的进样器，它是 由圆形密封垫(转子)和固定底座(定子)组成。美国Rheodyne 公司的六通阀进样器最为通用，各大HPLC仪器制造商均以 此产品作为仪器的进样器。
24
《液相色谱分析法》课件
,
汇报人：
目录
01 添 加 目 录 项 标 题 03 液 相 色 谱 分 析 法 的
技术原理
05 液 相 色 谱 分 析 法 的 优缺点
02 液 相 色 谱 分 析 法 的 概述
04 液 相 色 谱 分 析 法 的 应用实例
06
液相色谱分析法的 发展趋势和未来展
望
Part One
单击添加章节标题
数据处理：对检测到的信号 进行处理，得到样品的色谱 图和定量结果
结果分析：根据色谱图和定 量结果，对样品进行分析和 鉴定
Part Four
液相色谱分析法的 应用实例
在药物分析中的应用
药物稳定性研究：研究药物 在储存过程中的稳定性
药物成分分析：分析药物中 的有效成分、杂质等
药物质量控制：控制药物的 质量，确保药物的安全性和
液相色谱分析法的研究热点和前沿技术
超高效液相色谱技术：提高分离效率，降 低检测限
生物样品分析：应用于生物医药、食品安 全等领域
质谱联用技术：提高检测灵敏度和准确性
环境样品分析：应用于环境监测、污染治 理等领域
微流控芯片技术：实现样品的微型化和快 速分析
智能化、自动化技术：提高分析效率，降 低人工操作误差
添加标题
核磁共振检测器：利用核磁共振原理，检测样品中的核磁共振信号，用于结构分析和定量分析
液相色谱分析法的操作流程
样品制备：将样品进行适当 的处理，如稀释、过滤等
样品注入：将样品注入到色 谱柱中
色谱分离：样品在色谱柱 中分离，根据不同组分的 性质和亲和力进行分离
检测器检测：样品经过检 测器时，检测器对样品进 行检测，得到相应的信号பைடு நூலகம்
《液相色谱法》PPT课件
§7-1 概述
（1）液相色谱简介
（2）液相色谱的发展
（3）液相色谱的分类
§7-2 液相色谱仪
（1）液相色谱仪
（2）液相色谱仪的流程图
（3）液相色谱仪的工作过程
（4）液相色谱仪的基本组成系统
（5）高压泵
精选课件ppt
1
第七章 液相色谱(liquid chromatography)
吸附色谱 吸附能，氢键 异构体分离、族分离，制备
分配色谱 疏水分配作用 各种有机化合物的分离、分析与制备
凝胶色谱 溶质分子大小 高分子分离，分子量及其分布的测定
离子交换色谱
库仑力
无机离子、有机离子分析
离子排斥色谱 Donnan膜平衡 有机酸、氨基酸、醇、醛分析
离子对色谱 疏水分配作用 离子性物质分析
疏水作用色谱 疏水分配作用 蛋白质分离与纯化
手性色谱
立体效应 手性异构体分离，药物纯化
亲和色谱 生化特异亲和力 蛋白、酶、抗体分离，生物和医药分析
两种最常用的色谱法
（一）吸附色谱法（adsorption chromatography） 以吸附剂为固定相的色谱方法称为吸附色
谱法。使用最多的吸附色谱固定相是硅胶，流 动相一般使用一种或多种有机溶剂的混合溶剂。 在吸附色谱中，不同的组分因和固定相吸附力 的不同而被分离。
（6）梯度洗脱装置 （7）进样器 （8）色谱柱 （9）色谱填料 （10）检测器 （11）数据处理系统与自动控制单元
§7-3 新型液相色谱仪简介
（1） waters的UPLC （2）岛津高效率HPLC-2010A/2010C型 （3）岛津LC-VP系列应用系统离子色谱仪
液相色谱原理及操作
液相色谱原理及操作液相色谱（Liquid Chromatography，简称LC）是一种基于样品在液相中与固定相之间分配系数差异的分离技术。
液相色谱广泛应用于医药、食品、环境等领域，具有分离效率高、样品处理简便、分析速度快等优点。
本文将介绍液相色谱的原理和操作方法。
一、液相色谱的原理1.分离原理液相色谱将样品溶解在流动相中，通过样品与固定相之间的相互作用，使得组分在固定相上进行吸附和解吸过程，从而实现组分之间的分离。
其中的吸附和解吸过程分别对应了样品分子和流动相之间的平衡状态，即“样品在固定相上吸附的速度等于样品从固定相上解吸的速度”。
2.固定相的选择和作用固定相通常是一种多孔的颗粒状材料，如硅胶、葡萄糖凝胶、氨基硅胶等。
固定相的选择应根据分析样品的特性和需求来确定。
对于极性物质，一般选择非极性固定相；对于非极性物质，一般选择极性固定相。
固定相通过化学亲和性、电荷分布以及空间效应等力对样品进行吸附和解吸，实现组分的分离。
3.流动相的选择和作用流动相通常是溶解在有机溶剂或水中的溶液或混合溶剂。
流动相的选择要根据样品的特性、需求和固定相的性质来确定。
流动相的作用包括维持固定相的湿润、分散样品、稀释样品、提供适当的流动速度等。
4.检测器的选择和作用液相色谱中常用的检测器有紫外可见光检测器、荧光检测器、电化学检测器等。
检测器的选择应根据样品的特性以及分析方法的要求来确定。
检测器的作用是对样品组分进行定性和定量分析、检测检测物质的浓度、检测化学反应等。
二、液相色谱的操作方法1.样品的准备样品的制备要根据不同的分析目的进行。
样品的处理可以包括固体样品的研磨、溶解、萃取等步骤。
在样品制备过程中要注意避免样品的氧化、光降解、挥发等影响分析结果的因素。
2.设备的准备液相色谱仪的主要组成部分包括进样器、流动相驱动装置、固定相柱和检测器等。
在操作前应确认仪器的正常工作状态、流动相的供给情况、固定相的状态以及检测器的灵敏度和稳定性。
液相色谱基本原理与应用ppt课件
高效液相色谱是在经典液相色谱基础上， 引入了气相色谱的理论，在技术上采用了 高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器， 因而具备速度快、效率高、灵敏度高、操 作自动化的特点。
病原体侵入机体，消弱机体防御机能 ，破坏 机体内 环境的 相对稳 定性， 且在一 定部位 生长繁 殖，引 起不同 程度的 病理生 理过程
三、HPLC在各领域的主要应用
• 环境：常见多环芳烃、多氯联苯、硝基化 合物、酚类化合物、邻苯二甲酸脂、有机 农药等。
• 农业：土壤矿物成分、肥料、饲料添加剂、 茶叶等农产品中无机和有机成分等。
• 食品：有机酸、氨基酸、糖、维生素、脂 肪酸、香料、甜味剂、防腐剂、人工色素、 病原微生物、霉菌毒素、多核芳烃等。
病原体侵入机体，消弱机体防御机能 ，破坏 机体内 环境的 相对稳 定性， 且在一 定部位 生长繁 殖，引 起不同 程度的 病理生 理过程
病原体侵入机体，消弱机体防御机能 ，破坏 机体内 环境的 相对稳 定性， 且在一 定部位 生长繁 殖，引 起不同 程度的 病理生 理过程
病原体侵入机体，消弱机体防御机能 ，破坏 机体内 环境的 相对稳 定性， 且在一 定部位 生长繁 殖，引 起不同 程度的 病理生 理过程
多环芳烃标准品色谱图
mV 900
萘 苊
800
700
600
二 苯 并a，h蒽 苯 并g，h，i苝 茚 苯1，2，3-cd苝
苯 并a蒽 屈 苯 并b荧 蒽 苯 并k荧 蒽 苯 并a芘
500
荧蒽
苊烯
400
芴 菲
蒽 芘
300
200
100
0
3 -100
6
9
12
15
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液相色谱原理及操作
液相色谱原理及操作液相色谱（Liquid Chromatography, LC）是一种分离和分析化合物的技术，使用液体作为移动相和固体或液体作为静相，在静相表面上实现化合物的分离。
液相色谱在生物化学、环境分析、药物分析、食品科学等领域被广泛应用。
液相色谱的原理基于分离过程中样品成分与固相之间的交互作用。
液相色谱根据实际应用可以分为几类，包括分析LC和制备LC。
其中，分析LC用于对复杂混合物中的成分进行分离和定量分析，制备LC用于分离和纯化特定化合物。
液相色谱操作的基本步骤包括样品预处理、样品进样、色谱柱选择、流动相组成调节、分离和检测等。
1.样品预处理：样品必须在进样之前进行预处理，去除杂质和固体颗粒。
常用的样品预处理方法包括过滤、萃取、稀释等。
2.样品进样：样品进样是将样品引入色谱系统的过程。
常用的样品进样方式包括手动进样、自动进样和在线进样等。
3.色谱柱选择：色谱柱是液相色谱的核心部分，不同的样品需要选择不同类型的色谱柱。
常用的色谱柱类型包括反相色谱柱、离子交换色谱柱、凝胶过滤色谱柱等。
4.流动相组成调节：流动相是液相色谱中的移动相，根据样品的性质和分离要求，可以调节流动相的组成和性质。
常用的流动相包括溶剂和缓冲液。
5.分离：在色谱柱中，样品组分与静相表面相互作用，根据它们与静相的亲水性、亲溶性等物理化学性质的不同，分离为不同的峰。
分离过程中，可以通过调节流速、温度和固相等参数来改变分离效果。
6.检测：检测是液相色谱中的最后一步，通过检测器检测色谱峰的高度或面积来定量分析样品中化合物的含量。
常用的检测器包括紫外可见光检测器、荧光检测器、质谱仪等。
液相色谱的优点包括分离效果好、灵敏度高、准确性高、应用范围广等。
然而，液相色谱技术也存在一些缺点，如样品准备复杂、分离时间长等。
因此，在实际应用中，需要根据样品的特性和分析目的选择合适的液相色谱方法。
总结：液相色谱是一种广泛应用于分离和分析化合物的技术。
007高效液相色谱法操作规程
目的：确保药品质量符合规定范围：所有本公司购进和生产的需进行该项检验的原辅料及成品责任人：QC人员内容：1. 简述高效液相色谱法是一种现代液体色谱法，其方法是将具有一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液，作为流动相，用泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理，得到测定结果。
由于运用了各种特性微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高，分离速度快的特点。
高效液相色谱法适用于能在特定填充剂的色谱柱上进行分离的药品的分离测定，特别是多组分药品的测定，杂质检查和大分子物质的测定。
2. 仪器高效液相色谱仪3. 操作方法3.1 流动相的制备用高纯度的试剂配制流动相，必要时照紫外分光光度法进行溶剂的检查，应符合要求；水为新鲜制备的高纯水，可用超级纯水器制得或用重蒸馏水。
对规定pH值的流动相，应使用精密pH计进行调节。
配制好的流动相应通过0.45μm 适宜的滤膜滤过，用前脱气。
应配制足量的流动相及时待用。
3.2 供试液的配制供试品用规定溶剂配制成供试溶液。
定量测定时，对照品溶液和样品供试溶液均应分别配制2份。
供试溶液在注入色谱仪前，一般应经0.45μm 适宜的滤膜滤过。
必要时，在配制供试溶液前，样品需经提取净化，以免对色谱系统产生污染。
3.3 检查上次使用记录和仪器状态检查色谱柱是否适用于本次实验，色谱柱进出口位置是否与流动相的流向一致，原保存溶剂与现用流动相能否互容。
流动相的pH值与该色谱柱是否相适应，仪器是否完好，仪器的各开关位置是否处于关断的位置。
3.4 泵的操作3.4.1 用流动相冲洗滤器，再把滤器浸入流动相中，启动泵。
3.4.2 打开泵的排放阀，用专用注射器从阀口抽出流动相约20ml，设置高流速进行冲泵排气，观察出口处流动相呈连续液流后，将流速逐步回零或停止冲洗，关闭排放阀。
3.4.3 将流速调节至分析用流速，对色谱柱进行平衡，同时观察压力指示应稳定，用干燥滤纸片的边缘检查柱管各连接处应无渗漏。
液相色谱概述与基本原理
采用更小粒径的填料，实现更高的分离度和分析速度。
反相高效液相色谱（RP-HPLC）
发展反相色谱柱和洗脱液体系，增强对极性化合物的分离效果。
亲水作用色谱（HILIC）
利用亲水作用力进行分离，适用于极性化合物的分离和分析。
提高分离效率和灵敏度
新型检测器
开发和应用新型检测器，如质谱检测 器、荧光检测器等，提高检测灵敏度 和选择性。
THANKS
感谢观看
按固定相的极性分
类
可分为正相色谱和反相色谱。正 相色谱采用极性固定相，适用于 极性物质的分离；反相色谱采用 非极性固定相，适用于非极性物 质的分离。
03
液相色谱的应用
在化学分析中的应用
分离和纯化有机化合物
液相色谱可用于分离和纯化有机化合物，如芳香烃、醇、醛、酮等， 常用于有机合成和天然产物的分离。
02
有毒有害物质分析
03
生态毒理学研究
液相色谱可用于检测工业废水、 废气中的有毒有害物质，为环境 保护提供科学依据。
液相色谱可用于研究环境污染物 对生物体的毒性作用，为生态毒 理学研究提供技术支持。
04
液相色谱的发展趋势和挑战
技术创新和改进
高效液相色谱（HPLC）
通过改进色谱柱填料和固定相，提高分离效率和选择性。
微柱和纳升液相色谱
采用微柱和纳升液相色谱技术，降低 样品消耗量和流动相体积，提高分离 效率和灵敏度。
解决实际应用中的问题
复杂样品处理
发展样品前处理技术，如固相萃取、在 线萃取等，简化样品处理过程，提高分 析效率。
VS
多维液相色谱
采用多维液相色谱技术，实现更复杂的样 品分离和分析，提高分离效果和峰容量。
液相色谱操作步骤
液相色谱操作步骤1.样品制备：将待测化合物溶解在合适的溶剂中，通常是一种与流动相相溶的溶剂。
如果样品是固体，可以首先用溶剂溶解，然后使用过滤器去除悬浊物。
2.准备流动相：根据需要选择合适的流动相，并将其制备好。
流动相通常是由溶剂和缓冲剂或某种添加剂组成的混合物。
流动相的准备应符合色谱方法的要求。
3.色谱柱选择：根据待测化合物的性质选择合适的色谱柱。
色谱柱的选择涉及到固定相的类型、大小和形状等因素。
常见的色谱柱类型包括RP（反相）、NP（正相）、离子交换柱等。
4.色谱柱装载：将准备好的色谱柱连接到色谱仪，并使用适当的固定相条件进行装填。
确保色谱柱的装填均匀，并且柱床紧密、无气泡。
5.系统平衡：开启色谱仪，让流动相在色谱柱中流动，直至达到稳定状态。
这个过程被称为系统平衡，通常需要几十分钟到几小时的时间。
6.样品注射：将制备好的样品以适当的体积注射到色谱仪中。
样品注射器通常用来控制样品的体积和速度。
7.梯度洗脱条件：根据色谱方法的要求，逐渐改变流动相的组成和浓度，以实现对化合物的分离和纯化。
这个过程称为洗脱。
梯度洗脱条件的选择需根据化合物的极性和流动相的性质来确定。
8. 检测器检测：在某种波长下使用检测器对流出的化合物进行检测。
常见的检测器有紫外-可见（UV-Vis）检测器、荧光检测器、电化学检测器等。
9.数据处理和结果分析：根据检测器输出的信号，使用数据处理软件对色谱图形进行处理和分析。
可以根据峰面积、保留时间和质量浓度等参数确定化合物的含量。
10.仪器维护和清洗：使用完毕后，及时对色谱仪进行维护和清洗。
具体的清洗步骤应按照仪器和色谱柱的说明进行。
总之，液相色谱是一种复杂的分离和分析技术，操作步骤繁琐，但准确掌握每个步骤的要领可以保证结果准确、重复性好。
因此，在进行HPLC实验前，需要充分了解分析样品的特性以及所使用仪器的操作要点和安全注意事项。
《液相色谱法》课件
DATE
ANALYSIS
SUMMAR Y
REPORT
CATALOG
DATE
ANALYSIS
SUMMAR Y
05
液相色谱法的优化与注 意事项
实验条件的优化
1 2
流动相的选择
根据分析物的性质选择合适的流动相，如有机溶 剂、缓冲液等，以达到最佳分离效果。
流速的优化
流速对色谱分离效果有重要影响，需根据实际情 况调整流速，以达到最佳分离效果。
3
柱温的优化
柱温会影响物质的吸附和扩散速度，适当提高柱 温可以加快分析速度，但过高的温度可能导致柱 效降低。
液相色谱柱的维护与保养
使用前清洗
新柱子使用前需进行彻底清洗，以去除残留物和 污染物。
使用中维护
使用过程中应定期清洗和再生色谱柱，以保持其 性能和寿命。
储存条件
色谱柱应存放在干燥、避光的地方，避免直接阳 光照射和高温。
反相色谱法
总结词
反相色谱法是利用非极性固定相和极性流动相之间的相互作用来分离物质的分离 模式。
详细描述
反相色谱法中，固定相通常是烷基键合硅胶，流动相则是极性的溶剂，如水、甲 醇等。在分离过程中，非极性或弱极性的组分更容易被固定相吸附，因此会先被 洗脱出来。
离子交换色谱法
总结词
离子交换色谱法是利用离子交换剂与溶液中的离子之间的相互作用来分离物质的分离模 式。
动相。
流动相的流速和组成对分离效果 也有影响，需根据实际情况调整
。
固定相
固定相是色谱柱中的填料，用于吸附样品中的组分。
常见的固定相有硅胶、氧化铝、活性炭等，根据不同分离需求选择合适的固定相。
固定相的粒径和性质对分离效果有影响，粒径越小，性质越均匀，分离效果越好。
第7章高效液相色谱分析法
第7章高效液相色谱分析法高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分离和分析技术。
它的分离原理是利用样品中不同组分在固定填料（站相）上的分配行为，通过流动相（流动相）的推动，使不同组分在填料上快速分离。
HPLC由于其灵敏度高、分析速度快、分辨率高等优点，广泛应用于药物分析、环境监测等领域。
高效液相色谱分析法的基本步骤包括：样品制备、进样、色谱分离、检测和数据处理。
样品制备是将需要分析的样品处理成可溶解于溶剂体系中的形式，通常需要提取、过滤等步骤。
进样是将样品注入色谱柱中，常用的进样方式有定量进样和体积进样。
色谱分离是指样品组分在填料中的分离过程，选择合适的填料和流动相可以实现对目标物的有效分离。
检测是通过检测器对样品在色谱柱中的分离情况进行监测，常用的检测器有紫外检测器、荧光检测器等。
数据处理是将得到的检测结果进行定量分析和报告生成。
高效液相色谱分析法具有如下特点：1.分离效率高：由于HPLC使用的填料颗粒细小，色谱柱长度较长，使得分离能力显著提高，可以同时分离多个组分。
2.灵敏度高：HPLC配备了多种灵敏度高的检测器，如紫外检测器、荧光检测器等，可以对很低浓度的组分进行检测。
3.分析速度快：HPLC的柱径较小，填料颗粒细小，流动相的流速较大，使分离速度更快。
可以在短时间内完成大量分析。
4.具有选择性：可以根据目标物的化学性质选择不同的填料和流动相，从而实现对不同化合物的选择性分离。
5.自动化程度高：HPLC仪器配有自动控制系统和数据采集系统，可以实现样品进样、数据处理等自动化操作，提高了实验效率和准确性。
高效液相色谱分析法在实际应用中具有广泛的应用。
比如在药物分析方面，HPLC可以用于药物质量控制、药物代谢动力学研究等。
在环境监测方面，HPLC可以用于有机污染物的检测和分析。
在食品安全方面，HPLC可以用于检测食品中的残留农药、添加剂等。
液相色谱流程图及各部分作用
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凝胶 凝胶基质 珠
小分子 大分子
凝胶过滤过程示意图
色谱柱的重要参数
（1）柱体积：指凝胶装柱后，从柱的底板到凝胶沉积表面 的体积，即柱床体积，常用Vt 表示。
（2）空隙体积（也称外水体积）：色谱柱内凝胶颗粒之间 空隙的体积，常用Vo表示。
（3）内水体积：在一定的凝胶柱内，凝胶颗粒内部孔隙所 占的体积，常用Vi表示。
当料液体积小于两者洗脱 体积之差时，两种物质才 可能得到完全分离
GFC的分离精度有限, 料液处理量也有限
二、 凝胶过滤介质
对介质的要求
亲水性高，表面惰性，即与溶质不发生任何化学或 物理相互作用；
化学稳定性高，对pH、离子强度及化学试剂稳定， 使用寿命长；
具有一定的孔径分布范围； 机械强度高，允许较高的操作压力(流速)。
m为分配系数，它表示一种物质在凝胶颗粒孔隙内的滲 透程度
洗脱速度
洗脱速度取决于分配系数m，m＝(Ve－Vo)／Vi，相当于这 种分子在凝胶孔隙内所占体积和孔隙总体积的比值。
凝胶
m=l 0<m< l m＝0
1.Ve=Vo 完全排阻，洗脱速度最快。 m＝0。 2. Ve＝Vi＋Vo ≈ Vt 完全进入凝胶颗 粒内部,洗脱速度最慢。m=l。 3. Vo <Ve<Vt 部分排阻，m值介于0-l 之间，物质的洗脱速度随其m值的 增加而降低
色谱法的特点
分离精度高、设备简单、操作方便。 终产品纯化，适用于价格昂贵的产品
色谱法的应用
物质成分的定量分析与检测； 生物物质的制备分离和纯化。
GC- C
岛 津
14 气 相 色 谱 仪
H日PL立C液仪相色谱仪
第一节 色谱原理与分类
一、原理
色谱分离的主体介质：固定相和流动相 原理：根据混合物中，溶质在互不相溶的固定
液相色谱 超临界流体色谱
生物分离主要采用液相色谱法（liquid chromatography)
纸色谱
液相色谱
2.根据固定相形状
薄层色谱
柱色谱
多用于 分析
易放大， 适于大量
制备
3.根据操作压力
液固柱色谱
大规模 制备
低压色谱（<0.5MPa)
中压色谱(0.5-4.0MPa)
高压色谱(4.0-405MPa)
洗脱法与迎头法和置换法的差异？
样品液
迎头法
大量、连续
置换法
适量
洗脱法
极少量
“流动相” 分离结果
样品液 一个纯组分
置换剂
流动相(溶剂, 水,缓冲盐)
纯组分区带 n个纯组分
色谱带 与
色谱图
洗脱法
置换法 迎头法
6.根据分配机理
凝胶过滤
离子交换
疏水性相互 作用色谱
原理
亲和色谱
吸附色谱
反相色谱
第二节 凝胶过滤色谱
第七章 液相色谱
概述
分子的形状和大
小、分子极性、
色谱法（chromatography) 吸附力、 分子
亲和力、疏水性
色谱法又称层析法。属高度纯化技术。 等
是利用混合物中各组分理化性质的不同，使各组
分以不同程度分布在固定相和流动相中，当流动
相流过固定相时，各组分以不同的速度移动，而
达到分离的技术。
分离精度高，主要用 于分析，也可用于分
离制备
4.根据流动相流动方向
轴规率相模高流放。色大谱容易；柱效
但柱设备造价较高， 较少使用
径相流色谱
溶质在半径方 向上得到分离
5.根据分离操作方式
洗脱展开（色谱ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 迎头分析 置换展开（色谱）
1）迎头分析
样品液 分离柱
与固定床吸附操作相同，大量料液连续 地通过色谱柱，直到在出口处发生溶质 穿透。只有最先穿透的组分（分配系数 小）能回收到纯物质，之后流出组分均 为混合物
蛋白质在凝胶介质中的分配系数随 相对分子质量的增大而减小
料液体积
─当料液体积很少时，(与洗脱体积比较可以忽略不计)， 在洗脱图中，从加样到峰顶位置所用洗脱液体积为Ve。 ─当料液体积与洗脱体积比较不能忽略时，洗脱体积计算 可以从料液体积的一半到峰顶位置。 ─当料液很大时，洗脱体积计算可以从应用样品开始到洗 脱峰升高的弯曲点(或半高处)。
相和流动相之间分配行为的差别，引起的随流 动相移动速度的不同而进行分离的方法。
紫外检测器、荧 光检测器
色谱图（chromatogram) -------荧光检测器
色谱图（chromatogram) -------紫外检测器
保留时间
二、分类
1.根据流动相状态
气相色谱
固定相形式： 固体、液体、 和以固体为载 体的液体薄层
凝胶介质的种类
葡聚糖系列 琼脂糖系列 聚丙烯酰胺系列 其他
G后面的数字越大，凝胶孔经越
大，越适合于大分子的分离，
葡聚糖凝胶
一、原理与操作
GFC的原理
凝胶具有多孔网状结构， 小分子可以进入凝胶网孔， 而大分子则排阻于颗粒之 外。
（不同大小分子在多孔凝胶中阻滞力不同）
大分子物质沿凝胶颗粒 间隙随洗脱液移动，流 程短，移动速率快，先 被洗出层析柱
小分子物质可通过凝胶 网孔进入颗粒内部，然 后再扩散出来，故流程 长，移动速度慢，最后 被洗出层析柱
（Gel Filtration Chromatography）
基本概念
凝胶过滤色谱（Gel Filtration Chromatography，GFC）又称凝 胶排阻色谱, 分子筛过滤等。
利用凝胶粒子（凝胶过滤介质） 为固定相，根据料液中溶质相 对分子质量的差别进行分离的 液相层析法.
单个凝胶珠本身象“筛子”。不 同类型凝胶的筛孔的大小不同。
主要用于色谱过程分析和理论研 究
2）置换展开(顶替展开)
混合样
加样
置换剂
分离结果
置换剂与固定 相亲和作用大 于料液中各组
分
将混合物样品加到色谱柱后，然后用亲和力大的置换剂流
过色谱柱，试样中的各组分按亲和力由小到大顺序依次被置 换出分离柱。
3）洗脱展开（elution method）
最常见的色谱方法
（4）洗脱体积：是指被分离物质通过凝胶柱所需洗脱液的 体积，常用Ve 表示。
Vt=Vo+Vi+Vg≈ Vo+Vi
Vg为凝胶本身的体积
当样品流经凝胶柱时，大于孔隙
GFC的洗脱曲线的大分子完全不滲中入等到分凝子样胶（品内分体部子积，大小小于在孔上隙的小分子， 只一端需洗V0体脱积到的另洗一脱端述 脱液；液两便体种可积极将则介限其需于之由要两间V）者0＋之所V间需i体，洗积的洗脱液 Ve＝V0＋（mV接i（近0柱<m体<1积）V。t)，才能将它 们由一端洗脱到另一端。