ABO血型鉴定
ABO血型的鉴定
实验ABO血型的鉴定[实验目的] 学会用玻片法鉴定ABO血型，加深理解血型分型的依据。
[实验原理]血型是根据存在于红细胞膜外表面的特异性抗原确定的，这种抗原由遗传基因决定。
血清中的抗体可与红细胞膜上的不同抗原结合，产生凝集反应，最后发生红细胞的溶解。
A凝聚原+ A 凝集素→红细胞凝聚B凝聚原+ B 凝集素→红细胞凝聚ABO血型系统根据受试者红细胞上A、B凝集原的有无和种类，将血型分为A, B, O及AB型。
[实验用品]标准抗A和抗B血清一套，玻片、玻璃蜡笔、碘伏消毒液、牙签、采血针、显微镜等。
[实验方法]1.标记玻片：取干净玻片一张，擦干，不能留有水分，以防溶血；用玻璃蜡笔分别在两端表明A、B字样。
2.滴加血请：在载玻片A、B两端分别滴加标准抗A血清、抗B血清各一滴。
注意切不可混淆。
3.消毒采血：用棉签蘸取碘伏消毒液，消毒左手无名指指腹皮肤。
用消毒采血针垂直刺入消毒处皮肤采血1—2滴，将血液分别滴入标准抗A、抗B血清中，分别用牙签将血液与血清混匀，注意切不可用一根牙签在两侧血清中搅拌。
4.观察反应：静置10~15分钟后用肉眼观察有无凝集现象，肉眼不易分辨时用低倍镜观察。
5.结果判断：根据有无凝集现象判定血型。
（1）只在抗A血清中有凝集反应，则血型为A型；（2）只在抗B血清中有凝集反应，则血型为B型；（3）在抗A及抗B血清中均有凝集反应，则血型为AB型；（4）在抗A及抗B血清中均无凝集反应，则血型为O型。
6.[注意事项]（1）.采血针和皮肤必须严格消毒。
（2）滴加两种标准血清切不可混淆, 移动玻片时切勿将两种标准血清相混。
切不可用一根牙签在两侧血清中搅拌。
（3）注意区别凝集现象，肉眼分辨不清时使用低倍镜进行辨别。
7.实验记录：（1）实验现象：（2）实验结果：。
ABO血型的鉴定
实验步骤
1、在玻片两端分别标明“A”和“B”， 并各滴生理盐水一滴。 2、用75％酒精棉球消毒受测者一 侧耳垂或无名指尖，以采血针刺入 该处皮肤1.5—2mm再用清洁牙签蘸 取少量血液，分别混入玻片上的生 理盐水中，稍加搅拌成混悬液。
3、分别向标明“A”和“B”的两端混悬 液中加入抗A和抗B标准血清一滴并混 匀。 4、静置5-10分钟后观察结果。平置 玻片于光线充足处，后衬白色背景将 玻片轻轻摇动，红细胞结成小片块状 且不能摇散者为凝集；反之，摇动后 为均匀混悬液者为不凝集。根据有无 凝集现象判定血型。
结 果
A型血
抗A血清 抗B血清
B型血
抗A血清 抗B血清
O型血
抗A血清 抗B血清
AB型血
抗A血清 抗B血清
ABO血型的鉴定
实验目的
学会用玻片法测定ABO血型，根据测 定结果确定血型。
Hale Waihona Puke 实验原理用已知的凝集素（标准血清）鉴定出 被检者红细胞膜上未知的凝集原，从 而测出自己的血型。
实验器材
滴管、双凹玻片、牙签、采血针。 抗Ａ标准血清（从Ｂ型血的血清中 获得）、抗Ｂ标准血清（从Ａ型血的 血清中获得）、生理盐水，75%酒精 棉球。
ABO血型鉴定
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（4）观察结果：肉眼观察有无凝集 (或溶血)反应，再用低倍镜观察，判 定阴性、阳性和阳性强度。
凝集判断标准：如红细胞呈均匀分 布，无凝集颗粒，显微镜下红细胞 分散存在，无凝集靠拢现象为阴性； 红细胞出现凝集为阳性。
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【注意事项】
1．所用器材必须干燥清洁、防止溶血；为 避免交叉污染，各器皿均一次性使用为佳。
6. 理论上IgM抗A和抗B与相应红细胞的反 应温度以4℃最强，但为了防止冷凝集现象 的干扰，一般仍在室温(20C～24C)内进 行试验，37C可使反应减弱。
7. 观察结果时应注意红细胞呈特异性凝集、 继发性凝集以及缗钱状形成的区别。
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思考
根据自己的血型，说明你能接受和输血 给何种血型的人，为什么？
ABO血型鉴定
——玻片
输血科
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1
【基本原理】
常用盐水凝集法检测红细胞上存在的血型抗 原，以及血清中存在的血型抗体，依据抗原 抗体存在的情况判定血型。常规的方法有： ①正向定型：用已知抗体的标准血清检查红 细胞上未知的抗原。②反向定型：用已知血 型的标准红细胞检查血清中未知的抗体。结 果判定：凡红细胞出现凝集者为阳性，呈散 在游离状态为阴性。
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2
一、血型Blood Group/type
血型：是对血液分类的方法，血 细胞（红细胞）膜上存在的特异 抗原性物质的类型。
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3
血型分类的依据是红细胞表面是否存 在某些可遗传的抗原物质。
红细胞凝集Agglutination：血型不相 容的血液混合后，其中的红细胞聚集 成簇并溶血。
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AB型人大多小时候怕陌生人，很闭塞，但长 大以后善交朋友，交际广泛。AB型人因过于 自信，容易自满，老年时给人感觉很傲慢。 不过他们兼具A型与B型的特质，做事有计划， 但没有耐性，容易冲动，直觉敏锐，不喜欢 墨守成规，性情多变，有时表现极端的个性。 善于待人接物，很注意合情合理性，讨厌口 是心非的人，具有强烈的批评精神。 AB型 是不讲人情，不谈爱情的，男女关系在AB型 看来是件极具单纯的事情，不会像其他血型 的人弄得那样复杂 。
abo血型鉴定方法
abo血型鉴定方法
ABO血型鉴定方法包括以下步骤：
1.准备样本：收集被检测者的血液样本，通常采用静脉采血或指尖采血。
2.制备试剂：制备含有抗A、抗B抗体的试剂。
3.进行试验：将被检测者的血液滴在试剂上。
如果血液中含有抗A抗体，则血液会与抗A抗体反应，试剂变为凝胶状，表示血型为B型；如果血液中含有抗B 抗体，则试剂变为凝胶状，表示血型为A型；如果血液中都不含有抗A或抗B 抗体，则试剂不会发生凝胶反应，表示血型为O型；如果血液中同时含有抗A 和抗B抗体，则试剂会产生凝胶反应，表示血型为AB型。
4.验证结果：对测试结果进行验证，确保准确性。
实验十五 ABO血型鉴定
实验十五 ABO血型鉴定一、正定型法【目的】掌握用盐水介质法进行ABO血型系统(ABO group)正定型(direct typing)的原理、操作方法和结果判断。
【原理】用已知的IgM类特异抗体（标准血清）与被检红细胞在室温条件下、盐水介质中反应，根据红细胞是否出现凝集现象来测定被检红细胞膜上有无与血型抗体相对应的抗原，从而判断和鉴定被检者的血型。
【器材】1. 1.小试管、记号笔、蜡笔、试管架。
2. 2.尖滴管、胶吸头。
3. 3.吸管、吸耳球。
4. 4.载玻片或有凹槽的玻璃板或白瓷板。
5. 5.离心机。
6. 6.显微镜。
【试剂】1．标准抗A、抗B血清（商品）分为人血清ABO血型抗体和人ABO血型单克隆抗体，要求如下：（1）人血清ABO血型抗体：①特异性高。
②凝集效价：抗A不低于1∶128 ，抗B不低于1∶64。
③亲和力：反应开始15s内即出现凝集，3min时明显凝集，血凝块大于1mm2。
④稳定性高。
⑤已灭活补体。
（2）人ABO血型单克隆抗体：①特异性：抗A抗体特异凝集具有A型红细胞抗原的A1、A2、A1B、A2B；抗B抗体只凝集含B抗原的B和AB型红细胞。
②亲和力：以开始反应到出现凝集的时间表示抗血清的亲和力，国家标准是抗A对A1、A2、A2B分别为15s、30s、45s；抗B对B型红细胞为15s。
③凝集效价：国家标准是抗A1、抗B均大于1∶128。
④稳定性：较人血清抗体的稳定性低。
2．生理盐水。
【标本】抗凝静脉血或末梢血。
【操作】制备被检者5％红细胞生理盐水悬液：抗凝血离心或红细胞自然沉降后取试管下层的红细胞2滴于小试管中，加入生理盐水2ml，用尖滴管将红细胞与生理盐水充分混匀。
2 500r/min离心3 min 后弃去上清液，重复洗涤3次。
自管底吸取1滴压积红细胞加入19滴生理盐水中混匀，此即为5％的红细胞生理盐水悬液。
操作示意见图4-1。
图4-15％红细胞生理盐水悬液制备操作示意图1．玻片法（1）标记玻片或白瓷板：取洁净的载玻片或白瓷板1块，用蜡笔画出小格，标明抗A、抗B。
ABO血型的鉴定
反向定型 标准红细胞+被检查血清 A型红细胞 B型红细胞 C型红细胞
结果判断
+
_
+
_
+
_
A型
-
+
+
+
_
_
B型
+
+
+
_
_
_
_பைடு நூலகம்
_
+
+
_
AB型
_
O型
鉴定方法及评价
1、生理盐水凝集法； 2、微柱凝胶法； 3、血型定型试剂卡法。
1、生理盐水凝集法
• 是临床最常用的方法 • 可以用试管法和玻片法测定 • 玻片法不适用于反定型 • 标准血清来源有两种途径
人血清ABO血型抗体
• 高度特异性； • 高效价； • 高亲和力； • 无冷凝集素； • 无菌。
人ABO血型单克隆抗体
• 来源； • 特异性； • 亲和性； • 效价； • 稳定性； • 无菌； • 灭活补体。
2、微柱凝胶法
• 一种新的免疫学检测方法 • 采用单克隆抗体 • 结果可直接观察，也可用血型分析仪 • 灵敏度高
ABO血型鉴定的原理
• ABO血型鉴定主要利用抗原与抗体之间的反
应来完成，包括正向定型和反向定型，正 向定型是用已知特异性抗体（标准血清） 检查红细胞上的未知抗原，反之反向定型 是利用已知血型的标准红细胞检查血清中 的未知抗体。
ABO血型正向、反向鉴定及结果判断
正向定型
标准血清+被检查红细胞
抗A
抗B 抗AB
3、血型定型试剂卡法
• 利用免疫检测和分子排阻层析原理 • 能同时进行正反向定型和Rh（D）血型鉴定 • 结果重复性好
ABO血型鉴定
ABO血型鉴定
ABO血型鉴定介绍：
ABO血型鉴定即指ABO血型抗原的检测。
ABO血型鉴定正常值：
ABO血型分为A型、B型、O型、AB型。
ABO血型鉴定临床意义：
ABO血型鉴定主要用于：
①临床输血：当循环血量不足或大失血或贫血需进行输血治疗，在输血前必须先选择血型相同的供血者，再进行交叉配血，完全相同后才能输血。
②在皮肤、肾移植等器官移植的时候选择ABO血型相符的供体。
③不孕症和新生儿溶血症病因的分析。
④亲子鉴定等。
ABO血型鉴定注意事项：
取血前注意消毒，取血后注意预防伤口感染。
ABO血型鉴定检查过程：
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ABO血型鉴定
实验步骤
玻片法 • （1） 取玻片一块，用干净纱布轻拭使之洁净，在玻片两 端用笔标明A及B，并分别各滴入A及B标准血清一滴。 • （2） 细胞悬液制备从指尖或耳垂取血一滴，用棉签将其 涂于玻片上（注意：要用不同的棉签涂）。采血时应注意 先用75％酒精消毒指尖或耳垂。 • （3） 竹签两头分别混合，搅匀。 • （5） 1-2min后观察结果。如有凝集反应可见到呈红色点 状或小片状凝集块浮起。先用肉眼看有无凝集现象，肉眼 不易分辨时，则在低倍显微镜下观察，如有凝集反应，可 见红细胞聚集成团。 • （6） 判断血型 根据被试者红细胞是否被A，B型标准血 清所凝集，判断其血型。
在ABO血型系、O四型。
表 4-3-1-1 ABO 血型中的抗原和抗体 血 型 O A B AB 红细胞膜上所含的抗原 无A和B A B A和B 血清中所含的抗体 抗 A 和抗 B 抗B 抗A 无抗 A 和抗 B
实验器材和药品
• 1．器械采血针，消毒注射器，玻片，竹签，棉球， 记号笔。 • 2．药品标准A血清，标准B血清， 75％酒精。
生凝集现象。血型鉴定是将受试者的红细胞加入标准A型
血清（含有抗B抗体）与标准B型血清（含有抗A抗体）中， 观察有无凝集现象，从而测知受试者红细胞膜上有无A或/
和B抗原。
交叉配血是将受血者的红细胞与血清分别同供血者的血清 与红细胞混合，观察有无凝集现象。输血时，一般主要考 虑供血者的红细胞不要被受血者的血清所凝集；其次才考 虑受血者的红细胞不被供血者的血清所凝集。前者叫交叉 配血试验的主侧（也叫直接配血），后者叫交叉配血的次 侧（也叫间接配血）。只有主侧和次侧均无凝集，称为 “配血相合”，才能进行输血；如果主侧凝集，称为“配 血不合”或“配血禁忌”，绝对不能输血；如果主侧不凝 集，而次侧凝集，可以认为“基本相合”，但输血要特别 谨慎，不宜过快过多，密切注视有无输血反应。
鉴定abo血型实验报告
鉴定abo血型实验报告
鉴定ABO血型实验报告
ABO血型系统是人类最常见的血型系统之一，通过实验鉴定ABO血型可以为临床输血、配型和亲子鉴定提供重要的参考依据。
本实验旨在通过准确的实验操作和数据分析，对被鉴定者的血型进行准确鉴定，为临床医学提供可靠的实验数据。
实验方法：
1. 采集被鉴定者的血液样本，并进行离心分离，得到红细胞悬液和血浆。
2. 采用抗体法鉴定血型。
将被鉴定者的红细胞悬液与A、B、O血型抗体分别混合，观察凝集反应情况。
3. 采用凝集素法鉴定血型。
将被鉴定者的血浆与A、B凝集素分别混合，观察凝集反应情况。
实验结果：
根据实验操作和数据分析，得出以下鉴定结果：
1. 抗体法鉴定：A抗体与被鉴定者的红细胞悬液发生凝集反应，B抗体与被鉴定者的红细胞悬液发生凝集反应，O抗体未与被鉴定者的红细胞悬液发生凝集反应。
2. 凝集素法鉴定：被鉴定者的血浆与A凝集素发生凝集反应，与B凝集素未发生凝集反应。
综合两种方法的实验结果，可以确定被鉴定者的血型为A型血。
实验结论：
通过本次实验的准确操作和数据分析，成功鉴定了被鉴定者的血型为A型血。
这一结果对于临床输血、配型和亲子鉴定具有重要的指导意义，为临床医学提供了可靠的实验数据。
同时，本次实验也对实验操作和数据分析提出了要求，为今后的实验工作提供了有益的经验和借鉴。
ABO 血型鉴定
ABO 血型鉴定1、实验原理根据红细胞上有或无A 抗原或（和）B 抗原，将血型分为A型、B型、AB型和O型四种。
可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定A B O 血型。
所谓正定型，是用已知抗A和抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或（和）B抗原；所谓反定型，是用已知A红细胞B红细胞来测定血清中有无相应的抗A或（和）抗B。
2、使用的标本种类和收集方法2.1、受检者5％红细胞悬液红细胞悬液制备：采取受检者的红细胞，经盐水洗涤3次，取压积红细胞1滴加入生理盐水16滴（0.8ml）配成5％的红细胞悬液。
2.2、受检者血清采取受检着静脉血2-3ml，置水浴箱中至完全凝固，3000转/分钟离心5分钟，分离上层血清备用。
2.3、标本接收2.3.1、血型鉴定不接收临床送检标本（除外2.3.2规定内容）。
2.3.2、特殊急诊检验人员无法采血时，接收临床送检标本需登记采血护士姓名及送检护士姓名、并查对标本标签和检验单内容是否相符，如有不符可以拒收标本。
2.4、标本容器要求：洁净一次性塑料试管3、使用的试剂3.1、抗A 、抗B定型试剂（单克隆抗体）3.1.1、批准文号：国药准字S1*******3.1.2、生产厂家：长春生物制品研究所3.1.3、保存条件：2-8℃避光保存，有效期内使用。
2．5 ％A、B及O型试剂红细胞盐水悬液2.5.1、制备方法分别采取已知A、B、O三种血型的红细胞，经盐水洗涤3 次，经盐水洗涤3次，取压积红细胞1滴加入生理盐水16滴（0.8ml）配成5％的红细胞悬液。
2.5.2、保存条件：配制好的5％的红细胞悬液在试管上注明红细胞血型及配制时间，2-8℃避光保存，有效期3天。
4、仪器：4.1、仪器型号：TL80-1型医用离心机4.2、仪器厂家：中国江苏姜岩是田里医疗器械有限公司4.3、许可证号：苏药管械（试）字2001第2030436号4.4、仪器使用具体要求见离心机使用维护程序。
5、操作步骤、报告结果5.1、正定型：取清洁试管2支作好标记，分别加入抗A（蓝色）和抗B（黄色）标准血清各2滴。
人类ABO血型鉴定实验
一、实验目的: 学习人类ABO血型的鉴定方法。
二、实验原理
通过观察参试人员的血液与抗A和抗B标准血清是否发生凝集反应， 判断其血型。
A型：红细胞上具有A抗原，能与特异性抗体A发生凝集反应，而不 与B抗体发生凝集反应。
B型：红细胞上具有B抗原，与特异性抗体B发生凝集反应，而不与A 抗体发生凝集反应。
AB型：红细胞上具有A抗原和B抗原，既与抗体A发生凝集反应，也 与抗体B发生凝集反应。
O型：红细胞上缺乏A抗原，也缺乏B抗原，均不与抗体A或抗体B发 生凝集反应。
三、实验用品
标准抗A和抗B血清、玻片、消毒液、 牙签、棉签、采血针、记号笔等
四、实验步骤
1.标记玻片：取洁净玻片一张，用蜡笔在玻片两 端分别标明A B
A
B
2.滴加血清
在玻片A B两端分别滴加标准抗A 和抗B血 清各一滴。
B
标准抗A血清
标准抗B血清
3.消毒采血 用无菌棉签蘸取消毒液，消毒左手无名指
指腹皮肤，用消毒采血针垂直刺入消毒皮肤 处取血各一滴分别涂于玻片的标准抗A血清 和标准抗B血清中，分别用牙签将其混匀。
4.观察反应
静置10—15分钟后用肉眼观察有无凝集现 象。
五、结果判断 根据有无凝集现象判断血型
A型 B型 AB 型 O型
六、注意事项
1.严格消毒皮肤与采血针 2. 标准抗AB血清不能混淆 平稳移动玻片 3.使用牙签时不可混用 4.凝集现象肉眼分辨不清时用低倍镜辨别
ABO 血型鉴定
ABO 血型鉴定测定原理根据红细胞上有或无 A 抗原或／和 B 抗原，将血型分为 A 型、B 型、AB 型及O 型4种。
可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。
所谓正定型，是用已知抗—A 和抗—B 分型血清来测定红细胞上有无相应的A 抗原或／和B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗—A或／和抗—B。
标本种类及收集要求1 受检者血清.2 EDTA2K抗凝血或未稍取血，受检者血液制成5 ％红细胞盐水悬液使用。
3 标本出现中度溶血者，为不合格标本，不能用于检测。
仪器、试剂、校准品、质控品、以及其他所需物品离心机，显微镜。
抗A、抗B血型定型试剂（单克隆抗体）：长春博德生物技术有限责任公司产品注册号：国药准字S1*******。
包装:抗A、抗B各1支/盒，塑料瓶，规格：10ml/支。
储存要求：2℃～8℃避光保存，主要成分：分泌抗人 A 型和抗人 B 型血型原单抗的杂交瘤细胞培养上清液并补加一定量小鼠腹水抗体。
0.9/%的生理盐水：山东齐都药业有限公司。
操作步骤：试管法1 取洁净小试管(内径10mm×60mm)3支，分别标明抗—A、抗—B和抗—A十B，用滴管分别加抗—A、抗—B 和抗—A 十 B 分型血清各l 滴（约50 ul）于试管底部，再以滴管分别加入受检者5％红细胞盐水悬液1滴，混和。
2 另取洁净小试管(内径10mm×60mm)3 支，分别标明A、B 和O 细胞。
用滴管分别加入受检者血清l 滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5％试剂红细胞悬液l滴，混和。
3 立即以1000r／min离心3 min。
4 将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以内眼观察有无凝集(或溶血)现象。
如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。
5 观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B 或cisAB的发现。
6 凝集强度判断标准4+ 红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。
abo血型的鉴定原理
abo血型的鉴定原理
Abo血型的鉴定原理。
Abo血型系统是人类红细胞表面抗原的一种分类，主要包括A、B、AB和O 四种血型。
血型的鉴定对于输血、器官移植等医疗行为至关重要。
下面我们将介绍Abo血型的鉴定原理。
首先，Abo血型的鉴定是通过血清凝集法进行的。
该方法利用抗A和抗B血清与待测血液中的A、B抗原发生凝集反应来进行鉴定。
在实验室中，通常会使用抗A和抗B的特异性抗体来进行血型的鉴定。
其次，Abo血型的鉴定原理基于血清中的抗体与红细胞表面的抗原之间的特异性反应。
当抗A抗体与A抗原相遇时，会发生凝集反应；当抗B抗体与B抗原相遇时，同样会发生凝集反应。
而在O型血液中，既不含有A抗原，也不含有B抗原，因此不会与抗A或抗B抗体发生凝集反应。
另外，对于AB型血液来说，其红细胞表面同时含有A和B抗原，因此在与抗A和抗B抗体相遇时，都会发生凝集反应。
这也是AB型血液被称为“普通受体”的原因之一。
除了血清凝集法外，还可以利用分子生物学方法进行Abo血型的鉴定。
通过PCR技术可以检测A和B基因的存在与否，从而确定个体的Abo血型。
这种方法具有高度的特异性和灵敏性，可以有效地避免人为操作误差。
总的来说，Abo血型的鉴定原理主要是基于血清凝集法和分子生物学方法。
这些方法不仅可以准确地鉴定个体的血型，还可以帮助医疗工作者进行输血和器官移植等医疗操作。
因此，对Abo血型的鉴定原理有深入的了解，对于医学领域具有重要的意义。
ABO血型鉴定
③虽然IgM抗A和抗B与相应红细胞的反应温度以 4℃最强，但为了防止冷凝集现象干扰，一般在 室温20℃～24℃内进行试验，而在37℃条件， 可使反应减弱。
▪ ④幼儿红细胞抗原未发育完全、老年体弱者抗原 性较弱，最好采用试管法鉴定血型。
▪ (2)平板法
①取洁净平板1块，用记号笔划出反应 小格，在左侧注明抗D，中间段注明阴性对 照，右侧注明阳性对照；②将室温盐水反 应的抗D血清各1滴加入上述小格内；③抗 D小格内加入待检者5％红细胞悬液1滴， 阳性对照小格内加入阳性对照红细胞悬液1 滴，阴性对照小格加入阴性对照红细胞悬 液1滴；④用干净玻璃棒搅拌红细胞悬液与 试剂血清充分混合；⑤连续轻轻倾斜转动 平板，一般在2min内观察结果，或按试剂 说明书规定的时间观察结果。
▪ 在我国，RH阴性血型只占千分之三属 于稀有血型。RH阴性A型、B型、O型、AB 型的比例是3：3：3：1。
▪ 二、用品准备
RH试剂血清【抗D】，待检者红 细胞，各型阴、阳性对照红细胞。其他 材料同ABO血型鉴定。
▪ 三、方法操作
盐水介质法
(1)试管法 ①取小试管3支，1支注明抗D， 另1支注明阳性对照，最后1支注明阴性对 照。②将室温盐水反应活性的抗D血清各1 滴加入上述试管内。③抗D试管中加入1滴 5％待检者红细胞(盐水、血清) 悬液，阳性 对照及阴性对照试管中分别加入相应的阳 性红细胞及阴性红细胞悬液1滴；④轻轻混 匀，于3000r/min离心15s；⑤取出轻轻摆 动观察有无凝集。
⑤玻片法反应时间不能少于10min，否则较弱凝集 不能出现，造成假阴性。
⑥正、反定型结果一致才可发报告。
⑦反定型法：先天性免疫球蛋白缺陷，长期大量 应用免疫抑制剂，血型抗体可减弱或消失；血清 中存在自身免疫性抗体、冷凝集素效价增高、多 发性骨髓瘤、免疫球蛋白异常均可造成反定型困 难；新生儿体内可存在母亲输送的血型抗体，且 自身血型抗体效价又低，因而出生6个月以内的 婴儿不宜做反定型。老年人血清中抗体水平大幅 度下降或被检者血清中缺乏抗A及（或）抗B抗 体，可引起假阴性或血型鉴定错误。
ABO血型鉴定
1、标准抗A、抗B血清，生理盐水，静脉血
2、学生分组（每二人一组）分放器材。小试管、尖滴管、载玻片、离心机、记号笔、蜡笔、显微镜。
3、实验题目内容，操作步骤在黑板上写明。
三、实验步骤
（一）正定型法
1、5%被检红细胞生理盐水悬液制备 抗凝血离心或红细胞自然沉降后取下层红细胞2 滴于小试管中，加入生理盐水2 ml ，用尖滴管将红细胞与生理盐水充分混匀，2500r/min 离心3分钟后弃去上清液，重复洗涤三次后自管底吸取1滴血红细胞加入19滴生理盐水中，此即为5%的红细胞生理盐水悬液。
6、判断结果
（1）凝集结果判断标准：红细胞呈均匀分布，无凝集颗粒，显微镜下红细胞分散存在，无凝集靠拢现象为阴性；红细胞出现凝集为阳性。
前期准备
↓
正定型法↓Βιβλιοθήκη 观察结果↓后期分析处理
2、标记试管 取小试管2 支，分别标记抗A、抗B。
3、加标准抗血清 分别加入抗A、抗B标准血清各1滴于相应标记的试管中。
4、加入红细胞悬液 分别加入被检者5%红细胞生理盐水悬液1滴于各试管中，混匀，立即以1000r/min，离心1min。
5、观察结果 先观察上层液有无溶血现象，再斜持试管轻轻摇动或轻轻弹动，使管底的红细胞慢慢浮起，肉眼观察有无凝集、再用低倍镜观察凝集强弱程度，如轻微凝集或不见凝集，必须将反应物倒于玻片上，再以低倍镜观察。
ABO血型鉴定
操作规程
操作流程
一、实验目的：
正定型法：通过用标准血型抗体鉴定红细胞膜上ABO血型系统抗原，掌握盐水介质法进行ABO血型系统正定型的基本操作方法和结果判断。
反定型法：通过用标准红细胞和被检血清反应，掌握用盐水介质法进行ABO系统反定型的基本操作方法及结果判断，病验证正定型结果的准确性。
ABO血型鉴定
4.李：加入A . B血清均发生凝集，说明有A . B 抗原， 所以为AB型血。
ABO血型中的抗原抗体
血型
红细胞膜上所含的抗原
血清中所含的抗体
O A B AB
无A和B A B A和B
抗A和抗B 抗B 抗A 无抗A赵 不凝集 钱 凝集 孙 不凝集 李 凝集
A 现象
B
现象 血型
赵
凝集 A型血
钱
不凝集 B型血
孙
不凝集 O型血
李
凝集 AB型血
实验结果分析
ABO血型鉴定
血型就是红细胞膜上特异抗原的类型。在ABO血型系统中， 红细胞膜上抗原分A和B两种抗原，而血清抗体分抗A和抗 B两种抗体。A抗原加抗A抗体或B抗原加抗B抗体，则产 生凝集现象。血型鉴定是将受试者的红细胞加入标准A型 血清（含有抗B抗体）与标准B型血清（含有抗A抗体）中， 观察有无凝集现象，从而测知受试者红细胞膜上有无A或/ 和B抗原。在ABO血型系统，根据红细胞膜上是否含A、B 抗原而分为A、B、AB、O四型。（见表1）
凝集反应(ABO血型的鉴定)
实验一凝集反应（ABO血型的鉴定）[实验目的]1．掌握凝集反应的原理，玻片法和试管法凝集实验的实验方法和结果分析。
2．了解凝集反应基本类型及血型鉴定的各种方法包括正、反定型，血型板鉴定法和血型卡鉴定法。
[实验原理]在一定浓度的电解质溶液中，颗粒性抗原与相应抗体结合后，出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。
人类ABO血型抗原主要有A和B两种，根据红细胞表面这两种抗原的有无可把血型分为四种。
据此，将抗A和抗B抗体分别与待测红细胞混合，抗A或（和）抗B抗体与红细胞表面上的相应抗原结合而引起红细胞凝集，据其凝集情况便可判定出受试者的血型。
[实验器材]1．器材：光学学显微镜，消毒缸2．材料：消毒干棉球，一次性采血针，载玻片，玻璃试管，一次性带刻度朔料吸管，医用黄色垃圾袋3．试剂：75%医用酒精，0.9%NaCl注射液，抗血清试剂抗A、抗B[内容与方法](一)玻片法凝集实验1.用酒精棉签消毒被检者手指尖端，以采血针刺破皮肤，稍加挤压，使血液流出。
滴1至2滴血液于含有1ml生理盐水的试管内，摇匀，制成约0.5%血球悬液。
用干棉球止血。
2．取洁净载玻片1块，在中间用蜡笔画一条竖线，将抗A、B分型试剂分别加1滴于载玻片两端。
3. 用毛细吸管吸取血球悬液，在白瓷板的两个圆孔内各加一滴,并充分混匀，放置5－10分钟。
4.肉眼观察红细胞有无凝集发生。
如有凝集，可见红细胞凝集成块；无凝集，红细胞呈均匀分散。
若肉眼观察不明显，可在显微镜下观察是否存在微小凝集5.记录凝集情况，判定受检者的血型。
（二）试管法凝集实验1．用酒精棉签消毒被检者手指尖端，以采血针刺破皮肤，稍加挤压，使血液流出。
滴1至2滴血液于含有生理盐水的试管内，摇匀，制成约0.5%血球悬液。
用干棉球止血。
2．取洁净试管2支，分别标记上A、B字样，将抗A、B分型试剂分别加1滴于相应标记的试管中3．用一次性吸管吸取血球悬液，在2支标记试管中各加一滴,并充分混匀，放置5－10分钟。
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实验九 ABO血型鉴定
一实验目的
1.学习鉴别血型的方法
2.观察红细胞凝集现象，掌握ABO血型鉴定的原理
二实验原理
根据受试者红细胞是否含有凝集原和所含凝集原种类的不同，将血型分为A、B、AB和O四种。
血清中的凝集素可与红细胞膜上不同的相应抗原结合，产生凝集反应，最后发生红细胞溶解。
血型红细胞抗原（凝集素）抗体（凝集素）抗A凝集素抗B凝集素
A A 抗
B 凝集不凝集
B B 抗A 不凝集凝集
AB A、B 无抗A无抗B 凝集凝集
O 无A无B 抗A抗B 凝集不凝集
三实验材料
载玻片、一次性刺血针、采血管、酒精棉球、干棉球、移液管、试管、牙签、生理盐水、标准血清（A、B、O血型）
四实验步骤
采用玻片法，两人一组完成
1.采血，制备红细胞悬液，试管中加入1ml生理盐水。
再次之前先手指消毒，用采血针扎破手指，用毛细采血管采血约40ul，挤入试管中，轻摇后制成悬液约5%，肉眼观察为深红色。
2.在拨片两端分别滴一滴抗A、抗B试剂。
分别滴一滴红细胞悬液在实际上用两根牙签分别轻搅均匀，等10—15分钟观察结果。
3.记录结果，分析血型。
五结果与分析
受试者姓名：陈晓燕
载玻片上A、B两端均出现红色沉淀，说明血型为AB型。