最新寄生虫病检测检验技术
寄生虫病原学检查
寄生虫病原学检查寄生虫病原学检查一粪便检查.粪便检查是诊断寄生虫病的基本方法。
为了取得准确的结果,送检标本必须新鲜,保存时间- -般不宜超过24小时。
如检查肠内原虫滋养体,最好立即检查,注意保温,或有条件时暂存在35~37C。
盛粪便的容器要干净,粪便中不可混人尿液和其他污染物,以免影响检查结果。
具体方法如下。
(一)直接涂片法用以检查蟎虫卵原虫包囊和滋养体。
方法简便,连续做3次涂片,可提高检出率。
1.蠕虫卵检查滴1滴生理盐水于洁净的载玻片上,用牙签挑取绿豆大小的粪便,在生理盐水中涂抹均匀;涂片厚度以透过玻片约可辨认书上的字迹为宜。
加盖片后用低倍镜或高倍镜观察。
需注意鉴别虫卵与粪便中的异物。
虫卵都具有一-定形状和大小,卵壳表面光滑整齐,具固有的色泽,卵内可见卵细胞或幼虫。
2.原虫检查(1)滋养体检查:涂片应较薄,方法同蠕虫卵检查。
温度愈接近体温,滋养体的活动愈明显,必要时可将涂片置保温台.上保持温度。
(2)包囊碘液染色检查:直接涂片方法同上,但以1滴碘液代替生理盐水。
若同时需检查活滋养体,可在玻片另. -侧滴1滴生理盐水,同上法涂抹粪便标本,再盖上盖片。
滴碘液的一-侧查包囊,另一侧查活滋养体。
(3)隐孢子虫卵囊染色检查:目前最佳的方法为金胺-酚改良抗酸染色法。
其次为金胺酚染色法和改良抗酸染色法。
新鲜粪便或经10%甲醛溶液固定保存(4C,1个月内)的含卵囊粪便都可用这3种方法染色。
染色过程是先用金胺酚染色,再用改良抗酸染色法复染。
具体方法如下1.金胺-酚染色法2.改良抗酸染色法3.金胺酚染色-改良抗酸复染法（二）改良加藤法改良加藤法是一项用于检查寄生虫的辅助检查方法。
其。
适用于检查各种蠕虫卵。
方法简便，操作过程中虫卵不会散失。
效果较好。
过硬和过稀的粪便不宜使用本法。
泡沫状的粪便会在玻璃纸下形成许多微小气泡，妨碍镜检。
并可作虫卵定量检查。
此相检查可以用于判断相应的病征。
原理：是利用粪便定量或定性厚涂片，以增加视野中虫卵数，可作虫卵定量检查。
检验科常见寄生虫感染检测方法
检验科常见寄生虫感染检测方法寄生虫感染是一种常见而严重的健康问题，尤其是在发展中国家。
检验科的主要职责之一就是确保及时准确地检测出寄生虫感染，以便进行有效的治疗和控制。
本文将介绍一些常见的寄生虫感染检测方法，以帮助读者更好地了解这个领域的知识。
一、粪便检测法粪便检测法是检验科中最常用的一种检测方法，在寄生虫感染的早期诊断中发挥重要作用。
该方法通过检测患者的粪便样本中是否存在寄生虫卵或囊泡，来确定是否感染了寄生虫。
常见的粪便检测方法有直接涂片法、福尔马林浓度法、酸胆染色法等。
这些方法具有操作简便、成本低廉的特点，但需要训练有素的技术人员进行操作，以确保结果的准确性。
二、血液检测法血液检测法是另一种常见的寄生虫感染检测方法，适用于一些通过血液传播的寄生虫疾病的诊断。
该方法通过血液样本中的抗体或寄生虫特异性抗原的检测，来确定是否感染了寄生虫。
常见的血液检测方法有酶联免疫吸附试验（ELISA）、血原虫显微镜检查等。
血液检测法相对于粪便检测法来说，具有操作简便、便于大规模筛查的优势，但也需要专业设备和技术支持。
三、组织检测法组织检测法适用于一些疑难病例或特殊情况下的寄生虫感染检测。
该方法通过对患者的组织样本进行显微镜检查或基因分析，来确定是否存在寄生虫感染。
常见的组织检测方法有组织切片检查、PCR检测等。
组织检测法具有高度的准确性和可靠性，但需要手术取样或侵入性操作，适用范围较窄。
四、免疫学检测法免疫学检测法是一种新兴的寄生虫感染检测方法，通过测定人体的免疫反应来确定是否感染了寄生虫。
常见的免疫学检测方法有免疫荧光检测、免疫电镜检测等。
免疫学检测法具有敏感性高、特异性强的特点，能够检测出低浓度的寄生虫感染，但需要专业的实验室设备和操作技术。
五、分子生物学检测法分子生物学检测法是一种基于DNA或RNA的寄生虫感染检测方法，具有高度的准确性和特异性。
常见的分子生物学检测方法有实时荧光定量PCR、核酸杂交检测等。
病虫害的快速检测与检测技术
加强技术研发和人才培养，推动产学 研合作，加强国际交流与合作。
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人工检测是最基本的病虫害检测方法 ，通过观察植物的外观和生长情况， 以及检查是否有害虫或病菌的迹象来 进行判断。
人工检测具有简单易行、灵活性高的 优点，但对于大规模种植或需要定期 监测的情况，效率较低且容易漏检。
显微镜检测
显微镜检测是通过显微镜观察植物组织或害虫的形态特征，以确定病虫害种类和 程度的方法。
测。
高光谱遥感检测技术
总结词
高光谱遥感检测技术利用高光谱成像技术，通过分析目标物的光谱特征来快速、准确地诊断病虫害。
详细描述
高光谱遥感检测技术利用光谱分辨率极高的成像光谱仪，获取目标物的连续光谱信息，结合图像分析技术，识别 出病虫害的特征波段和光谱曲线。该技术具有大范围、快速、无损、准确等优点，尤其适用于大面积、快速监测 病虫害的发生和扩散。
免疫检测技术
免疫检测技术利用免疫学原理进行病 虫害的检测，如酶联免疫法、荧光免 疫法等。这种技术可以特异性地检测 病虫害的抗原，为防治提供可靠的依 据。
免疫检测技术的优点在于其特异性强 、灵敏度高，能够快速准确地检测病 虫害。然而，这种方法需要制备特定 的抗体，且成本较高。
03
传统检测技术
人工检测
病虫害的快速检测与 检测技术
汇报人：可编辑 2024-01-05
目录
• 病虫害概述 • 快速检测技术 • 传统检测技术 • 新兴检测技术 • 技术比较与展望
01
病虫害概述
病虫害概述
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02
快速检测技术
生物检测技术
生物检测技术利用生物对病虫害的敏感性进行检测，如昆虫 、鸟类、两栖动物等。这种技术可以实时监测病虫害的发生 和扩散，为防治提供及时的信息。
检验科寄生虫学常见检测与分析方法
检验科寄生虫学常见检测与分析方法大标题：检验科寄生虫学常见检测与分析方法引言：寄生虫病是一类由寄生虫引起的传染病，严重危害着人类和动物的健康。
在检验科寄生虫学领域，准确、快速地检测和分析寄生虫是至关重要的。
本文将介绍常见的检测与分析方法，旨在提供一些有用的参考。
一、细菌学常见检测与分析方法1. 直接涂片法直接涂片法常用于分析寄生虫卵或幼虫，通过显微镜观察来确定寄生虫种类和数量。
该方法简单、快速，但需要熟练技术操作。
2. 钩虫培养法钩虫培养法适用于检测钩虫卵的孵化及幼虫发育情况。
通过培养基中的条件，如温度、湿度等，观察寄生虫的生长情况并进一步分析其特性。
3. 血液检测法血液检测法常用于检测寄生虫在血液中的存在，如疟原虫。
这种方法通过血液细胞计数器或显微镜来观察血涂片中的寄生虫，进而进行分析和诊断。
二、分子生物学常见检测与分析方法1. PCR技术PCR（聚合酶链式反应）技术是一种灵敏且特异的检测方法，可用于定性和定量检测寄生虫DNA。
该方法准确度高，且可以同时检测多个寄生虫种类。
2. 实时荧光定量PCR技术实时荧光定量PCR技术结合了PCR技术和荧光探针技术，能够准确测量PCR体系中的DNA含量，并实时监测PCR反应的进程。
该方法操作简便，结果可靠。
3. 微阵列技术微阵列技术可同时检测多种寄生虫，并定性和定量其存在。
通过该技术，可以快速获得大量寄生虫检测结果，并进一步进行生物信息学分析。
三、免疫学常见检测与分析方法1. 酶联免疫吸附试验（ELISA）ELISA是一种常见的免疫学检测方法，可用于检测寄生虫特异抗原或抗体。
该方法操作简单、敏感，广泛应用于临床和实验室诊断。
2. 免疫荧光法免疫荧光法通过对标本中寄生虫特异抗原或抗体与荧光标记物的结合情况观察，来判断是否存在寄生虫。
该方法具有高灵敏度和特异性。
3. 红细胞凝集试验红细胞凝集试验适用于检测与红细胞寄生虫相关的抗体。
该试验通过观察抗原与抗体间的聚集情况来确定寄生虫感染的存在与程度。
诊断畜禽寄生虫病的一种新技术
诊断畜禽寄生虫病的一种新技术【关键词】寄生虫病多年来，我们研究了一种定性、定量检测寄生虫病的新技术，包括新虫卵计数器（已获国家专利）、操作程序、每克粪中虫卵数计算公式、对被检粪便采样量、粪便沉淀液的稀释体积和技术的可行性（即在粪便沉淀液中难以分布均匀的蛭形巨吻棘头虫虫卵、片形吸虫虫卵的分布均匀性进行了测定）进行了研究，并进行了临床试验检验，结果表明本技术用于定性、定量检测诊断寄生虫病是可靠的。
1 新虫卵计数器制作在一张2mm厚的载玻片上画2个1cm 2 的方格，在每个方格内，每间隔1mm 画1根直线（避免虫卵的重复和遗漏计数），然后用3根1mm 厚的玻璃条分别粘在两方格的中间和两边，再将另一张1mm 厚的玻片粘在玻璃条上，形成两个计数室，即一个计数室的体积为0.1mL ，见图1。
2 其它器具显微镜、秤（天平或其它小计量秤）、量筒、容器（烧杯、塑料杯或铁盅等均可）、铜筛网、移液管。
3 操作程序3.1 定量秤取被检家畜粪便（检测片形吸虫病时，最少被检羊粪便为4.7g 、牛粪便27.5g ），用定量粪便的3～5倍体积水调成糊。
3.2 用铜筛网过滤，并用适量水边冲洗边过滤。
3.3 将滤液沉淀30min（检测较大虫卵如片形吸虫虫卵、前后盘吸虫虫卵、棘头虫虫卵等的沉淀时间为15～20min ，检测球虫卵囊等的沉淀时间为1h ）;弃上清液，再加水沉淀，重复3次。
检测单个样品时，建议将沉淀改为离心，以便缩短操作时间。
3.4 弃适量上清液，用量筒量取该沉淀液量（每g 被检羊粪便沉淀液为5～10mL ，每g被检牛粪便沉淀液为3～5mL ）。
3.5 充分摇匀沉淀液后（肉眼见到粪渣在粪便沉淀液中均匀即可），用移液管迅速将部分沉淀液移至“计数器”的两计数室内。
3.6 在显微镜下，观察计数器两计数室内的寄生虫虫卵，并计数。
3.7 按以下公式计算EPG（每克粪中虫卵数）值。
EPG= 计数器两计数室内的虫卵总数×YmL（粪便沉淀液体积）Xg（粪便重量）×0.24 临床印证用本寄生虫病诊断监测新技术对178 只怀孕绵羊（之前已有3只怀孕绵羊因片形吸虫病死亡）的片形吸虫病病情程度进行诊断，有26只怀孕绵羊的片形吸虫虫卵的EPG值在300以上。
确诊寄生虫病的检验方法
确诊寄生虫病的检验方法
确诊寄生虫病的检验方法常见的有以下几种：
1. 外观检查：通过对患者粪便、尿液、血液等样本的外观检查，观察寄生虫的卵、包囊、幼虫等是否存在。
2. 粪便检查：常用的检测方法有直接涂片法、浮选法、离心法等。
通过显微镜观察粪便样本中是否存在寄生虫卵或幼虫。
3. 血液检查：常见的方法包括原虫抗体检测、免疫学检测、PCR检测等。
通过检测血液中的寄生虫抗体或寄生虫的DNA
来确定是否感染寄生虫。
4. 组织检查：对于一些寄生虫感染引起的组织病变，可以通过组织活检或手术切除标本来进行病理学检查。
5. 影像学检查：如X线、CT、超声等影像学检查可以对寄生
虫引起的组织病变进行观察，辅助确诊。
在进行寄生虫病检验时，需要根据具体疾病和临床表现选择合适的检验方法，有时可能需要多种方法的综合应用来提高诊断的准确性。
同时，检验前要正确采集和保存样本，以确保结果的可靠性。
寄生虫实验检验技术
实验检验技术一、病原检查1.粪便检查（1）直接涂片法：适用于蠕虫卵、原虫检查（活滋养体检查和包囊的碘液检查）。
（2）浓集法1）加藤厚涂片法。
2）沉淀法：自然沉淀法主要用于蠕虫的检查、离心沉淀法、倒置沉淀法适于比重较大的蠕虫卵检查、汞碘醛离心沉淀法适于原虫滋养体、包囊、蠕虫卵和幼虫的检查；醛醚沉淀法适于蠕虫卵和原虫包囊的检查。
3）漂浮法：饱和盐水漂浮法适于各种线虫卵、带绦虫卵等检查；硫酸锌离心漂浮法适于原虫包囊、多数蠕虫卵等检查；蔗糖溶液漂浮法适于原虫包囊、卵囊或孢子囊检查。
4）尼龙袋集卵法：主要适于血吸虫卵检查。
（3）虫卵计数法1）改良加藤厚涂片法：适于各种蠕虫卵计数。
2）小管浮聚计数法：适于大多线虫卵计数（4）毛蚴孵化法：适于血吸虫病原体检查。
（5）钩蚴培养法：检出率较直接涂片法高7倍。
（6）带绦虫孕节检查法：肉眼可观察。
（7）常用原虫检查染色法：劳氏酸性品红-固绿染色法适于阿米巴、蓝氏贾第鞭毛虫检查、福氏快速苏木精染色法适于阿米巴、蓝氏贾第鞭毛虫滋养体和包囊检查、金胺-酚染色法和改良抗酸染色法适于隐孢子虫卵囊检查。
2.肛门外检查（1）肛门周围蛲虫虫卵检查：有透明胶纸法、棉签拭子法，适于蛲虫、带绦虫检查。
（2）肛门周围蛲虫成虫检查：在肛门附近发现白色小虫，可进一步鉴定。
3.血液及骨髓检查（1）检查微丝蚴：①新鲜血片检查法；②厚血膜法；③活微丝蚴浓集法；④离心浓集法。
（2）检查疟原虫：①新鲜血片检查法：采血、制片（薄血膜，厚血膜）、固定、染色；②定量血沉棕黄色层（QBC）检查法；③疟原虫计数法。
4.其他排泄物与分泌物检查（1）痰液检查：适于肺吸虫卵、溶组织内阿米巴滋养体、蛔蚴等检查，方法有：直接涂片法、消化沉淀法。
（2）尿液和鞘膜积液检查：适于检查班氏微丝蚴，可用离心法。
（3）阴道分泌物检查：适于检查阴道毛滴虫等，可用直接涂片法、悬滴法、涂片染色法。
（4）前列腺液检查：适于检查男性泌尿生殖道的阴道毛滴虫。
寄生虫学免疫检验技术及进展
三、寄生虫Ag的分离、纯化和鉴 定 3、鉴定：
1)抗原组分及化学性质
A.SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺 凝胶电泳）
B.抗原的氨基酸序列分析
C.其它:放射免疫沉淀，双向电泳
三、寄生虫Ag的分离、纯化和鉴 定 3、鉴定：
2)抗原的活性及其特异性鉴定 A.免疫学方法：ELISA；Western-blot B.体外试验：如淋巴细胞转化试验—纯化 的血吸虫虫卵抗原比粗抗原刺激淋巴细胞 母细胞化的能力强。 C.动物试验：如血吸虫虫卵抗原可使小鼠 产生肺肉芽肿和足垫超敏反应。
寄生虫学免疫检验技术及进展
一、寄生虫学常用免疫检验技术 9、其它标记技术
1）酶标-HRP（辣根过氧化物酶）、LP （碱性磷酸酶） 2）PAP（非酶标技术） 3）ABC（生物素-亲和素系统） 4）放射性同位素 5）免疫荧光
二、敏感性与特异性
1、敏感性 2、特异性 三、寄生虫Ag的分离、纯化和鉴 定 1、分离 ：
寄生虫学免疫检验技术及进展
一、寄生虫学常用免疫检验技术 1、皮内试验 2、IHA （间接血凝试验）
3、ELISA（酶联免疫吸附试验）
4、Dot-ELISA （斑点－ELISA）
寄生虫学免疫检验技术及进展
一、寄生虫学常用免疫检验技术 5、DIFA （斑点免疫渗滤试验）
6、免疫微球技术
7、Western-blot （免疫印迹技术） 8、免疫组织化学技术
四、Ab制备
1、多抗 2、单抗 五、应用
血吸虫 1、检查抗体
血吸虫
1、检查抗体： 1）检测种类：IgM，IgG（G1G4），IgA
2）方法：皮试、IHA、ELISA、 Dot-ELISA、DIFA、Westernblot
寄生虫检验方法
寄生虫检验方法
1 范围
本方法适用于即食生食动物性水产品中吸虫囊蚴、线虫幼虫、绦虫裂头蚴的检验。
2 方法
2.1 肉眼检查
异尖线虫幼虫、阔节裂头绦虫裂头蚴等体积较大的虫种，可撕开肌肉、内脏后肉眼直接检查，必要时通过显微镜检查鉴定。
2.2 显微镜检查
2.2.1 试剂（人工消化液）
取胃蛋白酶（粗制）5g，溶解于900mL蒸馏水中，加浓盐酸7mL，再加蒸馏水至1000mL，充分混匀，放置15min后备用。
2.2.2 仪器设备
a) 显微镜（倍数：10×10）
b) 恒温水浴箱
c) 组织捣碎机
2.2.3 试样的制备
取50g肌肉（样品不足50g的，取全部肌肉）用组织捣碎机打浆（低速，检材粉碎即止），置三角烧瓶中以1:10加入人工消化液，充分搅拌。
于37℃±2℃水浴箱中放置4h～5h使肌肉充分消化，用吸管吸去上清液，再加适量蒸馏水，搅拌后沉淀20min～30min，再吸去上清液，反复清洗几次，直至上清液透明为止，沉淀备用。
2.2.4 检验
取上述经处理的沉淀物，在显微镜下，边用蒸馏水稀释边观察寄生虫。
3 结果报告
肉眼及镜检发现寄生虫，报告为检出寄生虫（注明寄生虫的种类和发育阶段）；肉眼及镜检未发现寄生虫，报告为未检出寄生虫。
1。
寄生虫检验技术总结
寄生虫检验技术总结寄生虫检验技术是一种通过对人体样本进行实验室检测，旨在诊断人体内部是否有寄生虫感染的技术手段。
随着寄生虫感染的增加和世界范围内对人体寄生虫感染重要性认识的提高，对寄生虫检验技术的研究和应用也日益重要。
目前，常见的寄生虫检验技术可以分为以下几类:1. 病原体的直接检测方法: 该方法通过直接观察或提取病原体的核酸或蛋白质来检测寄生虫。
例如，血液中的埃勒夫（Elephantiasis）、疟原虫（Malaria）、血阨虫（Babesiosis）等寄生虫可以通过显微镜观察直接检测到。
2.免疫学检测方法:免疫学检测方法是通过检测人体对病原体的免疫反应来诊断寄生虫感染。
包括血清学检测和皮肤过敏试验。
血清学检测通过检测人体血液中的抗体水平来判断是否有寄生虫感染。
常用的方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫荧光试验（IFA）等。
皮肤过敏试验则是通过在人体皮肤上施加寄生虫抗原，观察是否发生过敏反应来诊断寄生虫感染。
3.分子生物学检测方法:分子生物学检测方法是通过寻找寄生虫的特定基因序列来检测寄生虫感染。
常见的方法有聚合酶链反应（PCR）、DNA 杂交技术等。
这些方法可以检测到寄生虫的DNA或RNA，从而对感染进行准确诊断。
4.其他检测方法:除了上述几种常用的检测方法外，还有一些特殊的检测方法，包括血液涂片检测、粪便检测、尿液检测等。
这些方法通过对不同样本的处理和观察，来诊断寄生虫感染。
然而，寄生虫检验技术也存在一些限制和挑战。
首先，不同类型的寄生虫需要不同的检测方法，因此，选择合适的方法需要根据具体情况进行评估。
其次，一些寄生虫感染并没有明显的症状，容易被忽视，这就需要在诊断过程中加强对患者病史和流行病学的调查。
此外，一些寄生虫可能具有抗药性，在治疗和检测上也提出了更高的要求。
总的来说，寄生虫检验技术在寄生虫感染的诊断和研究中起着重要的作用。
随着科技的不断进步，新的检测方法也将不断涌现，使得对寄生虫感染的检测更为准确和便捷。
寄生虫检测标准
寄生虫检测标准寄生虫检测是一种通过检测人体或动物体内的病原体来确定是否存在寄生虫感染的方法。
寄生虫检测的标准可以根据不同的寄生虫种类和感染方式进行调整，但是以下是一些与寄生虫检测相关的参考标准。
1. 样本采集：对于人体寄生虫检测，样本采集通常涉及粪便、尿液、血液、皮肤刮片、唾液或组织活检等。
对于动物寄生虫检测，样本采集可以包括鳞片、粪便、血液、尿液、组织活检等。
样本的采集需要遵循相应的操作规范，确保样本的纯净度和可靠性。
2. 寄生虫种类识别：在样本采集后，需要进行对可能寄生虫种类的识别。
这可以通过显微镜下的直接观察或特定的实验室技术来完成。
某些寄生虫可能需要特殊的染色或培养条件才能识别。
3. 分子生物学检测方法：一些寄生虫种类可能很难在显微镜下直接观察到，因此分子生物学检测方法成为一种常用的替代方案。
这些方法包括PCR（聚合酶链反应）等，可以通过分析寄生虫的DNA或RNA来确定感染的种类。
4. 免疫学检测方法：针对某些寄生虫感染，免疫学检测方法也是一种常用的筛查手段。
这些方法包括酶联免疫吸附化验（ELISA）、快速免疫层析试验（ICT）等，可以通过检测体液中的特定抗体或抗原来确定寄生虫感染的情况。
5. 结果解读：寄生虫检测的结果需要经过专业人员进行解读。
他们需要根据样本类型、检测方法的选择、感染历史、临床表现等因素综合评估结果。
不同类型的寄生虫感染可能需要不同的处理和治疗方法。
6. 质控和质量保证：在进行寄生虫检测时，质控和质量保证非常重要。
实验室需要建立标准操作规程，并参与外部质量评估计划。
对于每个检测项目，需要定期进行内部控制和质控样品的检测，以确保结果的准确性和可靠性。
总之，寄生虫检测需要采集样本，对寄生虫种类进行识别，使用适当的检测方法进行分析，解读结果，并进行质控和质量保证。
这些标准是确保寄生虫检测结果准确和可靠的重要步骤，有助于帮助医生或兽医做出正确的诊断和治疗决策。
家畜寄生虫病监测防控新技术
家畜寄生虫病监测防控新技术技术概述：1.家畜寄生虫病诊断监测新技术：采用科学设计和激光显微刻制等技术，建立“虫卵计数板”的制作及操作程序规范，该技术可用于定量检测几乎所有通过粪便排虫卵的寄生虫。
2.前后盘吸虫病防治技术：我国奶牛的前后盘吸虫有22个种，隶属2个科6个属，通过研究前后盘吸虫的繁殖特性，奶牛前后盘吸虫病流行特点及其控制要点以及药物的筛选试验，建立奶牛前后盘吸虫病防治技术。
3.猪棘头虫病防治技术：在分子水平上筛选出抑制蛭形巨吻棘头虫LDH酶而对宿主LDH酶无抑制作用的药物，明确了硝硫氰醚对猪棘头虫LDH同工酶的抑制是该药物防治猪棘头虫病的作用机制，筛选出猪棘头虫病防治药物，临床试验结果表明其有效率达99％以上。
4.规模养殖家畜寄生虫病防控新模式：针对传统经典技术的盲目性等问题，建立了“定期监测、适时驱虫、驱虫后及时检测与评估”的规模养殖家畜寄生虫病控制新模式。
技术要点：1.畜禽寄生虫病诊断监测新技术制作了拥有自主知识产权的“虫卵计数板”、操作规范程序、虫卵计算公式等，并将新技术操作需要的各种器具组合并建立成“家畜寄生虫病诊断监测箱”。
该技术不仅适合乡镇畜牧兽医站和动物医院及养殖场应用，而且适合相关科研、教学应用。
2.家畜寄生虫病控制新技术新技术控制程序为：定期监测→根据需要实施驱虫→及时检测与评估。
建立猪、牛、羊的寄生虫病监测时间表，即规模养猪场每年3月、7月、11月各进行一次监测、奶牛场每年4月和11月各进行一次监测、羊场每年3月、5月、8月、11月各进行一次监测。
制订了实施预防性驱虫的各种寄生虫病的EPG临界值，10％的随机抽样被检粪便阳性猪的线虫虫卵500时、10％猪的棘头虫虫卵EPG值大于300时，进行预防性驱虫的“实施驱虫的参考标准”；牛场片形吸虫病的EPG阈值为150，前后盘吸虫病的EPG阈值为1000，消化道和呼吸道线虫病的EPG阈值为250；羊场的线虫、片形吸虫驱虫阈值分别750和300。
寄生虫病的检测技术
寄生虫病的检测技术寄生虫病是一种由寄生虫引起的感染性疾病，可能导致不同程度的健康问题，甚至危及生命。
由于它们的生命周期中存在许多不同阶段，各种类型的寄生虫病通常需要使用不同的检测技术。
传统的寄生虫检测方法通常需要培养寄生虫，这种方法非常耗时且成本高。
但是现在，随着动态荧光技术、核酸放大、免疫分析和电学分析方法的不断发展，科研家和医生们又重新评估了这一新技术。
动态荧光技术动态荧光技术通常用于衣原体的检测。
衣原体是一种能引起部分生殖系统疾病的寄生细菌，被广泛认为是一种常规试验可能无法检测出的微生物。
因此，动态荧光技术的发明成为了寄生虫病检测技术的一次重大革新。
通过动态荧光技术，我们可以检测出患者体内的实际病原体数量。
它使用的是靶分子技术，即通过识别和绑定一种特定的分子（在这种情况下是衣原体DNA或RNA），然后使用荧光显微镜或其他类似设备来检测这种绑定。
这种技术还可以被用于在不同样本中研究微生物的存活和扩散。
它们可以用于检测疾病的细胞附着和生长，以及它们如何在不同的体内器官中繁殖。
核酸放大离开宿主体依赖的DNA和RNA分子也可以被引入PCR或RT-PCR等技术中进行扩增。
这种技术可以放大分子序列，以便直接检测这些序列。
核酸放大技术可以在许多寄生虫感染的早期检测出病原体，因此已被证明是一种非常有效的寄生虫检测的方法。
核酸放大检测技术可以使用各种不同的DNA和RNA检测方法。
例如，在PCR扩增期间可以使用荧光标记的前导引物或探针，以检测特定的DNA或RNA序列。
另一方面，RT-PCR技术可以被用来检测RNA，在RNA转录酶的作用下，将RNA转换为DNA，然后进行PCR扩增。
核酸放大技术也已被研发出用于检测血液样品、脑脊液、组织样品、尿液和头发等。
免疫分析免疫分析可以用于检测体液样品中的特定抗体或抗原。
这种技术通常被用于检测对某种病原体产生的免疫应答或体内病原体分子的存在。
在寄生虫感染中，免疫分析技术可以用于检测当前和过去感染的证据。
动物寄生虫病PCR诊断技术样本
动物寄生虫病PCR诊断技术样本动物寄生虫病是指动物体内寄生的一类寄生虫引起的疾病，它们通过寄生在动物体内并侵害宿主的组织、器官和系统，引起一系列不同程度的病理损害。
动物寄生虫病对养殖业、畜牧业和野生动物保护等方面都有重要影响，因此及早、可靠地诊断寄生虫感染是非常重要的。
寄生虫病的诊断一直是医学科学家和兽医师所关注的重要领域，为了提高动物寄生虫病的诊断效率和准确性，PCR（Polymerase Chain Reaction，聚合酶链反应）技术被广泛应用于寄生虫病的诊断。
PCR技术是一种通过DNA扩增来检测目标DNA序列的技术，它采用了一种在体外复制DNA的酶，聚合酶，通过不断重复的步骤，复制目标DNA 片段从而使其增加几个数量级。
PCR技术的基本原理是将DNA样本与反向引物和正向引物结合，并加入DNA聚合酶、四种碱基和缺失单碱基的dNTP，通过反复温度循环中的DNA变性、引物结合和DNA合成，最终得到数倍于起始数量的目标DNA序列。
PCR技术具有敏感、特异性强、高通量、快速和准确等优点。
在动物寄生虫病诊断中，可以通过设计特异的引物，将寄生虫的DNA从动物组织或体液样本中扩增出来，并通过聚丙烯酰胺凝胶电泳或实时荧光PCR等方法进行分析和检测。
对于一些传统的诊断方法难以确诊的情况，如寄生虫病在早期感染、轻微感染和低密度感染等情况下，PCR技术能够提供更为敏感和准确的结论。
根据动物寄生虫病的特点，适宜的PCR样本包括动物体内组织和体液样本。
常见的动物寄生虫病的PCR样本有：1.血液样本：对于一些血吸虫感染、疟原虫感染等疾病，可以通过提取感染动物的全血样本中的寄生虫DNA进行诊断。
2.组织样本：通过对动物组织样本进行PCR扩增，可以检测到一些针对特定寄生虫的DNA片段。
例如，肉眼可见的病变组织、手术获取的寄生虫感染的组织切片等。
3.分泌物样本：对于一些存在寄生虫卵或囊泡排出的动物寄生虫病，如弓形虫感染等，可以通过采集动物的分泌物样本，提取其中的寄生虫DNA进行PCR检测。
第十七章_寄生虫病原检查技术
第五篇实验技术及抗寄生虫药物第十七章寄生虫病原检查技术寄生虫学诊断技术包括病原检查、免疫学检查和分子生物学检查等三个方面。
本节将主要对病原检查的各种技术方法作一较全面的介绍第一节粪便检查粪便检查是诊断寄生虫病常用的病原学检测方法。
要取得准确的结果，粪便必须新鲜，送检时间一般不宜超过24小时。
如检查肠内原虫滋养体，最好立即检查，或暂时保存在35°C～37°C条件下待查。
盛粪便的容器须洁净、干燥，并防止污染；粪便不可混入尿液及其它体液等，以免影响检查结果。
具体方法如下：（一）直接涂片法（direct smear method）用以检查蠕虫卵、原虫的包囊和滋养体。
方法简便，连续作3次涂片，可以提高检出率。
1．蠕虫卵检查滴一滴生理盐水于洁净的载玻片上，用棉签棍或牙签挑取绿豆大小的粪便块，在生理盐水中涂抹均匀；涂片的厚度以透过玻片隐约可辨认书上的字迹为宜。
一般在低倍镜下检查，如用高倍镜观察，需加盖片。
应注意虫卵与粪便中的异物鉴别。
虫卵都具有一定形状和大小；卵壳表面光滑整齐，具固有的色泽；卵内含卵细胞或幼虫。
2．原虫检查(1)活滋养体检查：涂片应较薄，方法同查蠕虫卵。
气温愈接近体温，滋养体的活动愈明显。
必要时可用保温台保持温度。
（2）包囊的碘液染色检查：直接涂片方法同上，以一滴碘液代替生理盐水，粪便涂抹方法同上。
若同时需检查活滋养体，可在玻片另一侧滴一滴生理盐水。
同上法涂抹粪便标本，再盖上盖片。
片中滴碘液的一侧查包囊；另一侧查活滋养体。
碘液配方：碘化钾4g，碘2g，蒸馏水100ml。
（3）隐孢子虫卵囊染色检查：目前最佳的方法为金安-酚改良抗酸染色法。
其次为金胺酚染色法和改良抗酸染色法。
对于新鲜粪便或经10%福尔马林固定保存（4℃1个月内）的含卵囊粪便都可用这三种方法染色。
染色过程是先用金胺-酚染色，再用改良抗酸染色法复染。
方法步骤如下：金胺－酚（auramine-phenol）染色法：1)染液配制：1g/l金胺—酚染色液（第一液）：金胺0.1g，石炭酸5.0g，蒸馏水100ml；3%盐酸酒精（第二液）：盐酸3ml，95%酒精100ml；5g/l高锰酸钾液（第三液）：高锰酸钾0.5g，蒸馏水100ml。
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5516.1-2005寄生虫病检测检验技术1一般检查法1．1粪便的检查粪便检查是确定肠道寄生虫病诊断的最主要的方法，也是属于临床化验室常规检查的方法之一。
1．1．1直接涂片法此法用于检查虫卵、滋养体和包囊。
为了避免遗漏，一般需连续检查三张涂片。
此法的优点是操作简便，迅速。
缺点是阳性率较低，视野中杂质较多，虫卵或原虫少时不易查到。
1．1．1．1生理盐水涂片法：操作方法（1）取洁净的载玻片一张，于中央滴1~2滴生理盐水。
（2）用便签挑取约火柴头大小的一块粪便（约0.1g），置盐水中涂抹均匀，成半透明的混悬液，其厚薄以透过书上的铅字为宜，如果太厚阻碍光线的透过，太薄则影响检查效果（必要时加盖玻片）。
（3）先用低倍镜观察，从边缘开始来回顺序推动移动器，仔细寻找虫卵。
（4）找到虫卵后，应将虫卵移至视野中央，辨认是何虫卵（必要时可换高倍镜进一步观察）。
注意事项：（1）检查痢疾阿米巴原虫时，要挑取带有脓血的粪便。
（2）检查原虫包囊时，所取的粪便应再少一些，粪膜涂的再薄一些，否则包囊不易找到。
（3）检查原虫滋养体时，要注意保温，避免化学药品和尿的污染，影响滋养体伪足的运动。
（4）防止涂片变干，可随时滴加生理盐水。
一般不用油镜观察。
（5）某些植物细胞很像虫卵，是要加以鉴别，植物细胞的内部结构不象虫卵那样规则，外形多扁平，用嘴轻吹时，植物细胞往往易翻动或变形。
（6）要注意虫卵与人类酵母菌的区别，很易与包囊混淆，酵母菌为无色圆形或卵圆形小体，大小不一，内含一个较大的透明体，其四周有狭窄的细胞浆，浆内含有少数折光形小体和核，有时透明体偏于一边。
如用蒸馏水稀释粪便涂片，酵母菌即被裂解消失，而原虫包囊仍存在。
（7）只有雄性寄生虫也无虫卵，切勿随意报告阴性结果。
（8）采集的标本要新鲜，一般不宜超过一昼夜，否则原虫或某些虫卵易变形或者死亡，引起误诊；采集标本的容器要清洁，避免与化学药物或尿混合，否则原虫滋养体很快死亡，影响检出率。
1．1．1．2碘液涂片法：用碘液代替生理盐水，适用于肠道原虫的检查。
方法（1）检查原虫包囊时在干净的载玻片上滴一滴碘液，然后取少许粪便，于碘液中，涂抹均匀，便可检查。
（2）检查原虫活滋养体时，可在用生理盐水涂匀的粪膜附近滴一滴碘液，取少许粪便在碘液中涂匀，勿使两块粪膜相混合，盖上盖玻片，便可观察。
这样的涂片一半染色，检查包囊，另一半不染色，可以检查活滋养体。
试剂：1、碘液染色液：碘化钾4g碘2g蒸馏水100ml先将碘化钾溶于少量水中，然后加碘溶解后，再加水到100ml。
2、碘伊红染色液碘液：碘化钾5g溶于生理盐水100ml，加碘至饱和。
伊红液：伊红饱和于生理盐水中。
应用时将上述两液等量混合。
注意事项：（1）碘易升华，放置数日变淡、均以原液瓶底有碘片沉集，每日取少量上清液使用为宜。
（2）碘液过浓，易使标本沉集成块且使原虫染色过深，而致构造不大明显，故在使用时，注意调节碘液量。
（3）碘、伊红染色时背景较深，不如使用碘液时背景清楚。
1．1．1．3快速染色法快速染色法用于肠道原虫的快速诊断。
固定液的配制丙酮50ml冰醋酸50ml甲醛溶液10ml邵氏液890ml以1.25g酚复红与0.5g耐绿混合于上述液中即可使用。
混合液应贮存于棕色玻璃瓶中，严密封口，二个月后染液仍稳定，染色结果不变。
操作方法（1）用棉签将粪便在玻片上涂成薄层。
（2）用滴管将混合液滴在粪涂片上，并将粪膜完全盖住，使之染色并固定。
（3）将载玻片在酒精灯上慢慢加热，待蒸汽出现后，即可缓慢地在火焰上经过2~3次。
（4）立即用自来水轻轻冲洗。
（5）分别依次放置于50%及70%酒精中，每次各需时30秒钟。
然后放在95%及纯酒精中，各15秒钟，最后置于二甲苯中透明1分钟。
（6）封固于香胶中，即能做镜检。
用此法染成的标本外观与苏木素染色法相同，呈蓝紫色，核的微细构造与拟染色体特别明显，所需时间仅2.5分钟，不需要特殊的技巧，而且保存液与固定液混合于染液中。
染色标本可保存两个月，染色的特征上都没有明显的改变。
1．1．1．4煌焦油蓝、伊红染色法：此种染色法是一种活体湿片快速染色法，不影响阿米巴原虫的活力，着色不明，便于检出虫体和鉴定虫种。
试剂的配制甲液：煌焦油蓝0.2g氯化钠 6.35g枸橼酸钠 1.1g饱和氯化钠溶液0.1ml蒸馏水100ml乙液水溶性金红 1.0g蒸馏水100ml用时将甲、乙两液等量混合。
操作方法：（1）在干净的载玻片上加一滴生理盐水。
（2）用便签挑取少许粪便的粘液部分，与生理盐水混合，涂成适当的粪膜。
（3）加上述混合染色液一滴，混合之，覆置盖玻片。
（4）先用低倍镜找到，然后换高倍镜鉴定。
1．1．2浓集法：用较多的粪便，将其中的虫卵或包囊集聚在一个小范围内，便于检出，其阳性率比直接涂片法高；缺点是较直接涂片法复杂，时间也较长些。
浓集法又分为漂浮法和沉淀法。
1．1．2．1漂浮法利用虫卵和包囊的比重小于液体比重的原理使线虫卵或包囊浮集于液面，以增加单位面积虫卵和包囊的含量，提高检查效果。
通常用的方法有饱和盐水漂浮法和硫酸锌离心浮聚法。
（1）饱和盐水漂浮法：试剂的配制食盐40g蒸馏水100ml加热至沸，冷后取上清液使用。
如每95ml内加5ml40%甲醇溶液，可起固定的作用，有利于吸虫卵的上浮。
操作方法○1取0.5~1g的粪便放入漂浮瓶内（一般可用链霉素瓶代替）。
○2加入少量的饱和盐水（约为容器的1/3即可），用便签搅拌成均匀的混悬液。
○3再加入饱和盐水至漂浮瓶口，使液面略高于瓶口而未溢出为止。
○4在瓶口盖一载玻片，静置10~15min后，将载玻片迅速上提翻转，立即镜检。
注意事项○1此法适用于线虫卵的检查，如果漂浮时间过长，可使虫卵及包囊变形，甚至下沉。
○2浮集于表面的杂质在放置载玻片前，要清除掉，否则影响检查结果。
（2）硫酸锌离心浮聚法操作方法○1取1份粪便与10份温水调合成混合液。
○2取两层纱布过滤于离心管内。
○3用2000~2500r/min的离心速度离心1min，弃去上层液体，再加水少许，将沉淀物调和，再离心，反复2~3次，至水清为止。
○4弃去上清液，加入硫酸锌液（比重1.180即33%的溶液）少许调匀，再加入硫酸锌溶液，随加随调匀，使液面距管口约1cm即可。
○5再离心沉淀1min。
○6用白金耳取表面的液体于玻片上镜检。
1．1．2．2沉淀法利用虫卵比重大于水的原理，使其下沉在水底。
缺点是对于比重略大于1的原虫包囊效果较差，检查费时较多。
沉淀法又分自然沉淀法和离心沉淀法。
（1）自然沉淀法○1取20g左右的粪便放在烧杯内，加少许清水充分搅拌，再加入20倍的水，边加水边搅拌。
○2用二层纱布或60~80目的铜筛将其滤入500ml的三角量杯内。
再加满水，静置20~30分钟。
○3弃去上清液，重新加满清水，静置15~20分钟，如此反复数次，至上清液清晰为止。
○4弃去上清液，取沉渣镜检。
（2）离心沉淀法用离心机离心，可加速虫卵下沉，缩短检查时间。
操作方法○1取黄豆粒大小的粪便一块，加入10倍的清水，搅拌成混悬液。
○2用二层纱布或60~80目的铜筛将其滤入离心管内。
○3以1500~2000r/min速度离心1~2min，弃去上清液，加入清水，调匀后再离心沉淀，至上清液清晰为止。
○4取沉渣镜检。
注意事项○1所取粪便必须充分搅匀。
○2离心机启动要逐渐加速，停止时要逐渐减速，避免因其骤起或骤停使离心管互相撞击而破碎或扬起沉淀物。
○3弃去上清液时动作要快，避免沉淀物随上清液流出。
（3）消化法此法为目前检查肝吸虫卵常用的方法，检出率较高。
○1取10%氢氧化钠溶液5ml，置试管内。
○2取粪便1g放入试管内，充分搅拌，静置1h。
○3吸取管底沉渣，滴于载玻片上镜检。
（4）醋酸—醚浓集法本法对虫卵浓集颇佳，醋酸能溶解碳酸盐类，消除粘液物质及使一部分脂肪水解，醚能溶解剩余的脂肪及渗透混悬物质，使其比重减轻而浮于液面易与虫卵分离。
操作方法○1取粪便1~2g放入试管内，加入5%醋酸溶液约10ml，以玻棒充分搅拌均匀。
○2用一层纱布过滤于离心管中，加入等量醚液，塞住管口，用力振摇1min。
○3离心数分钟，此时管内自上而下分为醚层，粪内粗大物质渣滓层，醋酸液层及沉淀层等四部分，虫卵在管底沉淀层内。
○4用毛细吸管取沉淀少许于载玻片上镜检。
○5醚层适用于隐血试验。
（5）汞碘醛沉淀法本法同时有浓集，固定及染色的作用，对原虫的滋养体及包囊效果较好，也可用于集卵。
试剂的配制汞碘醛染色液卢戈氏液（碘5g、碘经钾10g、蒸馏水100ml）1ml甲醛 1.5ml硫柳汞酊7.5ml用时将三种液体按上述比例配制卢戈氏液，超过一周后不宜再用。
操作方法○1用2层纱布过滤于离心管中，加乙醚4ml，加塞后用力振荡。
○2静置2min后，离心1min。
○3弃去上清液，取沉渣加盖玻片镜检。
1．1．3肛门外检查法主要检查产于肛门附近的蛲虫卵和污染肛门附近的带绦虫卵，有时在肛门附近还可发现血吸虫卵，此外阿米巴患者遇有肛门溃疡时，亦可从溃疡处检查阿米巴原虫的滋养体。
因此肛门外检查法已不限于检查蛲虫卵。
此法分为棉拭子法和透明胶纸法。
1．1．3．1棉拭子法1、操作方法（1）取10cm长的棉签一根，用时先在生理盐水中稍加湿润。
再于受检者肛门周围皱襞上揩拭。
（2）然后将棉签置于试管内（也可用干净的青霉素小瓶），加饱和生理盐水至容器的1/3处，用力振荡棉签约半分钟，迅速将棉签提起，并将棉签在管壁上挤去盐水。
（3）加饱和盐水至试管口，盖以载玻片，漂浮5~10分钟后取下镜检。
或以1500r/min 离心5min倾去上清液吸取沉渣镜检。
注意事项○1检查的时间最好是清晨刚起床的时候。
○2所用棉签刚刚湿润即可，切不可沾水过多，或带有悬滴。
1．1．3．2透明胶纸法（1）取透明胶纸卷，剪成宽1~2cm，长3~5cm的胶纸条，贴于载玻片上备用。
（2）将有胶纸的一面贴于受检者肛门周围皱壁上。
（3）把粘有虫卵一面的胶纸放在载玻片上，滴生理盐水1~2滴，使胶纸平展，便可镜检，如加二甲苯后虫卵更为清晰。
1．2血液和骨髓的检查血液检查法是诊断丝虫病，疟疾等最基本的方法，骨髓检查法是诊断黑热病较常用的方法。
1．2．1微丝蚴的检查采血时间应在夜间十点钟以后至次晨2点以前，为微丝蚴在末梢血液内活动最多的时间，尤为患者睡后再唤醒效果更佳。
1．2．1．1新鲜血片法操作方法：（1）用75%酒精棉球消毒耳垂或手指。
（2）待干后用采血针刺破耳垂或手指，待血自然流出。
（3）接一大滴，放载玻片中央，盖一盖玻片。
（4）置低倍镜下观察，如有微丝蚴可呈蛇形蠕动，碰撞血球，使红血球摆动不停。
注意事项：（1）采血时间最好是在夜间。
（2）采血量不宜过多，否则血球会将虫体遮盖，但又不宜过少，血量太少，又影响检出率。
1．2．1．2厚血片法操作方法（1）取血时间仍在夜间采血为好。