生物化学知识点总结
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两性化合物:在同一分子中带有性质相反的酸、碱两种解离基团的化合物。
等电点:当溶液pH为某一pH值时,氨基酸分子中所含的正负数目正好相等,净电荷为0。这一pH值即为氨基酸的等电点,简称p I。
在等电点时,氨基酸既不向正极也不向负极移动,即氨基酸处于两性离子状态。
①pI 〉pH:分子显正电性。
氨基酸在等电点时溶解度最小,易发生沉淀
在等电点pH条件下,蛋白质为电中性,比较稳定。其物理性质如导电性、溶解度、粘度和渗透压等都表现为最低值,易发生絮结沉淀。
在近紫外区(200-400nm)只有酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸有吸收光的能力。
通过离子交换、电泳、或等电沉淀等技术进行氨基酸的分离、制备或分析鉴定。
除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外,所有α-氨基酸和蛋白质都能和茚三酮反应生成紫色物质。但能与茚三酮发生紫色反应的不一定是氨基酸和蛋白质,
2、4-二硝基氟苯反应、丹磺酰氯反应、苯异硫氰酸酯反应亦称Edman反应用来鉴定蛋白质或多肽的N-末端氨基酸残基。
层析法是生化最为有效的常用分离氨基酸的方法
层析法由三个基本条件构成:
⊙水不溶性惰性支持物
⊙流动相能携带溶质沿支持物流动
⊙固定相是附着在支持物上的水或离子基团。能对各种溶质的流
动产生不同的阻滞作用。
蛋白质的一级结构指蛋白质多肽连中氨基酸的排列顺序,包括二硫键的位置。它是蛋白质生物功能的基础。
组成肽链的氨基酸单元称为氨基酸残基
肽键中的C-N键具有部分双键性质,不能自由旋转
组成肽键的四个原子和与之相连的两个 碳原子都处于同一个平面内,此刚性结构的平面叫肽平面或酰胺平面
氨基酸的顺序是从N-端的氨基酸残基开始,以C-端氨基酸残基为终点的排列顺序。
肽链N-末端和C-末端氨基酸残基的确定
2,4-二硝基氟苯(DNFB)法
丹磺酰氯(DNS)法
羧肽酶法:从多肽链的C-端逐个的水解氨基酸
肼解法:多肽与肼在无水条件下加热,C-端氨基酸即从肽链上解离出来,其余的氨基酸则变成肼化物。
氨基酸序列测定—Edman降解
几条多肽链借助非共价键连接在一起,称为寡聚蛋白质
测定蛋白质一级结构
a)测定蛋白质分子中多肽链的数目
b)多肽链的拆分
c)二硫键的断裂
4)分析多肽链的N-末端和C-末端。
5)多肽链断裂成多个肽段多肽链断裂法:酶解法和化学法
肽链主链上的亚氨基与羰基氧原子间形成氢键
离子键(盐键):由于正负离子之间的静电吸引所形成的化学键
.配位键:在两个原子之间,由于单方面提供共用电子对所形成的共价键
二硫键:两个半胱氨酸巯基氧化脱氢而形成的-S-S-桥
非蛋白氨基酸
广泛存在于各种细胞和组织中,呈游离或结合态,但并不存在蛋白质中的一类氨基酸
蛋白质的二级结构是指多肽链的主链本身在空间的排列、或规则的几何走向、旋转及折叠。它只涉及肽链主链的构象及链内或链间形成的氢键。
主要有α-螺旋、β-折叠、β-转角、无规则卷曲
α-螺旋
螺距为0.54nm,含3.6个氨基酸残基;两个氨基酸之间的距离为0.15nm;
天然蛋白质中的α-螺旋几乎都是右手螺旋。
β-折叠
由两条或多条几乎完全伸展的多肽链平行排列肽链的主链呈锯齿状折叠构象
蛋白质的三级结构是指多肽链借助各种次级键(非共价键)在二级结构的基础上进一步盘旋、折叠形成具有特定肽链走向的紧密球状构象。
蛋白质胶体溶液的稳定性:表面电荷和水化膜
蛋白质分子大小、形状不一样,所带电荷的性质、数量不同,因此在电场中泳动的方向、速率也各不相同
蛋白质的变性作用
蛋白质受物理或化学因素作用,有序的空间结构被破坏,致使其生物活性丧失,理化性质异常变化,一级结构保持不变。
变性因素:物理因素如热、紫外线照射,高压,和表面张力等;化学因素如有机溶剂、脲、胍、酸碱等
作用机理:主要是次级键断裂,二、三级空间结构被破坏,分子的紧密结构变成了松散的无序状态。
当变性因素除去后,变性蛋白质重新回复到天然构象,这一现象称为蛋白质的复性
蛋白质的沉淀作用
改变蛋白质胶体溶液的环境条件,破坏其水化膜和表面电荷,蛋白质亲水胶体便失去稳定性,发生絮结沉淀现象。
有机溶剂沉淀法盐析法重金属盐沉淀法生物碱试剂沉淀法热凝固沉淀法
盐溶:在盐浓度很稀的范围内,随盐浓度的增加,蛋白质的溶解度亦随之增加
盐析:当溶液中盐浓度提高到一定的饱和度时,蛋白质的溶解度逐渐降低,蛋白质分子发生絮结,沉淀析出
盐析方法沉淀蛋白质常用的去盐方法为:透析和凝胶过滤
结构域:三级结构内由几个超二级结构单位组成的分立的、独立折叠的结构单位称为结构域。
分子病—指蛋白质分子中由于AA排列顺序与正常蛋白质不同而发生的一种遗传病
一级结构与功能的关系
(1)一级结构不同,生物功能各异
(2)一级结构中“关键”部分相同,其功能也不同
(3)一级结构的关键部位发生变化,其生物活性也发生改变或丧失
(4)一级结构的变化与疾病的关系
高级结构与功能的关系:空间构象发生改变会引起蛋白质的功能发生变化,功能丧失或功能增大等。
抗体就是免疫球蛋白是一类血浆糖蛋白
能引起免疫反应的任何分子或病原体称为抗原。
核酸化学
核苷酸:构成核酸大分子的基本单位
核苷酸本身由核苷和磷酸组成, 而核苷则由戊糖和碱基形成
核苷-碱基与戊糖通过糖苷键连接形成核苷
DNA所含的戊糖为β-D-2-脱氧核糖;RNA所含的戊糖则为β-D-核糖。核苷和核苷酸分子中的核糖均为β型。
核苷酸的生物学作用
(1)参与DNA、RNA的合成、蛋白质的合成、糖与磷脂的合成。
(2)在能量转化中起重要作用,ATP是生物体内能量的通用货币。
(3)是构成多种辅酶的成分:NAD、NADP、FAD、FMN和CoA。
(4)参与细胞中的代谢与调节(cAMP、cGMP
DNA的一级结构
脱氧核苷酸分子间连接方式及排列顺序
DNA的二级结构
DNA的两条多聚核苷酸链间通过氢键形成的双螺旋结构。
碱基堆积力(主要因素)碱基配对的氢键。
(一)名词解释
1.两性离子:指在同一氨基酸分子上含有等量的正负两种电荷,又称兼性离子。
2.必需氨基酸:指人体(和其它哺乳动物)自身不能合成,机体又必需,需要从饮食中获