生物化学实验复习题库

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1、卵磷脂提取原理:

卵磷脂在大脑、神经组织、肝脏、肾上腺和红细胞中含量丰富，尤其是在蛋黄中。卵磷脂易溶于脂肪溶剂，如乙醇和乙醚，可以用这些脂肪溶剂提取。本实验用95%乙醇提取卵磷脂，用蒸汽浴分离乙醇和卵磷脂。

2.卵磷脂的提取原理:新提取的卵磷脂被鉴定为白蜡，与空气接触后，由于不饱和脂肪酸的氧化而变成棕色。卵磷脂中的胆碱基团在碱性条件下分解成三甲胺。三甲胺有一种特殊的鱼腥味，可以被识别。

3、糖莫尔斯试验的颜色反应:

糖用无机酸(浓硫酸、浓盐酸)脱水，生成糠醛或糠醛衍生物，在浓无机酸的作用下，与а-萘酚形成紫色缩合物。因为糠醛或糠醛衍生物对此都是肯定的，所以它不是糖的特定反应，而是可以用来鉴别糖的存在。

4、糖色反应塞的测试:

酮糖在浓酸的作用下脱水生成5-羟甲基糠醛，后者与红色的间苯二酚反应。有时，它也产生棕红色沉淀，溶解在乙醇中形成亮红色溶液。这个反应是酮糖的特定反应，在同样条件下醛糖显色反应缓慢，只有当糖浓度高或沸腾时间长时，才是弱阳性反应。在实验条的条件下，蔗糖可能水解并呈现阳性反应。赛波特试验可以识别酮糖的存在。5.什么是纸色谱？

纸色谱是最简单的液-液相分配色谱。滤纸是纸色谱的支撑。当载体被水饱和时，大多数水分子被滤纸的纤维素牢固地吸附，因此，纸及其饱和水是色谱的固定相，与固定相不混溶的有机溶剂是色谱的流动相。

因为不同的氨基酸在相同的溶剂中有不同的溶解度，所以氨基酸在滤纸上的迁移率不同。

6.什么是Rf值？影响Rf值的主要因素是什么

Rf是氨基酸的特定位移值。Rf=从原点到色谱点中心的距离/从原点到溶液前端的距离

影响纸色谱迁移率Rf值的主要因素有:1 .样本本身的性质和结构；2、溶剂的性质；3.酸碱度；4.温度；5.滤纸的性质。

7.如何准备延长剂？

8.平衡溶剂在色谱柱中的作用是什么？9.牛奶制备酪蛋白的原理和方法。

牛奶含有半乳糖、蛋白质和脂肪。蛋白质中的酪蛋白通过等电点沉淀，然后通过离心获得。小的碳水化合物分子被分离，因为它们在清澈的液体中。通过有机溶剂萃取除去沉淀物中的脂肪，最终得到纯净的白色结晶酪蛋白。

方法:在鲜奶中加入PH4.7的醋酸缓冲液，在40℃下沉淀酪蛋白，洗涤，将醇醚吸附于水中，干燥成粉末，计算提取率。步骤:保温、调节酸碱度、沉淀、离心、洗涤、干燥和称重

10.蛋白质的等电点是多少？实际意义是什么？

蛋白质等电点:指氨基酸的正离子浓度和负离子浓度相等时的酸碱度，用符号pI表示。

像氨基酸一样，蛋白质是两性电解质。调节蛋白质的酸碱度可以使蛋白质带正电荷或负电荷。在pI中，溶解度最低，在外加电场中，蛋白质分子不会移动到正极或负极。

11.蛋白质变性与沉淀的关系。

沉淀可由蛋白质变性或盐析引起。蛋白质变性是指在光、热、有机溶剂和一些变性剂(如重金属盐)的作用下，蛋白质空间结构的破坏，使蛋白质失去活性，其过程是不可逆的。盐析是指向蛋白质溶液中加入轻金属盐来沉淀蛋白质。这是因为盐的加入降低了蛋白质和沉淀物的溶解度。这个过程是可逆的，当加入水时，蛋白质会溶解。这两者本质上是不同的。

12.通过蛋白质和氨基酸的显色反应实验，你掌握了几种定性鉴别蛋白质和氨基酸的方法了吗？他们的原则是什么？

缩二脲试验

茚三酮反应

黄色反应

考马斯亮蓝反应

13、甲醛滴定法测定氨基酸的基本原理:

14.当甲醛被滴定时，加入氢氧化钠溶液滴定氨基而不是羧基。为什么？为什么选择酚酞作为指示剂？

15.当使用醋酸纤维素膜电泳分离血清蛋白时，有必要将样品点靠近

负电极放置。这是什么原因？当通过电泳分离血清蛋白时，所用的电泳缓冲液的酸碱度为8.6。在这样的环境中，血清蛋白的几个蛋白在电离后带负电，因此只有当样品在负端被发现并施加电压时，它才能移动到正电极并彼此分离。

16.你认为电泳失败的原因是什么？

(1)电泳图案不规则:斑点不均匀、薄膜渗透不完全或温度过高，导致薄膜表面局部干燥或水分蒸发，缓冲液变质；在电泳过程中，薄膜放置不正确，因此电流方向不平行。

(2)蛋白质组分分离不良:由样品过多、电流过低、薄膜结构过细、透水性差和导电性差造成。

(3)染色后，由于染色时间不足或染色液过时，白蛋白在中间颜色变浅；如果是由于蛋白质含量高引起的，可减少血清量或延长染色时间，通常2分钟是合适的。如果球蛋白的百分比增加的时间太长，A/G比就会降低。

(4)薄膜不完全透明:当温度未达到90℃以上，透明液体老化，浸泡时间不够时，将样品放入烘箱中。

(5)透明薄膜上的气泡:玻璃片上的油脂使薄膜部分脱落或薄膜滚动不良。17.721使用分光光度计时应注意什么？

18.如何对血清蛋白电泳结果进行定量分析？简要解释其原理

与蛋白质结合的染料可以溶解在碱液中，溶液的颜色深度与蛋白质质量成正比。比色法用于比较每个蛋白条溶解在碱中后溶液的颜色，每个蛋白的百分比是根据每个组分的吸光度占总吸光度的百分比计算

的。

含量计算:外径总和T = A+α 1+α 2+β+γ

白蛋白% = a/t × 100%

α1球蛋白% =α1/T×100%α2球蛋白% =α2/T×100%β球蛋白% =β/T×100%γ球蛋白% =γ/T×100% 19，酵母核糖核酸的分离原理

酵母细胞富含核酸，核酸主要是核糖核酸，其含量为干菌体的2.67%~10.0%，而脱氧核糖核酸含量较少，仅为0.03%~0.516%。因此，酵母经常被用作提取核糖核酸的原料。适于大规模操作的低成本稀碱法或浓盐法主要用于工业上制备核糖核酸。两种方法提取的核酸都是变性的核糖核酸，主要用作制备单核苷酸的原料，工艺相对简单。

稀碱法是用氢氧化钠使酵母细胞壁变性并裂解，然后用酸中和，用乙醇沉淀核糖核酸，或在除去蛋白质和菌体后，调节酸碱度至pH2.5，以等电点沉淀。提取的核糖核酸被不同程度地降解。

20、酵母核糖核酸分离工艺简介

(1)取材:(2)提取:0.04毫升/60毫升，研磨至均匀。沸水浴30分钟(3)离心分离菌体残渣，得到核糖核酸提取物(4)沉淀核糖核酸:向核糖核酸提取物中加入酸性乙醇(5)离心，得到粗核糖核酸；(6)用醇醚洗涤，得到精制产品(7)干燥；(8)重21。如何获得高产量的核糖核酸粗品？

22.酵母核糖核酸成分的鉴定

核糖核酸包含核糖、嘌呤碱基、嘧啶碱基和磷酸。用硫酸煮沸可以水解它，并且可以从水解产物中检测到上述成分的存在。

(1)碱基的鉴定——嘧啶碱基