pfge脉冲场凝胶电泳具体操作

pfge脉冲场凝胶电泳具体操作
PFGE（Pulsed Field Gel Electrophoresis）是一种高分辨率的凝胶电泳
技术，可用于分离和检测大分子量DNA片段。

该技术常用于研究基因组结构、遗
传变异和DNA断裂等领域。

下面将详细介绍PFGE的具体操作步骤。

1. 准备DNA样品:
a. 从细胞中提取DNA。

可以使用标准的DNA提取方法，如酚/氯仿法或商用DNA提取试剂盒。

b. 用酶切酶或限制酶对DNA进行切割。

选择使DNA在所需大小范围内切割的酶，以便获得所需的DNA片段。

2. 制备凝胶:
a. 准备1% - 2% 的琼脂糖溶胶。

将所需琼脂糖加入TE缓冲液中，并在适当
的温度下加热搅拌，直到完全溶解。

b. 将琼脂糖溶胶倒入制作凝胶的模具中。

在模具顶部放置梳子以制作凝胶槽，并确保梳子的位置水平。

c. 让凝胶固化。

根据琼脂糖溶胶中指定的温度和时间，将模具放入冰箱或培
养箱中，使凝胶完全固化。

3. 负载和电泳样品:
a. 准备DNA样品。

将所需比例的DNA标记物和DNA样品混合，并加入适量的
加载缓冲液，如Bromophenol Blue。

b. 用吸管吸取混合物，并将其轻轻注入凝胶槽中的样品孔中。

确保尽量避免
气泡进入凝胶槽。

c. 启动电泳。

电泳前，确保样品中有足够的时间固定在凝胶上。

启动电源，
并将电流设置为所需的值。

4. 设置电泳条件:
a. 选择适当的电泳缓冲液。

常用的电泳缓冲液包括TBE缓冲液（三硼酸钠缓
冲液）和TAE缓冲液（乙醋酸/三乙酸片性缓冲液）。

b. 设置电泳条件，如电流密度，脉冲时间和频率等。

这些条件可以根据所研究的DNA分子量和所使用的电泳设备进行调整。

5. 进行电泳:
a. 启动电泳设备，确保电泳条件设置正确，并在所需时间内运行电泳。

b. 当电泳结束时，关闭电源，并小心地取出凝胶，以免损坏样品。

6. 可选的染色和可视化:
a. 将凝胶放入染色缓冲液中，如溴化乙锭溶液，使DNA可被视觉化。

b. 在染色缓冲液中搅拌凝胶，确保各个区域充分染色。

c. 在适当的条件下，观察和拍摄凝胶，并提取分析感兴趣的DNA片段。