人PPARαLBD融合蛋白表达质粒的构建和诱导条件优化

人PPARαLBD融合蛋白表达质粒的构建和诱导条件优化
李苌清;章涛;袁野;周歧新
【期刊名称】《生物医学工程学杂志》
【年(卷),期】2008()4
【摘要】过氧化物酶体增殖物活化受体α(Peroxisome prolifterator-activated receptor α,PPARα)属于Ⅱ型核受体,通过其配体结合区(1igand binding domain,LBD)结合特定的激动剂对参与机体代谢的关键酶、受体等的表达起调节
作用。

本研究以人肝组织总RNA为模板,利用RT-PCR方法扩增出人PPARαLBD
基因的cDNA片段,将其插入表达载体pMAL-p2X的麦芽糖结合蛋白(Maltose binding protein,MBP)编码基因malE的下游,转化入宿主菌E.coli.TB1。

然后对
重组质粒在大肠杆菌TB1中的表达条件进行了优化。

经SDS-PAGE分析和Bio-Rad Quantity One凝胶影像分析结果表明,诱导剂IPTG的浓度为0.4mmol/L,30℃振荡诱导培养6h时,可获得高效表达的MBP-PPARαLBD融合蛋白,重组蛋白的表
达量可达胞质总蛋白的31.34%。

为进一步纯化和PPARα配体筛选研究打下了良
好的基础。

【总页数】5页(P908-911)
【关键词】PPARα;麦芽糖结合蛋白;表达条件;优化
【作者】李苌清;章涛;袁野;周歧新
【作者单位】重庆医科大学药理教研室,重庆市生物化学及分子药理学重点实验室【正文语种】中文
【中图分类】Q786
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