实验题目血红蛋白测定和红细胞计数
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实验题目：血红蛋白测定与红细胞计数
检验诊断学教研室
张群智 教授
实验目的要求： 通过血红蛋白测定、红细胞计数实验要求： 1、掌握红细胞计数、血红蛋白测定的原理、方 法及注意事项。 2、掌握血细胞计数板的结构
一、血红蛋白测定(Hemoglobin简称Hb) （氰化高铁血红蛋白法）
【原理】 血红蛋白中的亚铁离子（Fe2+）被高铁氰 化钾氧化成高离子（Fe3+），血红蛋白转化 成高铁血红蛋白，高铁血红蛋白与氰离子 （CN-）结合，生成稳定的氰化高铁血红蛋白。 用光电比色计在540nm波长比色。从HicN参 考液制作的标准曲线上读取血红蛋白克数。
【操作方法】 l、取红细胞稀释液2.0ml毫升，放入一小试 管内。 2、用血红蛋白吸管吸血至l0ul处。 3、擦去管尖外部余血将血液迅速轻轻吹入盛 有红细胞稀释液的试管内，吸上清液嗽洗吸管 2-3次，立即摇匀。
4、用玻棒取混悬液少量，充入计数池内。 5、待2—3分钟，让红细胞完全下沉后，将计 数板平放在显微镜台上，用低倍镜观察，如 红细胞分布均匀即可换高倍镜进行计数。
3、质量控制： 中方格内红细胞分布应均匀，健康成人每 中方格红细胞数约为80—100个，各中方格内 之红细胞相近，如悬殊过大(超过10个细胞以 上的)应重混匀再充填。
Leabharlann Baidu
报告方式： Hb ： RBC:
g／ L ×l012/L
【操作】 取试剂5毫升加入血液20ul混匀置5分钟后 用721光电比色仪，540nm波长，试剂为空 白调0点比色，读取光密度，查标准曲线得 结果。
红细胞计数(red blood cell简称RBC) ——显微镜直接计数(试管法)
【原理】 一定量的血液经一定量等渗性稀释液稀 释后，充入血细胞计数池中显微镜下计数一 定容积内的细胞，再换算成每升标本的细胞 数报告。
红细胞计数的区域: 中心大方格中的5个中方格(正中一个和四 角各一个)。
计数原则: 数上不数下，数左不数右的计数原则即凡压 在中方格边线(双线)上的红细胞，只计上侧与 左侧线上的细胞，而压在下侧与右侧线上者不 计入。
【计算】 红细胞数/L=5个中方格内红细胞数 ×5×10×201×106或 红细胞数/L=5个中方格内红细胞数 ÷100×1012 式中×5 5个中方格换算成1个大方格 ×10 1个大方格容积为0.1ul，换算成1.0 uL。 ×201 血液的稀释倍数 ×106 由u1换算成L
【注意事项】 1、吸管、试管要注意清洁、干燥以防溶血， 操作迅速避免血液凝固，如有血凝块应重新采 血。 同时做血红蛋白测定，白细胞计数和分类 计数，在采血时应先做血膜再做红细胞，然后 做白细胞，血红蛋白检验，避免红细胞破坏。
2、充液： 充液前，红细胞复液要充分摇匀，红细胞 悬液注入计数池内要求分布均匀，不可有气泡， 亦不可有多余液体外溢。
检验诊断学教研室
张群智 教授
实验目的要求： 通过血红蛋白测定、红细胞计数实验要求： 1、掌握红细胞计数、血红蛋白测定的原理、方 法及注意事项。 2、掌握血细胞计数板的结构
一、血红蛋白测定(Hemoglobin简称Hb) （氰化高铁血红蛋白法）
【原理】 血红蛋白中的亚铁离子（Fe2+）被高铁氰 化钾氧化成高离子（Fe3+），血红蛋白转化 成高铁血红蛋白，高铁血红蛋白与氰离子 （CN-）结合，生成稳定的氰化高铁血红蛋白。 用光电比色计在540nm波长比色。从HicN参 考液制作的标准曲线上读取血红蛋白克数。
【操作方法】 l、取红细胞稀释液2.0ml毫升，放入一小试 管内。 2、用血红蛋白吸管吸血至l0ul处。 3、擦去管尖外部余血将血液迅速轻轻吹入盛 有红细胞稀释液的试管内，吸上清液嗽洗吸管 2-3次，立即摇匀。
4、用玻棒取混悬液少量，充入计数池内。 5、待2—3分钟，让红细胞完全下沉后，将计 数板平放在显微镜台上，用低倍镜观察，如 红细胞分布均匀即可换高倍镜进行计数。
3、质量控制： 中方格内红细胞分布应均匀，健康成人每 中方格红细胞数约为80—100个，各中方格内 之红细胞相近，如悬殊过大(超过10个细胞以 上的)应重混匀再充填。
Leabharlann Baidu
报告方式： Hb ： RBC:
g／ L ×l012/L
【操作】 取试剂5毫升加入血液20ul混匀置5分钟后 用721光电比色仪，540nm波长，试剂为空 白调0点比色，读取光密度，查标准曲线得 结果。
红细胞计数(red blood cell简称RBC) ——显微镜直接计数(试管法)
【原理】 一定量的血液经一定量等渗性稀释液稀 释后，充入血细胞计数池中显微镜下计数一 定容积内的细胞，再换算成每升标本的细胞 数报告。
红细胞计数的区域: 中心大方格中的5个中方格(正中一个和四 角各一个)。
计数原则: 数上不数下，数左不数右的计数原则即凡压 在中方格边线(双线)上的红细胞，只计上侧与 左侧线上的细胞，而压在下侧与右侧线上者不 计入。
【计算】 红细胞数/L=5个中方格内红细胞数 ×5×10×201×106或 红细胞数/L=5个中方格内红细胞数 ÷100×1012 式中×5 5个中方格换算成1个大方格 ×10 1个大方格容积为0.1ul，换算成1.0 uL。 ×201 血液的稀释倍数 ×106 由u1换算成L
【注意事项】 1、吸管、试管要注意清洁、干燥以防溶血， 操作迅速避免血液凝固，如有血凝块应重新采 血。 同时做血红蛋白测定，白细胞计数和分类 计数，在采血时应先做血膜再做红细胞，然后 做白细胞，血红蛋白检验，避免红细胞破坏。
2、充液： 充液前，红细胞复液要充分摇匀，红细胞 悬液注入计数池内要求分布均匀，不可有气泡， 亦不可有多余液体外溢。