临床生化实验方法的选择和评价
临床生物化学检验质量控制流程图
临床生物化学检验质量控制流程临床生化检验室全面质量控制（TQC）是利用现代科学管理的方法和技术检测分析过程中的误差，控制与分析有关的各个环节，确保实验结果的准确可靠。
一、分析前质量保证(一) 人员的素质和稳定性凡进入生化专业的工作人员上岗前应培训，了解本专业的实验室工作流程，掌握各种设备的操作、维护、保养，熟练应用实验室LIS系统，掌握各项目检测原理及影响因素，熟练应用比对方法。
(二) 实验室的设置和工作环境实验室布局合理，环境整洁，仪器间应进行防尘处理，温度15~30°C，相对湿度<65%。
(三) 实验仪器的质量保证1. 分析仪器的性能检查1.1 波长校正在更换光源灯、重新安装、搬运或检修后，以及仪器工作不正常时，都要进行波长校正。
就是正常工作的仪器，每隔一个月也要检查一次，这样才能保证读数与通过样品的波长符合，保证仪器的最大灵敏度。
1.2 线性检查包括仪器线性及测定方法线性两个方面的检查。
线性误差表现为溶液的浓度与吸光度不成线性关系，出现正偏离或负偏离的现象。
这种偏离，一是溶液本身不符合比耳定律，此现象叫做化学偏离；二是仪器本身各种因素的影响，使吸光度测定值与浓度之间不成线性关系，这种现象叫做仪器偏离。
仪器偏离的因素很多，如杂光、有限宽带、检测器噪声、环境条件的变化、波长的变动、比色杯的误差、辐射光的非平行性、检测器本身的非线性等。
1.3 稳定性检查当电源电压在220~230V围变化时，仪器读数漂移不应超过透光度标尺上限值的±1.5%。
在电源电压不变的条件下，在3分钟其读数漂移不应超过标尺上限值的±0.5%。
1.4 重复性检查在波长、工作状态、电源电压、比色杯等合格的前提下，可进行重复性检查。
用重铬酸钾溶液（30、60、90、190mg/L）在波长440nm，将各浓度管连续测3~5次，各浓度管中最大差值误差小于1%T为合格。
1.5 灵敏度检查将重铬酸钾液配制成30和32.5mg/L及120和122.5mg/L的4种应用液（浓度差两组各为2.5mg/L）。
临床生化检验分析质量指标
临床生化检验分析质量指标临床生化检验是一种重要的医学检验方法，通过对患者的体液样本进行分析，可以获得关于患者体内生物化学代谢状态的信息，为临床诊断和治疗提供了重要的参考依据。
而临床生化检验分析质量指标则是评价检验结果的准确性和可靠性的重要标准。
首先，作为临床生化检验的重要指标，精确度是评价分析质量的关键因素之一。
精确度是指检验结果与真值之间的接近程度，包括系统误差和随机误差两个方面。
系统误差是由于实验条件、试剂、仪器等因素引起的固定的偏差，而随机误差则是由于实验操作过程中的不确定性引起的波动。
为了提高精确度，需要严格控制实验条件，确保试剂的质量和稳定性，采用准确的仪器和方法，同时加强人员培训，从而减小误差对结果的影响。
其次，在临床生化检验中，灵敏度和特异度也是评价分析质量的重要指标。
灵敏度是指检验方法能够对阳性样本准确地识别出来的能力，特异度是指检验方法能够对阴性样本准确地识别出来的能力。
提高灵敏度可以减少假阴性结果的发生，提高特异度可以减少假阳性结果的发生。
为了提高灵敏度和特异度，需要选择合适的检验方法和标准，确保方法的准确性和稳定性，在临床应用中根据实际需要进行合理调整，从而提高检验结果的可靠性。
此外，稳定性也是评价临床生化检验分析质量的重要指标之一。
稳定性是指检验结果在不同存储条件和时间的变化情况。
对于生化指标来说，可能受到温度、光照、PH值等因素的影响，因此需要在适当的条件下进行样本的采集、保存和运输，以保证结果的准确性和可靠性。
同时，还需要建立合理的质控体系，定期进行内部和外部质量控制，及时发现和纠正可能存在的问题，确保检验结果的稳定性和可靠性。
最后，参考范围的确定和标准化也是评价临床生化检验分析质量的重要内容。
参考范围是指正常人群中某一指标的变异范围，通常以百分位数表示。
在临床应用中，参考范围的确定对于判断患者是否健康或是否存在某种疾病非常重要。
因此，需要根据不同人群的特点和检验方法的特性，进行科学、准确的参考范围确定，同时加强标准化管理，确保不同实验室之间的结果可以相互比较和参考。
03试验方法评价
三级（控制物） 特性：控制物有冻干的或溶液， 以参考方法用一级或二级标准品
定值
用途：用于质量控制，一般不用于 标化。
方法选择要求和步骤
实用性（微量快速）
基本要求
可行性（条件和费用） 可靠性（准确特异安全）
基
本
步
骤
广泛查阅文献 选定候选方法 进行初步实验
二、实验方法评价 目的和意义
方法学评价是通过实验途径，测定
并评价方法的精密度与准确度，评 价实验的过程就是对误差的测定。
方法评价指标
准确度与偏差系数
评价 指标
精密度与变异系数 灵敏度与特异性 干扰值与干扰率 线性范围
实验 误差
1.准确度与偏差系数（CB）
测定值与真值的符合程度，常用不准确度
表示。
偏差系数（CB） =(真值-x／真值)×100% 例：
参考值的确定：
参考个体的选择原则：具有代表性；随
机选择；样本要达到要求，100例以上；测
定结果准确可靠。
参考值范围： 均数-标准差法：X2S 可信区间法：95%可信限
2、医学决定水平的确定
一般用Xc表示。 一个诊断实验一般确定三个决定水平： Xc1 ：待诊值，提示需进一步检查的阈值； Xc2 ： 确诊值，提示需要采取治疗措施的界值； Xc3 ： 提示预后或需要紧急处理的界值。 另外，有些指标还应设置危急值。
4.特异性：指分析测定中只与某一成分发生反应
的特性强弱。
双缩脲法（肽键） 酶联免疫法（酶与底物,抗 原与抗体的特异性结合）
血清蛋白（７５g/L）
特异性与非特异干扰的区别
5.线性范围：指实验方法所能检测标本中某物
质的浓度范围。
实验十五临床生化检验方法学评价试验 - 副本
回收试验
试剂 操作步骤 结果计算 评价标准
——见教科书
回收试验
注意事项: 分析物浓度应选择医学决定水平，血糖 的医学决定水平为2.8，6.7，8.9。 纯标准品溶液的加入体积不得超过血清 样品的10%，避免将血清过度稀释，引 起误差的改变或消失。 准确加量是最关键的技术。
干扰实验
目的要求 掌握方法学干扰试验的设计原理和基
检测能力测定
试剂 操作步骤 结果计算 评价标准
——见教科书
检测能力测定
注意事项
最低检测限量可以表示试验方法的灵敏度，但两者概 念不同。检出限是一种分析方法的最大检测能力的指 标，更具实用性。
灵敏度与分析变异有关，所以有人以斜率/标准差代 替灵敏度，在检测待测物浓度较小差别时，这里的灵 敏度与精密度相混淆。因此，要使用方法的灵敏度保 持稳定，必须结合精密度及准确度全面考虑。
本方法统计分析；熟悉干扰试验的注意 事项和评价标准。客观评价GOD-POD法 测血糖恒定系统误差的大小。
干扰实验
原理
干扰实验是测定特异性和干扰两者引起的 误差。在具体的方法学评价实验中，首先要确 定被试可疑物质是否引起系统误差；若能引起 误差，再进一步探讨其误差的来源是因方法特 异性差还是干扰，若加入的物质本身和分析试 剂反应并产生读数，这是特异性差，若加入的 物质不与分析试剂反应，但它改变了分析物与 分析试剂间的反应，这是干扰。本实验用尿酸 做HO不能参与第二步POD的偶连反应，从而降 低显色强度，产生负的测定误差。因此，尿酸 对反应有干扰，但不是尿酸被测定。
干扰实验
试剂 操作步骤 结果计算 评价标准
——见教科书
干扰实验
注意事项 加入可疑干扰物浓度要明显高于常见浓度的上 限，有可能时应达到病理标本的最高值尿酸升 高的变动范围在0.42~0.9mmol/L之间。 凡可疑干扰物都应做。 无论是方法特异性差或干扰，都影响测定结果 的准确性，影响程度与分析物浓度无关，与分 析物量有关，所以 产生的误差都是恒定系统误 差，常以偏差BIAS作为统计量。 其他注意事项与回收实验相同 。
临床生化实验方法的选择和评价
注意事项 被试验的物质：胆红素、溶血、防腐剂、抗凝剂、药物等
可疑干扰物的浓度：干扰物浓度有可能达到病理标本最高 浓度值。 本试验检测的误差包括方法特异度不高和干扰物作用引起 的误差。
消除干扰常用方法 空白对照：试剂空白：常见
标本空白：
物理、化学方法分离干扰物 双波长或多波长法检测排除干扰 误差较大又无法消除，则改进或更换方法。
④应用安全可靠。
（2）可靠性
一般具有较高的精密度和准确度， 以及较大的检测能力。
2、方法选择的步骤
1）广泛查阅资料
根据方法选择的要求对已发表的各种方法进行 比较与检验，确定哪些方法有充分的科学根据 及真实的使用价值。必须仔细分析各种方法的 特点，选择适合于本实验室具体条件的方法， 并且要判断所选方法能否满足本室工作的需要。
2）选定侯选方法
经初步选定的方法称为候选方法。候选方法
确定后，应该写出该法的原理与参考文献， 所用仪器、试剂的来源、牌号、纯度（或配 套试剂盒），标本收集要求，详细的操作步 骤，标准曲线和结果计算，文献中列出的性 能指标，参考值与参考范围，以及其它应注 意的事项与安全防护措施等。
3）进行初步试验 为了实用的目的，初试应该包括 ①标准曲线及其重复性； ②质控血清或新鲜标本的重复试验；
２）参考方法（reference method ）：
已知其准确度和精主工，干扰因素少，系统误差很 小。有适当的灵敏度、特异性及较宽的分析范围。在 条件许可的实验室中经常使用。 用途：主要用于鉴定常规方法和试剂盒、鉴定二级标 准品，为质控血清定值等 缺点：技术性要求高，费用贵，设备要求较高，测定 时间较长
③分析待测物浓度不同的标本，与公认的参考
(整理)检验医学专业实验IV临床生物化学检验部分
自动生化分析仪实际K值测定实际K值：理论K值受样品和试剂的加量准确度、比色杯光径准确度，尤其是ε的影响。
ε在波长和温度等不同时有所不同，故有必要获得用户所用分析仪的实际ε，再计算K值，此为~。
一、340nm波长实际K值测定【实验原理】：通过有NAD+（NADP+）参与的反应途径，用NADH或NADPH标准液来校正仪器。
用己糖激酶（HK）方法测定葡萄糖时，葡萄糖的消耗与NADH的生成呈等摩尔关系。
葡萄糖有标准纯品，当反应达到终点时，NADH的摩尔数等于标准的葡萄糖摩尔数。
在需要校正的仪器上测其A即可求得实际摩尔吸光系数，计算出实际K值。
【注意事项】1．减少偶然误差重复测定10次，当CV>5％时，则重新测定10次。
2．减少系统误差使用实际K值计算酶活性。
3．如果实际ε值与理论ε值偏差过大，需对仪器检修和校正。
二、405nm波长实际K值测定【实验原理】：许多酶活性测定时，以人工“色素原”为底物，经酶作用后可释放出在405nm 波长具有吸收峰有色的反应产物，如对硝基苯酚(4-NP)、对硝基苯胺(4-NA)、对硝基-5-氨基苯甲酸(ANBA)。
他们在405nm波长时的理论ε分别为18 700、9 870、9 490。
可使用其相应的纯标准品在需要校正的仪器上测其A即可求得实际ε，计算出实际K值。
以ALP实验(产物为4-NP) 为例测定实际K值。
【注意事项】1．4-NP标准品纯度要求较高，必要时需纯化。
2．其他注意事项参见340nm K值校正。
三、如何校正K值在理论K值或实际K值得情况下，测定某标准品的含量，若测得的结果偏低，则需要把测得的结果调整至原标准品的含量，此时调整的数值称为校正因子，则校正K值=理论（实际）K值×校正因子=理论（实际）K值×校准值÷实测值NADH正负向反应测定酶活性一、血清乳酸脱氢酶测定LD催化反应式为：L-乳酸+ NAD+（LD）→丙酮酸+ NADH + H+在反应过程中，乳酸被氧化生成丙酮酸，同时NAD+还原为NADH。
临床化学分析方法选择与评价
临床化学分析方法选择与评价本文将就临床生化检测中的试剂选择，试验方法的选择，以及实验结果的评价方法进行简单的阐述。
使大家对试验方法的各种评价指标和评价方法有充分的了解，同时能让大家充分认识到实验室的检测方法评价的重要性。
一、对试剂及试剂盒的选择（一）对试剂的要求为了保证一定质量，对生化试剂的要求，首先实验室使用的检验试剂应通过国家食品药品监督管理局 SFDA 的批准，拿到批准文号；第二，产品的名称，应参照 SFDA 颁布的“体外诊断试剂分类目录”确定产品的名称；三，规格型号，应规定可进行测试的次数，也可用包装规格表示。
（二）对试剂盒的要求对试剂盒的要求都有哪些？第一，检测原理，即方法学原理，简单扼要说明测定原理及名称；第二，试剂组份，要明确说明试剂中组份，组成成份的数量、比例及浓度，应采用国际标准或法定单位；第三，所用校准品应该符合国家食品药品监管管理局（ SFDA ）的标准和要求；第四，试剂的稳定性，应该标明试剂盒的贮存条件与有效期，同时还要注意开瓶后试剂的贮存条件与有效期。
有特殊要求时应该明确说明；第五，检测程序，包括校准和质控的程序；第六，参考区间及其参考人群的说明，实验室给临床发报告时候，必须要给出参考区间，结果的参考区间切忌不要直接使用国外人群的参考值，不能代表中国人群的实际情况。
第七，诊断性试剂的性能评估，它的准确性对临床诊治疾病非常重要。
评估包括试剂的敏感性、特异性、精密度、线性范围或可报告范围、抗干扰能力、准确性、溯源性、方法对比结果等；第八，注意事项，应该注明是体外诊断用，以及化学品危害的说明等。
二、实验方法和标准品的选择实验方法根据准确度与精密度的不同，可以分为三级，即：决定性方法（一级参考方法）、参考方法（二级参考方法）和常规方法（厂家选定方法和终用户实验室常规方法）。
（一）标准品的分级标准品可以分为一级标准品（一级参考物质）、二级标准品（二级参考物质）和校准品，前两级是国家认可的，它有标准物质证书。
临床生化检验方法的选择和评价
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齐齐哈尔医学院生化教研室
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（二）标准品的分级
1．一级标准品（原级参考物，primary reference material ） 是一种稳定而均一 的物质，它的数值已由决定性方法确定，
或由高度准确的若干方法确定，所含杂
质也已经定量，且有证书；用于校正决
定性方法，评价及校正参考方法以及为
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（二）准确度评价
❖ 1．方法比较试验
❖(1)要求 比较方法应是参考方法或推荐 方法，如该测定没有参考方法或推荐方 法亦可用公认的常规方法。
❖ 但须具备：
❖ ①比较试验方法有更好的精密度。
❖ ②干扰影响已知。
❖ ③与试验方法使用相同的计算单位。
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值为回收量。
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❖
（2）回收率计算：理想的回收率为
100%，如某法测血钙的回收率为
95.7%，有4.3%的比例误差，表明一个
含钙真值为2.5mmol/l的标本,若用该方
法测定,约为
2.39mmol/l(2.5×95.79% )，误差为
0.11mmol/L(2.5×4.3%)。
主要用于常规方法的评价或为控制物定
值和常规测定的结果计算。
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3．校准品（calibrator） 用二级标准品和常 规方法测定得到校准品，用于常规测定中 的标准
4 .控制物（control material） 具有与 检测过程相适应的特性，其成分及基质与 检测样本相同或相似，且均匀、稳定。
临床生物化学检验-第5章 常用分析技术
(affinity chromatography)
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离子交换层析 (ion exchange chromatography, IEC)：是依据各种离子或离子 化合物与固定相离子交换剂的结合力不同而进行分离纯化的方法。
色谱技术 ，发现了液-液即分配色谱法
固定相-
流动相-
20世纪60年代高效液相色谱，high performance liquid chromatography即HPLC
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1. 按流动相种类分类
气相层析
液相层析
超临界流体 层析 电层析
气体
液体
超临界流体 缓冲溶液、 电场
挥发性有机物
可以溶于水或 有机溶剂中的 各种物资
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高效液相层析法 (high performance liquid chromatography，HPLC)： 是在经 典液相色谱和气相色谱的基础上发展起来的分析技术。 由于高效固定相填料颗粒小而 均匀（1.7~10μm） ，会引起高阻力（小颗粒具有高柱效），因此采用高压输液泵输送 流动相 ，可大大加快分析速度 ，故又称高压液相层析法。
临床应用：作为参考方法测定钙、镁定值或建立新常规方法作比较试验。 优点： 灵敏度高、选择性好、分析速度快。 缺点：需校准物、分析条件要求高、操作较复杂、测定每一种元素需特 定的空心阴极灯、有些反应的显色剂本身的颜色会影响测定的专一性。
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1. 校准曲线法：以校准物浓度（系列浓度）为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线 ，在相同条件 下测定待测样品 ，然后在标准曲线上查找待测物质浓度。影响因素较多 ，每次需绘制新标准曲线。
临床生化检验技术本科第二章 临床生物化学检测方法的选择与评价
②管回收率： 0.18(mmol/L)除 以0.19(mmol/L) 等于94.7% ③管回收率： 1.15(mmol/L)除 以1.19(mmol/L) 等于96.6 平均回收率
=95.7%
第二章 临床生物化学检测方法的选择与评价
结果列表
测得浓度
①1.70 ②1.88 ③2.85 平均
加入浓度
― 0.19 1.19
第二章 临床生物化学检测方法的选择与评价
第二节 临床生物化学检测方法的评价 和性能判断
一、检测系统的比对 二、方法学性能评价 三、质量目标设定与方法 学性能判断
第二章 临床生物化学检测方法的选择与评价
方法学评价
• 建立或引进一个新方法，应对其技术性能如准确 度、精密度、线性等指标做出评价。
• 通过实验途径，对其性能评价指标（精密度、准 确度等）进行测定，决定候选方法是否可以被接 受（判断其能否满足临床使用要求）。
主要方法： 溴甲酚绿法、双缩脲法、J-G法等。
应用： 临床常规检验使用，常规方
法在作出评定以后，经有关学术 组织认可，可以作为推荐方法 （recommended method ） 。
第二章 临床生物化学检测方法的选择与评价
第二章 临床生物化学检测方法的选择与评价
• 决定性方法
一级标准品
• 参考方法
第二章 临床生物化学检测方法的选择与评价
2.精密度评价——重复性试验
试验的目的在于考察候选方法的偶然误差（也称 随机误差）。 （1）方法：在重复性条件下对同一样本，进行多 次分析测定，各测定值间随机误差的大小，即结 果的可重复程度就是精密度。一般测定次数为20 次。
反映精密度好坏的指标：标准差或变异系数。
应用：
临床生化检验临床应用性能评价
注意事项：
①正确选择受检对象，以受检对象的确对所反映的总体具有 代表性和不存在对指标具有影响的因素为原则；
②合理规定参考人群的条件，如年龄、性别、民族、职业、 女性的月经期、妊娠和哺乳，以及标本采集的时间和地区 因素等；
③保证一定数量的受检人数，一般应有100例以上，若指标分 布呈偏态时应在120例以上，特殊情况至少也应30例以上；
通常用于
①拟诊为严重但疗效好的疾病，以防漏诊；
②拟诊为有一定治疗效果的恶性肿瘤，以便 早期确诊及时治疗；
③存在多种可能疾病的诊断，可排除某一诊 断；
④普查或定期健康体检，能筛选某一疾病, 以防漏诊。
2、诊断特异度与误诊
用诊断试验检出的阴性结果的百分率，表示非患病者中诊断 试验正确确定非患病者的能力，又称为真阴性率。
“金标准”
是指当前临床医学界公认的，诊断疾病最可靠的、在 临床上能获得肯定结论的方法。
使用金标准的目的就是准确区分受试对象是否为某病 患者。
临床上常用的金标准包括组织病理学检查（活检、尸 体解剖）、外科手术发现、病原体分离培养鉴定、特 殊检查和影像学检查（CT、核磁共振、彩色B超）、 生物学标志检查和长期随访所得的结论等。
确认试验：确诊试验主要是指在实验如果是阳性（定性）的情况下，需要做的一种
确诊实验，以肯定对疾病的诊断。
筛查实验与诊断实验的区别
一、检验项目临床应用性能评价的意义
1.检验项目临床应用面临的问题 2.临床生物化学检验学科发展的需要 （1）决定新检验项目的临床应用 （2）合理选择检验项目的适用范围 （3）为制定临床检验实践指南提供依据 3.临床生物化学检验工作的基本任务之一
例如，诊断冠心病的标准诊断方法是冠状动脉造影， 诊断肾炎的标准方法是肾组织活检和尸体解剖，诊断 胆结石的标准方法是手术所见。
临床生化诊断试验的诊断性能评价
临床生化诊断试验的诊断性能评价第一节概述临床诊断试验(diagnostic test)是指临床上用于某种疾病诊断的诊断方法。
广义上讲，临床诊断试验不仅包括各种实验室检查、影像诊断和仪器诊断，也包括一些病史及临床检查提供的资料。
随着科学技术的进步与发展，用于疾病诊断的临床诊断试验层出不穷，但是，并不是所有的新的临床诊断试验均比常规方法或旧的方法好。
新的临床诊断试验的性能如何，必须用合理的评价方法进行评价确定。
临床诊断试验的性能评价内容包括技术性能评价、诊断性能评价、临床效应评价和经济效益评价。
诊断性能评价的方法是基于有关流行病学调查为基础，对某种疾病的诊断方法进行评价的临床试验。
它侧重于对一种新的诊断方法，包括症状、体征、检查和检验等进行临床试验评价。
临床生化诊断试验是指临床生化实验室中用于某种疾病诊断、筛查和监测的检查方法或项目。
临床生化诊断试验的诊断性能评价，不同于技术性能的方法学评价，它以流行病学调查为基础，评价某种临床生化诊断项目在某种疾病诊断方面的诊断价值。
一、临床诊断试验的数据与患病情况的关系诊断试验分定性试验和定量试验。
定性试验的结果分为阳性和阴性结果，定量试验的结果为一系列连续的计量数据，这些数据可被分界值将其分为两个部分，也可判断为阳性和阴性结果。
一般情况下，由quot;正常人"与"病人"的诊断试验的结果的分布有部分重叠，因此，诊断试验的结果和患某病的情况之间可能出现四种关系：①真阳性（True positive，TP）指经试验而被正确分类的患者的数目。
②假阳性（False positive，FP）指经试验而被错误分类的非患者的数目。
③真阴性（True negative，TN）指经试验而被正确分类的非患者的数目。
④假阴性（False negative，FN）指经试验而被错误分类的患者的数目。
结果见图8-1。
二、临床诊断试验的诊断性能评价的层次（一）诊断试验对疾病诊断的准确性、有效性和可靠性诊断试验提供的数据有两个方面的作用：①对疾病的状态识别，即鉴别有无疾病。
临床生化方法学评价
仪器、试剂误差
• 偶然误差：
定义：指以偶然的和不可预料的方式出现的不易测定 的偏差。 特点：
误差的大小或正负相等，在均数两侧对称分布，增加测定次 数可以减小，可以控制在一定范围内，但不可避免。表示不精 密度。
主要见于：操作误差
方法的线性范围不够宽 实验条件随机改变 注：引起SE与RE的因素是相对的。
4、回收试验注意事项：
① 准确吸量 ②作高、中、低三个浓度（线性范围内）的回收实验， 计算平均回收率。 ③分析样品终浓度最好达医学决定水平。 ④加入标准液的体积要在10％以内。 ⑤ 一般标准液浓度比欲增加的浓度至少高10倍。 ⑥最好重复测定几次。 ⑦病人样品数视具体情况而定。 ⑧最好同时用对比方法测回收。
回收率计算，以测定血清钙为例：
(1)样品制备：
①基础样品：血清2ml＋蒸馏水0.1ml
②分析样品：血清2ml＋4mmol/L钙标准液0.1ml
③分析样品：血清2ml＋ 25mmol/L钙标准液0.1ml
(2)计算公式及计算结果：
加入浓度=
标准液浓度×
标准液量(ml) 血清量(ml)+标准液量(ml)
(1)系统误差(SE)： 恒定系统误差(CE)：误差大小与被测物浓度无关。 比例系统误差(PE)：误差大小与被测物浓度有关。
(2)偶然误差/随机误差(RE)
允许误差
• 系统误差：
定义：指一系列测定结果与真值或靶值 相比存在同一倾向的偏离。
特点：重复检验时，按一定规律重复出 现，增加测定次数不可消除，但改进方法 等可以校正。表示不准确度。
指经过充分证实认为精密度与准确度稍低于决 定性方法，其各种轻度干扰因素为已知的分析方 法。用于鉴定常规方法与二级标准品，及为质控 血清定值，评价商品试剂盒。
实验方法的选择及评价
典型产品： Roche公司的CFAS（ Calibrator for automation system） BECKMAN公司的multi Calibrator
什么是校准（Calibration）： 用已知浓度的校准物（ calibrator ）在规定条件下进行测 定以找出一个参考点（K值）的过程即为校准 K=校准物浓度/(校准物吸光度－试剂空白吸光度) 常规条件下校准的用途：获得K值以便于计算待测标本 的结果
胆固醇氧化酶法
项目
决定性方法
参考方法
TG
ID-MS
酶法
ALT
--LDH-NADH法AST--MDH-NADH法
GGT
--
连续监测产物生成法
CK
--
NAD+偶联法
注：
ID-MS：同位素稀释一质谱法
MDH：苹果酸脱氢酶 LDH：乳酸脱氢酶
二、标准物质的分级及质控物 国际标准化委员会（International Standards Organization, ISO)对标准品（参考物）定义：它的一种或几种物理或化学 性质已经充分确定，被用于校正仪器或用于评价一种测定方 法的物质。 标准品分级： 一级标准物质
二级标准物质 校准物 质控物 2.1 标准物质（standard material ） 又称参考物质（ reference material ），是一类充分均匀，并具 有一个（或多个）确定特性值的材料或物质 用以校准仪器设备、评价测量方法，或给其它物质赋值 标准物质的定值结果一般表示为：标准值±总不确定度 “标准物质证书”是介绍标准物质的技术文件，是研制单位向 用户提出的质量保证书和使用说明 2.2 一级标准物质 又称原级参考物( primary reference material ) 是已经确定的稳定而均一的物质，它的数值由决定性方法确 定，或由高度准确的若干方法确定，所含杂质也已经定量 用于校正决定性方法，评价及校正参考方法以及为“二级标 准品”定值 一级标准品都有证书 认可的参考物质 认可的参考物质（Certified Reference Material, CRM ），其 特性值由建立了溯源性的程序确定，且每个标准值都附有给 定置信水平的不确定度 CRM 470由欧洲共同体参考局制备提供 CRM 470含14种血清蛋白的定值：白蛋白、Ig A、a1-抗胰蛋 白酶、Ig G、C3、Ig M、C4 、巨球蛋白、铜蓝蛋白、前白 蛋白、C反应蛋白、转铁蛋白、酸性糖化蛋白、触珠蛋白 2.3 二级标准物质 又称二级参考物（secondary reference material） 用一级标准物质校准，参考方法定值 用于校准常规方法、为质控物定值 国内的几种二级参考物： 红细胞微粒标准物质 — GBW E 090001 胆红素标准物质 — GBW E 090002 氰化高铁血红蛋白溶液标准物质 — GBW E 090004 纯化血红蛋白标准物质 — GBW E 090011 2.4 校准物（ Calibrator ）及校准 用二级标准物质和常规方法校准 用于对常规方法和仪器进行校准的物质即为校准物
实验方法的选择及评价
实验方法的选择及评价临床生化实验方法的选择及评价教学目标和要求☐掌握：校准物与质控物的概念及其区别，重复性实验、回收试验、干扰试验、对比实验的方法及指标的计算☐熟悉：参考值的概念，实验方法的性能标准及其评价指标、医学决定水平、危急值☐了解：方法和标准品的分级一、方法的分级：决定性方法、参考方法、常规方法 1.1 决定性方法（definitive method）☐准确度最高☐系统误差最小☐经过详细的研究，没有发现产生误差的原因或在某些方面不够明确的方法☐测定结果为―确定值‖，与―真值‖最接近☐技术要求太高，费用昂贵☐不直接用于鉴定常规方法的准确性☐只用于发展及评价参考方法和标准品1.2 参考方法（reference method）☐准确度与精密度已经充分证实的分析方法☐干扰因素少，系统误差很小，与重复测定的随机误差相比可以忽略不计☐有适当的灵敏度、特异性、较宽的分析范围(线性) ☐在条件优越的实验室中经常使用☐主要应用于鉴定常规方法，评价其误差大小，干扰因素，并决定其是否可以被接受☐也用于鉴定二级标准品，为质控血清定值，也可用于评价商品试剂盒等 1.3 常规方法（routine method）☐性能指标符合临床或其它目的需要☐有适当的分析范围☐经济实用☐偏差已知的方法（指准确度已经确定的方法，准确度不明者称为偏差未知的方法）☐常规方法在作出评价以后，经有关学术组织认可，可以作为推荐方法常见项目的方法分类二、标准物质的分级及质控物☐国际标准化委员会（International Standards Organization, ISO)对标准品（参考物）定义：它的一种或几种物理或化学性质已经充分确定，被用于校正仪器或用于评价一种测定方法的物质。
☐标准品分级：⏹ 一级标准物质⏹ 二级标准物质⏹ 校准物☐质控物2.1 标准物质（standard material ）☐又称参考物质（ reference material ），是一类充分均匀，并具有一个（或多个）确定特性值的材料或物质☐用以校准仪器设备、评价测量方法，或给其它物质赋值☐标准物质的定值结果一般表示为：标准值±总不确定度☐ “标准物质证书”是介绍标准物质的技术文件，是研制单位向用户提出的质量保证书和使用说明 2.2 一级标准物质☐又称原级参考物( primary reference material )☐是已经确定的稳定而均一的物质，它的数值由决定性方法确定，或由高度准确的若干方法确定，所含杂质也已经定量☐用于校正决定性方法，评价及校正参考方法以及为―二级标准品‖定值☐一级标准品都有证书认可的参考物质☐认可的参考物质（Certified Reference Material, CRM ），其特性值由建立了溯源性的程序确定，且每个标准值都附有给定置信水平的不确定度☐ CRM 470由欧洲共同体参考局制备提供☐ CRM 470含14种血清蛋白的定值：白蛋白、Ig A、a1-抗胰蛋白酶、Ig G、C3、Ig M、C4 、巨球蛋白、铜蓝蛋白、前白蛋白、C反应蛋白、转铁蛋白、酸性糖化蛋白、触珠蛋白 2.3 二级标准物质☐又称二级参考物（secondary reference material）☐用一级标准物质校准，参考方法定值☐用于校准常规方法、为质控物定值☐国内的几种二级参考物：⏹ ⏹ ⏹ ⏹红细胞微粒标准物质— GBW E 090001 胆红素标准物质— GBW E 090002氰化高铁血红蛋白溶液标准物质— GBW E 090004 纯化血红蛋白标准物质— GBW E 0900112.4 校准物（ Calibrator ）及校准☐用二级标准物质和常规方法校准☐用于对常规方法和仪器进行校准的物质即为校准物☐典型产品：⏹ Roche公司的CFAS（ Calibrator for automation system）⏹ BECKMAN公司的multi Calibrator☐什么是校准（Calibration）：⏹ 用已知浓度的校准物（ calibrator ）在规定条件下进行测定以找出一个参考点（K值）的过程即为校准⏹ K=校准物浓度/(校准物吸光度－试剂空白吸光度)2.5 质控物（control material ）☐质量控制（Quality control）是保证产品（检验结果）满足要求的过程☐用于确定测量过程的系统误差，确定是否可以发出报告☐具有与检测过程相适应的特性，其成份与检测样本的基质相同或相似☐用于进行质量控制的物质即为质控物。
临床生化检查操作方法
临床生化检查操作方法临床生化检查是临床医学中常用的一种检查手段，通过对患者的血液、尿液、体液等样本进行化学成分的检测，以及相关酶、蛋白质和代谢物的定量分析，从而获得临床诊断和治疗的重要信息。
操作方法的规范性和准确性对于检查结果的可靠性至关重要。
以下是临床生化检查的操作方法的详细介绍。
一、采集标本：1. 血液标本的采集：采用无菌操作技术，首先对患者进行适当的准备工作，观察采血部位的皮肤是否有感染或者受伤，选择最佳的采血部位，用75%酒精或碘伏消毒皮肤。
待消毒液干燥后，将采血针插入血管，并用一次性注射器采集适量的血液样本。
2. 尿液标本的采集：让患者进行体位改变，取晨尿或者全天的尿液作为标本。
在采集前，要让患者对尿液容器和个人卫生进行准备，然后清洁外生殖器，用无菌尿杯收集尿液。
3. 其他体液标本的采集：根据具体的实验要求进行操作，家居情况下由专业医务人员进行操作。
二、标本处理：1. 血液标本的处理：采集完成后，将血液标本转移到干净的试剂管中，并用适当的抗凝剂处理，如EDTA、肝素等。
对于需要血清的检查，应该在样本凝固后离心分离血清。
2. 尿液标本的处理：将采集的尿液标本转移到干净的试剂管中，进行适当的处理，如稀释、离心、沉淀等。
根据实验目的的不同，处理方法也会有所不同。
3. 其他体液标本的处理：根据具体的实验操作要求，进行相应的标本处理。
三、检测操作：1. 准备实验物品：准备所需的试剂、仪器和耗材等实验物品，并按照相关规范对其进行检验和校准。
2. 样本的加样：将处理好的标本加样到相应的检测仪器中，注意加样的数量和质量以及操作的规范性。
3. 实验操作：按照实验操作手册的要求，进行相应的实验操作，如温度、时间、反应物的加入顺序等方面的操作要求。
4. 数据记录：记录实验操作的过程和结果，包括样本的编号、操作的时间、试剂和仪器的规格、结果的数字和单位等。
四、结果分析和报告：1. 结果分析：对实验获得的数据进行分析，比对参考值，并结合患者的临床资料进行结果的解释。
临床生化检验方法与试剂盒评价 医学课件
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
（二）检测系统比对的实施步骤
①制订分析质量目标 ②仪器性能评价
③确定对比检测系统 ④初步评价检测系统
⑤比对
步内 骤容
可接受性判断
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允许不精密度、允许 偏倚和允许总误差
准确度和精密度
参考系统或 公认的测定系统
性能指标
40-100例
测定系统的关键要素
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第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
2.对仪器性能进行评价 保证仪器处于良好 的工作状态，具备可接受的精密度和准确 度。 3. 确定对比检测系统 比如具有溯源文件 的HK法测定血糖的配套检测系统，并对该 检测系统的性能进行验证，核实其准确度 和精密度。
第20页
第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
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第二十一章 临床生化检验方法与试剂盒评价
三 方法学评价实验
美国国家临床实验室标准委员会（NCCLS）于2005年更 名为临床和实验室标准研究院（CLSI）。制订了一系列评 价方案（evaluation protocols，EP），包括: 临床化学设备精密度评价（EP5-A） 定量分析方法的线性评价（EP6-A） 干扰试验（EP7-A） 方法对比评价及偏差评估（EP9-A2） 定量方法的初步评价（EP10-A2） 定性方法的评价（EP12-A） 基质效应评价（EP14-A）、。 EP不仅可用来评价临床生物化学检验方法性能，也可用以 评价试剂盒和分析仪器的性能。
标准计量局、参考实验室、试剂盒供应
商、临床实验室
3
保证仪器良好的工作状态、严格的操作
规程和质量控制、实验室内部测定系统
的比对、实验室间的比对
第25页
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决定性方法 ID-MS
电量滴定法、中子活化法
ID-MS ID-MS ID-MS、中子活化法
重量分析法、中子活化法
参考方法 原子吸收分光光度法 电流滴定法 原子吸收分光光度法
ID-MS、离子交换层析法
ID-MS ID-MS —— ID-MS ID-MS ID-MS —— —— —— ——
火焰光度法 火焰光度法 免疫化学法 双缩脲法 离子交换层析法 尿素酶法 尿酸酶法（紫外法） 重氮反应法 己糖激酶法
引起原因： •方法误差：最严重、最难避免的误差，是 方法的分析性能所固有的缺陷所致。可通 过方法的选择和评价来减少。
•仪器和试剂误差：常见仪器波长未校准， 量器不准，试剂质量差等。
2）随机误差（random error，RE）：
是指在实际工作中，多次重复测定某一物质时引 起的误差。 误差没有一定的大小和方向。步骤越多，出现的 机会越多，不可避免，可减少。 主要见于：操作习惯，实验条件改变等。
标本来源： • 个体基础参考值 • 群体基础参考值
2）制订 （１）参考个体的选择
（２）测定方法的选择与标准化
（３）参考值及其范围的确定 • 单值估计：过高为异常，以单值上限为参考 值界限
• 区间估计：过高和过低均为异常，制定参考 值上、下限
注意事项：
①正确选择受检对象，以受检对象的确对所反映的总体具 有代表性和不存在对指标具有影响的因素为原则； ②合理规定参考人群的条件，如年龄、性别、民族、职业、 女性的月经期、妊娠和哺乳，以及标本采集的时间和地 区因素等； ③保证一定数量的受检人数，一般应有100例以上，若指 标分布呈偏态时应在120例以上，特殊情况至少也应30 例以上； ④测定方法应标准化，保证测定结果的可靠性和可比性。 ⑤根据专业知识确定单、双侧位界，严格按照统计要求进 行测定结果的处理。
三、临床生化实验诊断试验的性能评价 （一）诊断试验的选择原则
1、临床灵敏度：诊断试验检出阳性病人的百 分率。 临床灵敏度=
实际检出阳性数 理论阳性数 X100%
理想试验的诊断灵敏度为100%。
2、诊断特异度
用诊断试验检出的阴性结果的百分 率，表示非患病者中诊断试验正确确定非 患病者的能力，又称为真阴性率。
２）参考方法（reference method ）：
已知其准确度和精主工，干扰因素少，系统误差很 小。有适当的灵敏度、特异性及较宽的分析范围。在 条件许可的实验室中经常使用。 用途：主要用于鉴定常规方法和试剂盒、鉴定二级标 准品，为质控血清定值等 缺点：技术性要求高，费用贵，设备要求较高，测定 时间较长
④应用安全可靠。
（2）可靠性
一般具有较高的精密度和准确度， 以及较大的检测能力。
2、方法选择的步骤
1）广泛查阅资料
根据方法选择的要求对已发表的各种方法进行 比较与检验，确定哪些方法有充分的科学根据 及真实的使用价值。必须仔细分析各种方法的 特点，选择适合于本实验室具体条件的方法， 并且要判断所选方法能否满足本室工作的需要。
注意事项 被试验的物质：胆红素、溶血、防腐剂、抗凝剂、药物等
可疑干扰物的浓度：干扰物浓度有可能达到病理标本最高 浓度值。 本试验检测的误差包括方法特异度不高和干扰物作用引起 的误差。
消除干扰常用方法 空白对照：试剂空白：常见
标本空白：
物理、化学方法分离干扰物 双波长或多波长法检测排除干扰 误差较大又无法消除，则改进或更换方法。
参考值在临床应用中应注意的问题
①参考值的使用有一定的范围，仅适合于符
合参考个体要求的参考人群。 ②参考值范围通常定为 ±2S，有时称为95% 可信区间，即此范围仅覆盖研究人群的95%， 因此，参考值范围不能盲目地作为正常与疾 病的分界点。 ③综合评价，参考值在作为诊断和监测目的 使用时，应注意年龄、性别、饮食、药物、 个人习惯和体力锻炼等因素的影响。
(四)方法比较试验（对比试验）
用于检测候选方法的系统分析误差。对所得数据
进行分析，可提供系统误差的性质（恒定或／和 比例误差） 对一组病人的标本用候选方法和比较方法同时 进行分析测定，观察二者之间的差异。这是考验 候选方法是否可采用的重要措施。
①在进行临床化学常规方法的评价时，最好选
择参考方法作为比较方法 ②若采用已知偏差法，则有部分误差来自比较 方法（与已知偏差 一致的那部分误差），剩余 的则属于侯选方法。 ③若采用未知偏差法，分析误差可能来源于二 者之一或两者都有，难以分析。
2、实验误差
实验误差：测定值与真值之差
1）系统误差（systematic error， SE） ：一系列分析测定的 结果对真值或靶值存在有同一倾向的偏差。一般由恒 定因素引起，重复测定，重复出现，消除系统误差可 提高测定的准确度。 分为： 恒定误差：由干扰物引起的使测定值与真值存在的误 差，与干扰物浓度相关，与被测物浓度无关。 比例误差：相对于被测物浓度有相同的百分比误差， 误差的绝对值与被测物浓度成正比。
③分析待测物浓度不同的标本，与公认的参考
方法的测定值作对比； ④要有足够的试验证明仪器与试剂能符合要求。
二、实验方法的评价 （一）评价实验与分析误差类型的关系 1、方法学评价：通过实验途径测定并评价方法 的精确度和准确度，在实验中测定的是不精确 度和不准确度，强调的是误差，评价实验的过 程就是对误差的测定。
2、回收试验
回收是指候选方法准确测定加入常规分析标本 的纯分析物的能力，用回收率表示。 本试验的目的是检测候选方法的比例系统误差。
1）方法 将被测物标准液加入病人标本中，成为分析标 本；原病人标本中加入等量的无被测物的溶剂作基础标本； 然后用候选方法测定并得到各自浓度。
2）计算
回收浓度＝分析标本测得浓度一基础标本测得浓度。 X 标准液浓度 病人样品量（ml） +标准液量（ml） 回收浓度 X 100% 加入浓度 标准液量（ml）
2）选定侯选方法
Байду номын сангаас
经初步选定的方法称为候选方法。候选方法
确定后，应该写出该法的原理与参考文献， 所用仪器、试剂的来源、牌号、纯度（或配 套试剂盒），标本收集要求，详细的操作步 骤，标准曲线和结果计算，文献中列出的性 能指标，参考值与参考范围，以及其它应注 意的事项与安全防护措施等。
3）进行初步试验 为了实用的目的，初试应该包括 ①标准曲线及其重复性； ②质控血清或新鲜标本的重复试验；
3、方法学评价指标： 1）准确度：测定值与真值之间的符合程度。 2）精密度：对同一标本用同一方法在同样条件 下多次重复测定，所得各次结果之间的符合程 度。 3）灵敏度：化学反应中能检出的最小量。 4）特异性：分析测定中只对某一成分起反应， 其他物质对反应毫无影响或基本无影响。 5）线性范围：实验方法所能检测标本中某物质 的浓度范围。
（二）方法评价实验
1、重复性实验：实验的目的是检测候选方法的随机误 差。方法是对同一材料(标准液、质控液、标本等)分成 数份试验标本进行多次分析测定
试验形式与方法 (1)批内重复性试验：用同一份标本在短时间内用候选 方法作多次(一般20次)重复测定。 (2)日内重复性试验：在一天内对一个或数个标本作数 批重复测定。 ( 3)日间重复性试验：将同一标本分成数份，按方法每 天测一次，连续测定20天观察结果变异。
Abell-Kendall法，胆固醇氧化酶法
酶法 MDH-NADH法 LDH-NADH法 连续监测产物生成法 NAD+偶联法
ID-MS：同位素稀释-质谱分析法
2、标准品的分级
标准品是一种物质，它的一种或几种物理或 化学性质已经充分确定，可被用来校正仪器或证 实某种实验方法。 1）一级标准品：已确定的稳定而均一的物质，可用 于校正决定性方法、评价或校正参考方法，为 “二级标准品”定值。一级标准品都有证书，在 美国由国家标准局（NBS）发给合格证书，并指明 它的性质和有关数据。 2）二级标准品：由参考方法定值有关物质的量，主 要用于常规方法的标化或为质控物定值。
加入浓度＝
回收率（%）=
注意事项： 吸量准确； 加入标准液后，其实验样品的被子测浓度最好 达到医学决定水平； 总浓度必须在方法分析范围内； 需加入高中低不同浓度回收试验，计算平均回 收率； 加入标准液的体积一般在10%内； 重复2-3次。
3、干扰试验 干扰试验是用来检测候选方法的恒定系统误 差。干扰物浓度不同，误差大小也不同。
诊断特异度=
实际检查结果为阴性数 全部受检的未患病者总数 X100%
理想试验的诊断特异性为100%。
（二） 参考值与医学决定水平的确定
1．参考值
1）概念 参考范围：以95%的可信性为界，以X±2S表示
是指从某一参考个体或参考人群中获得的测定数值。
在临床检验中，将获得的观察值即某项检验结果与某个 标准的数据进行比较，借以对资料作出合理解释。
临床生化实验方 法的选择和评价
对于现代化临床化学实验室来说， 不但要准确报告实验数据，还要 了解实验数据的处理、考核和评 价实验方法，正确解释和应用实 验数据。
一、实验方法的选择
(一)实验方法和标准品的分级
1、方法的分级
1）决定性方法（definitive method ）
准确度最高，系统误差最小，与真值最接近， 需要 精密仪器，高纯度的试剂 用途：用于发展及评价参考方法和一级标准品。 缺点：技术要求太高，费用昂贵，设备要求高，测 定时间长
3）控制物：用标准品及参考方法定值。用于质控。
（二） 实验方法选择的要求和步骤
1. 实验方法选择的要求
国际临床化学协会（IFCC）提出：常规方法应具 有实用性和可靠性两方面的性能指标 。 （1）实用性
①微量快速能便于急诊，适合成套项目分析。
②费用低廉，包括劳动力与试剂、设备及一般管 理费用等。 ③方法简便。