血清类型对大鼠骨骼肌干细胞增殖的影响

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《2024年利拉鲁肽对高脂喂养大鼠胰岛素抵抗和骨骼肌脂质沉积的影响及相关机制的探讨》范文

《利拉鲁肽对高脂喂养大鼠胰岛素抵抗和骨骼肌脂质沉积的影响及相关机制的探讨》篇一摘要：本文旨在探讨利拉鲁肽对高脂喂养大鼠胰岛素抵抗及骨骼肌脂质沉积的影响，并进一步探讨其潜在的作用机制。

通过实验观察，我们发现利拉鲁肽能够显著改善高脂饮食诱导的胰岛素抵抗，并减少骨骼肌脂质沉积。

本文将详细阐述实验过程、数据、结果及讨论，为利拉鲁肽在相关疾病治疗中的应用提供理论依据。

一、引言随着生活水平的提高，高脂饮食已成为导致代谢性疾病的重要原因。

胰岛素抵抗和骨骼肌脂质沉积是其中的关键病理过程。

利拉鲁肽作为一种新型降糖药物，除了具有降血糖作用外，是否对高脂喂养大鼠的胰岛素抵抗和骨骼肌脂质沉积有改善作用，其作用机制如何，是本研究的重点。

二、材料与方法1. 实验动物与分组选用健康成年雄性SD大鼠，随机分为四组：正常饮食对照组、高脂饮食模型组、利拉鲁肽治疗组及联合用药组。

2. 高脂饮食及药物干预高脂饮食组大鼠给予高脂饲料喂养，利拉鲁肽治疗组及联合用药组在给予高脂饲料的同时分别进行利拉鲁肽的腹腔注射治疗。

3. 指标检测通过血糖、胰岛素检测评估胰岛素抵抗情况，利用组织学方法观察骨骼肌脂质沉积情况。

三、实验结果1. 胰岛素抵抗的改善实验结果显示，高脂饮食组大鼠出现明显的胰岛素抵抗现象，而利拉鲁肽治疗组及联合用药组大鼠的胰岛素敏感性得到显著改善，其中利拉鲁肽治疗组改善效果最为明显。

2. 骨骼肌脂质沉积的变化高脂饮食导致大鼠骨骼肌出现明显的脂质沉积现象。

经利拉鲁肽治疗后，骨骼肌脂质沉积程度明显减轻，其中治疗组的效果优于联合用药组。

四、讨论1. 利拉鲁肽的作用机制利拉鲁肽作为胰高血糖素样肽-1（GLP-1）类似物，具有促进胰岛素分泌、抑制胰高血糖素分泌及减缓胃排空等作用。

本研究表明，利拉鲁肽能够改善高脂饮食大鼠的胰岛素抵抗，这可能与其促进胰岛素分泌、提高胰岛素敏感性有关。

此外，利拉鲁肽可能还具有调节脂质代谢的作用，从而减少骨骼肌脂质沉积。

IGF-1基因转染对大鼠成肌细胞增殖和分化的影响

测发现ＩＧＦ组细胞有ｈｌＧＦ－１表达，ＧＦＰ组和Ｃｏｎｔｒｏｌ组细胞未见ｈＩＧＦ－１表达；Ｍ兀、检测显示ＩＧＦ组成肌细胞光吸收值增大，与Ｃｏｎｔｒｏｌ组和ＧＦＰ组细胞相比，差异有显著性（Ｐ＜０．０５）；流式细胞仪检测显示：与对照组和
ＡｂｓｔｒａｃｔＯｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔ０ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｈｕｍａｎｉｎｓｕｌｉｎｌｉｋｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ－１（ｈｌＧＦ－１）ｏｎｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ
ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＩＧＦ－１Ｇｅｎｅ￣＇ａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｏ１１ｔｈｅＰｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄＤｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆＭｙｏｂｌａｓｔｓｉｎＲａｔ

ＷａｎｇＸｉａｏｌｉｎ，ＷａｎｇＹｏｎｇｊｉｎ，ＲｏｎｇＳｈｕｌｉｎｇ，ａｌ
ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｅｄｉａｔｒｉｃｓ，ＡｆｉｌｆｉａｔｅｄＨｅｐｉｎｇＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＣｈａｎｇｚｈｉＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ

血清诱导细胞增殖的研究模型

血清诱导细胞增殖的研究模型
血清诱导细胞增殖的研究模型主要包括以下几种：
1. 动物模型：使用小鼠、大鼠、兔子或猪等动物作为研究对象进行血清诱导细胞增殖的研究。

这种模型适用于观察全身性生理反应和组织级别的效应。

2. 细胞系模型：使用细胞系或原代细胞来研究血清对细胞增殖的影响。

常见的细胞系模型包括肝细胞、肾细胞、乳腺上皮细胞等。

这种模型可以更精确地观察血清对细胞的直接影响。

3. 三维细胞培养模型：将细胞在三维培养基质中进行培养，以更好地模拟体内的细胞环境。

这种模型能够提供更生理相关的结果。

4. 体外器官模型：将器官或组织切片放置在培养皿中，添加适当的培养基和血清，以研究血清对器官或组织的影响。

这种模型能够更好地模拟体内的器官和组织环境，但操作难度较大。

以上模型可以根据研究的具体目的和需求选择使用，每种模型都有其特定的优势和局限性。

研究人员需要根据实际情况选择适合的模型来开展血清诱导细胞增殖的研究。

成年大鼠骨骼肌成肌细胞的原代培养(一)解读

成年大鼠骨骼肌成肌细胞的原代培养(一)【摘要】目的探索成年大鼠骨骼肌成肌细胞的原代培养方法。

方法取成年Wistar大鼠的后肢肌肉,利用组织块法培养成肌细胞。

并对培养细胞进行形态学研究和细胞鉴定。

结果采用组织块培养成肌细胞的密度可达118/ml, 成肌细胞的分化鉴定显示94%以上的细胞呈骨骼肌特异的肌细胞。

结论利用组织块法成功培养成年大鼠原代骨骼肌成肌细胞,该方法实用性强,所得成肌细胞纯度高,为深入研究心力衰竭骨骼肌成肌细胞自体移植奠定了基础。

【关键词】骨骼肌成肌细胞原代培养大鼠成年【Abstract】 Objective： To explorean experimental method for primary culture of adult rat skeletalmuscle sarcoblast Methods: Muscle of posterior limb from wistar rat were cultured by tissue culture method. The cells were counted and observed by light microscopy combined with identification. Results:The number of skeletalmuscle sarcoblast118per millilitre. skeletalmuscle sarcoblast cell differentiation accredit showed that over 94% cells were stained positive for myogenin.Conclusions: Tissue culture method conveniently permits the purification and Proliferation of myoblast. These esults provide the basis for future studies to assess the ability of the cells to repair heart failure.【Key words】skeletalmuscle sarcoblast primaryculture rat adult心肌细胞是终末化组织，不能再生。

血清视黄醇结合蛋白4对胰岛素抵抗大鼠骨骼肌组织磷脂酰肌醇3激酶的影响

血清视黄醇结合蛋白4对胰岛素抵抗大鼠骨骼肌组织磷脂酰肌醇3激酶的影响目的研究视黄醇结合蛋白4（RBP4）对胰岛素抵抗大鼠骨骼肌组织磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）的影响。

方法雄性Wistar大鼠以高脂高糖饲料喂养诱发胰岛素抵抗模型，造模成功后随机分成正常对照(NC)、胰岛素抵抗(IR)和吡格列酮治疗(IR＋PIO)三组。

喂养8周后处死动物，取血清测血糖（FPG）、胰岛素（FINS）、甘油三酯（TG）、胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白（LDL）,计算胰岛素敏感指数（ISI），ELISA法检测血清RBP4水平，免疫组化方法检测骨骼肌组织中磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)表达水平。

结果(1)IR组大鼠RBP4、FINS、LDL、腹部脂肪含量与体重比值高于NC组和IR＋PIO组(P＜0.01)，IR组ISI、HDL低于其他两组(P＜0.01)，IR＋PIO组FBG、TC、TG低于IR组（P＜0.01）；(2)IR组骨骼肌组织PI3K的表达低于NC组和IR＋PIO组(P＜0.01)；(3)血清RBP4与骨骼肌组织PI3K(r=-0.577，P＜0.01)、HDL(r=-0.550，P＜0.01)、ISI(r=-0.457，P＜0.01)呈负相关，与FINS(r=0.604，P＜0.01)、腹部脂肪含量与体重比值(r=0.472，P＜0.05)、LDL(r=0.337，P＜0.05)呈正相关。

结论胰岛素抵抗大鼠血清RBP4升高，吡格列酮可降低其水平。

RBP4与大鼠骨骼肌组织PI3K水平负相关，提示其降低胰岛素的敏感性可能与阻碍胰岛素信号转导有关。

[Abstract]ObjectiveTo investigate effects of Retinol binding Protein-4（RBP4）on Phosphatidylinositol 3 Kinase (PI3K) in somatic muscle tissue of Insulin resistant rats. MethodsWe seted up insulin resistant rat model on a high fat diet.Then the rats were divided into normal control group(NC),insulin resistant group(IR) and IR model plus pioglitone therapy group(IR+PIO)at random.After 8 weeks,their blood was extracted for measuring the levels of glucose and serum RBP4,insulin,HDL,LDL,TG,TC.Immunohistochemistry was applied to detect the expression levels of PI3K in Somatic Muscle tissue.Results(1)The RBP4,FINS,LDL,ratio of visceral fat content over body weight,were significantly increased in RI group compared with control or IR+PIO(P＜0.01);ISI，HDL were significantly lower in IR group compared with control or IR+PIO(P＜0.01);FBG,TC,TG in IR＋PIO group were significantly lower than those in IR group.(2)The expression levels of PI3K of IR group were significantly lower than those of both control group and IR+PIO group in somatic muscle tissue(P＜0.01)；（3）RBP4 was directly coorelated with PI3K in somatic muscle tissue (r=-0.577，P＜0.01),FINS（r=0.604，P＜0.01）,ratio of visceral fat content over body weight(r=0.472，P＜0.05),LDL(r=0.337，P＜0.05),HDL（r=-0.550，P＜0.01）and ISI(r=-0.457，P＜0.01).ConclusionThe level of RBP4 were increased in IR group and pioglitone could decrease its level. RBP4 was directly coorelated with the levels of PI3K in somatic muscle tissue of IR rats,the mechanisms degrading insulin sensibility might be closely related with the interfere of insulin signal transduction in target tissues.[Key words]Retinol binding protein-4；Insulin resistant；Phosphatidylinositol 3 kinase；PioglitoneStern于1995年提出了代谢综合症的共同土壤学说，认为糖尿病、高血压及冠心病是在胰岛素抵抗这个共同的土壤中“生长”出来的，即胰岛素抵抗是代谢综合症的核心，但胰岛素抵抗的触发机制较复杂，目前尚未完全明了。

炎症因子PGE2可促进肌肉干细胞再生

步确定其作用机理，研究人员构建了一种基因工程实验小鼠，使他们能够动态监测肌肉干细胞随时
间推移的数量和活动变化，并研究干细胞如何对注射毒素或低温导致的腿部肌肉损伤做出响应。结果显示，与对照组比较，暴露于ＰＥＧ２１ｄ后，肌肉干细胞的数量增加了６倍。当给小鼠肌肉注射ＰＧＥ２
ｎｅｗｓ／２０１７－，０６一ｉｎｌｆａｍｍａｔｏｒｙ — ｍｏｌｅｃｕｌｅ・ｅｓｓｅｎｉｔａｌ－ｍｕｓｃｌｅ－－ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．ｈｔｍｌ
【３】炎症意料之外的作用—— 促进肌肉干细胞再生，生物探索．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｄｉｓｃｏｖｅｒ．ｃｏｍ／ｎｅｗｓ／ｒｅｓｅａｒｃｈ／７２３８４３．ｈｔｍｌ
图１ＰＥＧ２促进肌肉干细胞再生模式图参考资料
【ｌ】ＨｏａＡＴＶ，ＰａｌｌａａＡＲ，．ＢｌａｋｅＭＲ，．ｅｔａ１．ＰｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎＥ２ｉｓｅｓｓｅｎｔｉａｌｆｏｒｅｆｉｆｃａｃｉｏｕｓｓｋｅｌｅｔａｌｍｕｓｃｌｅｓｔｅｍ．．ｃｅｌｌｆｕｎｃｉｔｏｎ．，ａｕｇｍｅｎｔ．．
ＭｕｓｃｌｅｒｅｇｅｎｅｒａＵｏｎ

血清BMP-9、PGC-1α、BSAP_水平与创伤性骨折延迟愈合的关系

血清BMP-9、PGC-1α、BSAP水平与创伤性骨折延迟愈合的关系王旭，徐魁伟，冯殿发，张晓志辽宁省健康产业集团阜新矿总医院骨外一科，辽宁阜新 123000摘要：目的　探讨血清骨形态发生蛋白-9（BMP-9）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α（PGC-1α）、骨特异性碱性磷酸酶（BSAP）水平与创伤性骨折延迟愈合的关系。

方法　选取创伤性骨折术后延迟愈合患者71例为延迟愈合组，按1∶1病例对照形式选取创伤性骨折术后正常愈合患者71例为正常愈合组。

采用酶联免疫吸附法检测血清BMP-9、PGC-1α、BSAP。

采用多因素Logistic回归分析影响创伤性骨折愈合的因素，采用受试者工作特征（ROC）曲线分析血清BMP-9、PGC-1α、BSAP水平对创伤性骨折延迟愈合的预测价值。

结果　与正常愈合组比较，延迟愈合组血清BMP-9、PGC-1α、BSAP水平降低（P均<0.05）。

多因素Logistic回归分析显示，年龄增加（OR=1.097，95%CI：1.020～1.180）、糖尿病（OR=2.121，95%CI：1.078～4.173）、骨质疏松症（OR=3.933，95%CI：1.242～12.451）为影响创伤性骨折愈合的独立危险因素，BMP-9（OR=0.950，95%CI：0.919～0.981）、PGC-1α（OR=0.969，95%CI：0.954～0.983）、BSAP（OR=0.837，95%CI：0.750～0.935）升高为独立保护因素（P均<0.05）。

ROC曲线分析显示，血清BMP-9、PGC-1α、BSAP水平联合预测创伤性骨折延迟愈合的曲线下面积为0.928，大于BMP-9、PGC-1α、BSAP单独预测的0.778、0.791、0.788（P均<0.05）。

结论　血清BMP-9、PGC-1α、BSAP水平降低与创伤性骨折术后延迟愈合密切相关，血清BMP-9、PGC-1α、BSAP水平联合对创伤性骨折术后延迟愈合有较高的预测价值。

MEF2A对秦川牛骨骼肌成肌细胞增殖和分化的调控作用

MEF2A对秦川牛骨骼肌成肌细胞增殖和分化的调控作用摘要：MEF2A是一种重要的肌肉转录因子，在肌肉组织的发育和调控中扮演着重要的角色。

本文通过对大鼠秦川牛骨骼肌成肌细胞的培养和实验，发现MEF2A对肌细胞的增殖和分化具有重要的调控作用。

首先，本文通过Western blot分析，发现MEF2A在秦川牛骨骼肌成肌细胞中的表达量在细胞增殖期和分化期均有显著的变化。

在细胞增殖期，MEF2A的表达量相对比较低，而在细胞分化期，MEF2A的表达量则显著增加。

这表明MEF2A在调控肌肉细胞分化过程中起着重要的作用。

接着，本文利用siRNA技术抑制MEF2A的表达，并使用MTT和BrdU实验来研究MEF2A的抑制对秦川牛骨骼肌成肌细胞增殖的影响。

实验结果表明，抑制MEF2A的表达可降低细胞的增殖能力。

此外，本文还通过检测细胞周期蛋白D1 (cyclin D1)的表达变化来进一步确认MEF2A对细胞增殖的调控作用。

实验结果表明，抑制MEF2A的表达可明显下调细胞周期蛋白D1的表达水平。

最后，本文还研究了MEF2A对秦川牛骨骼肌成肌细胞分化的调控作用。

实验结果表明，抑制MEF2A的表达可抑制秦川牛骨骼肌成肌细胞的分化。

此外，本文还通过检测肌肉特异蛋白的表达水平来进一步确认MEF2A对细胞分化的调控作用。

实验结果表明，抑制MEF2A的表达可显著降低肌肉特异蛋白的表达水平。

综合以上实验结果，本文表明MEF2A在秦川牛骨骼肌成肌细胞的增殖和分化过程中起到了重要的调控作用。

这些发现对于进一步理解肌肉细胞发育和调控机制具有重要的意义。

关键词：MEF2A；秦川牛骨骼肌成肌细胞；增殖；分化Abstract：MEF2A is an important muscle transcription factor that plays a vital role in the development and regulation of muscle tissue. In this study, we investigated the regulatory effects of MEF2A on the proliferation and differentiation of Qin-Chuan cattle skeletal muscle myoblasts through cell culture and experimental techniques.Firstly, Western blot analysis demonstrated that the expression of MEF2A in Qin-Chuan cattle skeletal muscle myoblasts changed significantly during both the proliferation and differentiation stages. Specifically, the expression of MEF2A was relatively low during the proliferation stage, whereas the expression of MEF2A increased significantly during the differentiation stage. This suggests that MEF2A plays an important role in regulating muscle cell differentiation.Secondly, we used siRNA technology to suppress the expression of MEF2A and studied the effects of MEF2A suppression on the proliferation of Qin-Chuan cattle skeletal muscle myoblasts using MTT and BrdU assays. The results showed that inhibiting the expression of MEF2A reduced the proliferation capacity of the cells. Furthermore, we also confirmed the regulatory role of MEF2A in cell proliferation by detecting changes in the expression of the cell cycle protein Cyclin D1.Finally, we investigated the regulatory effects of MEF2A on the differentiation of Qin-Chuan cattle skeletal muscle myoblasts. The results showed that suppressing the expression of MEF2A inhibited the differentiation of these cells. We also confirmed the regulatory role of MEF2A in cell differentiation by detecting changes in the expression of muscle-specific proteins.In conclusion, this study demonstrates that MEF2A plays an important role in the proliferation and differentiation of Qin-Chuancattle skeletal muscle myoblasts. These findings provide important insights into the development and regulation of muscle cells.Keywords: MEF2A; Qin-Chuan cattle skeletal muscle myoblasts; proliferation; differentiation。

胶原蛋白肽含药血清促进成骨细胞增殖和分化

胶原蛋白肽含药血清促进成骨细胞增殖和分化刘俊丽;宋淑军;司少艳;卢伟鹏;郭燕川【摘要】目的牛骨胶原蛋白肽(collagen peptides,CP)化合物能够显著增加股骨骨密度,并改善股骨的微结构,在骨质疏松症的预防和治疗中发挥重要的作用,它通过口服给药的形式吸收入肠.然而,此过程的分子机制尚不清楚.因此,本研究以阐明牛骨CP化合物血清对成骨细胞增殖与分化的影响.方法制备牛骨CP化合物大鼠血清,牛骨CP化合物处理的实验组和未经处理的对照组大鼠血清浓度为3%、6%、10%,加到无血清的DMEM溶液中,用MTT法和流式细胞术分别检测牛骨CP血清对MC3T3-E1细胞增殖和细胞周期的影响.茜素红矿化染色检测牛骨CP血清对成骨细胞矿化,用Pro Plus 6图像软件定量分析茜素红染色的含量.结果 MTT结果表明,3%、6%及10%的CP化合物含药血清与对照组相比,能够显著促进MC3T3-E1细胞增殖(P＜0.05).然后将3% CP化合物含药血清,对照组(control,CN)血清分别作用于MC3T3成骨细胞,培养3 d,流式细胞术测定细胞周期.结果表明,与3%CN 血清相比,3% CP血清组G1期比例显著减少,G2/S期比例显著增加(P＜0.01),表明牛骨CP通过促进G2/S期的百分含量而促进细胞的增殖.矿化染色结果表明CP血清处理21 d后能显著促进成骨细胞的矿化(P＜0.05).结论牛骨CP血清在成骨细胞增殖与分化中起重要作用,为骨质疏松症的防治提供了理论依据.%Objective Bovine collagen peptides (CP) compounds could significantly elevate femoral bone mineral density and improve femoral bone microstructure, thus play an important role in the prevention and treatment of osteoporosis by oral administration and intestinal absorption.However, the molecular mechanisms of this process remain unclear.Therefore, we undertook experiments to clarify the effects of bovine CP compounds inserum on the proliferation and differentiation of osteoblast. Methods CP compounds in serum form were prepared, and rat serum containing bovine CP compounds (experimental groups) at the concentration of 3%, 6%, and 10% or control serum (control (CN) group) was added to DMEM without FBS.The effect of CP in serum on the proliferation and cell cycle of MC3T3 cells were examined by MTT and flow cytometry, respectively. Quantitative analysis of mineralization in osteoblasts using Alizarin red staining was measured by Image Software Pro Plus 6.0. Results We found that MTT values of MC3T3-E1 cells after treatment with bovine CP compounds at a concentration of 3%, 6% and 10% in serum were much higher than the control serum (P＜0.05).MC3T3-E1 cells were harvested at 3 d after treatment with 3% CP serum DMEM without FBS or CN serum.Cell cycle distribution analysis of MC3T3-E1 cells was conducted by flow cytometry.3% CP compounds in serum led to increased cell cycle arrest in the G2/S phase at day 3 (P＜0.01), and G1phase was significantly reduced compared with control serum.This suggested that CP compounds in serum might play an important role in osteoblast proliferation.Calcium deposit test showed that CP in serum significantly increased mineralization in osteoblasts at the 21st day (P ＜0.05).Conclusion Bovine CP compounds in serum played an important role in osteoblasts proliferation and differentiation, which provides a theoretical basis for the prevention and treatment of osteoporosis.【期刊名称】《中国骨质疏松杂志》【年(卷),期】2018(024)006【总页数】5页(P750-754)【关键词】胶原蛋白肽含药血清;成骨细胞;增殖;分化;骨质疏松;动物实验【作者】刘俊丽;宋淑军;司少艳;卢伟鹏;郭燕川【作者单位】中国科学院理化技术研究所,光化学转换与功能材料重点实验室,北京100190;解放军第306医院特种医学实验研究中心,北京100101;解放军第306医院特种医学实验研究中心,北京100101;中国科学院理化技术研究所,光化学转换与功能材料重点实验室,北京100190;中国科学院理化技术研究所,光化学转换与功能材料重点实验室,北京100190【正文语种】中文【中图分类】R-332骨质疏松症是一种代谢性疾病，其特征是骨形成不足、骨吸收过度而导致骨量减少及骨微结构的恶化，其后果增加了骨脆性和骨折易感性[1]。

4周大强度离心运动对大鼠骨骼肌的影响——以a-肌动蛋白基因表达和血清CK、LDH作为指标

２０１３年第０４期
吉林农业
ＪＩＬｌＮＡＧＲＩＣＵＬＴＵＲＥ
ＮＯ．０４．２０１３
（总第３０１期）
（ＣｕｍｕｌａｔｉｖｅｔｙＮＯ．３０１）
４周大强度离心运动对大鼠骨骼肌的影响
以ａ一肌动蛋白基因表达和血清ＣＫＬＤＨ作为指标
定腓肠肌ａ — ａｃｔｉｎｍＲＮＡ的表达，运动后即刻取材，采用酶动力法测试ＣＫ及ＬＤＨ。研究结果发现：连续的训练能增强大鼠腓肠肌ａ — ａｃｔｉｎｍＲＮＡ的表达，从ＣＫ、ＬＤＨ活性看连续运动可以加快骨骼肌损伤的恢复，机体对运动逐渐产生适应。关键词：离心运动；肌动蛋白；基因表达；．肌酸激酶（ＣＫ）；乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）中图分类号：Ｒ８７文献标识码：Ａ文章编号：１６７４ — ０４３２（２０１３）一０４ — ００８２ — ２
和一次性训练Ｂ组（测定骨骼肌ａ — ａｃｔｉｎｍＲ — ＮＡ表达）根据取样表Ｉ大强度离心运动后血清ｃＫ值的变化（平均数 ±标准差，的时间分为：即刻组、６ｈ组、１２ｈ组、２４ｈ组、４８ｈ组、７２ｈ组，安Ｕ／Ｌ）静组分为：安静Ａ组（测ｃＫ、ＬＤＨ）、安静Ｂ组（Ｎａ — ａｃｔｉｎ基因表达），每组５只，分笼饲养，自由饮食，室温１８ ±２ ℃ ，光照时间为６ — ８４，时，ｓＤ大鼠由吉林大学白求恩医学院动物实验中心提供。１．２运动方式实验前３天，所有动物进行适应性５４１０ｍｉｎ跑台运动，速度为５～１０ｍ／ｍｉｎ，坡度为０度。正式实验时，所有对照组进行一次大强度训练，所有训练组动物均进行持续性下坡跑，大鼠在坡度为一ｌ６。的跑台上，以１６ｍ／Ｍｉｎ的速度进行９Ｏ分钟的下坡跑，中间休息２分钟，每周连续训练５天，休息２天，安静组正常饮食、光

富血小板血浆对鼠骨骼肌卫星细胞增殖及成骨活性的影响

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ＪｕｎｆａａｄＭａｉｏａｉｕｇｒ１０Ｎｏ３Ｊｎ，００ｏｒＭｏｌｎｘｌｆａＳｒｅｙＶｏ．．ｕｅ２１Ｏｒｌｃｌ２
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基础研究・
富血小板血浆对鼠骨骼肌卫星细胞增殖及成骨活性的影响
ＨＵＡＮＧＳｅｇｙｎｈｎ－ｕ，ＷＡＮＧＺｏｌｕ —ｉｎ
（ｅａｔｅｔｆＯａａｄＭａｉｏａｉｕｇｒ，ｓｉｌｏａｏｏｙＤｐｒｎｏｒｎｘｌｆｃａＳｒｅｙＨｏｔＳｍｔｌ，ｍｌｌｌｐａｏｔｆｇ
Ｔｎｎｖｒｉ，ｈｎｈｉ００２ＣｉａｏｇｉｉｅｓｙＳａｇａ２０７，ｈｎ）Ｕｔ
性较对照组增高明显（＜．１；素红染色可见钙结节形成；钙素和ＩＰ０）茜０骨型胶原免疫组织化学染色阳性。结论：ＲＰＰ对体外培养的鼠ＭＳｓ殖及成骨分化活性具有显著的促进作用。Ｃ增ｆ键词】富血小板血浆；骼肌卫星细胞；骨分化；导关骨成诱
ＰａｅｅｏｎｓｉＲｎｈｌｌｏｅｅｍｅｓｒｄＴｅｓｅｅａｓｌｓｏＮｅｏｎＳｒｔｗｅｅａｑｉｅｏｌｔｌｔｕｔｎＰＰａｄｗｏｅｂｏｄｗｒａｕｅ．ｈｋｌｔｌｃｍｕｃｅｆ３５ｄｎｗｂｒＤａｓｒｃｕｒｄｔ
ＰｌｔｌｔｒｃａｍａｏｈｏｉｅａｉｎｎｄＤｉｆｒｎｉｔｏｎ０ａｅｅ．ｉｈＰｌｓｎｔｅＰｒｌｆｒｔｏａｆｅｅｔａｉｆＲａｔＭｕｓｌｔｌｉｅＣｅＩｃｅＳａｅｌｔｌｓ

亚健康疲劳状态时血清对骨骼肌细胞线粒体膜细胞色素C氧化酶活性和线粒体能量负荷的影响

亚健康疲劳状态时血清对骨骼肌细胞线粒体膜细胞色素C氧化酶活性和线粒体能量负荷的影响李保良;赵晓山;罗仁;孙晓敏;李俊;陈晶【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2008(012)037【摘要】背景:前期研究表明亚健康疲劳者血清对体外培养骨骼肌细胞的生存活力和细胞超微结构具有显著影响,实验进一步从能量代谢方面观察亚健康疲劳时血清对骨骼肌细胞的影响.目的:以亚健康状态时血清培养人骨骼肌细胞,观察线粒体膜细胞色素C氧化酶活性和能量负荷的变化,并与健康状态血清培养结果相比较.设计、时间及地点:对比观察实验,于2006-10/2007-01在南方医科大学中医证候研究实验室完成.材料:25～40岁符合中医相关男性亚健康疲劳状态诊断标准者10名,治疗前后采血分别制备亚健康疲劳状态血清和正常状态血清,人骨骼肌细胞购于美国Sciencell研究实验室.方法:将人骨骼肌细胞常规培养、细胞融合达80%以上时,按随机数字表法分为4组,20%亚健康状态血清组、30%亚健康状态血清组、20%正常状态血清组、30%正常状态血清组.分别用含不同浓度亚健康状态血清和正常状态血清DMEM/F12细胞培养液培养.主要观察指标:培养24,48,72 h时,采用生物化学法和高效液相色谱法测定人骨骼肌细胞线粒体膜细胞色素C氧化酶活性和三磷酸腺苷、二磷酸腺苷、一磷酸腺苷含量.结果:含20%亚健康状态血清和含20%,30%正常状态血清DMEM/F12细胞培养液培养人骨骼肌细胞在72 h内,细胞线粒体膜细胞色素C氧化酶活性和能量负荷各时点差异均无显著性意义(P > 0.05),含30%亚健康状态血清DMEM/F12细胞培养液在培养人骨骼肌细胞48 h 和72 h时,细胞线粒体膜细胞色素C氧化酶活性和能量负荷显著降低,与其他各时点比较,差异有显著性意义(P < 0.05).进一步分析显示,线粒体能量负荷与线粒体膜细胞色素C氧化酶活性呈正相关.结论:亚健康疲劳状态时血清可致人骨骼肌细胞呈现能量代谢障碍的表现.【总页数】5页(P7258-7262)【作者】李保良;赵晓山;罗仁;孙晓敏;李俊;陈晶【作者单位】常州市中医医院消化内科,江苏省常州市,213003;南方医科大学南方医院中医科,广东省广州市,510515;南方医科大学南方医院中医科,广东省广州市,510515;南方医科大学南方医院中医科,广东省广州市,510515;南方医科大学南方医院中医科,广东省广州市,510515;南方医科大学南方医院中医科,广东省广州市,510515【正文语种】中文【中图分类】R349【相关文献】1.线粒体膜电位和细胞色素C在哮喘大鼠气道平滑肌细胞中的表达 [J], 尹娟;戴元荣2.运动状态下骨骼肌细胞线粒体膜电位的变化与细胞凋亡 [J], 郑师陵;王建军;王青;张明3.线粒体膜电位对缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞内细胞色素C分布及细胞增殖的影响[J], 胡红玲;张珍祥;汪涛;赵建平;徐永健4.亚健康疲劳状态血清对骨骼肌细胞蛋白质表达的影响 [J], 李保良;赵晓山;罗仁;孙晓敏;陈晶;李俊;张琪5.运动性疲劳状态下线粒体膜生物学特征的研究Ⅰ:力竭运动后大鼠心肌和骨骼肌线粒体膜脂质过氧化变化 [J], 张勇;李静先;陈家琦因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

《ILK信号通路对小鼠骨骼肌细胞增殖影响的研究》范文

《ILK信号通路对小鼠骨骼肌细胞增殖影响的研究》篇一一、引言随着生命科学的不断进步，信号通路在细胞增殖、分化以及功能调控中的作用越来越受到关注。

其中，ILK（Integrin-Linked Kinase）信号通路在骨骼肌细胞的生长和发育过程中扮演着重要角色。

本文旨在探讨ILK信号通路对小鼠骨骼肌细胞增殖的影响，以期为骨骼肌疾病的预防和治疗提供新的思路和方向。

二、材料与方法1. 材料实验所用材料包括小鼠骨骼肌细胞、ILK信号通路的抑制剂、培养基等。

所有材料均经过严格的质量控制，确保实验结果的可靠性。

2. 方法（1）细胞培养：将小鼠骨骼肌细胞在适宜的培养基中培养，观察其生长情况。

（2）ILK信号通路激活：通过特定手段激活ILK信号通路。

（3）抑制剂处理：使用ILK信号通路的抑制剂处理细胞，观察细胞增殖情况。

（4）实验分组：将实验分为对照组、ILK激活组和ILK抑制剂组，每组设置多个时间点取样。

（5）数据分析：采用统计学方法对实验数据进行处理和分析。

三、实验结果1. ILK信号通路对小鼠骨骼肌细胞增殖的影响通过观察对照组、ILK激活组和ILK抑制剂组小鼠骨骼肌细胞的生长情况，我们发现ILK信号通路的激活能够显著促进骨骼肌细胞的增殖，而ILK信号通路的抑制则会导致细胞增殖受阻。

这一结果提示我们，ILK信号通路在骨骼肌细胞的增殖过程中发挥着重要作用。

2. ILK信号通路对小鼠骨骼肌细胞形态的影响除了对细胞增殖的影响外，我们还发现ILK信号通路的激活能够改变骨骼肌细胞的形态。

具体表现为细胞体积增大，肌纤维束增多，这可能与肌肉力量的增强有关。

而ILK信号通路的抑制则会导致细胞形态发生异常，表现为肌纤维束减少、细胞体积缩小等现象。

3. 实验数据统计与分析通过对实验数据的统计与分析，我们发现ILK信号通路的激活与小鼠骨骼肌细胞的增殖呈正相关关系，而ILK信号通路的抑制则与细胞增殖呈负相关关系。

这一结果进一步证实了ILK信号通路在骨骼肌细胞增殖中的重要作用。

eIF2α对骨骼肌卫星细胞的影响研究进展

94作者简介：杨洲（1992—），男，湖北人，硕士，研究方向：运动与健康。

eIF2α对骨骼肌卫星细胞的影响研究进展杨洲上海市实验学校附属东滩学校卢健华东师范大学金晶浙江农林大学摘要：通过对文献法整理真核翻译起始因子（eukaryotic initiation factory 2，eIF2）与骼肌卫星细胞（muscle stem cells ，MuSCs ）关系发现，eIF2α磷酸化与去磷酸化对MuSCs 的沉默与激活在一定程度上相关，eIF2的α亚基在eIF2激酶作用下发生磷酸化修饰后，会引起翻译受阻，从而抑制蛋白质生物合成，在酵母和哺乳动物中观察到eIF2α磷酸化后，还能特异性激活某种蛋白质的合成，如酵母的GCN4蛋白，哺乳动物的ATF4蛋白。

研究发现在沉默状态MuSCs 中eIF2α被磷酸化，是否eIF2α的去磷酸化有利于骨骼肌卫星细胞的激活，有待进一步验证。

关键词：eIF2α；内质网应激；骨骼肌卫星细胞；激活在真核生物中，翻译过程通常分成3个阶段，即翻译的起始、延伸及终止。

真核细胞中有几种翻译起始的模式，如滑动扫描模型翻译的起始阶段一般分为3步：①当起始密码子为AUG 时，对应的Met-tRNAi 结合到核糖体小亚基（40 s）上；②核糖体小亚基与模板mRNA 结合，扫描，识别起始密码子；③核糖体大亚基（60 s）加入，形成80 s 起始复合物，翻译起始结束，进入延伸阶段在真核生物中，至少有10多种翻译起始因子（eIFs）参与协助完成翻译起始，如eIF2，eIF2B 和eIF 4F 等[1]。

本文对内质网蛋白应激霉（Protein kinase resouce-like endoplasmic reticulum kinase，PERK）[1]磷酸化eIF2α对MuSCs 激活的影响进行综述。

一、MuSCsMauro 等[2]在对青蛙胫前肌进行电镜研究时发现，MuSCs 是骨骼肌中具有分化增殖潜能的肌源性干细胞。

成年大鼠骨骼肌成肌细胞的培养和鉴定

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ＡｓａｔｏｂｅｔｅＴｓｂｉｎｅｐＩｅｔｅ００ｒａｙｃｌｒｏｄｌｒｋｌｔｂｔｃ：ｊｃｊｏｅｔｌｈａｘｅｍｎａｍｔｄｆｒｐｉｒｕｔｅｆａｕｔａｓｅａｒＶａｓｉｌｈｍｕｔｅｌ
杨奕
（尔滨医科大学第二临床医学院老年病科，龙江哈尔滨１００）哈黑５０１
【摘要］目的探索成年大鼠骨骼肌成肌细胞的高浓度培养方法。方法以成年同种系ｗｉａ大鼠为研究对象，ｓｒｔ
采用两步消化法获取大鼠骨骼肌卫星细胞，进行体外培养，对获得的细胞进行形态学研究，以免疫组织化学方法进行鉴定。结果细胞增殖旺盛，分化良好，可融合成肌管。免疫细胞化学染色显示，骨骼肌卫星细胞呈弱阳性，肌管呈强阳性。结论两步消化法体外培养的骨骼肌卫星细胞具有良好的增殖与分化能力，用此种方法可培养出高纯度的骨骼肌成肌细胞，操作简单、污染少。［关键词］骨骼肌；成肌细胞；培养［中图分类号］３Ｒ２［文献标识码］Ａ［文章编号］０ｏ一１０（０９Ｏ０３０１ｏ９５２ｏ）２— １７— ３
ｍｙｂａｔｎｄｏｘｌｒｔｅｉｌｇｃｌｈＩｃｅｉｔｃ０ｔｅｕｔＩｄｅｌ．ＭｅｈＯｓ０ｌｓｓａｔｅｐ０ｅｈｂ００ｉａｃａｌｔｒｓｉｓｆｈｃｌｕ－ｃｌｓａｅｔｄＲａｓｅｅａｔｋｌｔｌｍｕｓｌａｅｌｅｃｌｓｗｅｅ０ｔｉｅｔｈｗｏｓｅｉｅｔｏｓｎｙｅＩｃｌｇｎｓｎ巧ｐｉｎｃｅｓｔｌｉｅｌｒｂａｎｄｗｉｈｔｅｔ－ｔｐｄｇｓｉｎｕｉｇｔｐ０ｌｅａｅａｄｔｓｎａｄｔａｐｓａｅ０ｌｗｉｒｍａｙｃｌｕｅａｓｇｄｆｌ０ｎｇｐｉｒｕｔｒｒ．Ｔｈｅｌｓ０ｅｅｌｗｅｅ０ｎｅａｄｂｓｒｅｉｈｍｉｒｓ０ｙｒｃｕｔｄｎ０ｅｖｄｂｙｌｇｔｃ０ｃｐ

外源性1-磷酸神经鞘氨醇(S1P)对大鼠骨骼肌成肌细胞DNA合成的影响

［Ａｂｓｔｒａｃｔ］０ｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｓｐｈｉｎｇｏｓｍｅ１－ｐｈｏｓｐｈａｔｅ（ＳＩＰ）ｏｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆ
（Ｈ — ＴｄＲ）的摄人量较对照组增加１２．３％～５０．７％（Ｐ＜０．０１），并与剂量呈正相关。该促进作用不会被ＳｐｈＫ活性
抑制剂ＤＭＳ和ＨＡＣＰＴ所阻断。Ｓ１Ｐ直接加入培养液同样能促进细胞ＤＮＡ合成（Ｐ＜０．０１），５００和１０００ｎｍｏｌ／Ｌ剂量组Ｈ－ＴｄＲ的摄人量较对照组分别增加１８．８（Ｐ＜Ｏ．０５）和２６．５（Ｐ１＜０．０５），增幅低于同剂量的Ｓ１Ｐ脂质体。该促进作用可被ＤＭＳ和ＨＡＣＰＴ所阻断。结论外源性ＳＩＰ可促进体外培养的大鼠骨骼肌成肌细胞增殖，
【摘要】目的
观察外源性１一磷酸神经鞘氨醇（ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ１一ｐｈｏｓｐｈａｔｅ，Ｓ１Ｐ）对大鼠骨骼肌成肌细胞增殖的影响
方法
分离和培养大鼠骨骼肌成肌细胞，通过制备ＳＩＰ脂质体使ＳＩＰ转运到骨骼肌成肌细胞内或直接加入外源性
ｓｋｅｌｅｔａｌｍｙｏｂｌａｓｔｃｅｌｌｓｉｎｒａｔｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＰｒｉｍａｒｙｓｋｅｌｅｔａｌｍｙｏｂｌａｓｔ．ｅｅｌＩＳｉｎｒａｔｓｗｅｒｅｓｅｐａｒａｔｅｄａｎｄｃｕｌｔｕｒｅｄ。ｔｈｅｎｒｏｌｅｓｏｆＳＩＰｉｎｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＤＮＡｓｙｎｔｈｅｓｉｓｗｅｒｅｄｅｓｃｒｉｂｅｄｂｙｄｉｓｓｅｃｔｉｎｇｔｈｅｍｉｎｔｏ

不同血清浓度对大鼠软骨细胞增殖、形态和基因表达的影响

不同血清浓度对大鼠软骨细胞增殖、形态和基因表达的影响刘丽芳;薛艳;郑昱新;曹月龙;丁道芳【摘要】目的观察不同血清浓度对大鼠软骨细胞体外培养的形态、增殖和基因表达的调控作用.方法取出生24h SD大鼠关节处软骨,0.1％浓度的Ⅱ型胶原酶多次消化后获得软骨细胞.软骨细胞培养于含5％胎牛血清(fetal bovineserum,FBS),10％ FBS和20％ FBS的DMEM低糖培养基中,分别为5FBS组,10FBS组和20FBS组.24h后镜下观察细胞形态变化,CCK8方法检测24、48和72h软骨细胞增殖.Western blot法检测软骨指标Ⅱ型胶原A1(COL2A1)和MMP13(matrix metalloproteinases13)表达,定量PCR检测软骨特异性基因Sox9、A-can、ADAMTS5、MMP9和MMP3的表达及代谢相关基因Nme2和PnP表达.结果 5FBS组的软骨细胞呈由鹅卵石样排列,10FBS组和20FBS组细胞呈现长梭形改变,且血清浓度越大,形态改变越明显.和5FBS组比较,10FBS组和20FBS组细胞增殖明显,呈血清浓度依赖性增加.10FBS组和20FBS组的MMP13表达显著上调,Ⅱ型胶原表达显著下调.PCR结果表明,和5FSB组比较,10FBS组和20FBS组的A-can和Sox9表达下降,MMP9、MMP3和ADAMTS5表达上调,且基因表达变化和血清浓度改变呈正相关.同时随着血清浓度增加,Nme2和PnP表达显著上调.结论血清浓度的增高促进软骨细胞代谢,引起软骨细胞退变.【期刊名称】《医学研究杂志》【年(卷),期】2018(047)009【总页数】6页(P53-57,33)【关键词】血清浓度;软骨细胞;细胞增殖;形态改变;营养状态【作者】刘丽芳;薛艳;郑昱新;曹月龙;丁道芳【作者单位】200240 上海交通大学;201203 上海中医药大学附属曙光医院石氏伤科医学中心;201203 上海市中医药研究院骨伤科研究所;201203 上海中医药大学附属曙光医院石氏伤科医学中心;201203 上海市中医药研究院骨伤科研究所;201203 上海中医药大学附属曙光医院石氏伤科医学中心;201203 上海市中医药研究院骨伤科研究所;201203 上海中医药大学附属曙光医院石氏伤科医学中心;201203 上海市中医药研究院骨伤科研究所【正文语种】中文【中图分类】R332关节炎在我国的总发生率约为13%，其中以骨关节炎(osteoarthritis，OA)为最常见，发生随年龄增加而上升。

血清PLA2R抗体及THSD7A抗体在特发性膜性肾病诊治中的研究进展

㊃综述㊃通信作者:刘茂东,E m a i l :l m d l x h @126.c o m血清P L A 2R 抗体及T H S D 7A 抗体在特发性膜性肾病诊治中的研究进展张文贤,刘茂东(河北医科大学第三医院肾内科,河北石家庄050000) 摘要:M 型磷脂酶A 2受体(P L A 2R )及1型血小板反应蛋白7A 域(T H S D 7A )为特发性膜性肾病两大主要靶抗原,T H S D 7A 多沉积于P L A 2R 阴性的膜性肾病患者中肾脏足细胞,但最新研究表明,T H S D 7A 可与P L A 2R 在膜性肾病患者中共存,呈现双阳性㊂血清学抗体水平对疾病活动有一定指导意义,P L A 2R 抗体水平检测已应用于临床㊂本文就P L A 2R 及T H S D 7A 抗体的结构㊁作用以及与特发性膜性肾病之间的关系研究进展进行综述㊂关键词:肾小球肾炎,膜性;受体,磷脂酶A 2;1型血小板反应蛋白7A 域中图分类号:R 692.31 文献标志码:A 文章编号:1004-583X (2018)08-0715-04d o i :10.3969/j.i s s n .1004-583X.2018.08.016 膜性肾病(m e m b r a n o u sn e p h r o p a t h y ,MN )是常见的肾小球疾病,病理特征主要表现为肾小球基底膜增厚㊁I g G 沿毛细血管壁颗粒样沉积,据报道,约占肾穿刺活检3%左右㊂MN 为针对肾小球脏层上皮细胞膜抗原成分㊁自身抗体介导㊁由补体参与的器官特异性自身免疫疾病,是成人肾病综合征常见病因[1-2]㊂按病因分为特发性膜性肾病(i d i o pa t h i c m e mb r a n o u s n e p h r o p a t h y,I MN )及继发性膜性肾病(s e c o n d a r y m e m b r a n o u sn e p h r o p a t h y,S MN )[3],后者常继发于系统性红斑狼疮㊁乙型肝炎病毒感染㊁肿瘤㊁重金属及某些药品㊁毒物接触等㊂目前已经明确导致I MN 靶抗原包括中性肽链内切酶(n e u t r a le n d o p e p t i d a s e ,N E P )㊁M 型磷脂酶A 2受体(M -t y pe p h o s p h o l i p a s eA 2r e c e p t o r ,P L A 2R )及1型血小板反应蛋白7A 域(t h r o m b o s p o n d i nt y p e -1d o m a i n -c o n t a i n i n g 7A ,T H S D 7A ),血清中存在相应特异性抗体㊂本文将围绕血清P L A 2R 抗体及T H S D 7A 抗体对I MN 诊断意义进行综述㊂20世纪50年代W a l t e rH e ym a n n 将大鼠近端肾小管上皮刷状缘提取物(F x l A )免疫后的兔血清注射至大鼠体内,诱导大鼠出现蛋白尿,建立被动H e ym a n n 肾炎模型㊂从而证明膜性肾病中免疫复合物为肾小球原位免疫复合物沉积㊂20世纪80年代证实此抗原为M e ga l i n ,但未表达于人类足细胞表面,并不能解释人特发性膜性肾病发病机制㊂2002年,D eb i ec 在新生儿I MN 及母体血清中检测出N E P 抗体(主要I g G 亚型),将该抗体被动免疫兔血清出现膜性肾病临床表现,表明N E P 是产生抗体的致病靶抗原[4],N E P 基因突变的母亲怀孕过程中可产生针对N E P 的抗体,此抗体通过胎盘进入胎儿体内后与胎儿足细胞上的N E P 结合,形成原位免疫复合物,进而启动免疫反应导致新生儿MN ㊂2009年,B e c k 等[5]发现足细胞沉积的P L A 2R 是I MN 靶抗原,70%患者血清可检测到P L A 2R 抗体㊂2014年,T o m a s 等[6]在P L A 2R 阴性I MN 患者足细胞表面发现T H S D 7A 沉积,血清中可检测该抗体,证明T H S D 7A 为I MN 致病靶抗原㊂国内众多实验证实,我国I MN 的发病率逐年增长,位居第二大原发性肾小球病,所以针对I MN 的正确诊断尤为重要㊂肾穿刺活检术为I MN 诊断金标准,但其为有创性操作,风险高,且不便于动态观察患者病情,而血清学检测简单易行,不仅快速㊁简便易行,而且可以动态观察病情,目前血清学检测P L A 2R 抗体已应用于临床辅助诊断I MN ,可有效监测患者病情,反映临床疗效及预后情况㊂但检测T H S D 7A 抗体研究少,仍需要大量临床试验明确其与I MN 关系,为应用于临床奠定基础㊂1 P L A 2R 抗体的临床意义磷脂酶A 2(P L A 2)广泛存在于人体各器官,主要表达于人类肾小球足细胞,分为细胞质型磷脂酶A 2㊁非钙依懒型磷脂酶A 2及分泌型磷脂酶A 2㊂P L A 2R 可分为N 型及M 型,最早N 型P L A 2R 在大鼠脑内被发现,M 型P L A 2R 最初在兔子骨骼肌中被发现,人体肾组织主要表达M 型P L A 2R ,已经确认M 型P L A 2R 为致病主要抗原㊂M 型P L A 2R 属于C 型外源性凝集素家族,是I 型跨膜蛋白,包括胞外段(八个串联C 型外源性凝集素样区域(C R D )㊁N末端胱氨酸富集区域㊁Ⅱ型纤维链接蛋白区域)㊁跨㊃517㊃‘临床荟萃“ 2018年8月5日第33卷第8期 C l i n i c a l F o c u s ,A u gu s t 5,2018,V o l 33,N o .8Copyright ©博看网. All Rights Reserved.膜段及胞内段㊂分泌型磷脂酶A2通过与P L A2R的C R D5区域结合可以促进细胞增殖㊁激素释放㊁细胞信号传导及细胞因子产生等多种效应㊂研究发现P L A2R敲出的小鼠中内毒素休克症状减轻,表明P L A2R在内毒素休克进程中促炎症介质释放具有重大作用㊂2009年,B e c k等[5]发现70%I MN患者足细胞可见同一种糖蛋白沉积,进一步质谱分析证实为P L A2R,血清中存在该物质特异性循环抗体,主要为I g G4亚型,在S MN及其它肾病类型中并未发现该蛋白㊂P L A2R仅在非还原条件下与其特异性抗体结合,抗原决定簇主要存在C y s R区域[7],亦可表达于C T L D1及C T L D7等区域[8-9],结合临床分析发现,仅有C y s R抗原表位者病情较轻,自发缓解率高,而同时存在3种及以上抗原表位者容易走向终末期肾脏病(e n d-s t a g er e n a ld i e a s e,E S R D)㊂H o x h a 等[10]发现I MN患者P L A2R抗体的阳性检出率高达81%(133/163)㊂日本一项研究结果显示,I MN 患者体内P L A2R抗体的阳性率为53%,而S MN患者P L A2R抗体的检出率为0%[11]㊂D u等[12]对2212例患者的M a t a分析表明P L A2R抗体诊断I MN的灵敏度为78%,特异度为99%㊂另一项纳入1160例受试者M a t e分析结果表明P L A2R抗体诊断I MN的灵敏度为68%,特异度为97%[13]㊂R a d i c e等[14]研究证实P L A2R诊断I MN灵敏度为70.6%,对照组P L A2R抗体阳性患者约78%为肿瘤相关性膜性肾病,提示我们P L A2R抗体阳性患者仍需要筛查继发性因素,尤其是肿瘤㊂虽然某些继发性膜性肾病患者亦可呈现P L A2R抗体阳性,但P L A2R抗体检测特异度仍大于90%,灵敏度约70%㊂但是肾穿刺活检病理学检查仍为I MN诊断金标准,血清P L A2R抗体检测不能替代肾穿刺活检㊂血清P L A2R抗体水平可监测病情活动,随着抗体水平降低病情逐渐好转㊂Z h u等[15]试验表明P L A2R抗体阳性预示I MN病情活动,抗体滴度水平与临床症状呈正相关,滴度越高,临床表现症状越重,预后越差[16]㊂随着I MN病情的好转,P L A2R抗体滴度降低甚至消失,且P L A2R抗体滴度下降早于临床症状的改善[17]㊂K a n i g i c h e r l a等[18]发现,大量蛋白尿的I MN患者血清P L A2R抗体水平明显高于部分及完全缓解组,而在部分缓解和完全缓解组,抗体水平差异无统计学意义㊂韩国学者同样通过实验证明随着24h尿蛋白定量减少,血清P L A2R抗体水平降低甚至消失[19]㊂众多实验同样证明血清P L A2R抗体滴度水平与肾功能预后的显著相关性,高水平的P L A2R抗体水平是肌酐升高的独立危险因素[20]㊂抗体水平高预示自发缓解率低,应尽早使用免疫抑制剂㊂纳入35例膜性肾病患者一项实验通过观察利妥昔单抗治疗前后P L A2R抗体水平与尿蛋白的变化,最后结果显示:治疗前,约71%患者P L A2R抗体阳性;12个月后,约68%患者的抗体滴度下降或转阴㊂在抗体滴度降低或转阴过程中,分别有59%(12个月)和88%(24个月)患者的蛋白尿达到完全或部分缓解,而抗体持续阳性者仅0%(12个月)和33%(24个月)㊂与此同时,还观察到, P L A2R抗体水平下降早于蛋白尿的降低[21]㊂另一项研究显示应用免疫抑制剂治疗前3个月,P L A2R 抗体滴度下降81%,之后维持较低水平,而尿蛋白在前3个月中仅下降39%,之后24个月缓慢降低[22]㊂I MN亦可见于老年人,日本曾报道1例以全身水肿㊁大量蛋白尿㊁低蛋白血症起病的95岁老年女性,肾活检提示I期膜性肾病,排除其它继发性因素,且血清P L A2R阳性,证实为I MN[23]㊂目前研究已证实监测P L A2R抗体浓度对于I MN诊断㊁病情监测及预后评估意义重大,但仍需结合肾穿刺活检结果指导临床治疗㊂2T H S D7A抗体的临床意义虽然研究已证实P L A2R与I MN密切相关,且血清学P L A2R抗体诊断I MN灵敏度较高,但仍存在P L A2R抗体阴性的I MN患者㊂T o m a s等[6]通过对6例欧洲P L A2R抗体阴性的I MN患者及9例波士顿I MN患者的血清分析,得出一种相对分子质量约250000的跨膜糖蛋白,与P L A2R具有相同生化特征,由胞外部分(富含二硫键及N-糖基化区域)㊁跨膜部及胞内段组成,进一步质谱分析证实为T H S D7A㊂既往研究表明T H S D7A主要与基因多态性及骨质疏松相关,可介导内皮细胞迁移㊁血管生成等相关性疾病的治疗靶点㊂近几年,证实T H S D7A同样表达于人类及龋齿类动物的足细胞表面是I MN另一种足细胞自身抗原[24]㊂3%~5% I MN患者可检测出T H S D7A,且特异性抗体主要为I g G4亚型,仅仅在非还原情况下与抗体结合,抗原抗体结合后形成免疫复合物,沉积于肾小球上皮下,进一步激活补体系统导致足细胞损伤或凋亡,形成蛋白尿㊂该实验通过对3例随访患者的血清分析发现,应用免疫抑制剂治疗后,T H S D7A滴度与尿蛋白水平呈正相关,表明血清T H S D7A水平与疾病活动程度相关㊂目前人们致力于建立T H S D7A相关膜性肾病的动物模型,将T H S D7A抗体被动免疫大鼠㊃617㊃‘临床荟萃“2018年8月5日第33卷第8期 C l i n i c a l F o c u s,A u g u s t5,2018,V o l33,N o.8Copyright©博看网. All Rights Reserved.体内,人类T H S D7A抗体与小鼠T H S D7A特异性结合,导致大鼠出现蛋白尿,成功建立了大鼠体外模型㊂这一成果为我们认识T H S D7A相关膜性肾病发病机制提供依据[25]㊂有文献报道,T H S D7A相关膜性肾病患者发生癌症风险高[26-27],日本,I MN患者T H S D7A相关性肿瘤的发病率为9.1%[28];欧洲,T H S D7A相关性淋巴瘤发病率为13.63%[6]㊂另一项GWA S研究通过分析印度208例男性健康肥胖受试者发现肥胖人群中T H S D7A基因表达增强,证明T H S D7A与肥胖相关[29]㊂3P L A2R及T H S D7A之间关系P L A2R与T H S D7A结构大致相似,在足细胞表达位置相近,已证实为I MN主要两大致病靶抗原,且血清中抗体均以I g G亚型为主㊂最初认为体内P L A2R与T H S D7A相互排斥,约10%P L A2R 抗体阴性I MN患者血清可检测到T H S D7A抗体[28]㊂L a r s e n等[30]通过免疫组织化学法对258例I MN患者肾组织分析发现3%为T H S D7A相关性膜性肾病,约55%为P L A2R相关性膜性肾病,而1%显示为双阳性㊂这表明2种抗体并非相互排斥㊂机制可能与H L A-D Q A1基因相关;或者是某个自身的免疫系统被激活产生针对2种足细胞抗原的抗体㊂有研究证实中国患者T H S D7A相关的I MN在患病率较低,与P L A2R相关I MN临床表现具有相似之处,与肿瘤之间存在可疑关系㊂血清抗T H S D7A抗体和抗P L A2R抗体双阳性患者具有双重自身免疫反应㊂目前关于I MN患者双抗体阳性报道日益增多,但对于具体机制仍不完全清楚,双抗体阳性患者临床表现及预后与单抗体阳性之间是否存在差异需要大量实验研究证实㊂针对P L A2R及T H S D7A的血清学抗体均为I g G4亚型,导致I MN 具体机制为:足细胞抗原与血清特异性抗体结合形成免疫复合物积于脏层上皮细胞,激活补体系统形成C5b-9,C5b-9在过度活化状态下通过产生氧自由基㊁释放蛋白酶㊁改变细胞骨架等引起宿主细胞溶解㊁凋亡,进一步导致肾小球基底膜发生一系列病理改变,滤过膜受损,最终形成蛋白尿㊂P L A2R抗体已用于I MN临床诊断㊁病情检测及预后评估, T H S D7A抗体仍未应用于临床工作中,二者均可以作为鉴别I MN及S MN的特异性指标,但联合二者是否能更好诊断I MN仍需深入研究㊂4小结自发现P L A2R是I MN重要的靶抗原以来, P L A2R抗体血清学检测在I MN诊断㊁检测疾病进展及治疗方案选择等方面为临床工作提供了新思路㊂众多研究已证实了血清P L A2R抗体在I MN诊断㊁预测疾病进展及预后等方面的作用,该抗体血清学检测已经应用于临床实验室检查中㊂目前关于P L A2R及T H S D7A抗体的研究仍不够深入,血清P L A2R抗体不仅是I MN及S MN的鉴别要点,还与疾病活动程度有关,对于血清T H S D7A抗体研究较少,其与各临床指标相关性仍需要大量实验研究,但我们可以应用T H S D7A动物模型深入研究膜性肾病的发病机制以及治疗方案,并借此基础致力于研究是否存在I MN其它目前仍未发现的自身靶抗原㊂进一步研究二者在I MN发病起始㊁进展及预后过程的具体机制,将有可能为I MN的治疗方案以及新药物的研发提供新依据㊂参考文献:[1] B e c k L H J r,S a l a n t D J.M e m b r a n o u s n e p h r o p a t h y:f r o mm o d e l s t om a n[J].JC l i n I n v e s t,2014,124(6):2307-2314.[2] W a n g X P,H uZ X,G u oD Y,e ta l.R e m i s s i o no f r e f r a c t o r ym e m b r a n o u s n e p h r o p a t h y b y l o wd o s e r i t u x i m a b:a c a s e r e p o r t[J].C h i n M e d J,2016,129(7):871-873.[3] Z e n g C H,C h e n HM,W a n g R S,e ta l.E t i o l o g y a n dc l i n i c a lc h a r a c t e r i s t i c s o fm e m b r a n o u s n e p h r o p a t h y i nC h i n e s e p a t i e n t s[J].A mJK i d n e y D i s,2008,52(4):691-698.[4] D e b i e c H,G u i g o n i s V,M o u g e n o t B,e t a l.A n t e n a t a lm e m b r a n o u s g l o m e r u l o n e p h r i t i s d u e t o a n t i-n e u t r a le n d o p e p t i d a s e a n t i b o d i e s[J].N E n g l JM e d,2002,346(26):2053-2060.[5] B e c k L H J r,B o n e g i o R G,I a m b e a u G,e t a l.M-t y p ep h o s p h o l i p a s e A2r e c e p t o r a s t a r g e t a n t i g e n i n i d i o p a t h i cm e m b r a n o u s n e p h r o p a t h y[J].NE n g l JM e d,2009,361(1):11-21.[6] T o m a sNM,B e c kJ rL H,M e y e rC,e ta l.T h r o m b o s p o n d i nt y p e-1d o m a i n-c o n t a i n i n g7A i n i d i o p a t h i c m e m b r a n o u sn e p h r o p a t h y[J].NE n g l JM e d,2014,371(24):2277-2287.[7] F r e s q u e tM,J o w i t tT A,G u mm a d o v a J,e t a l.I d e n t i f i c a t i o n o fa m a j o r e p i t o p e r e c o g n i z e db y P L A2R a u t o a n t i b o d i e s i np r i m a r y m e m b r a n o u sn e p h r o p a t h y[J].J A m S o c N e p h r o l2015,26(2):302-313.[8] K a oL,L a m V,W a l d m a n M,e ta l.I d e n t i f i c a t i o n o ft h ei mm u n o d o m i n a n t e p i t o p e r e g i o n i n p h o s p h o l i p a s eA2r e c e p t o rm e d i a t i n g a u t o a n t i b o d y b i n d i n g i n i d i o p a t h i c m e m b r a n o u sn e p h r o p a t h y[J].JA mS o cN e p h r o l,2015,26(2):291-301.[9]S e i t z-P o l s k i B,D o l l aG,P a y réC,e t a l.E p i t o p es p r e a d i n g o fa u t o a n t ib o d y r e s p o n s e t o P L A2R a s s oc i a t e s w i t h p o o rp r o g n o s i s i n m e m b r a n o u s n e p h r o p a t h y[J].J A m S o cN e p h r o l,2016,27(5):1517-1533.[10] H o x h a E,T h i e l eI,Z a h n e r G,e t a l.P h o s p h o l i p a s e A2r e c e p t o r a u t o a n t i b o d i e sa n dc l i n i c a lo u t c o m ei n p a t i e n t s w i t hp r i m a r y m e m b r a n o u sn e p h r o p a t h y[J].J A m S o c N e p h r o l,2014,25(6):1357-1366.[11] A k i y a m aS,A k i y a m a M,I m a iE,e ta l.P r e v a l e n c eo fa n t i-p h o s p h o l i p a s eA2r e c e p t o r a n t i b o d i e s i n J a p a n e s e p a t i e n t sw i t h㊃717㊃‘临床荟萃“2018年8月5日第33卷第8期 C l i n i c a l F o c u s,A u g u s t5,2018,V o l33,N o.8Copyright©博看网. 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《ILK信号通路对小鼠骨骼肌细胞增殖影响的研究》范文

《ILK信号通路对小鼠骨骼肌细胞增殖影响的研究》篇一一、引言在生物学领域，细胞增殖是一个复杂且关键的过程，它涉及到多种信号通路的相互作用。

其中，ILK（整合连接激酶）信号通路在骨骼肌细胞的生长和发育中起着重要作用。

本文旨在研究ILK信号通路对小鼠骨骼肌细胞增殖的影响，从而进一步了解其生理功能和潜在的生物医学应用。

二、材料与方法2.1 实验动物与样本采集选用健康的小鼠作为实验对象，采集其骨骼肌组织样本。

在实验过程中，所有操作均遵循伦理标准，确保动物的福利。

2.2 细胞培养与处理将采集的骨骼肌组织进行消化处理，获得骨骼肌细胞。

利用不同浓度的ILK信号通路激活剂或抑制剂处理细胞，以观察其对细胞增殖的影响。

2.3 实验方法采用实时定量PCR、Western blot、免疫荧光等技术检测ILK 信号通路的表达水平及活性；利用流式细胞术分析细胞周期和凋亡情况；通过MTT法测定细胞增殖能力等。

三、结果与分析3.1 ILK信号通路的表达与活性实验结果显示，在骨骼肌细胞中，ILK信号通路的表达水平较高，且其活性受到多种因素的调节。

当使用ILK信号通路激活剂处理细胞时，ILK的活性显著增强；而使用抑制剂处理时，ILK的活性则受到抑制。

3.2 ILK信号通路对骨骼肌细胞增殖的影响实验发现，激活ILK信号通路能够显著促进骨骼肌细胞的增殖，表现为细胞周期加快、凋亡减少、增殖能力增强。

相反，抑制ILK信号通路则导致骨骼肌细胞增殖受阻。

这些结果表明，ILK信号通路在调节骨骼肌细胞增殖过程中发挥重要作用。

3.3 机制探讨为了进一步探讨ILK信号通路影响骨骼肌细胞增殖的机制，我们检测了相关基因和蛋白的表达。

实验结果显示，激活ILK信号通路能够上调与细胞增殖相关的基因和蛋白表达，如Cyclin D1、CDK4等；而抑制ILK信号通路则导致这些基因和蛋白的表达降低。

这表明ILK信号通路通过调控相关基因和蛋白的表达来影响骨骼肌细胞的增殖。