急性大鼠心肌梗死实验模型的制备

左心耳
在左心耳下距主动脉根部2～3 mm处可见一粉红色细小血管
1.6 关胸及术后处理 逐层关胸, 断开呼吸机,清理呼吸道 清理呼吸道（ 逐层关胸 断开呼吸机 清理呼吸道（拔出气 管插管后应注意将大鼠舌头外提， 管插管后应注意将大鼠舌头外提，防止舌根 后坠出现缺氧窒息）并观察大鼠呼吸， 后坠出现缺氧窒息）并观察大鼠呼吸，以浅 快呼吸，频率30~40次/min为宜。术后单笼 为宜。 快呼吸，频率 次 为宜 饲养。 饲养。 注:手术过程中大鼠冠状动脉结扎后可能马上出 手术过程中大鼠冠状动脉结扎后可能马上出 现心律失常，室性停搏或心室纤维颤动， 现心律失常，室性停搏或心室纤维颤动，立 即解除对心脏的挤压或同时进行心内按压可 以使心脏恢复搏动。 以使心脏恢复搏动。
大鼠心肌梗死实验模型的制备
背景
有关心肌梗死模型的制作，国内外采用结扎、 有关心肌梗死模型的制作，国内外采用结扎、 药物、冷冻、栓塞、电凝等方法制作兔、大鼠、 药物、冷冻、栓塞、电凝等方法制作兔、大鼠、 狗等不同动物的心肌梗死模型， 狗等不同动物的心肌梗死模型，但大多数学者认 为结扎法复制的心肌梗死模型与心肌梗死实际发 病过程更符合。 病过程更符合。 由于临床大多心肌缺血或心肌梗死都是一渐 进性过程，会不断发生缺血或梗死后再灌现象。 进性过程，会不断发生缺血或梗死后再灌现象。 而冠状动脉结扎法能人为地仿造临床心肌梗死过 程的冠状动脉梗死，其梗死部位、 程的冠状动脉梗死，其梗死部位、分布范围相对 一致，病理生理、 一致，病理生理、生化改变与临床心肌梗死更相 似。 综上所述,结合实际操作条件 结合实际操作条件,选用结扎大鼠 综上所述 结合实际操作条件 选用结扎大鼠 冠状动脉结扎的方法,以建立稳定的 以建立稳定的、 冠状动脉结扎的方法 以建立稳定的、适于细胞移 植治疗心肌梗死的大鼠动物模型。 植治疗心肌梗死的大鼠动物模型。
3 结果讨论
两只实验鼠死亡原因讨论： 两只实验鼠死亡原因讨论： ①号实验鼠在结扎冠状动脉时心脏停止跳动死亡 ②号实验鼠在关闭胸腔时呼吸停止死亡 考虑以下可能原因： 考虑以下可能原因： 鼠龄过大，适应手术能力较适龄鼠差， ⑴. 鼠龄过大，适应手术能力较适龄鼠差，多篇文 献提出实验鼠体重以250 ±25 g 为宜，本次实验 献提出实验鼠体重以 为宜， 鼠体重分别为① 鼠体重分别为① 290g及②360g; 及
结扎冠状动脉时部位未掌握好， ⑹. 结扎冠状动脉时部位未掌握好，结扎部位 过高（结扎到左主干）， ），大鼠出现严重心 过高（结扎到左主干），大鼠出现严重心 律失常乃至心跳骤停， 律失常乃至心跳骤停，尽管已施以胸外按 压等抢救措施， 压等抢救措施，但是最终没有成功使实验 鼠复苏； 鼠复苏； 呼吸机频率和潮气量没有掌握好； ⑺. 呼吸机频率和潮气量没有掌握好； 时值冬季，气温较低，手术操作时间较长， ⑻. 时值冬季，气温较低，手术操作时间较长， 开胸后实验鼠体温丧失较大，存在低体温、 开胸后实验鼠体温丧失较大，存在低体温、 手术和麻醉多重打击。 手术和麻醉多重打击。
实验鼠体重较实验前预期的要重， ⑵. 实验鼠体重较实验前预期的要重，麻醉剂 有使用过量的可能， 有使用过量的可能，实验鼠术中出现呼吸 抑制； 抑制； 开睑器撑开术口压迫肺脏时间过长， ⑶. 开睑器撑开术口压迫肺脏时间过长，可能 存在气胸肺不张造成实验鼠缺氧； 存在气胸肺不张造成实验鼠缺氧； 压迫心脏时造成大血管移位扭转， ⑷. 压迫心脏时造成大血管移位扭转，重要脏 器供血不足； 器供血不足； 术中失血过多， ⑸.术中失血过多，造成血压下降，失血性休 术中失血过多 造成血压下降， 克；
1 实验步骤和观察项目
1. 1 实验动物 健康雄性 健康雄性Wistar大鼠 只, 大鼠30只 大鼠 体质量250 ±25 g制作心肌梗死动物模型 体质量 制作心肌梗死动物模型 的大鼠体重以200～ 250 g为宜（动物太小， 为宜（ 的大鼠体重以 ～ 为宜 动物太小， 不利于操作，耐受创伤能力低； 不利于操作，耐受创伤能力低；而体重及 鼠龄太大，则不利术后观察生存期， 鼠龄太大，则不利术后观察生存期，而且 麻醉剂量不好掌握，凝血功能较差， 麻醉剂量不好掌握，凝血功能较差，不易 止血。 止血。实验动物由广西医科大学实验中心 提供。） 提供。）
1. 4气管插管 气管插管 大鼠仰卧固定于手术台上。 大鼠仰卧固定于手术台上。沿颈部中线切 开皮肤，分离组织暴露气管， 开皮肤，分离组织暴露气管，用7号注射针 号注射针 头做为插管以45度斜进针从甲状软骨下缘 头做为插管以 度斜进针从甲状软骨下缘 轻轻水平插入约0.7~1.5cm 斜面朝上。固 斜面朝上。 轻轻水平插入约 定好,气管插管，呼吸比为1：2，呼吸频率 定好 气管插管，呼吸比为 ： ， 气管插管 90次／rain，潮气量 ml／kg。关闭呼吸 次 ，潮气量14 ／ 。 四肢接心电图机记录术前心电图。 机，四肢接心电图机记录术前心电图。完 毕打开呼吸机， 此时作心电图与开胸后结 毕打开呼吸机， (此时作心电图与开胸后结 扎前心电图对照,验证是否为先天变异或实 扎前心电图对照 验证是否为先天变异或实 验前异常－心电图机未借到， 验前异常－心电图机未借到，所以心电图 未能做) 未能做
1.7 术后抗感染及护理 大鼠本身具有比较强的抗感染能力，但是 大鼠本身具有比较强的抗感染能力， 预防感染有利于促进术后恢复， 预防感染有利于促进术后恢复，并且良好 的术后护理可以提高动物模型的生存率。 的术后护理可以提高动物模型的生存率。 因此，术前所用手术器械均要用75％ 因此，术前所用手术器械均要用 ％酒精 浸泡消毒。术后腹腔注射青霉素80万 。 浸泡消毒。术后腹腔注射青霉素 万U。待 大鼠麻醉清醒后即可与其糖水和饲料， 大鼠麻醉清醒后即可与其糖水和饲料，无 须禁食。术后可适量补充能量。 须禁食。术后可适量补充能量。冬天应注 意保嗳。 意保嗳。
建模原理
生物体各组织器官要维持其正常的生命活动， 生物体各组织器官要维持其正常的生命活动，需要心 脏不停地搏动以保证血运。 脏不停地搏动以保证血运。而心脏作为一个泵血的肌性动 力器官，本身也需要足够的营养和能源， 力器官，本身也需要足够的营养和能源，供给心脏营养的 血管系统，就是冠状动脉和静脉，也称冠脉循环。 血管系统，就是冠状动脉和静脉，也称冠脉循环。冠状动 脉是供给心脏血液的动脉，起于主动脉根部,行于心脏表 脉是供给心脏血液的动脉，起于主动脉根部 行于心脏表 冠状动脉收集代谢后的静脉血， 面。冠状静脉伴随 冠状动脉收集代谢后的静脉血，归流 于冠状静脉窦，回到右心房。正常情况下， 于冠状静脉窦，回到右心房。正常情况下，冠状动脉 之 尚有丰富的吻合支或侧支。冠状动脉虽小， 间，尚有丰富的吻合支或侧支。冠状动脉虽小，但血流量 很大。占心排血量的5%，这就保证了心脏有足够的营养， 很大。占心排血量的 ，这就保证了心脏有足够的营养， 维持它有力地昼夜不停地跳动。如果冠状动脉突然阻塞， 维持它有力地昼夜不停地跳动。如果冠状动脉突然阻塞， 不能很快建立侧支循环，常常导致心肌梗塞。 不能很快建立侧支循环，常常导致心肌梗塞。但若冠状动 成的，则侧支可逐渐扩张， 脉阻塞是缓慢形 成的，则侧支可逐渐扩张，并可建立新 的侧支循环，起代偿的作用。 的侧支循环，起代偿的作用。左冠状动脉为最大冠状动脉 分支.主要供应左心室前壁和侧壁 主要供应左心室前壁和侧壁， 分支 主要供应左心室前壁和侧壁，其主要分支是左前降 支和左回旋支.选用结扎鼠左冠状动脉前降支中上 选用结扎鼠左冠状动脉前降支中上1／ 处 支和左回旋支 选用结扎鼠左冠状动脉前降支中上 ／3处 结扎的方法,冠状动脉突然阻塞 冠状动脉突然阻塞， 结扎的方法 冠状动脉突然阻塞，侧支循环不及起代偿的 作用.以建立稳定的、适于细胞移植治疗心肌梗死. 作用 以建立稳定的、适于细胞移植治疗心肌梗死 以建立稳定的
1. 2 试验材料和药品 : 10%水合氯醛溶液、青霉素注射液、碘伏、 水合氯醛溶液、 水合氯醛溶液 青霉素注射液、碘伏、 小动物呼吸机、心电图机、大白鼠手术板、 小动物呼吸机、心电图机、大白鼠手术板、 5ml注射器 个、7号或 号针头、眼科剪、 注射器2个 号或4号针头 注射器 号或 号针头、眼科剪、 手术灯、眼科开睑器、小镊子、小弯钳、 手术灯、眼科开睑器、小镊子、小弯钳、 缝针、缝合线(6 线 、 缝针、缝合线 - 0线)、小无菌棉签 1.3 麻醉 SD大鼠称重 两只Wistar大鼠体重各为① 大鼠称重(两只 大鼠体重各为① 大鼠称重 两只 大鼠体重各为 290g及②360g), ① 号鼠腹腔注射乌拉坦 及 1.45ml②号鼠腹腔注射 10%水合氯醛 水合氯醛1ml。 ② 水合氯醛 。
2 检测指标
2.1 术前和术中做的心电图 2.2 组织病理学检查 开胸结扎冠状动脉后1d、 及 分批处死 开胸结扎冠状动脉后 、2d及3 d分批处死 实验鼠。取其心脏， 实验鼠。取其心脏，沿心脏纵轴剖开左右 心室， 心室，用10％福尔马林溶液固定 h，然 ％福尔马林溶液固定24 ， 后垂直于心脏纵轴从心尖部至心底部分别 横切4个切面 石蜡包埋，连续5 个切面， 横切 个切面，石蜡包埋，连续 um厚度切 厚度切 染色， 片，HE染色，观察左室壁心肌组织的病理 染色 变化，确定心肌梗死的存在。 变化，确定心肌梗死的存在。
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甲状软骨下缘
1.5开胸及冠状动脉结扎 开胸及冠状动脉结扎 心前区域剃毛, 在心脏搏动最明显处,第三肋间隙 心前区域剃毛 在心脏搏动最明显处 第三肋间隙 水平开胸,皮肤切口约 皮肤切口约1. ～ 水平开胸 皮肤切口约 5～2. 0 cm,逐层钝性分 逐层钝性分 离肌肉至胸膜。剪开胸膜,用眼科开睑器撑开肋间 离肌肉至胸膜。剪开胸膜 用眼科开睑器撑开肋间 肌切口,以无菌棉球向下压迫左肺以保护肺脏剪开 肌切口 以无菌棉球向下压迫左肺以保护肺脏剪开 心包,用无菌棉签推开左心耳 用无菌棉签推开左心耳。 心包 用无菌棉签推开左心耳。在左心耳下距主动 脉根部2～ 线穿过一小束心肌,并 脉根部 ～3 mm处,用6 - 0线穿过一小束心肌 并 处用 线穿过一小束心肌 结扎。 结扎后左室壁变苍白 结扎后左室壁变苍白,并出现室壁运动减 结扎。(1)结扎后左室壁变苍白 并出现室壁运动减 术中结扎成功标识:心电监护见 导联大鼠 弱。(2)术中结扎成功标识 心电监护见 导联大鼠 术中结扎成功标识 心电监护见II导联 于结扎冠状动脉后QRS波峰降低，J点上移，ST 波峰降低， 点上移 点上移， 于结扎冠状动脉后 波峰降低 段明显抬高.证明心肌缺血存在心肌梗死 证明心肌缺血存在心肌梗死（ 段明显抬高 证明心肌缺血存在心肌梗死（证明结 扎成功，心电图于结扎前与结扎后的心电图改变, 扎成功，心电图于结扎前与结扎后的心电图改变 排除手术操作造成人为性大鼠心肌缺血） 排除手术操作造成人为性大鼠心肌缺血） 。然后 加大通气量,充分使肺复涨 并清理胸腔。 充分使肺复涨,并清理胸腔 加大通气量 充分使肺复涨 并清理胸腔。