急性大鼠心肌梗死实验模型的制备(课堂PPT)
急性大鼠心肌梗死实验模型的制备
急性大鼠心肌梗死实验模型的制备
陈红霞;高英茂;邴鲁军
【期刊名称】《中国组织化学与细胞化学杂志》
【年(卷),期】2005(014)001
【摘要】目的建立一种稳定可重复的急性心肌梗死动物模型.方法 Wistar大鼠经戊巴比妥钠麻醉后,气管切开插管,连通呼吸机,开胸后结扎左冠状动脉前降支.4周后取出心脏做病理组织学和心肌特异性肌钙蛋白T免疫组织化学染色检测.结果成功制备心肌梗死动物模型,并进行了病理组织学和免疫组织化学染色证实.结论本文建立的实验方法操作简单,成功率高,结果可靠.
【总页数】4页(P70-73)
【作者】陈红霞;高英茂;邴鲁军
【作者单位】山东大学医学院组织胚胎学教研室,济南,250012;山东大学医学院组织胚胎学教研室,济南,250012;山东大学医学院组织胚胎学教研室,济南,250012【正文语种】中文
【中图分类】R541
【相关文献】
1."血瘀证"下急性心肌梗死模型与单纯急性心肌梗死模型大鼠心肌形态学、心肌酶学及血液流变学变化的比较 [J], 王佳;曲绍眷;于晓风;周金影;睢大筼
2."血瘀证"下急性心肌梗死模型与单纯急性心肌梗死模型大鼠心脏血流动力学及心电图变化的比较 [J], 于晓风;王佳;曲绍春;周金影;西月;睢大筼
3."血瘀证"下急性心肌梗死模型与单纯急性心肌梗死模型大鼠血液生化学比较 [J],
曲绍春;于晓风;王佳;周金影;谢昊霖;睢大筼
4.大鼠急性心肌梗死模型制备及对心功能影响的实验研究 [J], 侯春丽;张冬梅;侯学红;杨少军
5.大鼠急性心肌梗死模型制备方法研究进展 [J], 曹珏;李贻奎;陈孟倩;姚魁武
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大鼠急性心肌梗死模型的制备
实验流程: 1、麻醉动物 2、建立人工气道,机械通气 3、开胸,暴露心脏,结扎左冠状动脉 4、心电图验证损伤电流,确认心肌梗死 5、关胸,抗感染处理 6、附加实验,可练习制备心动过缓模型
实验步骤:
大鼠称重后用戊巴比妥钠溶液(30 mg/kg)或水合氯醛(300 mg/kg) 腹腔注射,麻醉后仰卧固定于手术 台板上。手术野皮肤去毛,碘酒、 酒精消毒,铺消毒巾。同时连心电 图机,用肢体导联进行心电图监测。
实验步骤:
迅速将心脏复位,逐层缝合;
最后一针先穿针打虚结,通过此间隙用注射器 抽出胸腔内气体,恢复胸腔负压后关胸。 待动物苏醒后拔除气管插管,以7/0 无损伤逢 合针将切口处相邻两个气管软骨环拉拢后闭合 气管。(如为经口腔插管则不需缝合。) 术后每天肌肉注射青霉素80万U,预防感染3 d。
关键要点: ① 剪开心包,挤压右侧胸腔使心脏暴露于 胸腔外,或用小药匙将心脏小心移出胸腔。 ② 以左冠状静脉主干为标志,于左心耳根 Байду номын сангаас下方2mm处进针,在肺动脉圆锥旁出针。 观察心电图,待其稳定后双重结扎前降支。 此后的心电图变化才能说明冠脉结扎情况。
附加实验——大鼠缓慢心率模型制备
结扎冠脉成功后,可不关胸,继续进行缓慢 心率模型制备练习 实验方法:
用棉签蘸40%甲醛,于上腔静脉根部与右 房交界处,接触1min,损伤窦房结,观察 心电图,如出现心率减慢,提示模型成功, 其余关胸步骤同前。
(因心梗可出现缓慢心率,此结果判定不排 除是心肌梗死引起的,仅供练习。)
实验步骤: 颈部正中切开气管并插管,用动物 人工呼吸机进行人工呼吸;潮气量 30 ml/kg,机械通气频率60-70次 /min。 人工呼吸下,在胸骨左缘扪及心脏 搏动处纵行切开皮肤约3 cm,逐层 分离皮下组织、肌肉,于第4肋间开 胸,剪开心包,暴露心脏、血管。
急性大鼠心肌梗死实验模型的制备共21页
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61、奢侈是舒适的,否则就不是奢侈 。——CocoCha nel 62、少而好学,如日出之阳;壮而好学 ,如日 中之光 ;志而 好学, 如炳烛 之光。 ——刘 向 63、三军可夺帅也,匹夫不可夺志也。 ——孔 丘 64、人生就是学校。在那里,与其说好 的教师 是幸福 ,不如 说好的 教师是 不幸。 ——海 贝尔 65、接受挑战,就可以享受胜利的喜悦 。——杰纳勒 尔·乔治·S·巴顿
急Hale Waihona Puke 大鼠心肌梗死实验模型的制备16、自己选择的路、跪着也要把它走 完。 17、一般情况下)不想三年以后的事, 只想现 在的事 。现在 有成就 ,以后 才能更 辉煌。
18、敢于向黑暗宣战的人,心里必须 充满光 明。 19、学习的关键--重复。
20、懦弱的人只会裹足不前,莽撞的 人只能 引为烧 身,只 有真正 勇敢的 人才能 所向披 靡。
大鼠心肌梗死动物模型的制备
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大鼠急性心肌梗死动物模型的建立和评估-最新文档资料
大鼠急性心肌梗死动物模型的建立和评估1 对象与方法?1. 1研究对象清洁级雄性Spreague-Dawley (SC)大鼠20 只,体质量250〜300 g (275± 15. 3) g,由广州中医药大学实验动物中心提供。
随机分为假手术组和心肌梗死组。
1 .2 研究方法?1 . 2. 1 MI 模型的建立[2-3] 氯胺酮( 75 mg/kg )腹腔注射麻醉,经口人工呼吸(导管置于大鼠的舌体与上颌之间),连接小动物呼吸机予以正压通气,潮气量3〜5 ml/100 g ,呼吸频率60次/min,吸呼比1? : ?1。
左侧胸部备皮,消毒手术区域,经胸骨左缘第4 肋间开胸,钝性分离肌肉,以眼科开睑器撑开肋间肌切口,暴露心脏,剪开心包,于肺动脉圆锥与左心耳之间距主动脉根部2~3 mm处,用7-0眼科无创缝合针,穿过前降支深部连同一小束心肌一并结扎。
根据心电图和心肌组织颜色确定冠脉结扎成功。
逐层缝合胸壁,自主呼吸恢复后拔出通气导管。
大鼠清醒后送动物房饲养,规律照明,自由进食和饮水。
术后连续3 d 予以青霉素40 万U 腹腔注射以预防感染。
假手术对照组除不结扎冠状动脉外,其余步骤相同。
1. 2. 2 超声心动图检查[4]3% 戊巴比妥钠( 45 mg/kg )腹腔注射麻醉,用Philips Sonos 5500型多功能超声诊断仪( S12探头,频率5~12 MHz),在胸骨旁以二维超声和M型超声测量左室收缩末径(LVSd、左室舒张末径(LVDd、舒张期左室后壁厚度(PWd、舒张期左室前壁厚度(AWd Ml组为梗死区室壁厚度)、左室射血分数(LVEF和短轴缩短率(FS),分别计算梗死区变薄指数(BBZS即舒张期左室前壁厚度/后壁厚度)和非梗死区增厚指数(ZHZS即舒张期左室后壁厚度/前壁厚度)。
所有参数均在3 个连续的心动周期中进行测量并取平均值。
1.2.3 血流动力学检查[5]3%戊巴比妥钠(45mg/kg)腹腔注射麻醉,气管切开插管,保持呼吸道通畅。
大鼠心肌梗塞模型
大鼠心肌梗塞模型
大鼠:用3%戊巴比妥钠(30mg/kg)行腹腔注射麻醉,麻醉满意后置于手术台,四肢及头部仰卧固定于手术台上,四肢皮下连接心电图电极,记录标准Ⅱ导联心电图,颈部皮肤备皮消毒,胸骨上窝上正中切开皮肤0.5cm,向上钝性分离推开下颌下腺,剪除气管前肌肉,使气管在没有任何拉钩牵引的情况下能充分显露,彻底止血后于第2~3气管环间行气管横行切开,注意不要切断气管软骨环,切口长度不超过气管周径的1/3,擦干其内分泌物后插入气管插管,深度为0.5~1cm。
连接空气呼吸机进行人工控制呼吸,呼吸频率90次/min,潮气量10~12ml,呼吸比设为1:1。
左前胸去毛,消毒铺巾,顺肋间隙方向于胸骨左旁第3~4肋间切开皮肤,长约1cm,逐层分离皮下组织、肌肉,于2~3肋骨间撑开进胸,向右上方推开胸腺,可暴露心脏及大血管根部,切开心包,轻挤大鼠胸廓,将心脏挤出,有部分动物在左心耳下缘与肺动脉圆锥间可以看见左冠脉前降支起始部,线缝针的进针深度控制在0.1cm,宽度为0.1~0.2cm;回纳心脏入胸廓,待动物的数十次心动周期后,收线打结;观察数分钟后,彻底止血后逐层关胸。
关胸过程中于切口内放置排气管,关胸毕,抽空胸腔积气后拨除。
恢复大鼠自主呼吸,拨出气管内插管,清除气管内分泌物,气管切口及颈部切口开放,不作缝合。
手术过程中分开胸后、缝针后、结扎后和关胸后四个点记录心电图变化;合格动物2周及6周后均复查心电图。
以上手术均在严格无菌条件下进行。
术后肌内注射青霉素钠2×10U/d,连续5d抗感染。
大鼠心肌梗死模型建立方法选择及心电图表现
檵檵檵檵殝
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中国实验动物学报 2011 年 12 月第 19 卷第 6 期
Acta Lab Anim Sci Sin , December , 2011 , Vol. 19. No. 6
spectively. There was no myocardial infarction and the survival rate was 100% in the sham operation group. ECG : QRS-T wave displayed an intersection “M ” shape in the sham group and before left coronary artery ligation. The R wave and T wave fused into one large tent-like single wave after the left coronary artery ligation ,and without visible ST segment. Histopathological changes of myocardial infarction were seen at 4 weeks after operation. Conclusions tip ,and all ECG showed no visible ST segment in the rats. 【Key words 】 Rat ; Model ,myocardial infarction ; Electrocardiogram It is a novel method to establish myocardial infarct model that the suture is placed about 2 mm distal to the horizontal line of left atrial appendage
大鼠心梗模型goodppt课件
Pfu/ml:plaque forming unit/ml,噬斑形成 单位,指每毫升试样中所含有的具有侵染 性的噬菌体数 当噬菌体裂解平板培养基上 细菌后,就形成一个空斑,计为一个 plaque
TTC染色法
• 并行TTC染色进行心肌梗死范围的测定。TTC染色法:在 体动物模型灌注结束后,结扎冠状动脉,左心室注入2-3 %Evans蓝2-3ml,确定未缺血心肌(呈蓝色)和缺血心肌 (无蓝色)。分离缺血区和非缺血区并以滤纸吸干,置于 天平上称重,将缺血区心室肌以平行于房室沟的方向切成 7-8片,每片厚1-2mm,置入1%氯化三苯基四氮唑(TTC )磷酸盐缓冲液(PH 7.4)中37℃水浴10-15min。缺血 危险区因脱氢酶还原TTC而呈红色,梗死区因脱氢酶流失 而呈白色,将梗死区和非梗死区分离并分别称重,梗死范 围以梗死心肌占缺血心肌重量的百分比表示。
给药
• 实验兔称重 ,硫责妥钠 ;30mg/kg静脉麻醉,免仰卧位固定于手术台上 ,Maclab/8s多功能生理仪行心电监护。常规备皮、消毒,无菌条件下行 胸正中切口,沿胸骨正中将胸骨切开,暴露心脏,保持两侧胸膜完整无破 损,小心提起心包并剪开,可见与左冠状动脉前降支(LAD)相伴行的心大 静脉,LAD走行于心大静脉深方 ,表面覆盖薄层心肌 ,肉眼不易见 。
• 关胸过程中于切口内放置排气管(用小儿头 皮针的软管自制),关胸毕,抽空胸腔积气 后拨除。
• 试停呼吸机,大鼠恢复自主呼吸后,拨出 气管插管,充分清除气管内分泌物。
• 根据文献[l”一]和本实验室条件建立模型:健康成年雄性sD大鼠,体重 200一2509,术前禁食12h,不禁饮。3%戊巴比妥钠30m叭g腹腔注 射麻醉大鼠,起效后仰卧位固定于鼠板。用0号婴儿喉镜片经口气管 插管,插入16G静脉留置针,接小动物呼吸机控制呼吸。确定插管位 置深度正确后,口角挂线固定导管,根据血气结果,呼吸参数设定为 潮气量4一6ml,频率60一70次/分,吸呼比1:1。
大鼠急性心肌缺血模型
TECHNIC!!!
1、麻醉(腹腔注射 、麻醉 腹腔注射 腹腔注射)
• 下腹部腹中线稍向左或右1mm的位置 • 以45度角刺入腹肌,可觉抵抗力消失 • 麻药前1/3快注,后2/3缓慢注射并且观察 麻药前1/3快注, 2/3缓慢注射并且观察 1/3快注 • 动物头部放低,尾部提高 • 麻醉后心率为350-420/min
EVALUATION?
• 心脏: 结扎部位以下心肌紫绀 • ECG: II导心电图显示S-T段升高
PROCEDURE!
• • • • • • • • • 动物选择: 大鼠, 动物选择 SD大鼠,250~300g 大鼠 ~ 麻醉:乌拉坦,腹腔注射, 麻醉:乌拉坦,腹腔注射,7ml/kg 固定(把舌头往侧边拉出) 固定(把舌头往侧边拉出) 记录心电图(麻醉后心率控制在350 420/min) 350记录心电图(麻醉后心率控制在350-420/min) 气管插管 上呼吸机 通气量: 视不同型号呼吸机有所调整) 通气量:40ml (视不同型号呼吸机有所调整) 频率: 频率:70 呼吸比 1:1
TECHNIC!!!
2、心电图 、
(cont.)
• 进针部位:右手:白;左腿:红;右腿:黑 • 进针手法:用左手提起肢体皮肤,右手皮下 进针手法: 进针(切勿插入肌肉,避免肌电干扰) (切勿插入肌肉,避免肌电干扰) • 记录Ⅱ导联 Ⅱ导联心电图 • 调整参数,最佳显示
TECHNIC!!!
(cont.)
• 3、气管插管: • 喉结到胸骨切口,正中线部位开始钝 喉结到胸骨切口, 性分离肌肉; 性分离肌肉; • 打结技术! 打结技术! • 4、上呼吸机: • 确认管道通畅、检查潮气量、监控心 确认管道通畅、检查潮气量、 电图
TECHNIC!!!
大鼠冠心病心肌梗死模型制备的新方法
大鼠冠心病心肌梗死模型制备的新方法张世田;庞路路;冯悦;宁晚玲;黄岑汉;王露瑶;黄小珊;唐汉庆【摘要】目的通过结扎大鼠左心室回旋支末梢血管,探索一种制作大鼠心肌梗死模型的新方法.方法将90只SD大鼠随机分为对照组(10只)和模型组(80只),大鼠经腹腔注射10%水合氯醛麻醉后,颈部行气管切开插管术,呼吸机维持呼吸.对照组只开胸不结扎;模型组开胸结扎左心室回旋支末梢血管,术后笼中饲养4周,观察大鼠形态、行为学、呼吸改变,心电图、梗死心肌表现,组织病理学HE切片,并对其成活率进行统计,描述模型制作成功的标准.结果经过上述方法造模后,模型组大鼠形态、行为学、呼吸改变符合冠心病心力衰竭特征,心电图表现符合冠心病心肌梗死的动态演变过程,梗死心肌表现符合心肌梗死室壁瘤特征,组织病理HE染色示心肌坏死符合冠心病心肌梗死特征.且术后成活率(即造模成功率)达到83.75%,各项指标符合临床冠心病心肌梗死标准.结论结扎大鼠左心室回旋支末梢制作大鼠心肌梗死模型,方法简单、稳定快速,造模成功率高、可控性好,与临床冠心病心肌梗死相似度高,是一种理想的造模新方法.【期刊名称】《右江民族医学院学报》【年(卷),期】2017(039)003【总页数】4页(P179-182)【关键词】大鼠;心肌梗死;模型,动物;左心室回旋支【作者】张世田;庞路路;冯悦;宁晚玲;黄岑汉;王露瑶;黄小珊;唐汉庆【作者单位】右江民族医学院,广西百色 533000;广西中医药大学,广西南宁530200;广西中医药大学,广西南宁 530200;广西中医药大学,广西南宁 530200;右江民族医学院,广西百色 533000;右江民族医学院,广西百色 533000;广西中医药大学,广西南宁 530200;右江民族医学院,广西百色 533000【正文语种】中文【中图分类】R542.2+2大鼠心肌梗死模型是研究冠心病心肌梗死发病机制及相关药物药理作用的常用动物疾病模型,结扎大鼠左冠状动脉前降支造模是许多文献记载比较多的一种手术方法[1],但经解剖多只大鼠发现,左心室回旋支与前降支相比,其走行明显,左心末梢分支分布广泛,变异小,此处结扎便于操作、可控性好,我们在既往大鼠心肌梗死模型制作的基础上简化操作步骤,采用结扎大鼠左心室回旋支末梢血管来制作心肌梗死模型,通过分析观察相关指标,与临床冠心病心肌梗死相比较,判定该模型的制作效果,探索制作大鼠心肌梗死模型的新方法。
急性大鼠心肌梗死实验模型的制备ppt课件
3 结果讨论 两只实验鼠死亡原因讨论: ①号实验鼠在结扎冠状动脉时心脏停止跳动死亡 ②号实验鼠在关闭胸腔时呼吸停止死亡 考虑以下可能原因: ⑴. 鼠龄过大,适应手术能力较适龄鼠差,多篇文 献提出实验鼠体重以250 ±25 g 为宜,本次实验 鼠体重分别为① 290g及②360g;
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⑵. 实验鼠体重较实验前预期的要重,麻醉剂 有使用过量的可能,实验鼠术中出现呼吸 抑制;
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1.7 术后抗感染及护理 大鼠本身具有比较强的抗感染能力,但是 预防感染有利于促进术后恢复,并且良好 的术后护理可以提高动物模型的生存率。 因此,术前所用手术器械均要用75%酒精 浸泡消毒。术后腹腔注射青霉素80万U。待 大鼠麻醉清醒后即可与其糖水和饲料,无 须禁食。术后可适量补充能量。冬天应注 意保嗳。
⑺. 呼吸机频率和潮气量没有掌握好; ⑻. 时值冬季,气温较低,手术操作时间较长,
开胸后实验鼠体温丧失较大,存在低体温、 手术和麻醉多重打击。
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大鼠心肌梗死实验模型的制备
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背景
有关心肌梗死模型的制作,国内外采用结扎、 药物、冷冻、栓塞、电凝等方法制作兔、大鼠、 狗等不同动物的心肌梗死模型,但大多数学者认 为结扎法复制的心肌梗死模型与心肌梗死实际发 病过程更符合。
由于临床大多心肌缺血或心肌梗死都是一渐 进性过程,会不断发生缺血或梗死后再灌现象。 而冠状动脉结扎法能人为地仿造临床心肌梗死过 程的冠状动脉梗死,其梗死部位、分布范围相对 一致,病理生理、生化改变与临床心肌梗死更相 似。
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1. 2 试验材料和药品 : 10%水合氯醛溶液、青霉素注射液、碘伏、 小动物呼吸机、心电图机、大白鼠手术板、 5ml注射器2个、7号或4号针头、眼科剪、 手术灯、眼科开睑器、小镊子、小弯钳、 缝针、缝合线(6 - 0线)、小无菌棉签
大鼠心肌梗死模型图解
大鼠心肌梗死模型制作图解庄瑜制作南京市第一医院南京医科大学附属南京第一医院南京市心血管病医院心胸外科/制作前准备1.器械:动物呼吸机,开胸制作心梗模型,维持呼吸至关重要。
虽然据说某些牛人可以不用呼吸机,但是我想这是经验积累的结果,开始时必然要用;况且需要看此说明的人应该没有牛到这个程度。
当然,如果你经费异常充足,不在乎死亡成千上万的大鼠也可以。
显微器械,最主要的是针持,大鼠胸腔、心脏均很小,常规器械无法进入胸腔缝扎。
其他手术器械以眼科器械为主。
2.动物:应选择成年健康大鼠,耐受性较好。
最重要的是要充分利用每一只动物,包括死亡的大鼠。
许多人都知道制作大鼠模型需要多练习,但是练习不是买一大批大鼠,不停地缝扎,然后不停地扔掉死的大鼠;当然,制作心梗模型死亡一些大鼠是很正常的事情。
练习的前提是对大鼠解剖及操作过程的熟悉,如果可能的话,最好先找一份大鼠的解剖图谱,熟悉手术区域的解剖结构;同时研究实验流程,熟悉每一个实验步骤。
大鼠死亡后,不要急着扔掉,利用它练习每一个你不熟悉的操作步骤,直到熟练为止。
3.实验者:实验者必须具有一种平和的、耐得住寂寞的心态,制作模型需要时间,尤其是早期,需要耐心、仔细的摸索;必须对每一个步骤进行认真地研究。
最熟练的制作者做一只大鼠模型也需要30到40分钟的时间,加上准备及扫尾的时间,制作十只模型就需要一天的时间,如果你废寝忘食多用用功也可能做到15只左右,这样一天下来腰酸背痛是必然的,你能坚持多久?不熟练的话,一只就要两、三个小时;同时还要看着大鼠在你的手中死亡,这是很揪心的事情。
因此,实验者必须具备良好的心态,急于求成、难耐寂寞者不适合做此实验。
本人系气管切开插管,缝扎LAD制作模型。
亦有人经口插管,液氮冷冻制作模型;不在本人讨论范围之内,哪位有经验的话可以传上来,一起讨论。
最后祝各位早日成功!!导师简介陈 鑫 主任医师、教授,1963年2月出生于江苏靖江,1985年毕业于南京铁道医学院,同年进入南京市第一医院工作,1993年2月获南京医科大学硕士研究生学位,1993.3 - 1994.2至 Ocala Heart Institute, Ocala, FL, USA.学习,回国后从事心胸血管外科的临床、科研及教学工作,1999年成为南京医科大学硕士研究生导师,培养多名专业人才。
建模方法与步骤1
大鼠急性心梗模型的制作一. 材料和器材:1. 实验用鼠:大鼠 雄性 200g-250g2. 药物: (稀释: 1:3)麻醉药: 盐酸氯氨酮, 安定; 阿托品。
3. 器材:手术照明 大鼠固定板(固定线或皮筋5根) 手术洞巾2块 开睑器1 大号弯剪1 持针器1 显微持针器1 血管钳1 眼科弯镊2 皮镊1 眼科剪(直剪,弯剪各1) 手术刀1 培养皿2 小号圆针/三角针若干 动物呼吸机(潮气量指数并非真实数目,要根据手术时情况决定,本文中给出的潮气量为本人实验采用的,仅供参考)4. 耗材:非吸收性外科缝线(3/0) 经纬恩线 5/0 碘伏 针管(1ml,2ml,10ml) 无菌纱布 无菌棉球 无菌胶布手套 生理盐水和5%GNS 若干二.手术步骤:1. 电子秤秤量大鼠体重,计算药物剂量:氯氨酮 65-75mg/kg; 安定2-3mg/kg;阿托品 0.1-0.2mg/kg2. 麻醉:盐酸氯氨酮加安定复合麻醉,腹腔注射。
3. 固定,备皮,消毒,铺巾:固定不应过紧,备皮用大号弯剪,剪时保持皮肤紧绷,后碘伏消毒, 铺洞巾。
4. 气管切开,插管:①斜剪静针软管备插管用。
②选喉结与锁骨上窝间,沿前颈正中线下方剪开约1.0cm -1.5cm,钝性分离皮下, 从颌下腺下缘分离,显露气管前肌群,钝性 分离胸骨舌骨肌,显露气管下段,弯镊钝性分离气管旁软组织,后带线穿行,尽量不伤及气管两侧甲状腺动脉。
剪开气管环间半周。
③弯镊夹软管行插管,插入气管约1cm,打结固定。
④调整指数,接呼吸机:呼吸频率 70-73 次/分 潮气量 9-18ml 呼吸比 1:1。
5. 开胸:选胸骨旁纵行切口约2.5cm-3.0cm,充分显露胸大肌,分离胸大肌与前锯肌,缝针固定胸大肌于皮肤;分离前锯肌,缝针固定于皮肤;减潮气量至扩大切口至恰好放置开睑器,撑开。
―― 不要为了暴露清楚,肆意的扩大肋间切口,因为1、创伤大,2.加大关胸难度。
6.缝扎LAD:* 大鼠心脏(如左图示)(1)暴露:观察心脏搏动和胸壁活动――如有自主呼吸,应调整麻醉深度。
异丙肾上腺素诱导大鼠急性心肌梗死模型的制作
Model of Acute Myocardial Infarction Induced by Isoproterenol in Rats
WANG Juan-juan1, CHEN Feng-ying2*
摘要:目的 探讨异丙肾上腺素诱导大鼠心肌梗死模型的制作方法。方法 48 只雄性 wistar 大鼠,心肌梗死模型组大鼠皮下注射异丙肾上 腺素(ISO)150mg·kg-1.d-1,间隔 24 小时,连续 2 天。对照组同法皮下注射等量的生理盐水,连续 2 天。在第 2 次皮下注射异丙肾上腺素 24 小时后监测心电图,大鼠麻醉后分别记录大鼠注药前、注药后同步六导(肢体导联)心电图,测量心率,观察 Q 波及 ST 段偏移的程度,成模 后处死大鼠,取出心脏,并进行 HE 染色后于显微镜下观察其病理变化。结果 此法制作心梗模型的成功率为 100%,动物存活率为 80% 以上。 梗死心肌处发白、变薄,心脏明显扩大,部分大鼠肺淤血明显。HE 染色心梗组心肌细胞包膜不完整,心肌纤维增粗、变长、排列紊乱、间隙增宽, 细胞核数量减少,细胞核大而深染,可见炎症细胞浸润。结论 本实验制作心梗模型的方法确切有效、简单易行。而且本实验建立的心肌梗死 模型可进一步用于急性心力衰竭机制和治疗方面的研究 , 对相关领域研究起到参考作用。 关键词:心肌梗死;异丙肾上腺素;动物模型;大鼠 中图分类号:R542.2 文献标识码:A DOI: 10.19613/ki.1671-3141.2019.12.006
(1.Inner Mongolia Medical University, Huhhot Inner Mongolia; 2.the Affiliated Hospital of Inner Mongolia Medical University, Huhhot Inner Mongolia)
大鼠心肌梗塞
大鼠心肌梗死模型制作图解(图)(一)制作前准备1、器械:动物呼吸机。
开胸制作心梗模型,维持呼吸至关重要。
虽然据说某些牛人可以不用呼吸机,但是我想这是经验积累的结果,开始时必然要用;况且需要看此说明的人应该没有牛到这个程度。
当然,如果你经费异常充足,不在乎死亡成千上万的大鼠也可以。
显微器械,最主要的是针持,大鼠胸腔、心脏均很小,常规器械无法进入胸腔缝扎。
其他手术器械以眼科器械为主。
2、动物:应选择成年健康大鼠,耐受性较好。
最重要的是要充分利用每一只动物,包括死亡的大鼠。
许多人都知道制作大鼠模型需要多练习,但是练习不是买一大批大鼠,不停地缝扎,然后不停地扔掉死的大鼠;当然,制作心梗模型死亡一些大鼠是很正常的事情。
练习的前提是对大鼠解剖及操作过程的熟悉,如果可能的话,最好先找一份大鼠的解剖图谱,熟悉手术区域的解剖结构;同时研究实验流程,熟悉每一个实验步骤。
大鼠死亡后,不要急着扔掉,利用它练习每一个你不熟悉的操作步骤,直到熟练为止。
3、实验者:实验者必须具有一种平和的、耐得住寂寞的心态,制作模型需要时间,尤其是早期,需要耐心、仔细的摸索;必须对每一个步骤进行认真地研究。
最熟练的制作者做一只大鼠模型也需要30到40分钟的时间,加上准备及扫尾的时间,制作十只模型就需要一天的时间,如果你废寝忘食多用用功也可能做到15只左右,这样一天下来腰酸背痛是必然的,你能坚持多久?不熟练的话,一只就要两、三个小时;同时还要看着大鼠在你的手中死亡,这是很揪心的事情。
因此,实验者必须具备良好的心态,急于求成、难耐寂寞者不适合做此实验。
本文系气管切开插管,缝扎LAD制作模型。
亦有经口插管,液氮冷冻制作模型。
(二)制作步骤1、电子秤称量大鼠体重2、提起大鼠尾巴,置入小笼中。
3、倒出适量乙醚于纱布上,置入鼠笼内,盖紧笼盖。
4、待大鼠麻醉后取出,补充氯胺酮75~100mg/kg(ip)持续麻醉;阿托品20~30μg/kg腹腔注射,减少气道分泌物。
大鼠急性心肌缺血模型制备详细图解
模型的背景,心肌缺血模型分全心缺血和左心室缺血两种,全心缺血主要靠注射药物(如异丙肾上腺素等),左心室缺血主要靠手术对动物的冠状动脉左降支进行紧扎实现。
由于左心室缺血对临床的意义更大,所以研究心肌缺血药物时这个模型是必须的。
(1)术前12小时给动物禁食(2)将动物注射10%水合氯醛(0.4mL/100g)麻醉后固定在手术台上(3)用笔型静脉置留针进行气管插管,插好后可用手术刀柄靠近气管,如果见气雾,就证明成功,连接动物呼吸机,参数为:呼吸频率85;呼吸比1:1;潮气量为18ml(4)胸部被毛、酒精棉消毒,在胸部左侧3~4肋间剪开皮肤,如图1(5)分离肌肉露出肋骨,切口位置有两块肌肉,胸浅肌和胸深肌,注意按照肌肉的纹路分离可以避免将肌肉扯烂,如图2(6)在第三根肋骨下用止血钳将肌肉分离开,然后左手用止血钳挑住肋骨,右手持剪刀剪开第三根肋骨,如图3(7)用止血钳将剪断的肋骨夹住掰开,放入开睑器,用止血钳剥离心包膜,如图4(8)用止血钳将胸腺(心脏上面白的像脂肪一样的东西)夹住拉出,如图5(9)在左心耳与肺动脉圆锥间穿6~0号线,拉紧丝线,形成心肌缺血,观察线扎紧的部位上下大约2mm范围的心肌是发白色的,如图6(10)闭合胸腔,注意将胸腔内的空气挤出(这点非常关键,这个模型最容易失败导致大鼠死亡的就是这个地方),对肌肉和皮进行缝合,挤空气的手法如图7(11)结扎术后6小时可进行TTC染色:将大鼠脱颈处死,打开胸腔,将心脏剪下,用生理盐水将心脏清洗干净并排出心脏内的淤血,沿冠状沟将心房切除留下心室,用刀片将心脏切成1mm厚的切片,放入0.1%的TTC磷酸盐缓冲液(pH 7.4)37℃水浴7~10分钟,取出切片用生理盐水冲洗数次,观察结果。
非梗死区因脱氢酶还原TTC而呈红色,梗死区因脱氢酶流失而呈白色,将梗死区和非梗死区分离并分别称重,梗死范围以梗死心肌占缺血心肌重量的百分比表示。
下图是染色的结果,图8结扎位置,梗死的地方其实肉眼大致能看出,和其他地方相比发白,图9:下面再发正常大鼠和梗死大鼠的心电图区别,是用的PowerLab做的,正常的如下22小时后的心电。
大鼠心梗模型
• 试停呼吸机,大鼠恢复自主呼吸后,拨出 气管插管,充分清除气管内分泌物。
• 根据文献[l”一]和本实验室条件建立模型:健康成年雄性sD大鼠,体重 200一2509,术前禁食12h,不禁饮。3%戊巴比妥钠30m叭g腹腔注 射麻醉大鼠,起效后仰卧位固定于鼠板。用0号婴儿喉镜片经口气管 插管,插入16G静脉留置针,接小动物呼吸机控制呼吸。确定插管位 置深度正确后,口角挂线固定导管,根据血气结果,呼吸参数设定为 潮气量4一6ml,频率60一70次/分,吸呼比1:1。
• 备皮,消毒,铺单后,在左侧腋下和剑突连线偏上Icm做一斜切口, 长度约为2.scm,以心脏搏动最强点为中心。依次钝性分离深浅筋膜 、胸大肌、前锯肌,显露肋骨,可见心脏暗影。
• 将皮肤与各层肌肉做一个荷包缝合备用。充分止血后,由第3、4肋间 入胸(心搏最强点偏上一肋),钝性分离肋间肌,分离肋间肌范围应适 当,不能太接近胸骨以免造成大出血。
• 待大鼠出现吞咽动作时,拔除气管插管。 术毕肌肉注射青霉素10
• 活体取出心脏,迅速取材,去除左、右心 房及右心室,冲洗后4%多聚甲醛溶液固定 ,沿左室长轴由心尖至心底做厚切片,将 左室分为6片,石蜡包埋切片
• 用6一OProlene线缝针在距左心耳下缘 1mm处,左冠状静脉主干附近的室间沟内 ,将LAD连同少量心肌组织一起缝扎,进针 深度控制在1~2mm,宽度为2~3mm
• 用0号婴儿喉镜片经口气管插管,插入16G 静脉留置针,接小动物呼吸机控制呼吸。
• 动物的选则: 健康雄性SD大鼠,建议使用250g左右体重的,耐受力强。而且小一点的胸壁较薄,开胸容易。 麻醉: 我用的是10% 水合氯醛,感觉效果还不错,20分钟左右待大鼠呼吸平稳即可手术,2~3个小时后苏醒。剂量 0.4~0.45ml/100g体重,这个也有个体差异,要大家自己摸索一下。 这里给大家一些建议:1.麻药刚发挥作用的时候大鼠状态不平稳,这时候不要急于作手术,多观察一会儿。2. 麻醉程度宜浅不易深,如果麻药打浅了,只要大鼠没有过分挣扎,可适当局麻,千万不可反复补麻药,我的经 验这样的情况即使手术成功大鼠也活不长。 关于呼吸: 这是关系到手术成功与否的最主要因素。麻醉药会使大鼠呼吸道产生分泌物,我一般都是在麻醉大鼠后腹腔注 射阿托品0.1mg/只,但据我观察我们学校动物中心的大鼠分泌物不多,不用药也行,曾经买过河南一批大鼠, 分泌物极多,必须用药。 气管插管我用的是临床上的静脉输液套管针,创伤小,目前术后没发生过呼吸道感染情况。 关于呼吸机: 我也用过江西特力公司的小动物呼吸机,但发现不太适用于大鼠这样的小动物,潮气量的调节非常粗略,不好 控制。现在我用的是我们学校自己生产的呼吸机,其实就是一个简易的空气泵,我自己又改装了一下,现在是 医用氧和空气的混合气,呼吸频率60/分钟,潮气量3ml/100g。这里由于条件限制,所以潮气量是比较粗略的, 而且氧气含量也无法测量,但是据我的经验,给纯氧对大鼠的损伤比不上呼吸机还大,只要有呼吸肌支持,适 当给些氧气辅助一下,大鼠成活不成问题。 关于手术切口: 我是在胸壁正中剪开皮肤,然后在胸骨左侧1CM左右钝性分离皮下组织和肌肉,最后用血管钳撑开胸腔,助手 用自制小拉钩拉开胸壁。这样的好处是每一层的开口不在一个位置,关胸后胸腔自然就闭合,不会漏气。我是 在心脏搏动最明显处打开胸腔,一般就是从剑突向上两个肋间。 关于心包膜: 有的时候不破心包膜心脏也能挤出来,但大部分时候还是要破的,打开胸腔后会看到在心脏下方有脂肪样东西 随着心脏跳动而活动,用眼科弯镊夹起这层膜一拽心包膜就开了,这时候助手从胸部的左右压迫胸壁,术者从 腹部轻轻一压心脏就出来了。 关于结扎: 针和线都是以前的师兄传给我的,总之是很细的那种,型号我就说不太清楚了,结扎方法也和坛子里其他人写 的一样,找到冠状静脉前降支,针穿过心肌一起结扎住,这里就不再罗嗦了。 关于感染的问题: 大鼠抗感染能力还是很强的,所以术前术中的消毒问题一般注意就行,术后抗生素在天气不热的情况下不给也 行,但是还是给些抗生素好,可以减少炎症造成的胸腔粘连。 以上是我想到的一些体会,如果有不明白的地方,愿意和大家交流。
矿产
矿产资源开发利用方案编写内容要求及审查大纲
矿产资源开发利用方案编写内容要求及《矿产资源开发利用方案》审查大纲一、概述
㈠矿区位置、隶属关系和企业性质。
如为改扩建矿山, 应说明矿山现状、
特点及存在的主要问题。
㈡编制依据
(1简述项目前期工作进展情况及与有关方面对项目的意向性协议情况。
(2 列出开发利用方案编制所依据的主要基础性资料的名称。
如经储量管理部门认定的矿区地质勘探报告、选矿试验报告、加工利用试验报告、工程地质初评资料、矿区水文资料和供水资料等。
对改、扩建矿山应有生产实际资料, 如矿山总平面现状图、矿床开拓系统图、采场现状图和主要采选设备清单等。
二、矿产品需求现状和预测
㈠该矿产在国内需求情况和市场供应情况
1、矿产品现状及加工利用趋向。
2、国内近、远期的需求量及主要销向预测。
㈡产品价格分析
1、国内矿产品价格现状。
2、矿产品价格稳定性及变化趋势。
三、矿产资源概况
㈠矿区总体概况
1、矿区总体规划情况。
2、矿区矿产资源概况。
3、该设计与矿区总体开发的关系。
㈡该设计项目的资源概况
1、矿床地质及构造特征。
2、矿床开采技术条件及水文地质条件。
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1.7 术后抗感染及护理 大鼠本身具有比较强的抗感染能力,但是 预防感染有利于促进术后恢复,并且良好 的术后护理可以提高动物模型的生存率。 因此,术前所用手术器械均要用75%酒精 浸泡消毒。术后腹腔注射青霉素80万U。待 大鼠麻醉清醒后即可与其糖水和饲料,无 须禁食。术后可适量补充能量。冬天应注 意保嗳。
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2 检测指标
2.1 术前和术中做的心电图 2.2 组织病理学检查
开胸结扎冠状动脉后1d、2d及3 d分批处死 实验鼠。取其心脏,沿心脏纵轴剖开左右 心室,用10%福尔马林溶液固定24 h,然 后垂直于心脏纵轴从心尖部至心底部分别 横切4个切面,石蜡包埋,连续5 um厚度切 片,HE染色,观察左室壁心肌组织的病理 变化,确定心肌梗死的存在。
⑶. 开睑器撑开术口压迫肺脏时间过长,可能 存在气胸肺不张造成实验鼠缺氧;
⑷. 压迫心脏时造成大血管移位扭转,重要脏 器供血不足;
⑸.术中失血过多,造成血压下降,失血性休 克;
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⑹. 结扎冠状动脉时部位未掌握好,结扎部位 过高(结扎到左主干),大鼠出现严重心 律失常乃至心跳骤停,尽管已施以胸外按 压等抢救措施,但是最终没有成功使实验 鼠复苏;
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3 结果讨论
两只实验鼠死亡原因讨论: ①号实验鼠在结扎冠状动脉时心脏停止跳动死亡 ②号实验鼠在关闭胸腔时呼吸停止死亡
考虑以下可能原因: ⑴. 鼠龄过大,适应手术能力较适龄鼠差,多篇文
献提出实验鼠体重以250 ±25 g 为宜,本次实验 鼠体重分别为① 290g及②360g;
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⑵. 实验鼠体重较实验前预期的要重,麻醉剂 有使用过量的可能,实验鼠术中出现呼吸 抑制;
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1 实验步骤和观察项目
1. 1 实验动物 健康雄性Wistar大鼠30只, 体质量250 ±25 g制作心肌梗死动物模型的 大鼠体重以200~ 250 g为宜(动物太小, 不利于操作,耐受创伤能力低;而体重及 鼠龄太大,则不利术后观察生存期,而且 麻醉剂量不好掌握,凝血功能较差,不易 止血。实验动物由广西医科大学实验中心 提供。)
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1. 4气管插管
大鼠仰卧固定于手术台上。沿颈部中线切 开皮肤,分离组织暴露气管,用7号注射针 头做为插管以45度斜进针从甲状软骨下缘 轻轻水平插入约0.7~1.5cm 斜面朝上。固 定好,气管插管,呼吸比为1:2,呼吸频率 90次/rain,潮气量14 ml/kg。关闭呼吸 机,四肢接心电图机记录术前心电图。完 毕打开呼吸机, (此时作心电图与开胸后结 扎前心电图对照,验证是否为先天变异或实 验前异常-心电图机未借到,所以心电图 未能做)
大鼠心肌梗死实验模型的制备
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背景
有关心肌梗死模型的制作,国内外采用结扎、 药物、冷冻、栓塞、电凝等方法制作兔、大鼠、 狗等不同动物的心肌梗死模型,但大多数学者认 为结扎法复制的心肌梗死模型与心肌梗死实际发 病过程更符合。
由于临床大多心肌缺血或心肌梗死都是一渐 进性过程,会不断发生缺血或梗死后再灌现象。 而冠状动脉结扎法能人为地仿造临床心肌梗死过 程的冠状动脉梗死,其梗死部位、分布范围相对 一致,病理生理、生化改变与临床心肌梗死更相 似。
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1. 2 试验材料和药品 : 10%水合氯醛溶液、青霉素注射液、碘伏、 小动物呼吸机、心电图机、大白鼠手术板、 5ml注射器2个、7号或4号针头、眼科剪、 手术灯、眼科开睑器、小镊子、小弯钳、 缝针、缝合线(6 - 0线)、小无菌棉签
1.3 麻醉 SD大鼠称重(两只Wistar大鼠体重各为① 290g及②360g), ① 号鼠腹腔注射乌拉坦 1.45ml②号鼠腹腔注射 10%水合氯醛1ml。
左心耳
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在左心耳下距主动脉根部2~3 mm处可见一粉红色细小血管
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1.6 关胸及术后处理 逐层关胸, 断开呼吸机,清理呼吸道(拔出气 管插管后应注意将大鼠舌头外提,防止舌根 后坠出现缺氧窒息)并观察大鼠呼吸,以浅 快呼吸,频率30~40次/min为宜。术后单笼 饲养。
注:手术过程中大鼠冠状动脉结扎后可能马上出 现心律失常,室性停搏或心室纤维颤动,立 即解除对心脏的挤压或同时进行心内按压可 以使心脏恢复搏动。
综上所述,结合实际操作条件,选用结扎大鼠冠 状动脉结扎的方法,以建立稳定的、适于细胞移植 治疗心肌梗死的大鼠动物模型。
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建模原理
生物体各组织器官要维持其正常的生命活动,需要心 脏不停地搏动以保证血运。而心脏作为一个泵血的肌性动 力器官,本身也需要足够的营养和能源,供给心脏营养的 血管系统,就是冠状动脉和静脉,也称冠脉循环。冠状动 脉是供给心脏血液的动脉,起于主动脉根部,行于心脏表 面。冠状静脉伴随 冠状动脉收集代谢后的静脉血,归流 于冠状静脉窦,回到右心房。正常情况下,冠状动脉 之 间,尚有丰富的吻合支或侧支。冠状动脉虽小,但血流量 很大。占心排血量的5%,这就保证了心脏有足够的营养, 维持它有力地昼夜不停地跳动。如果冠状动脉突然阻塞, 不能很快建立侧支循环,常常导致心肌梗塞。但若冠状动 脉阻塞是缓慢形 成的,则侧支可逐渐扩张,并可建立新 的侧支循环,起代偿的作用。左冠状动脉为最大冠状动脉 分支.主要供应左心室前壁和侧壁,其主要分支是左前降 支和左回旋支.选用结扎鼠左冠状动脉前降支中上1/3处 结扎的方法,冠状动脉突然阻塞,侧支循环不及起代偿的 作用.以建立稳定的、适于细胞移植治疗心肌梗死.
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甲状软骨下缘
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1.5开胸及冠状动脉结扎
心前区域剃毛, 在心脏搏动最明显处,第三肋间隙 水平开胸,皮肤切口约1. 5~2. 0 cm,逐层钝性分离 肌肉至胸膜。剪开胸膜,用眼科开睑器撑开肋间肌 切口,以无菌棉球向下压迫左肺以保护肺脏剪开心 包,用无菌棉签推开左心耳。在左心耳下距主动脉 根部2~3 mm处,用6 - 0线穿过一小束心肌,并结 扎。(1)结扎后左室壁变苍白,并出现室壁运动减弱。 (2)术中结扎成功标识:心电监护见II导联大鼠于结 扎冠状动脉后QRS波峰降低,J点上移,ST段明 显抬高.证明心肌缺血存在心肌梗死(证明结扎成 功,心电图于结扎前与结扎后的心电图改变,排除 手术操作造成人为性大鼠心肌缺血) 。然后加大 通气量,充分使肺复涨,并清理胸腔。