饲料中T-2毒素污染及快速定量检测方案--8min准确定量

合集下载

饲料霉变防控及霉菌毒素脱毒技术规范

DB41/T 2617—2024饲料霉变防控及霉菌毒素脱毒技术规范1范围本文件规定了饲料霉变防控及霉菌毒素脱毒的术语和定义、饲料霉变控制、霉变判定、霉菌毒素脱毒、效果评价及档案管理等的技术要求。

本文件适用于饲料霉变控制及脱毒。

2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。

其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T 6435饲料中水分的测定GB 13078饲料卫生标准GB/T 13092饲料中霉菌总数的测定GB/T 14699.1饲料采样GB/T 18823饲料检测结果判定的允许误差GB/T 20195动物饲料试样的制备GB/T 30956饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定免疫亲和柱净化-高效液相色谱法GB/T 30957饲料中赭曲霉毒素A的测定免疫亲和柱净化-高效液相色谱法NY/T 1970饲料中伏马毒素的测定NY/T 2071饲料中黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和T-2毒素的测定—液相色谱-串联质谱中华人民共和国农业部公告第1773号.饲料原料目录.2013年中华人民共和国农业部公告第2045号.饲料添加剂品种目录.2013年3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。

3.1饲料霉变因湿度、温度等环境因素或收获、贮存、加工、运输等过程不当，致使饲料出现霉菌和霉菌毒素污染的情况。

判定标准按照GB 13078执行。

3.2饲料脱毒采用物理、化学或者生物学方法，去除或降解饲料中霉菌毒素，以消除或降低霉菌毒素对畜禽的危.害。

3.3饲料原料粮食作物或其副产物等能够用于饲料加工生产的原料。

3.4饲料防霉剂DB41/T 2617—2024能降低饲料中微生物的数量、控制微生物的代谢和生长、抑制霉菌毒素的产生，预防饲料贮存期营养成分的损失，防止饲料发霉变质并延长贮存时间的饲料添加剂。

防霉剂品种参照《饲料添加剂品种目录》。

饲料中毒素分析化验方法

饲料中毒素分析化验方法一、毒素检测方法依据1、黄曲霉素检测依据GB/T5009.23-2006《食品中黄曲霉素B1、B2、G1、G2的测定》GB/T8381-2008《饲料中黄曲霉素B1的测定半定量薄层色谱法》2、T-2毒素检测依据GB/T23501-2009《食品中T-2毒素的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法》GB/T8381.4-2005《配合饲料中T-2毒素的测定薄层色谱法》3、玉米赤霉烯酮检测依据GB/T23504-2009《食品中玉米赤霉烯酮的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法》GB/T19540-2004《饲料中玉米赤霉烯酮的测定》4、赭曲霉毒素A检测依据GB/T23502-2009《食品中赭曲霉毒素A的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法》GB/T19539-2004《饲料中赭曲霉毒素A的测定》5、脱氧雪腐镰刀菌烯醇检测依据GB/T23503-2009《食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法》GB/T8381.6-2005《配合饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定薄层色谱法》二、所需仪器和试剂1、试剂色谱纯试剂：甲醇、乙腈、冰乙酸标准品试剂：玉米赤霉烯酮标准品、T-2毒素标准品、黄曲霉素B1、B2、G1、G2标准品、赭曲霉素A标准品、脱氧雪腐镰刀菌烯醇（呕吐毒素）标准品分析纯试剂：无水乙醇、石油醚（30℃-60℃，60℃-90℃）、乙酸乙酯、丙酮、硅胶G、三氯甲烷、羧甲基纤维素钠、苯、无水乙醚、中性氧化铝、活性炭、甲酸、正己烷、三氟乙酸、无水硫酸钠、硫酸、磷酸、氯化钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、氯化钾、4-二甲基氨基吡啶（DMAP）、1-蒽腈、碳酸氢钠、吐温-20、聚乙二醇2、仪器液相色谱仪（二元梯度高压恒流泵、荧光检测器、紫外检测器、柱温箱）、空气泵、氮吹仪、旋转蒸发器（500mL、250mL）、电动震荡器、分液漏斗、层析柱（内径20mm，长100mm；内径22mm，长300mm；）、玻璃纤维滤纸（直径11厘米，孔径1.5μm）、阀门注射器（玻璃材质）三、提取方法由于饲料中毒素检测中都是用免疫亲和柱提纯毒素造价比较高（一种毒素一次使用一个免疫亲和柱价格至少为100元），所以用化学试剂进行提纯，以降低检测的费用，节约成本。

饲料中玉米赤霉烯酮检测方法概况

生物学检测法是检测饲料中玉米赤霉烯酮毒素存在与否及毒性强弱的一种基本方法，具有操作简便、仪器成本低、耗时短等特点，可以应用于大量饲料样品玉米赤霉烯酮毒素的初步筛选。如对禾谷镰抱菌中玉米赤霉烯酮生物合成途径中的必需基因PKS4设计特异性引物，通过检测PKS4基因间接检测禾谷镰抱菌玉米赤霉烯酮毒素存在与否，同时结合ELISA检测方法
试验研究空
饲料中玉米赤霉烯酮检测方法概况
高琳王磊 (天津市农业生态环境监测与农产品质量检测中心300193)
摘要：玉米赤霉烯酮是由禾谷镰刀菌、三线镰刀菌、粉红镰刀菌等多种镰刀菌分泌的真菌毒素，可污染多种谷物和饲料。
玉米赤霉烯酮具有雌激素样作用，畜禽食用后可引发慢性中毒或繁殖技能障碍，严重影响畜禽机体健康。本文对饲料中玉米赤霉烯酮常用检测技术进行总结和概述，以期为建立精准、灵敏的饲料玉米赤霉烯酮检测方法提供理论参考，更好地促进饲料业绩畜牧业健康发展。
在兽医临床血清学检测上，正向间接凝血试验、固相阻断 ELISA和液相阻断ELSIA都是常用的疫苗抗体效价检测方法。但液相阻断ELISA具有敏感性良好，特异性较高，重复性优良，检测速度更快等优势，因此，在检测大批量样本时通常表现岀良好的适用性，可以更准确地评估疫苗免疫效能。
本试验为某羊羊牲畜养殖家庭农场所使用代号JYBL2014-5-21的口蹄疫O型灭活疫苗抗体效价检测提供了可靠的试验数据，能有效指导该场口蹄疫防治工作，为本县的O型口蹄疫防控工作提供了坚实的保障。
此次试验结果表明，抗体效价保护率为97.2%遥
参考文献: ［1］李冰，王涛，郑勇.羊口蹄疫的流行病学［J］.饲料博览,2020(7):70-71. ［2］胡珊莲.口蹄疫O型液相阻断ELISA免疫抗体检测方法的运用［J］.浙

食品中T-2毒素的测定标准文本(食品安全国家标准)

食品安全国家标准食品中T-2毒素的测定1 范围本标准规定了食品中T-2毒素的测定方法。

本标准第一法适用于谷物，酒类，酱油、醋、酱及酱制品中T-2毒素含量的测定，第二法、第三法适用于谷物中T-2毒素的测定。

本标准的方法检出限：第一法的对谷物的检出限为10μg/kg，对酒类、酱油、醋、酱及酱制品的检出限为5μg/kg。

第二法的检出限为1μg/kg。

第三法中直接法一的检出限为1μg/kg，直接法二的检出限为3.5μg/kg。

第一法免疫亲和层析净化液相色谱法2 原理用提取液提取试样中的T-2毒素，经免疫亲和柱净化，浓缩、衍生、定容后，用高效液相色谱仪进行测定，外标法定量。

3 试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或相当纯度的去离子水。

3.1 甲醇（CH3OH）：HPLC级。

3.2 乙腈（CH3CN）：HPLC级。

3.3 甲苯（C6H5CH3）：HPLC级。

3.4 甲醇-水（8+2）：取80mL甲醇，加20mL水。

3.5 4-二甲基氨基吡啶（DMAP）溶液：准确称取0.0325g于100mL容量瓶中，用甲苯稀释至刻度。

3.6 1-氰酸蒽（1-anthroylnitrile，1-AN）溶液：准确称取0.0300g于100mL容量瓶中，用甲苯稀释至刻度。

3.7 T-2毒素（T-2 toxin）标准品：纯度≥98%。

免疫亲和柱。

3.8 T-2毒素标准溶液：准确称取适量的T-2毒素标准品，用乙腈配成浓度为0.5mg/mL的标准储备液，-20℃避光保存。

使用前用乙腈稀释成适当浓度的标准工作液。

3.9 T-2毒素免疫亲和柱。

3.10 玻璃纤维滤纸。

4 仪器和设备4.1 液相色谱仪配有荧光检测器。

4.2 粉碎机：转速10000r/min。

4.3 高速均质器：转速大于10000r/min。

4.4 氮吹仪。

4.5 离心机。

4.6 涡旋混合仪。

4.7 空气压力泵。

4.8 试验筛：1mm孔径。

4.9 天平：感量0.001 g。

质谱分析法--定性与定量

CI-GC-MS、GC-MSn、LCMS、LC-MSn（相对） ±20% ±25% ±30% ±50%
China National Food Quality Safety Supervision and Inspection Center
二、定性（确证）方法
2002/657/EC规定：
要确证指令 96/23/EC 附录I-A 组所列的物质，最少需要4 个识别点，包括具有促合成作用和其他未允许的化合物，如二苯乙烯类化合物及其衍生物、盐、酯等、抗甲状腺剂、甾醇、二羟基苯甲
China National Food Quality Safety Supervision and Inspection Center
1-Br
2-Br
China National Food Quality Safety Supervision and Inspection Center
3-Br
China National Food Quality Safety Supervision and Inspection Center
二、定性（确证）方法
关于保留时间的讨论
GBT 16631-2008 高效液相色谱法通则：同样条件下重复试验的保留数据的分散性，RSD≤3%
JJG705-2002 液相色谱仪检定规程：定性测量重复性（6次测量）RSD≤1.5%
China National Food Quality Safety Supervision and Inspection Center
一、质谱基础及相关术语
术语
质谱峰类型分子离子
• 必须是化合物谱图中质量最高的离子 • 必须是奇电子离子、符合氮规则 • 必须能通过丢失合理的中性离子，产生谱图中高质量区的重要离子

国标_饲料中呕吐毒素的测定_解释说明

国标饲料中呕吐毒素的测定解释说明1. 引言1.1 概述本文旨在对国标饲料中呕吐毒素的测定方法进行解释和说明。

呕吐毒素是一类在饲料中常见的有害物质，对饲料以及食用动物的健康具有严重影响。

因此，准确测定饲料中呕吐毒素的含量非常重要，可以帮助农业生产者采取相应措施保障畜禽养殖的健康与安全。

1.2 文章结构本文分为五个主要部分：引言、饲料中呕吐毒素的测定、测定结果解读和分析、实验室内呕吐毒素测定步骤和注意事项介绍、结论与未来展望。

在引言部分，我们将提供背景信息和文章结构，并明确本文的目的。

1.3 目的本文旨在解释和说明国标所规定的饲料中呕吐毒素的测定方法。

首先，我们将介绍呕吐毒素的定义、特点以及其对于饲料和动物健康可能造成的影响。

其次，我们将详细介绍不同的呕吐毒素测定方法，并讨论其优缺点和适用范围。

接着，我们将解释常见呕吐毒素测试指标与标准之间的关系，并探讨测定结果与质量控制的相关性。

最后，我们将介绍在实验室内进行呕吐毒素测定的步骤和注意事项。

通过本文的阐述，读者可以全面了解国标规定的饲料中呕吐毒素的测定方法，并对结果进行正确解读和分析。

以上是对“1. 引言”部分内容的详细清晰撰写。

2. 饲料中呕吐毒素的测定2.1 呕吐毒素的定义和特点呕吐毒素是一类由细菌或真菌产生的有害化合物，可以存在于不合格或受污染的饲料中。

呕吐毒素具有强烈的毒性，能够对动物的消化系统造成损害，并导致呕吐、腹泻等严重症状。

其化学结构多样，常见的包括玉米赤霉烯酮、黄曲霉素等。

因此，准确测定饲料中呕吐毒素含量对于保证动物健康和饲养业发展至关重要。

2.2 呕吐毒素对饲料及动物健康的影响在饲料中存在过高的呕吐毒素含量会导致多种问题。

首先，它会直接危害动物消化系统，引起胃肠道疾病如胃溃疡、肠道出血等症状。

其次，高水平的呕吐毒素摄入还会降低动物对营养物质的利用效率，从而影响生长发育和繁殖能力。

此外，呕吐毒素还可能对动物的免疫系统和抗氧化能力造成损害，增加感染和疾病的风险。

AOAC饲料中药物官方分析法

AOAC饲料中药物官方分析法（2000）第5章40页2000AOAC国际版5．3．02杆菌肽预混剂AOAC官方分析方法杯碟法（本法应用于含≥10g杆菌肽/454g的预混剂）A原理：杆菌肽从已酸化有机溶剂系统中的饲料提取。

提取物离心，上清液用磷酸盐缓冲液稀释，然后用杯碟法用藤黄微球菌检定菌分析。

B试剂与装置(a)微生物—藤黄微球菌ATCC号10240 培养基（见）(b)提取溶剂—混合溶剂，27%乙腈（H3CN），27%甲醇，3%pH6.0的磷酸盐缓冲剂（见）,41%水和2%磷酸(85%)，加入0.5gEDTA/L（提取溶剂用EDTA饱和的）(c)磷酸盐缓冲剂—5%，pH6.5，见957.23B(d)C（见）(d)稀释剂—甲醇—5%pH6.5磷酸盐缓冲剂（12+88）(e)稀盐酸—小心加89ml盐酸至适量水中，并稀释到1L（1M）。

进一步稀释溶液1﹕100（0.01M）。

(f)钢管见957.23 C (a) (见)(g)钢管分布器：随机的见957.23(d) (见)C标准液见957.24*(a)和(b)(见)。

也即制备0.3和0.16u/ml溶液以平皿作成供试样品，用于监测定量用。

D杯碟准备采用1个约15ml的琼脂抗生素培养基1，957.23A(a)(见)。

通过实验皿最适的浓度（通常为0.02—0.05%）的藤黄微球菌ATCC No 1024，加到琼脂培养基上，使获得抑菌圈为15-17mm，用于0.2u/ml杆菌肽。

注入4个钢管内，标准曲线上的每点（即16个杯点），另外，4个杯为供试液。

标准曲线与杯碟两次（即32个钢圈），将作为检查样品0.3、0.16u/ml。

因此，总的将需要48个杯、两个曲线，对于每个预混剂样品加4个附加杯。

使琼脂培养基铺平，保持水平和一定硬度。

使用前转移到冰箱中，冷却≥1小时，所用碟当天配制。

E 提取准确称取含有约4600单位的杆菌肽饲料量装到300ml 的容量瓶中，或相当的容量瓶，用100ml 移液管加100ml 的提取溶剂，用振荡器振摇，提取饲料≥5分钟，转移上清液到塑料离心管中，2000转/分离心10分钟，通过玻璃棉过滤上清液至刻度量器中，稀释到制取的终稀释度为0.2±0.05u/ml 。

饲料中呕吐毒素（DON）荧光定量8min快速检测系统，国粮局权威验证

饲料中呕吐毒素（DON）荧光定量8min快速检测系统，国粮局权威验证一、呕吐毒素危害及检测方法介绍呕吐毒素作为一种常见的真菌毒素，在自然界中广泛存在于小麦等粮谷类农作物中，在世界范围内存在着较高的污染率，小麦一旦被呕吐毒素产毒菌株污染，在适宜生长环境（水分活度Aw>0. 87）中，产毒菌株会迅速生长，产生呕吐毒素，而小麦中的呕吐毒素又会随小麦粉的生产过程带入到面粉中，严重威胁人体健康。

我国2013 年国家风险监测计划已将小麦和面粉中呕吐毒素含量的监测列为重点。

目前呕吐毒素的检测方法主要分为两大类：即确认方法和快速方法。

确认方法主要基于理化仪器设备，如薄层色谱法(TLC)、气相色谱法(GC)、高压液相色谱法(HPLC)和各种联用技术如气质联用(GC-MS)、液质联用(HPLC-MS)等；快速方法主要是基于免疫化学基础上的免疫分析方法如免疫亲合柱-荧光检测(IAC-FLD)、酶联免疫吸附法(ELlSA)和胶体金免疫层析法等。

结果准确、法定认可是理化方法最大的优点，但是仪器设备价格昂贵，前处理过程复杂、操作繁琐、效率低，成本极高，因此不适用于大规模样本的筛查和日常的内控检测，一般仅用于最终的确证。

酶联免疫吸附法ELISA 方法和胶体金快速检测卡是企业常用的快速检测方法，但也均存在各自的优缺点：ELISA 方法能灵敏度相对较高，且能定量检测，但操作过程相对复杂，对环境和人员要求高，环境干扰因素复杂，重复性较差；胶体金检测卡可以满足现场快速的要求，能在5-10min内快速测定，但是只能定性，且灵敏度较低，肉眼观察主观性较强，重复性差。

二、饲料中呕吐毒素国家残留限量标准引自：《GB 137078-2017 饲料卫生标准》。

三、上海飞测饲料中呕吐毒素荧光定量快速检测系统上海飞测生物基于全球领先的荧光定量FPOCT技术平台，开发了呕吐毒素荧光定量快速检测系统，该系统结合了胶体金快速、酶联免疫定量以及色谱法准确的特点，可在8min内快速准确定量的测定出饲料中的呕吐毒素的含量，样品前处理简单（仅需7min），操作简便，只需一步加样，无需标准品，无需做标准曲线，采用荧光免疫定量分析仪读数，结果准确可靠且可现场打印，准确性高度符合HPLC法的检测结果，为呕吐毒素的快速检测和控制提供了一种全新的技术手段，适用于各类饲料加工企业、检测机构及政府相关监管部门。

黄曲霉毒素的危害、限量标准及快速定量检测方法

黄曲霉毒素的危害、限量标准及快速定量检测方法黄曲霉毒素（Aflatoxins，简写 AF）主要为黄曲霉和寄生曲霉的次生代谢产物。

在温暖与潮湿的气候地区粮食和饲料凡是被黄曲霉和寄生曲霉污染的都可能存在黄曲霉毒素。

黄曲霉毒素最易污染的有花生、玉米、棉籽、禽蛋、肉、奶及奶制品，其次是小麦、高粱和甘薯，大豆粕被黄曲霉毒素污染的程度轻些。

在我国，粮食和饲料被黄曲毒素污染的概率很高，给饲料企业以及养殖业主带来了很大的损失，人们食用含有黄曲霉毒素的食物危害到人体健康。

一、黄曲霉毒素的理化特性目前已经确定的黄曲霉毒素的结构有AFB1、AFB2、AFM1等 18 种，它们的基本结构中都含有二呋喃环和氧杂萘邻酮（又名香豆素），前者为其具有毒性的结构，后者可能与其的致癌性有关。

黄曲霉毒素很难溶解于水、己烷、乙醚和石油醚，易溶于甲醇、乙醇、氯仿以及二甲基甲酰胺（DMF）等有机溶剂中。

分子量为 312-346，熔点为 200-300℃，黄曲霉毒素耐高温，通常加热处理方式对其的破坏很小，只有在熔点的温度下才能发生分解。

黄曲霉毒素遇碱情况下能迅速分解，但此应可逆，即在酸性的条件下又能复原。

一般来说，温度30℃、相对湿度80%、谷物水份在14%以上（花生的水份在9%以上）最适合黄曲霉繁殖和生长。

在 24-34℃之间，黄曲霉菌产毒量最高。

几乎所有谷物、饲草和各种食品（包括畜产品）都可作为黄曲霉基质。

二、黄曲霉毒素对动物和人的危害2.1 黄曲霉毒素对动物的危害黄曲霉毒素的毒性非常高，是目前已发现霉菌中毒性最大的一种。

目前发现的18种黄曲霉菌毒素家族中， AFB1的毒性最为最为强烈，AFM1、AFG1 次之，AFB2、AFG2、AFM2 毒性较弱。

AFB1的毒性是砒霜的68倍，其诱发肝癌的能力甚至比二甲基亚硝胺大75倍之多。

其毒性的大小因动物的种类、年龄、性别、体况及营养状况的不同而有所差异，年幼动物、雄性动物较敏感。

饲料中霉菌毒素的检测技术

饲料中霉菌毒素的检测技术发表时间：2018-10-01T11:51:13.677Z 来源：《基层建设》2018年第27期作者：梅岩松[导读] 摘要：饲料被污染后，除了可引起饲料变质外，还可导致动物的各种疾病，甚至引起急性中毒性死亡，给养殖业造成了巨大危害。

哈尔滨市兽药饲料监察所黑龙江哈尔滨 150018摘要：饲料被污染后，除了可引起饲料变质外，还可导致动物的各种疾病，甚至引起急性中毒性死亡，给养殖业造成了巨大危害。

论文就霉菌毒素对动物的危害及其在饲料和动物体内的检测方法进行归纳分析，为今后进一步健全霉菌毒素检测方法，减轻霉菌毒素对养殖业的危害提供参考依据。

关键词：饲料；霉菌毒素；检测技术1 霉菌毒素对动物体的危害高浓度霉菌毒素可导致动物的急性中毒甚至死亡，而长期饲喂含有低浓度霉菌毒素的饲料可引起动物体慢性中毒。

其危害主要表现在以下四个方面：（1）破坏或降低饲料的营养成分，影响养分的吸收及代谢；（2）引起动物体肝脏、肾脏、肺脏、肠道等脏器损伤，如黄曲霉毒素的靶器官为肝脏，可引起肝硬化及肝癌等疾病，赭曲霉毒素A、桔青霉素、杂色曲霉毒素具有较强的肾脏毒性，可引起肾小管变性、坏死，导致患畜多尿、血尿及蛋白尿等；（3）引起各种繁殖障碍，导致母畜假发情、脱肛、流产、死胎等，如玉米赤霉烯酮具有较强的激素样作用，可导致动物发情综合症；（4）造成动物体免疫抑制，诱发各类慢性疾病，降低饲料效益。

2 霉菌毒素的检测方法2.1 酶联免疫吸附法（ELISA）ELISA法是利用抗原抗体反应原理，将已知抗原吸附在酶标板上，加入酶标记抗体和样品提取液并混合均匀，充分反应后用去离子水洗去多余抗体，再加入酶的底物，产生有色物质，最后加入终止液使反应终止，用酶标仪测定酶底物的降解量，参照标准曲线计算试样中的抗原量。

柳其芳采用ELISA法在1-20μg/kg范围内测定黄曲霉毒素B1，CV为0.4%-2.6％，回收率为92%-105％。

饲料检测操作规程

目录一、化验仪器操作规程 (3)1.电子天平操作规程 (3)2.马福炉操作规程 (4)3.恒温干燥箱操作规程 (4)4.凯氏定氮仪操作规程 (5)5.离心机操作规程 (5)6.数显恒温水浴锅操作、维护规程 (6)6.真空泵、抽滤装置操作规程 (8)7.电热蒸馏水器操作规程 (8)8.脂肪提取仪操作规程 (9)9.722型分光光度计操作规程 (9)10. pH计的操作规程 (10)二、实验操作规程 (15)1.饲料中水分和其他挥发性物质含量的测定 (15)2.饲料中粗灰分的测定 (18)3.饲料中粗蛋白的测定 (20)4.饲料中钙的测定 (24)5.饲料中总磷的测定 (28)6 .饲料中水溶性氯化物的测定 (33)7.粗脂肪的测定 (38)8. 挥发性盐基氮的测定 (40)9.鱼粉中酸价的测定 (42)10.饲料原料中游离氨的测定 (43)11.植物蛋白原料生熟度判定 (45)12.甲基紫法测饲料混合均匀度 (50)13. 微矿的测定 (52)1.水的总硬度的测定 (52)2. 饲料级碘酸钙 (53)3.甲酸钙的测定 (54)4.饲料级硫酸锰 (56)5.硫酸钠的测定 (58)6.饲料级硫酸锌 (60)7. 饲料级亚硒酸钠 (62)8.饲料级氧化锌 (64)9.碱式氯化铜的测定 (65)10.饲料级硫酸铜 (66)11.饲料级硫酸亚铁 (68)12.饲料级氯化钴 (70)13.小苏打（NaHCO3）的测定 (72)14.饲料级硫酸镁 (73)15.饲料级磷酸氢钙的测定 (74)16. 饲料级磷酸二氢钙的测定 (76)17.饲料及饲料原料中氟的测定 (78)18.石粉中钙镁含量的测定 (82)14.油脂检测 (85)1.过氧化值测定 (85)2.酸价的测定 (87)3.油脂TBA值的测定方法 (88)4.皂化值的测定 (90)5.油脂含皂量测定法 (91)6.油脂碘价的测定 (92)7.油脂中矿物油的定性检测 (94)8.生物柴油的检验 (94)9.油脂定性试验 (95)15.饲料中游离棉酚的测定方法 (95)16.霉菌毒素检测方法 (97)1.呕吐毒素(DON)的检测ELISA法 (97)2.黄曲霉毒素的测定ELISA法 (101)3.赤霉烯酮毒素测定 (104)17. 镜检部分 (108)1.鱼粉掺假检测及真蛋白质的测定 (110)2.鱼粉中掺入植物质、胺盐和鞣革粉的化学检验 (112)3.鱼粉中掺入植物质的检验 (113)4.鱼粉中掺入铵盐的检验 (113)5.鱼粉中掺入鞣革粉的检验 (114)6.盐析法测真蛋白 (114)7.测非蛋白氮法 (115)8.伪劣玉米蛋白粉的识别 (115)9.掺假豆粕的鉴定 (117)10.磷酸盐的鉴别 (119)11.氯化胆碱的真伪鉴别 (119)12.肉骨粉掺假检验 (121)一、化验仪器操作规程1.电子天平操作规程1、使用前：观察水平仪，调整水平调节脚，使水泡位于水平仪中心2、开机：按开关键ON，2秒钟后显示本机型号“xxxx”，再2秒后显示“0.0000”。

饲料中二甲氧苄氨嘧啶、三甲氧苄氨嘧啶和二甲氧甲基苄氨嘧啶的测定-最新国标

饲料中二甲氧苄氨嘧啶、三甲氧苄氨嘧啶和二甲氧甲基苄氨嘧啶的测定1范围本文件描述了饲料中二甲氧苄氨嘧啶、三甲氧苄氨嘧啶和二甲氧甲基苄氨嘧啶的液相色谱-串联质谱和高效液相色谱测定方法。

本文件适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料、添加剂预混合饲料和动物源性饲料原料中二甲氧苄氨嘧啶、三甲氧苄氨嘧啶和二甲氧甲基苄氨嘧啶的测定。

本文件液相色谱-串联质谱法的检出限为2.5µg/kg、定量限为5.0µg/kg，高效液相色谱法的检出限为0.25mg/kg、定量限为0.50mg/kg。

2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。

其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T20195动物饲料试样的制备3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。

4液相色谱-串联质谱法（仲裁法）4.1原理试样中的待测物在弱碱性条件下用乙酸乙酯提取、正己烷脱脂，经混合型强阳离子交换小柱净化，液相色谱-串联质谱仪测定，内标法定量。

4.2试剂或材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂。

4.2.1水：GB/T6682，一级。

4.2.2甲醇：色谱纯。

4.2.3乙腈：色谱纯。

4.2.4甲酸：色谱纯。

4.2.5乙酸铵：色谱纯。

4.2.6氨水。

4.2.7乙酸乙酯。

4.2.8乙酸钠溶液（82g/L）：称取8.2g乙酸钠，用水溶解，转移至100mL容量瓶中，定容，混匀。

4.2.95%乙酸溶液：移取5mL冰乙酸于100mL容量瓶中，用水稀释、定容，混匀。

4.2.101%乙酸-乙腈溶液：移取1mL冰乙酸于100mL容量瓶中，用乙腈（4.2.3）稀释、定容，混匀。

4.2.11乙腈-5%乙酸溶液：移取10mL乙腈（4.2.3）于100mL容量瓶中，用5%乙酸溶液（4.2.9）稀释、定容，混匀。

T-2毒素酶联免疫检测方法的研究的开题报告

T-2毒素酶联免疫检测方法的研究的开题报告标题：T-2毒素酶联免疫检测方法的研究一、问题背景T-2毒素是一种严重危害人畜健康的食品链传递的真菌毒素。

目前，T-2毒素的检测方法主要包括高效液相色谱法、毒素结合蛋白法等，但是这些方法操作步骤繁琐，操作复杂，不适合快速检测和大规模应用。

因此，迫切需要一种快速、简便、准确、灵敏性高的T-2毒素检测方法。

二、研究目的本研究旨在开发一种基于酶联免疫的T-2毒素检测方法，以提高检测效率和准确性。

三、研究内容1.筛选合适的T-2毒素抗原2.制备T-2毒素抗体3.构建T-2毒素酶联免疫检测方法4.优化酶联免疫检测条件5.测试酶联免疫检测方法的灵敏度、特异性和稳定性6.应用酶联免疫检测法检测真实样品四、研究意义开发一种快速、简便、准确、灵敏性高的T-2毒素检测方法，可以提供有效的检测手段，保障食品安全，为农业生产提供技术支持。

五、研究方法本研究采用T-2毒素为抗原，制备T-2毒素抗体，构建T-2毒素酶联免疫检测方法，并通过验证其灵敏度、特异性和稳定性，应用该方法检测真实样品。

六、预期成果本研究将开发出一种快速、简便、准确、灵敏性高的T-2毒素检测方法，可提供有效的检测手段，为保障食品安全提供技术支持。

七、进度计划1.2021年7月-8月：筛选合适的T-2毒素抗原，制备T-2毒素抗体。

2.2021年9月-11月：构建T-2毒素酶联免疫检测方法，优化检测条件。

3.2022年1月-3月：测试酶联免疫检测方法的灵敏度、特异性和稳定性。

4.2022年4月-6月：应用该方法检测真实样品。

5.2022年7月-8月：撰写论文，总结研究成果。

八、文献综述（待完成）。

饲料检测方法 PPT

04 点滴试验和快速试验
点滴试验和快速试验
• 利用饲料成分的化学性质所进行的点滴试验，主要用作定性分析，以快速判断饲料中是否存在某些特定的化学物质，如淀粉、尿酶等，这些方法简便易行，在饲料厂和养殖场均可使用。 • 淀粉检测： ‒ 原理：在少量饲料样品中加入碘—碘化钾溶液，若有淀粉存在，则呈现深蓝色。 ‒ 例子：鱼粉、肉粉等动物性饲料中不应含淀粉，但如果变蓝色，说明掺杂有淀粉或植物性成分。
• 尿素检测：
– 原理：尿素在尿素酶作用下生成氨，遇指示剂后变色。 – 操作：少量饲料样品加水搅拌后过滤，尿素溶于水，滤出后加2～3滴甲基红指示剂，然后加2～3滴尿酶溶液，若存在尿素则出现深红紫色，无尿素时呈现黄色。 – 例子：蛋白类原料厂商为了牟利，在蛋白饲料中掺入尿素，在用粗蛋白检测时计入蛋白含量，但其为非蛋白氮，属于粗蛋白检测方法漏洞，当年三聚氰胺也是钻这个漏洞。
• 2、容重法：一定体积的饲料其质量也是一定的，这种一定体积的质量称为体积质量，也称容重。
– 原理：容重法是根据一定体积的饲料原料都有一定的重量，通过检测样品与标准样品容重的比较，可以初步判断饲料原料的掺杂和含水量情况。 ‒ 方法：四分法取样倒入量筒至1000毫升刻度处，倒出称重，重复3次，以 g/L计算取平均值即为该饲料的容重。
物理检测
• 4.水洗法
– 原理同比重法，比较常用。 – 不同的原料在水中的位置、状态不一样进行判断。 – 例子： » 玉米蛋白粉中掺入染色的其他物质：水洗掉色； » 豆粕中掺入泥土、沙土：水洗沉淀 » 麸皮、次粉中掺入滑石粉：水洗沉淀
• 5.硬度测定
– 借助专用仪器来测定颗粒的相对硬度。在测定时，需测定大量颗粒，以获得有代表性的平均数据。

呕吐毒素标准检测规程完整

呕吐毒素标准操作规程1、目的为了规亲和柱净化样本中呕吐毒素的操作流程，特制订本操作规程。

2、围本标准适用于粮食、饲料、食品中呕吐毒素的检测。

345、程序5.1 原理测定的基础是抗原、抗体反应，抗体连接在柱体，样品经过提取、过滤后，缓慢的通过呕吐毒素免疫亲和柱，在免疫亲和柱毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。

用中醇洗脱呕吐毒素，然后注入到分析仪器中用于检测。

5.2溶液配制5.2.1 PBS缓冲液:称取&0g氯化钠，1.2g磷酸氢二钠,0.2g磷酸二氢钾,0.2g氯化钾，用990mL蒸镭水或去离子水溶解，用浓盐酸调节pH至7.0,再用蒸憎水或去离子水定容至1L。

上述PBS缓冲液用于样品的提取、稀释，以及亲和柱的清洗。

5.2.2呕吐毒素标准工作液：先用色谱级中醇将高标稀释到5ppm,再用水将其稀释到lppm,此时标品的溶剂为20%中醇，然后再用20%HJ醇将标准品梯度稀释到500ppb、200ppb、lOOppbx 50ppb。

5.3样品前处理5.3.1玉米、小麦、面粉、配合饲料、浓缩料、精补料等吸水性较小的样本一将样品粉碎，称取25g样品，加入5g聚乙二醇,加入125mL蒸镭水：——高速均质（＞10,000r/min） lmin （或用摇床200r/min〜300r/min剧烈振荡20min）；--用快速定性滤纸过滤，收集滤液；--滤液再用微纤维滤纸过滤，并收集滤液作为上样液；--取2.5mL上样液过免疫亲和柱净化。

稀释倍数：25.3.2隸皮、豆皮、玉米胚芽粕、米糠等吸水性较强的样本一称取10g样品，加入1 OOmL蒸憎水；——高速均质（＞10,000r/min） lmin （或用摇床200r/min〜300r/min剧烈振荡20min）；--用快速定性滤纸过滤，收集滤液；--滤液再用微纤维滤纸过滤，并收集滤液作为上样液；--取5mL上样液过免疫亲和柱净化。

稀释倍数：25.3.3酒类--取脱气的酒类样品（含二氧化碳的酒类样品，使用前先搅拌或超声脱气）或不含二氧化碳的酒类样品25g,用PBS缓冲液定容至100mL；——高速均质（＞10,000r/min） lmin （或用摇床200r/min—300r/min 剧烈振荡20min）；--用快速定性滤纸过滤，收集滤液；--滤液再用微纤维滤纸过滤，并收集滤液作为上样液；--取2mL上样液过免疫亲和柱净化。

饲料中维生素B2测定方法

饲料中维生素Ｂ2测定方法1主题内容与适用范围本标准规定了饲料中维生素B2测定方法。

本标准适用于饲料原料、协作饲料、浓缩饲料、维生素预混料中维生素B2的测定。

待测液中维生素B2检测浓度为0.05～0.2μg／mL。

2引用标准GB6682试验室用水规格3方法原理维生素B2（即核黄素C17H20N1O6）在440nm紫外光激发下产生绿色荧光，在一定浓度范围内其荧光强度与核黄素浓度成正比。

用连二亚硫酸钠还原核黄素成无荧光物质，由还原前后荧光强度之差与内标荧光强度的比值，计算样品核黄素的含量。

4试剂和溶液除特别规定外，本标准所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或相应纯度的水。

4.1盐酸溶液，0.1mol／L：将8.5mL盐酸（GB622）用水稀释至1000mL。

4.2盐酸溶液，1mol／L。

4.3氢氧化钠（GB629）溶液，1mol／L。

4.4冰乙酸（GB676）。

4.5冰乙酸溶液，0.02mol／L：将1.8mL冰乙酸用水稀释至1000mL。

4.6高锰酸钾（GB643）溶液，40g／L。

4.7过氧化氢（HG3─1082）溶液，100mL／L。

现用现配。

4.8核酸素标准溶液4.8.1核黄素贮备液Ⅰ：核黄素（中国药典参照标准），于五氧化二磷干燥器中干燥24h，称取0.0500g，溶解于0.02mol ／L乙酸溶液（4.5）中，在蒸汽浴上恒速搅动直至溶解，冷却后稀释至500mL。

盛入棕色瓶滴加甲苯掩盖，低温（4℃）保存。

该溶液每毫升含0.1mg核黄素。

4.8.2核黄素贮备液Ⅱ：取核黄素贮备液Ⅰ（4.8.1）10mL 用0.02mol／L乙酸溶液稀释至100mL，盛于棕色瓶中滴加甲苯掩盖，低温（4℃）保存。

该溶液每毫升中含10μg核黄素。

4.8.3核黄素标准工作液：取核黄素贮备液Ⅱ（4.8.2）10mL，用水稀释至100mL。

现用现配。

该溶液每毫升中含1μg核黄素。

4.9荧光素标准溶液4.9.1荧光素贮备液：称取荧光素（Q／HG22─786）0.0500g，用水稀释至1000mL，盛于棕色瓶中，低温（4℃）保存。

饲料分析与检测技术课程论文

黄曲霉毒素的检测方法研究应用化学 20096842 杨兰森摘要：黄曲霉毒素(AFT)是一类有毒致癌化合物，污染粮食及其制品，给人类健康造成严重威胁。

黄曲霉毒素(AFT)是迄今发现的毒性最强的一类生物毒素，有AFB1、AFB2、AFG1、AFG2等多种形式。

本文介绍了黄曲霉毒素的理化性质，对人和动物的危害等，并且对目前用于黄曲霉毒素的检测方法进行了综述。

在对薄层层析法、高效液相色谱法、微柱法及酶联免疫吸附法等检测方法综合分析的基础上，评述了上述方法的优劣和适用条件。

关键词：黄曲霉毒素危害检测方法进展黄曲霉毒素(AFT)主要是由黄曲霉和寄生曲霉等真菌产生的一类有毒次生代谢物。

在世界不同地区都发现了这些真菌大量存在于供人类食用的食品中，黄曲霉毒素污染已导致严重的食品安全问题[1,2]。

自20世纪60年代以来，有关黄曲霉毒素的危害被大量报道,以致黄曲霉毒素已成为最受人们关注的一种真菌毒素[3]。

阐明黄曲霉毒素的治病机理，快速，准确地检测食品中黄曲霉度的含量，并制定相应的标准，采取适当的预防措施来降低其危害已成为近来食品、饲料检测研究的重点。

1 黄曲霉毒素概述1.1 黄曲霉毒素的理化性质黄曲霉毒素是一组化学结构类似的化合物，目前已分离鉴定出12种，包括B1，B2，G1，G2，M1，M2，P1，Q，H1，GM，B2a和毒醇[4]。

黄曲霉毒素的的基本结构为二呋喃环和香豆素，B1是二氢呋喃氧杂萘邻酮的衍生物，即含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮(香豆素)，前者为基本毒性结构，后者与其致癌性有关[5]。

M1是黄曲霉毒素B1在体内经过羟化而衍生成的代谢产物。

黄曲霉毒素的主要分子形式含B1，B2，G1，G2，M1，M2等，其中M1和M2主要存在于牛奶中，B1为毒性及致癌性最强的物质。

黄曲霉毒素难溶于水、己烷、乙醚和石油醚，易溶于甲醇、乙醇、氯仿和二甲基甲酰胺等有机溶剂，分子量为312-346，熔点为200-300℃。

黄曲霉毒素耐高温，通常加热处理对其破坏很小，只有在熔点温度下才发生分解。