普通变形杆菌抗吞噬试验安排
大便培养
变形杆菌食物中毒诊断标准及处理原则 WS/T 9—1996
1 主题内容与适用范围
本标准规定了变形杆菌食物中毒的诊断标准、判定原则和处理原则。
本标准适用于变形杆菌食物中毒。
2 引用标准
GB 4789.28 食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂
A2 分离平板：接种于伊红美蓝琼脂平板或SS平板，36士1℃培养24h。
A3 伊红美蓝平板和SS琼脂平板，生长菌落无色透明或半透明圆形菌落，普通变形杆菌和奇异变形杆菌在伊红美蓝平板上可呈现片状蔓延生长菌落，挑取菌落接种三糖铁培养基。
A4 生化试验：三糖铁培养基，乳糖阴性，葡萄糖产酸产气或只产酸不产气，硫化氢阳性或阴性。尿素和苯丙氨酸酶阳性，可进行生化试验，其鉴别见表A1、表A2、表A3、表A4。
GB 14938 食物中毒诊断标准及技术处理总则
3 诊断标准
3.1 流行病学特点：
3.1.1 变形杆菌食物中毒在细菌性食物中毒中是较常见的一种，发病季节多在夏秋季节。
3.1.2 引起中毒的食品，主要以动物性食品为主，其次为豆制品和凉拌菜等，由于制作时造成污染而引起食物中毒。
表A4 普罗菲登斯菌属四个生化群的鉴别
A5 血清学凝集分型试验：普通变形杆菌和奇异变形杆菌O抗原为49个，H抗原为19个，见表A5。
表A5 普通和奇异变形杆菌简化抗原表
A6 患者血清效价测定：
A6.1 取患者急性期(发病后2～3d)和恢复期血清(12～15d)进行血清效价测定，同时取健康人血清做为对照。
表A1 变形杆菌属、普罗菲登斯菌属、摩根氏菌属鉴别表
变形杆菌属 普罗菲登斯菌属 摩根氏菌属
恙虫病的诊断标准
(1).临床症状：恙虫病立克次体对人体的损害是全身性的。
基本的病理变化是全身小血管炎、血管周围炎及单核细胞吞噬增生，可导致多脏器损害。
临床症状有：突然发病、高热(伴有头痛、畏寒或寒战)、食欲缺乏、颜面潮红、浅表淋巴结肿大、肝脾肿大、斑丘疹，并可发现特征性焦痂或溃疡。
对怀疑患本病的患者应十分注意寻找焦痂或溃疡。
它多位于肿大、压痛的淋巴结附近。
特别注意会阴、腋窝、外生殖器、腹股沟等隐蔽部位，防止漏诊。
(2).流行病学资料：查问患者发病前4～20天内是否去过恙虫病流行区，是否曾在户外工作、露天野营或在灌木草丛中坐、卧等经历。
同时，还应注意疾病流行季节和当地本病的流行情况等。
(3).实验室检查染病者的血象检查为外周血液白细胞数多减少或正常，重型患者可稍增高，分类常有核左移现象。
常做血清学检查和病原学检查：1.外-斐反应：外-斐反应亦称变形杆菌凝集试验，患者血清中抗恙虫病立克次体的抗体能与变形杆菌OXK抗原起凝集反应，为诊断提供依据。
病程第1周末仅少数(30%左右)阳性，第2周末为75%左右，第3周可达90%左右，效价可达1∶160～1∶1280。
第4周即开始下降，至第8～9周多转为阴性。
2.补体结合试验：特异性和灵敏度较高。
阳性率较高，且持续阳性时间较长，可达5年左右。
需选用当地多见株作抗原，也可采用多价抗原，因不同株的恙虫病立克次体的抗原性可有较大差异。
3.免疫荧光抗体试验：用间接免疫荧光抗体试验检测患者血清中特异性抗体，在病程的第1周末开始出现阳性，第2～3周末达高峰，60天后逐渐下降，但可持续数年。
有病后10年检测仍呈阳性的报告。
4.斑点酶免疫测定：用各种血清型的恙虫病立克次体或部分蛋白质作为抗原，吸附在硝酸纤维膜上作斑点酶免疫测定，检测患者血清中各血清型的特异性IgG 和IgM抗体。
该法敏感度高，特异性强，可区分各种血清型。
5.酶联免疫吸附试验与酶免疫测定：以基因重组技术表达的恙虫病立克次体分子量为56×103的蛋白质作为抗原，用酶联免疫吸附试验与酶免疫测定检测患者血清中抗恙虫病立克次体的IgG和IgM抗体，其敏感度为86%～88%，特异性为84%～90%。
奇异变形杆菌菌种类型
奇异变形杆菌菌种类型一、引言奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)是一种常见的肠道和泌尿系统感染病原菌，属于变形杆菌属。
它具有多种菌种类型，每种类型在生物学特性和致病性上存在一定的差异。
了解奇异变形杆菌的菌种类型对于深入理解其致病机制、预防和治疗相关感染具有重要意义。
本文将重点探讨奇异变形杆菌的常见菌种类型及其在疾病中的作用。
二、奇异变形杆菌的常见菌种类型根据基因型、生化反应和表型特征，可将奇异变形杆菌分为多个菌种类型，以下是其中常见的几种：1.奇异变形杆菌标准型：这是最常见的菌种类型，也是最早被发现的类型。
它具有中等程度的多形性，能够形成丝状、球状和长链状细胞。
标准型对多种抗生素敏感，但在某些条件下可产生耐药性。
2.奇异变形杆菌抗药型：这种菌种类型对多种抗生素产生耐药性，是导致治疗失败的主要原因。
抗药型主要通过质粒介导的耐药基因传播，这些质粒可编码多种抗生素的降解酶。
3.奇异变形杆菌黏液型：黏液型是近年来新发现的菌种类型，其特点是能在低营养环境中生长，且对黏液具有较强的黏附能力。
黏液型在肠道和泌尿系统感染中较为常见，可能与黏液成分有关。
4.奇异变形杆菌表面疏水型：这种类型具有高度疏水性表面，能够抵抗吞噬细胞的吞噬作用，从而在体内长期存活。
表面疏水型在慢性感染和生物膜形成中起重要作用。
三、奇异变形杆菌菌种类型在疾病中的作用不同菌种类型的奇异变形杆菌在疾病过程中具有不同的作用和特点：1.泌尿系统感染：奇异变形杆菌是引起泌尿系统感染的主要病原菌之一，尤其是尿路感染。
不同菌种类型的奇异变形杆菌在尿路感染中的致病力存在差异，其中标准型和黏液型较为常见。
这些菌种通过黏附于尿道上皮细胞并产生侵袭性酶来引发感染。
2.肠道感染：奇异变形杆菌也是肠道感染的常见病原菌之一，尤其是在免疫力低下的人群中。
不同菌种类型的奇异变形杆菌在肠道感染中的致病力和毒力存在差异，其中黏液型和表面疏水型具有较强的黏附力和定植能力。
项目十九吞噬细胞功能检测
项目十九吞噬细胞功能检测一、中性粒细胞吞噬功能测定(Neutrophil phagocytosis assay)(一)吞噬试验【实验原理】中性粒细胞具有吞噬功能，当与颗粒物质(如金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌等)混合孵育一定时间后，颗粒物质被吞噬。
根据吞噬率和吞噬指数可反映该细胞的吞噬功能。
【试剂和器材】1．试剂20%FCS RPMI-1640培养液、pH6.4 0.015mol/L PBS、Wright染液、金黄色葡萄球菌培养物、抗凝剂(4g/L柠檬酸钠溶液)。
2．器材37℃温箱、显微镜、滴管、一次性采血针、微量细胞培养板、无菌干棉球、酒精棉球、碘酒棉球、接种环等。
【步骤和方法】1．热灭活葡萄球菌悬液配制取金葡菌24h琼脂斜面培养物，用无菌生理盐水洗下菌苔，用PBS洗涤2次，100℃加热15min灭活。
取热灭活金黄色葡萄球菌混悬于20% FCS RPMI-1640培养液中, 用比浊法调整浓度至6×107/ml。
4℃保存，备用。
2．于微量细胞培养板孔内加1滴(约50μl)抗凝剂，无菌采人末梢血2滴(约100μl)与抗凝剂混匀。
3．向孔内加6×107/ml金黄色葡萄球菌悬液2滴(约100μl)，混匀。
4．置37℃烛缸或5% CO2孵箱内培养30min。
5．取1滴培养液推片，自然干燥，Wright染色，水洗，干燥，油镜镜检。
【结果判定】计数200个中性粒细胞，并分别记下吞噬细菌的细胞数和各个细胞吞入的细菌数。
计算吞噬率和吞噬指数：200个中性粒细胞中吞噬细菌的中性粒细胞数? 100％200200个中性粒细胞吞噬的细菌总数200【注意事项】1．所用器材要洁净。
2．越接近片子末梢细胞数越多，计数时应取片子前、中、后三段计数，以提高准确性。
3．抗凝剂用量要适当，过高则抑制吞噬功能，过低使血液凝固。
【方法评价】此法易操作、不需特殊设备，省时，费用低廉。
结果直观，可用于评价其他方法获得的结果，但是光学显微镜分辨率低，有时难以计数吞入的细菌颗粒。
clsi-m100-s20_2010抗菌药物敏感性试验解释标准(中文)
内部交流资料
Vol . 30 No .1 M1 0 0 - S 20
抗微生物药物敏感性试验的执行标准； 第二十版信息增刊 Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; Twentieth Informational Supplement
抗微生物药物敏感性试验执行标准； 第二十版信息增刊
Volume 30 Number 1
Franklin R. Cockerill, III, MD Karen Bush, PhD Michael N. Dudley, PharmD,FIDSA George M. Eliopoulos, MD Dwight J. Hardy, PhD David W. Hecht, MD Janet F. Hindler, MCLS, MT(ASCP) Janet A. Hindler. MCLS, MT(ASCP) Jean B. Patel, PhD, D(ABMM) Mair Powell, MD, FRCP, FRCPath, MHRA Richard B. Thomson, Jr., PhD John D. Turnidge, MD Melvin P. Weinstein, MD Barbara L. Zimmer, PhD Mary Jane Ferraro, PhD, MPH Jana M. Swenson, MMSc
多重耐药菌
多重耐药菌：1.怎么确诊多重耐药菌？方法？2.你们多重耐药菌都报哪些？怎么报？3.对检出率较高的多重耐药菌是否做同源性分析及耐药基因检测？4.怎样总结多重耐药菌分析？多长时间公布一次？你们医院多重耐药菌联席会能定期召开吗？根据群里的讨论，总结如下：所谓多重耐药菌：是指对临床使用的三类或三类以上的抗菌药物同时呈现耐药的细菌。
多重耐药（MDR）：对三类或三类以上抗菌药物（每类中至少一种）的获得性（而非天然的）不敏感（中介或耐药）泛耐药（XDR）：对除了1-2类抗菌药物之外的所有其他抗菌药物种类（每类中至少有一种）不敏感，也就是只对1-2类抗菌药物敏感。
全耐药（PDR):对所有抗菌药物种类中的所有药物不敏感。
若*中的某种病原体对某个代表性抗菌药物或这个类别抗菌药物固有耐药，则这耐药机制检测方法1、MRSA：对苯唑西林和（或）头孢西丁耐药的金黄色葡萄球菌2、VRE：琼脂筛选法能检测全部的VRE型，为临床常规筛选VRE的既简便有可靠的方法；纸片扩散法（需验证万古霉素mic）、自动化药敏检测法及分子生物学法3、CR-ABA、CR-PAE:根据美国临床标准化委员会CLSI规定，抗菌药物敏感试验可采用K-B纸片扩散法或MIC法。
对于XDRAB或PDRAB菌株建议采用MIC法测定药物敏感性，给临床提供更有价值的用药参考。
对于XDRAB或PDRAB感染，推荐根据临床需要进行联合药敏试验，如琼脂棋盘稀释法可精确判断两药是否有协同、相加或拮抗作用，但该方法较为繁琐；也可采用K-B法，将待测药敏纸片放置相邻、距离合适的位置，次日观察两个纸片间抑菌圈是否有扩大；或用Etest法，把Etest条在合适的位置交叉叠放，可粗略观察药物间是否有协同作用。
4、CRE:纸片扩散法及MIC法，不论用哪种方法，都要求进行产碳青霉烯酶的验证方法，一般有三种方法：改良HOdge实验、EDTA协同实验、Etest条实验（IMI 和IMI+EDTA协同实验）因为目前常见多重耐药菌包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）、耐万古霉素肠球菌（VRE）、产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）细菌、耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌（CRE）（如产Ⅰ型新德里金属β-内酰胺酶[NDM-1]或产碳青霉烯酶[KPC]的肠杆菌科细菌）、耐碳青霉烯类抗菌药物鲍曼不动杆菌（CR-AB）、多重耐药/泛耐药铜绿假单胞菌（MDR/PDR-PA)和多重耐药结核分枝杆菌等。
第六七章变形杆菌属
环境感染
二、医院感染的微生态特征 （一）大多数为机会致病微生物 1、以细菌为主，病毒、真菌、衣原体、支原
体、原虫等 2、革兰阴性杆菌是最重要的致病菌 （二）常具有耐药性 （三）常发生种类的变迁
三、医院感染的危险因素（自学） 四、医院感染的预防和控制 ❖ 1、消毒灭菌 ❖ 2、隔离预防 ❖ 3、合理使用抗菌药物
（三）细菌成分检测 1、抗原的检测：免疫标记技术、对流免疫电
泳等 2、核酸的检测：核酸杂交、PCR等
三、血清学诊断
抗体的检查（双份血清升高4倍以上） ❖ 直接凝集试验 ❖ 乳胶凝集试验 ❖ 中和试验 ❖ ELISA等
第二节 特异性预防
一、人工主动免疫
（一）疫苗 1、死疫苗（灭活疫苗） 2、活疫苗（减毒活疫苗） 3、亚单位疫苗 4、基因工程疫苗 5、重组载体疫苗 6、核酸疫苗（DNA疫苗）
性但仍保留免疫原性的生物制品。
二、人工被动免疫
1、抗毒素 2、抗菌血清 3、胎盘球蛋白、血清丙种球蛋白
两种人工免疫方法的比较
项目 接种物质
主动免疫 抗原
被动免疫 抗体
接种次数
1～3次
1次
生效时间 维持时间
2～3周 数月～数年
立即 2～3周
主要用途
预防
治疗和紧急预防
第三节 细菌感染的治疗
抗菌药物： 微生物合成抗生素 半合成抗生素 人工合成抗菌药物
致病力：病原微生物引起疾病的能力，其能力 的大小用毒力来表示（量的概念），常用半 数致死量（LD50）或半数感染量（ID50）作 为指标。
细菌构成感染的条件：
❖ 足够毒力 ❖ 足够数量 ❖ 适当的侵入门户
一、毒力
（一）侵袭力（invasiveness） 1、定义：病原菌突破机体某些防御功能进入 机体，并在机体内一定部位定居、繁殖和扩 散的能力。
医学微生物学 第20章 立克次体
立克次体
变形杆菌
抗体交叉反应抗体来自外裴氏反应示意图二、致病性与免疫性
传播媒介：吸血节肢动物，如虱、蚤、蜱、螨等。 致病物质：内毒素（发热、微循环障碍、DIC、休克
磷脂酶A（溶解宿主细胞膜或吞噬体膜） 微荚膜（粘附、抗吞噬）
致病机制：
立克次体 虱、蚤、蜱、螨等叮咬 或其粪便污染伤口 局部淋巴组织 或小血管内皮细胞 中增殖 立克次 体血症 （第一次） 经血流 全身 小血管内皮细胞 大量增殖 立 克次体血症（第二次）、毒血症和各 种临床症状。
结构与组成：有细胞壁(脂质）、细胞膜和微荚膜，DNA和RNA
℃
抵抗力：
加热56℃ 30min灭活 对常用消毒剂如石炭酸、酒精、来苏敏感 对氯霉素、四环素等敏感
耐低温、抗干燥，磺胺药刺激生长
Rickettsia prowazekii
（普氏立克次体）
恙虫热立克次体（Giema染色）
抗原结构：群特异性抗原 种特异性抗原
立克次体的脂多糖与某些变形杆菌的菌体抗原有共同抗原成分
外斐反应(Weil-Felix reaction) 是一种非特异凝集反应，用普通变形杆菌株 OX19、OX2、OXk抗原代替立克次体抗原，测定 体内相应抗体含量的方法。抗体效价≥1:160 或随病程延长效价有4倍升高者有辅助诊断立 克次体病的价值。
螨虫
蜱
吃饱的跳蚤
人体虱
所致疾病： 见前表
免疫性：
以细胞免疫为主，体液免疫为辅。 多数可获得持久的免疫。
三、微生物学诊断与防治
病原体的分离培养与鉴定 血清学试验（外斐反应、ELISA） 立克次体易引起实验室感染，注意无菌操作！！
控制和消灭媒介昆虫； 抗生素治疗（氯霉素、四环素，但禁用磺胺类药物）； 全细胞灭活疫苗
30 肠杆菌科
注：HUS为溶血性尿毒综合征（hemolytic uremic syndrome, HUS） SLT为志贺样毒素（shigella-like toxin, SLT）
卫生细菌学检查
在环境和食品卫生学上，常被用作粪便污染的检测指标 大肠菌群指数 细菌总数 每1L水中大肠菌群数 每1ml或1g样品中细菌总数
细菌居住部位发生改变引起的肠外感染
泌尿系统感染最常见，尿道炎、膀胱炎、肾盂肾炎 2、某些致病菌株 某些带有致病基因的血清型，引起肠道感染 包括如下5组
1、肠产毒性大肠杆菌(enterotoxigenic E. coli, ETEC)：
感染对象：婴幼儿和旅游者； 临床症状：从轻度腹泻至严重的霍乱样腹泻；
问题
• 志贺菌属的致病物质及其作用机制是什么？ • 对可疑痢疾患者如何进行微生物学检查？
第三节 沙门菌属 Salmonella
一大群人与动物肠道中的寄生菌 菌群、菌型甚多，多对动物致病， 仅少数对人致病
其中许多为人畜共患病
抗原构造 O抗原： IgM，出现早、维持时间短、 每种沙 门菌有数种O抗原，不同种间有共同的
4、肠致病性大肠杆菌(enteropathogenic E. coli, EPEC)：
感染对象：引起婴幼儿腹泻； 发病机制： EPEC的黏附，致小肠绒毛萎缩，上皮细胞 功能紊乱
5、肠黏附性大肠杆菌(enteroadherent, E. coli, EAEC) 感染对象：婴幼儿急性和慢性腹泻，伴脱水；引起的 腹泻较EPEC缓和
肥达反应(-)不能排除伤寒 副伤寒
带菌者检测Ab-Vi 1：10 粪便或尿液反复细菌分离培养（至少3次）
防治原则
• 加强水源和食品卫生管理 • 疫苗
– 伤寒、甲及乙型副伤寒3联菌苗 – Ty2la伤寒沙门菌口服活菌苗 – 伤寒Vi荚膜多糖疫苗
变形杆菌检测方法
三糖铁结果：K/A 产H2S 尿素分解阳性
5、生化试验
• 经初步鉴定符合变形杆菌特征菌株， 按表3-8-1、3-8-2、3-8-3、3-8-4中项目进 行生化鉴定试验，并判定种属或种群。
• 也可用API20E和全自动微生物分析系统进 行生化鉴定。
奇异变形杆菌 API20E 结果
API 20E报告单 奇异变形杆菌
二、生物学特性
（一）形态 1.菌体形态 • 变形杆菌为革兰阴性小杆菌，两端钝圆。 大小0.4～0.6μm×1～3μm，有明显多形性。 无荚膜。 • 有周身鞭毛，运动活泼。有菌毛，可粘附 至植物和真菌细胞表面，但不能与动物或 人类细胞粘附。
奇异变形杆菌悬浮标本的细胞形态，金属镀膜 ×24000 小杆菌，两端钝圆
奇异变形杆菌api20e结果api20e报告单奇异变形杆菌6变形杆菌菌数的测定在变形杆菌食物中毒诊断检验时需要对可疑食物进行变形杆菌活菌计数常采用近似计数将检样在研钵中研磨制成悬液后用生理盐水对原样品进行102103104105等稀释度的稀释分别移取各稀释度的悬液01ml接种于琼脂斜面底部的凝结水内但勿接触培养基斜面表面
EMB培养基上为无色透明菌落
SS培养基上形成单个菌落，菌落中心呈黑色， 有粘性，打开平皿时有臭味
血平板上形成无色透明菌落 迁徙现象明显，不溶血
4、初步鉴定
将三糖铁培养基上乳糖反应阴性、硫化 氢阳性或阴性的菌株接种尿素和苯丙氨酸 鉴定培养基，37℃培养24h，变形杆菌二者 均为阳性。 变形杆菌易与沙门氏菌混淆，但变形杆 菌能够水解尿素。
7、血清学实验
在食物中毒诊断和判定中，需要对来自可 疑食物与患者的菌株进行血清型别鉴定，以判 定其同源性，如果没有分型因子血清，可做患 者血清效价和交互吸收试验。如果这两个实验 不能做，至少应该将待试菌株分别点种在普通 营养琼脂平板的两端，待两侧的菌株蔓延生长 到平板中间，菌苔完全融合，说明两株细菌没 有拮抗现象。
变形杆菌类及其检验
变形杆菌类及其检验变形杆菌类为有动力的革兰氏阴性杆菌，包括变形杆菌属、普罗菲登属和摩根氏菌属。
变形杆菌属分为普通变形杆菌(P．vulgaris)、奇异变形菌(P．mirabilis)、产粘液变形杆菌(P．myxofaciens．)和潘氏变形杆菌(P．pennea)。
普罗菲登斯菌属共有5个种。
摩根氏菌属只有一个种，即摩根氏菌(Morganella morganii)。
变形杆菌类是腐物寄生菌，自然界中广泛分布，水、土壤、腐败有机物中以及动物肠中都有存在，是一种条件致病菌，这种活菌在肉品上大量繁殖，被人摄食后进人人体，在条件适合时，就有可能引起食物中毒。
所以只从样品中检出变形杆菌并无实际意义，只有变形杆菌类严重污染的食品被人摄食后，才能引起食物中毒。
检验变形杆菌引起的食物中毒时，不仅要分离鉴定变形杆菌而且还要检验变形杆菌在每克食品中的最近似数。
4起中毒事件概况1.1 2003年4月18日，康乐县苏集乡古洞沟村一村民在家举行宗教活动，参加活动的66人就餐后发生食物中毒。
经及时救治，未发生死亡。
对所食鸡肉和烩菜进行检验,检出变形杆菌；1.2 2003年4月18日，广河县阿里麻土乡古城村一村民在家举行宗教活动，参加活动的90人就餐后有62人发生食物中毒。
经及时救治，未发生死亡。
对所食羊肉进行检验，检出变形杆菌；1.3 2003年5月16日，康乐县白王乡老树村一村民宰杀病畜分食，30人发生食物中毒，未发生死亡。
经采样检验，检出变形杆菌；1.4 2003年5月26日，和政县梁家寺乡宋家沟村一清真寺举行宗教活动，参加活动者集体就餐，115人发生食物中毒，无死亡。
经采样检验，检出变形杆菌。
一、生物学特性1．形态与染色特性变形杆菌是一类大小、形态不一的细菌，有时球形，有时丝状，呈明显的多形性，周身鞭毛，能运动，无芽孢荚膜，革兰氏阴性。
2．培养特性1）需氧及兼性厌氧。
2）对营养要求不高，在普通琼脂上生长良好。
3）在固体培养基上普通和奇异变形杆菌常扩散生长，形成一层波纹薄膜，叫做迁徙生长现象。
动力实验变形杆菌现象
动力实验变形杆菌现象变形杆菌人和动物的寄生菌和病原菌。
广泛分布在自然界中，如土壤、水、垃圾、腐败有机物及人或动物的肠道内。
变形杆菌为能活泼运动而又极为多形性的一群肠道菌，有球形和丝状形，具有鞭毛、无荚膜、无芽胞、革兰氏阴性，运动活泼。
在固体培养基上呈扩散生长，形成迁徙生长现象。
若在培养基中加入0.1%石炭酸或0.4%硼酸可以抑制其扩散生长，形成一般的单个菌落。
在SS平板上可以形成圆形、扁薄、半透明的菌落，易与其他肠道致病菌混淆。
培养物有特殊臭味，在血琼脂平板上有溶血现象。
能迅速分解尿素。
根据菌体抗原分群，再以鞭毛抗原分型。
此属细菌X19、XK、X2的O抗原与人斑疹伤寒等某些立克次体的多糖抗原有交叉的血清学反应，可替代立克次体抗原与患者血清作凝集反应，此反应称为外斐试验，用于某些立克次体病的辅助诊断。
肠杆菌科中的一属革兰阴性运动细菌，有明显多边性，有周身鞭毛，运动活泼，无荚膜，有菌毛。
变形杆菌广泛分布在自然界中，如土壤、水、垃圾、腐败有机物及人或动物的肠道内。
细胞杆状；营养要求不高。
在固体培养基上呈扩张性生长，形成以菌种部位为中心的厚薄交替、同心圆形的层层波状菌苔，称为迁徙生长现象但也产生不规则形状的细胞（包括丝状体）。
为兼性厌氧菌，但在缺氧环境下发育不良。
为本属细菌的特征。
此现象可被苯酚或胆盐等抑制。
在血琼脂平板上有溶血现象。
在基础培养基（和含氰化钾的培养基）上生长，在20～40℃之间繁殖旺盛。
发酵葡萄糖，不发酵乳糖，在SS平板上的菌落形态和在双糖管中的生化反应模式与沙门菌属十分相似，可用尿素酶试验加以区别。
病原生物与免疫学基础第五章常见病原菌第二三节-肠道杆菌和弧菌属PPT课件
▪ 致病性的大肠埃希菌直接导致肠道感染引起人类腹泻
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7
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（二）卫生学意义
▪ 大肠埃希菌不断随粪便排出，可污染周围环境、 水源、食品等
▪ 样品中检出此菌愈多，表示粪便污染愈严重，间 接提示有肠道致病菌污染的可能
▪ 卫生学上常作为检测饮水、食品被粪便污染的指 标之一
▪ 我国饮水卫生标准：每1000ml饮水中大肠菌群数 不得超过3个。
C. 预防肠穿孔 √
D. 预防疾病复发
E. 防止便秘，嘱病人多食含粗纤维食物
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（二）填空题
1. 肠热症病后可获得 持久免疫 免疫。 2. 大肠埃希菌在环境和食品卫生学中，常被用作
粪便污染的卫生学检测指标。 3. 慢性细菌性痢疾病程一般超过 2个月 。 4. 中毒性痢疾常无明显的 消化道症状 ，主要表
药 射 水离
物 疫 卫、
是 苗 生治
环
及疗
丙
粪病
氟
便人
哌
管及
酸
-理 带
ห้องสมุดไป่ตู้
。
菌
防 治 原 则
20
三、志贺菌属
▪ 志贺菌俗称痢疾杆菌，分四群： ▪ A群（痢疾志贺菌） ▪ B群（福氏志贺菌） ▪ C群（鲍氏志贺菌） ▪ D群（宋内志贺菌） ▪ 我国流行的主要是福氏志贺菌。
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21
致病物质
▪ 菌毛
▪ 能粘附于结肠粘膜上皮细胞上，利 于细菌穿入细胞内繁殖
▪ 致病菌主要有鼠伤寒沙门菌、猪霍乱沙门 菌、肠炎沙门菌
▪ 通过污染的食物经消化道感染 ▪ 引起的急性胃肠炎症状，2～3d自愈 ▪ 常为集体性食物中毒。
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15
败血症
变形杆菌分离鉴定标准(一)
变形杆菌分离鉴定标准(一)变形杆菌分离鉴定标准引言变形杆菌是一类常见的细菌，其形状呈现为弯曲状或螺旋状，广泛存在于环境中。
由于其特殊的形态和生理特征，变形杆菌在科学研究和工业应用中具有重要作用。
为了准确分离和鉴定变形杆菌，一套规范的实验方法和标准被广泛应用。
变形杆菌分离鉴定标准变形杆菌的分离鉴定可以按照以下步骤进行：1.样品采集：从目标环境中采集样品，如土壤、水体、动物肠道等。
2.预处理：对采集的样品进行预处理，以去除干扰物质并提取变形杆菌。
–用适当的缓冲液将样品悬浮并混合均匀。
–利用离心等方法将悬浮液离心，以获得细菌沉淀。
–通过适当的水洗和稀释方法，去除干扰物质并浓缩变形杆菌。
3.培养：将预处理后的样品接种到合适的培养基上进行培养。
–选用含有适当营养物质的培养基，如Czapek培养基。
–调整pH值和温度，提供适宜的培养环境。
–培养时间根据需要进行调整。
4.纯化：从培养液中筛选出单一的变形杆菌菌落。
–用不同浓度的培养基进行稀释，以筛选出单一菌落。
–利用传代培养的方法，使菌落变纯。
5.形态观察：观察和描述变形杆菌的形态特征。
–使用显微镜对菌落进行观察。
–描述变形杆菌的长度、形状、弯曲度等特征。
6.生理特征鉴定：通过多种生理特征判断菌株的身份。
–进行生化试验，如碳水化合物利用能力、蛋白质水解能力等。
–进行氧需求试验，如需氧菌或耐气菌。
–进行其它适合的鉴定试验。
7.分子鉴定：使用分子生物学方法进行鉴定。
–提取变形杆菌的DNA。
–利用PCR扩增目标基因片段。
–进行测序和比对，鉴定菌株的身份。
结论变形杆菌的分离鉴定是进行科学研究和应用的重要步骤。
遵循规范的实验方法和鉴定标准，可以准确鉴定变形杆菌并获取可靠的实验结果。
各个步骤的严格操作和结果的准确判断是保证实验成功的关键。
通过不断的实践和改进，我们可以更好地理解和利用变形杆菌在不同领域中的作用。
多重调理吞噬试验方法的重复性和再现性研究
多重调理吞噬试验方法的重复性和再现性研究李江姣;杜慧竟;石继春;陈翠萍;徐苗;叶强【摘要】目的研究中国食品药品检定研究院(以下简称“我院”)建立的多重调理吞噬试验方法(MOPA)的重复性和再现性.方法采用MOPA方法对19份血清样本,针对13个血清型肺炎球菌的体外调理吞噬试验(OPA)滴度在我院及美国阿拉巴马大学肺炎链球菌血清学参比实验室分别进行两轮检测,对两个实验室间检测结果及本室的两轮试验结果进行比较分析.结果总体上,13个血清型的总的OPA滴度比较比较显示,两个实验室间相关系数为0.94,本室内部则可达到0.96,均呈现出良好的相关性.另一方面,各血清型的两实验室间和我院内相关系数范围分另为0.87～0.99和0.68～0.99.结论我院建立的MOPA方法具有良好的重复性和再现性,为我国开展肺炎链球菌疫苗的免疫保护效力评价工作奠定了良好的基础.【期刊名称】《中国医药导报》【年(卷),期】2015(012)028【总页数】5页(P14-17,封3)【关键词】调理吞噬试验;肺炎链球菌疫苗;功能抗体;重复性;再现性【作者】李江姣;杜慧竟;石继春;陈翠萍;徐苗;叶强【作者单位】中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室,北京100050;中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室,北京100050;中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室,北京100050;中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室,北京100050;中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室,北京100050;中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室,北京100050【正文语种】中文【中图分类】R392肺炎球菌疫苗的保护力可以通过临床效力试验来确定[1]，但由于需要的样本量大、费用高、周期长等原因临床效力试验往往不易实施。
病原生物学实验-微生物合集
病原生物学实验-微生物合集细菌生理及外界因素对细菌的影响生物安全柜使用Ⅱ级A2型生物安全柜细菌特殊结构荚膜芽孢鞭毛革兰染色制片：涂片、干燥、固定染色意义鉴别初筛标本指导用药与致病有关影响因素细菌：菌龄细菌细胞壁破损芽胞操作：涂片固定IMViC实验作用 ：鉴别大肠埃希菌和产气杆菌I - 吲哚（indol）试验机制大肠埃希菌——阳性具有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸生成吲哚，加入吲哚试剂，作用后形成红色的玫瑰吲哚。
产气杆菌——阴性M - 甲基红（methyl red）试验机制大肠埃希菌——阳性分解葡萄糖产生丙酮酸后继续分解丙酮酸产生乳酸、甲酸、乙酸等，由于产生大量有机酸，pH下降至4.5以下，加入甲基红指示剂显红色产气杆菌——阴性将两分子丙酮酸脱羧形成中性乙酰甲基甲醇，使培养物酸性物质减少，pH在5.4以上，加入甲基红指示剂显橘黄色V - VP（Voges-Proskauer）试验原理糖代谢分解葡萄糖产生丙酮酸，进一步分解形成甲酸、乙酸、乳酸等。
产气肠杆菌——阳性可使丙酮酸脱羧变为中性的乙酰甲基甲醇，在碱性环境下被空气氧化为二乙酰，后者与蛋白胨中精氨酸所含的胍基起作用，生成红色化合物大肠杆菌——阴性不能使丙酮酸脱羧方法分别接种大肠埃希菌和产气肠杆菌于2支葡萄糖蛋白胨水培养基37℃培养48h后取出分别+1ml α-萘酚溶酒精溶液和0.4mlKOH溶液，摇匀静置。
α-萘酚可加速反应C -枸橼酸盐利用（citrate utilization）试验原理能否利用枸橼酸盐取得碳源产气肠杆菌——阳性可以利用枸橼酸盐作为碳源，形成菌落。
且分解后，碱性的碳酸盐生成，使培养基pH升高，转位碱性。
培养基中的溴麝香草酚蓝指示剂由绿色转变为深蓝色大肠埃希菌——阴性不能分解枸橼酸盐，培养基仍为绿色生物因素对细菌的影响药敏实验噬菌体对细菌的作用细菌的代谢产物的检查乳糖发酵实验不同细菌分解乳糖后产酸产气与否的差异指示剂：溴甲酚紫——产酸——黄色大肠杆菌：分解葡萄糖&乳糖，产酸产气伤寒沙门菌：分解葡萄糖不分解乳糖，产酸不产气普通变形杆菌：分解葡萄糖不分解乳糖，产酸产气结果硫化氢实验某些细菌分解胱氨酸等含硫氨基酸→硫化氢，硫化氢遇亚铁/铅离子→黑褐色硫化亚铁（硫化铅）沉淀物培养基——醋酸铅培养基阳性——黑色沉淀/阴性——不变色肠杆菌科细菌鉴定尿素分解实验有些细菌有尿素酶，尿素→氨→pH↑→酚红指示剂变红（阳性）肠杆菌科细菌鉴定细菌的变异、致病性与免疫性细菌变异形态结构变异鼠疫耶氏菌 高盐培养基→大小不等多形态含青霉素培养基→L型细菌鞭毛变异鞭毛变异→无迁徙现象→点状生长遗传物质改变突变基因转移和重组转化结合转导普遍性转导局限性转导耐药质粒的转化实验操作实验结果长or不长血浆凝固酶实验金葡-产生-血浆凝固酶<—with—>加入肝素/枸橘酸钠的血浆 →凝固试验方法（试管法）凝固-阳性 不凝固-阴性透明质酸酶实验透明质酸——溶解组织结缔组织透明质酸——感染扩散化乙型溶血性链球菌——产生此酶实验结果致病性毒力侵袭力荚膜黏附素侵袭性酶血浆凝固酶透明质酸酶链激酶链道酶毒素内毒素外毒素侵入部位侵入数量免疫性免疫力非特异性免疫屏障结构吞噬细胞体积最大，细胞圆形。
肠道杆菌
致病性与免疫性
• 致病物质
–侵袭力： • 有Vi抗原的沙门菌具有侵袭力; • 菌毛粘附于小肠位于派伊尔淋巴结M细胞 皮下 组织 吞噬细胞吞噬，但不被杀灭，继续生长 繁殖 导致宿主细胞死亡
–内毒素：体温升高、WBC下降？ 中毒性症状 –外毒素（肠毒素）：
• 某些沙门菌,如鼠伤寒沙门菌 • 类似ETEC产生的肠毒素
第八章球菌重点
掌握SPA 掌握金黄色葡萄球菌的致病物质及其所致疾病 掌握化脓性链球菌的致病物质及其所致疾病 掌握肺炎链球菌的主要致病物质及所致疾病 了解肺炎链球菌的与甲型链球菌的鉴别 了解脑膜炎奈瑟菌的致病物质及所致疾病 了解淋病奈瑟菌的致病物质及所致疾病
重要名词： SPA
第九章 肠道杆菌科
肠杆菌科（Enterobacteriaceae）：一大群寄生于人和 动物肠道内 生物学性状相似的中等大小的G -杆菌。
我国饮用水卫生标准：
≤ 3个大肠菌群/1L饮水 ≤ 100个细菌总数/1ml饮水
第二节 志贺菌属（Shigella）
是人类细菌性痢疾最为常见的病原菌，俗称痢疾杆菌 dysentery bacterium。
形态
无荚膜、无鞭毛，有菌毛
生化反应 多数不分解乳糖，M+ VP-
对理化因素的抵抗力 低于其他肠道杆菌，对酸敏感
婴幼儿腹泻，严重可致死 不产生肠毒素和其它外毒素，无侵袭力，细菌繁 殖导致小肠微绒毛的破坏、肠功能紊乱
4、肠出血型大肠埃希菌（enterohemorrhagic E. coli，EHEC）：又称Vero毒素大肠杆菌。
血清型为O157：H7 5岁以下儿童易感 轻度水泻至伴剧烈腹痛的血便即出血性 结肠炎，有时并发溶血性尿毒综合征 致病物质：菌毛和毒素（与志贺毒素相似）
病原微生物实验重点
病原微生物实验重点高压蒸汽灭菌（最常用，最有效的一种湿热灭菌法）的原理和作用：原理：如果蒸汽被限制在一个密闭的容器（高压蒸汽灭菌器）中，随着压力的升高，蒸汽的温度也相应升高。
在103.4KPa蒸汽压下，温度达到121.3℃，维持20-30min可杀灭包括细菌芽孢在内的所有微生物（但不能杀灭活朊粒）作用：适用于包括液体在内的各种耐热，耐潮湿物品的灭菌血清肉汤培养基的用途：用于培养乙型溶血性链球菌等营养要求较高的细菌血琼脂培养基的用途：主要用于分离培养营养要求较高的细菌和观察某些细菌的溶血现象双糖铁培养基的原理及用途：双糖培养基乳糖：葡萄糖=10:1，若细菌能分解两种糖，因产酸量多，整个培养基将由红变黄；若只能利用葡萄糖，因产酸量少，斜面表面积大，有机酸易挥发氧化，结果培养基底部变成黄色，斜面仍保持红色。
该培养基还含有亚铁离子，可与硫化氢生成黑色沉淀，所以利用此培养基还能观察到某些细菌分级含硫氨基酸产生硫化氢的情况。
由于该培养基是半固体培养基，还可用于有无鞭毛（痢疾杆菌无鞭毛）的鉴定。
本培养基主要用于肠道致病菌的鉴定。
S-S琼脂培养基的原理及作用：①主要用于分离肠道致病性沙门菌属和志贺菌属的细菌②培养基的选择成分主要体现在煌绿对球菌生长有抑制作用，有助于肠道致病菌的生长；胆盐，枸橼酸钠，硫代硫酸钠可抑制革兰阳性细菌和大多数的大肠埃希菌属细菌的生成，枸橼酸铁能中和中性红的毒性作用，并能与硫代硫酸钠作为还原剂，避免某些细菌产生的硫化氢被氧化③培养基的鉴别作用体现在不发酵乳糖的沙门菌属和志贺菌属细菌，在平板上形成的菌落不着色，呈半透明。
大肠埃希菌能发酵乳糖，产生的酸使胆盐沉淀，胆盐与中性红结合，使菌落呈红色，在平板上可见培养基中红色成片的乳浊状沉淀。
某些变形杆菌和沙门菌还能分解含硫氨基酸产生硫化氢，使菌落中心成黑色。
此外，细菌在该平板上生长后，分解蛋白质产生氨基酸等碱性代谢物，使平板PH值升高，培养基由红变黄罗氏培养基的用途：主要用于结核分枝杆菌的培养（结核杆菌在该培养基上生长缓慢，呈菜花样）油镜的放大倍数：90或100（光学显微镜的分辨率为0.25μm）观察细菌鞭毛所用方法：压滴法，悬滴法，半固体鞭毛穿刺法细菌的革兰染色法：①原理：革兰阳性细菌的细胞壁结够比较致密，肽聚糖含量高且交联度大，脂质含量少，乙醇脱色过程中，虽然能溶解细胞壁的脂质而在壁上形成小孔，但脱水作用使细胞壁收缩构成屏障，通透性降低，阻止细胞内的结晶紫-碘复合物的溢出，细胞仍保持结晶紫初染的紫色。
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确定普通变性杆菌与RA W264.7的最佳作用时间：取108个细胞/ml菌与长成单层的RAW264.7细胞（六孔板，每孔约5x105个），分别孵育30min，60min，90min，120min。
弃去菌悬液，用37度预热PBS洗3次，换成含羧苄青霉素(5ug/mL)和卡那霉素(100ug/mL)的维持液继续作用1h，杀死胞外菌，取上清，涂LB平板，确定确定抗生素有效的杀死胞外细菌。
（（用预热的PBS洗3次，换成含10ug/mL卡那霉素的培养液维持。
分别在oh，2h和4h时，））用预热PBS洗2次，每孔加入1mL无菌蒸馏水，反复吹打后静置30min裂解细胞，释放胞内细菌。
将裂解液做连续倍比稀释，涂布LB琼脂平板，确定活菌数，找出吞噬细菌最多对应的时间即最佳作用时间。
同时以含2%血清的DMEM培养液为空白对照。
确定最佳作用时间时与RA W264.7互作的最佳菌量：分别取不同菌量（105，106，107，108个细菌/孔）与RAW264.7细胞在最佳互作时间共培养，弃去菌悬液，用37度预热PBS洗3次，换成含羧苄青霉素(5ug/mL)和卡那霉素(100ug/mL)的维持液继续作用1h，杀死胞外菌，取上清，涂LB平板，确定确定抗生素有效的杀死胞外细菌。
用预热的PBS洗3次，换成含10ug/mL庆大霉素的培养液维持。
分别在oh，2h和4h时，用预热PBS洗2次，每孔加入1mL无菌蒸馏水，反复吹打后静置30min裂解细胞，释放胞内细菌。
将裂解液做连续倍比稀释，涂布LB琼脂平板，确定活菌数。
算出吞噬的细菌比例（被吞噬的细菌数量/加入的细菌数量）对应的菌数即最佳作用菌量。