2015年创新设计高三生物复习全部课x1-2

(2)长期保存法： 甘油管藏 法，放在 －20 ℃
下保存
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特别提醒 (1)配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的注意事项
①倒平板的适宜温度是50 ℃左右，温度过高会烫手，过低
培养基又会凝固。 ②平板需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发， 又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 (2)平板划线操作的注意事项
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3．纯化大肠杆菌的方法
常用的微生物接种方法有平板划线法 和 稀释涂布平板法。
(1)平板划线法：是通过接种环在琼脂固体培养基表面 连续划线 的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基 的表面。(如下图示)
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(2)稀释涂布平板法：是将菌液进行一系列的 梯度稀释 ， 然 后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面， 进行培养。( 如下图所示)
分解尿素的细菌的分离与计数(5年9考)
(2012浙江卷，2010全国Ⅰ、重庆卷、安徽卷……) 一、实验原理 1．分离原理 土壤中细菌之所以能分解尿素，是由于它们体内能合成 脲酶 ，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起到 催化 作用。 2．筛选菌株的原理 微生物的选择培养：在选择培养基的配方中，把尿素作为
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(2)下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是________灭菌。 A．高压蒸汽 C．体积分数为70%酒精浸泡 B．紫外灯照射 D．过滤
(3)步骤X表示________。在无菌条件下操作时，先将菌液稀
释，然后将菌液________到培养基平面上。菌液稀释的目的 是为了获得________菌落。 (4)在培养时，需将培养皿倒置并放在______中。若不倒置培 养，将导致______。
解析
(1)在微生物的培养过程中，常用来分离微生物的方法
是稀释涂布平板法或平板划线法。(2)为了使微生物在培养基 上能够均匀分布，一般用稀释涂布平板法将微生物接种在培
养基上。(3)在抗药性检验过程中，如果在菌落周围出现透明
圈，说明此种抗生素可抑制该细菌；透明圈的大小表示此种 抗生素抗菌效果的强弱。据此可判断抗菌效果强弱依次是A、 C、B；D的透明圈中出现了一个菌落，说明该菌落对此种抗 生素具有耐药性。
第2讲
微生物的培养和利用
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2015备考·最新考纲
1 ． 微生物的分离和培养
3.培养基对微生物的选择作用
2. 某种微生物数量的测定
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考点1
微生物的实验室培养(5年15考)
(2013新课标全国Ⅱ卷、四川理综、江苏卷，2012北京卷、
浙江、山东，2011天津)
一、培养基 1．概念：人们按照微生物对 营养物质 的不同需求，配制 出的供其 生长繁殖 的营养基质
个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板
上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
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②操作： a．设置重复组，增强实验的说服力与准确性。
b．为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进
行计数。 ③计算公式：每克样品中的菌株数＝(C÷V)×M ，其中 C 代 表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板 时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。
谢特点，在培养
基中加入某种指 示剂或化学药品
特别提醒 自养微生物与异养微生物所需的营养物质不同：
①自养微生物所需的碳源、氮源来自含碳、含氮的无机物，
而异养微生物需要的碳源、氮源来自含碳、含氮的有机物， 因此可根据培养基中营养物质判断微生物的代谢类型。②含 氮无机物不但能给自养微生物提供氮源，也能作为能源物质， 提供能量，如NH3既作为硝化细菌的氮源也作为能源。
培养基中的唯一氮源，原则上只有能够利用尿素的微生物
才能够生长。
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二、统计菌落数目的方法 (1)显微镜直接计数法 ①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜
下计算一定容积的样品中微生物数量。
②方法：用血球计数板计算。 ③缺点：不能区分死菌与活菌。 (2)间接计数法(活菌计数法) ①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一
加凝固剂， 固体 培养基 如琼脂
微生物的 分离与鉴定、
活菌计数、菌种保藏
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天然 培养基 化学 成分 合成 培养基
含化学成分不明确 的天然物质 培养基成分明确(用 化学成分已知的化 学物质配成)
工业生产
分类、鉴定
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培养基中加入某
种化学物质，以 选择培 用 途 养基 抑制不需要的微 生物的生长，促 进所需要的微生
过
选择培养、鉴别等步骤获得。
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(2)取该单菌落适当稀释，用__________法接种于固体培养基 表面，在37 ℃培养箱中培养24 h，使其均匀生长，布满平板。 (3)为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有A、
B、C、D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，
培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致 病菌对抗生素A____________；含B的滤纸片周围没有出现 透明圈，说明该致病菌对抗生素B____________；含C的滤 纸片周围的透明圈比含A的小，说明
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微生物实验室培养的拓展应用 2．(2013·新课标全国Ⅱ理综)临床使用抗生素前，有时需要 做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量
样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌
对不同抗生素的敏感性。 回答下列问题： (1) 为了从样本中获取致病菌单菌落，可用 ____________ 法或 ____________ 法将样本接种于固体培养基表面，经
( A．培养基分装到培养皿后进行灭菌 B．转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线 C．接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养 )。
D．培养过程中每隔一周观察一次
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解析
培养微生物的过程中应先灭菌再倒平板，A错误；每
一次划线前都要进行接种环的灼烧灭菌，B正确；接种后的
培养皿应在恒温培养箱中进行培养，光照会影响温度等条件； 培养过程中观察间隔的时间一般不超过24 h。 答案 B
动物
糖类、脂 蛋白质或其降解
肪等 物
同碳源 都需要， 同碳源 种类及 功能基
微 生
异养
型
糖类、脂 蛋白质或其降解 肪、醇、 物、铵盐、硝酸 有机酸等 CO2、碳 酸盐等 盐、N2等 酸盐等 铵盐、硝酸盐 或利用光能 光能
物 自养
型 绿色植物
NH3、铵盐、硝 氧化无机物 本相同
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考点2
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(
)。
微生物分离与计数的考查
(2012· 浙江自选， 17) 幽门螺杆菌 (Hp) 感染是急慢性胃炎和 消化性溃疡的主要致病因素。在患者体内采集样本并制成菌 液后，进行分离培养。实验基本步骤如下：
配制培养基 ― →灭菌、倒平板 ― →X ― →培养 ― →观察
请回答下列有关问题。 (1) 在配制培养基时，要加入尿素和酚红指示剂，这是因为 Hp含有 ________，它能以尿素作为氮源；若有Hp，则菌落 周围会出现________色环带。
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― → 微生物的培养与观察― → 细菌
思维激活
判断正误
(1)只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素 ( )。
(2) 筛选分解尿素的细菌应以尿素作为培养基中的唯一氮 源
(
(3)统计样品中的活菌一般用平板划线法 (
)。
)。
(4) 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，若 指示剂变蓝，则说明筛选到分解尿素的细菌 答案 (1)√ (2)√ (3)× (4)×
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1一般都含有水、无机盐、碳源、氮源 2．营养构成2还需满足不同微生物对pH、特殊营养物质 以及O 的要求 2
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3．培养基的种类及用途
划分
标准
培养基的种类
特点 不加凝 固剂
用途
液体 培养基 物理 半固体培养基 性质
工业生产 微生物的运动
观Hale Waihona Puke 、鉴定培养、分离出特定微生物(如 在培养酵母菌和霉菌时，可在
培养基中加入 青霉素；在培养
金黄色葡萄球菌时，可在培养 基中加入高浓度的食盐等) 鉴别不同种类的微生物，如可 用 伊红—美蓝 培养基检测 饮用水或乳制品中是否有大肠 杆菌(若有，菌落呈深紫色， 并带有 金属光泽 )
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物的生长
根据微生物的代 鉴别培 养基
为5.0～6.0，培养不同微生物所需pH不同。
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2．培养基的营养构成 (1)各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源、 氮源和无机盐；
(2)不同培养基还要满足不同微生物对pH、特殊营养物质
以及氧气的要求。
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3．微生物和动植物营养要素的比较 项目 碳源 氮源 能源 无机盐、 水
答案
(1)平板划线
(3) 敏感 (4)A
稀释涂布(或涂布)平板
不敏感
(2)稀释涂布平
板 ( 涂布 ) 的弱
该致病菌对 C 的敏感性比对 A
耐药菌
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归纳比较
1．培养基的配制原则
(1) 目的要明确：配制时应根据微生物的种类、培养目的 等确定配制的培养基种类。 (2)营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。 (3)pH 要适宜：细菌为 6.5 ～ 7.5，放线菌为 7.5 ～ 8.5 ，真菌
①系列稀释操作(如下图所示)
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②涂布平板操作(如下图所示)