核桃青果皮系统溶剂提取物抑菌作用研究

旨在为进一步开发利用南疆核桃资源，增加其附 加值，提供一条新的途径。
1 材料和方法
1.1 材 料 核桃青皮采自新疆阿克苏核桃产区，在 45 ℃
左右的烘箱中烘干，粉碎过 0.177 mm 筛，然后密 封于塑料袋内，置冰箱中备用。
细 菌 ：枯 草 芽 孢 杆 菌 、金 黄 色 葡 萄 球 菌 、大 肠 杆菌；真菌：黑曲霉、青霉；啤酒酵母。以上供试菌 种由塔里木大学生命科学学院菌种保藏实验室 提供。 1.2 仪器与药品
第2期
龚斌荣等：核桃青果皮系统溶剂提取物抑菌作用研究
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粉、酵母膏、葡萄糖、牛肉浸膏、蛋 白 胨 均 为 生 化 试剂。
HYP -150 粉 碎 机 、RE -201D 旋 转 蒸 发 仪 、 SHB-B95A 型循环水式多用真空泵、101-5ARS 电 热鼓风干燥箱、DL-1 电子万用炉、BL2200H 电子 天平、SPX-250C 恒温恒湿培养箱、LDZX-40BI 立 式自动压力蒸汽灭菌器 。 1.3 方 法 1.3.1 待 测 样 品 的 制 备 称取一定质量核桃青 皮粗粉置于回流装置中，以 95%乙醇为提取溶剂 在 70 ℃水浴中回流提取 3 次（3 h→2 h→2 h），每 次加入 500 mL95%乙醇回流，合并 3 次提取液进 行减压浓缩至浸膏状, 留少部分醇提物稀释后直 接用于抑菌试验，剩余部分萃取用。称取核桃青皮 乙醇提取物浸膏 10 g 加入少量蒸馏水，装入分液 漏斗中混匀后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇各 萃取 4 次 (50 mL·次-1（) 图 1）。分别合并各萃取 液，减压浓缩至浸膏状。
(1.The Experiment Forest Station of Akesu region, Akesu, Xinjiang 843000,China; 2.College of Life Sciences, Tarim University, Alar, Xinjiang 843300,China;3.Afforestation Centre of Logistical Administration Office, Tarim University, Alar, Xinjiang 843300,China ) Abstract: The bacteriostasis of systematic solvents extracts from walnut green peel was studied.Six systematic solvents extracts were conducted for the inhibitory effects against food spoilage.The results showed that the extracts from walnut green peel could effectively inhibit the growth of bacteria. The petroleumether and acetate extract had stronger effects than other solvents. Key words: walnut green peel；extract；bacteriostasis
2 结果与分析
2.1 核桃青皮系统溶剂提取物的提取率 本试验采用冷浸法, 以最大限度保留其活性
成分,从表 1 数据可以看出，核桃青果皮乙醇提取 物 中 石 油 醚 、 乙 酸 乙 酯 提 取 率 相 对 为 16.09% 、 10 . 79 % ，说 明 有 很 大 一 部 分 活 性 物 质 能 够 溶 于 石 油醚、乙酸乙酯并被其萃取，同时也说明核桃青皮 中的活性物质极性较小。
青霉
9.45 12.00 13.10 9.20 -
黑曲霉
6.55 15.43 10.30 -
-
啤酒酵母
- 14.33 11.50 -
-
注 ： 孔 径 为 “6 mm”； 抑 菌 圈 直 径 包 括 孔 径 ， 抑 菌 圈 直 径均为平均值；“-”为无抑菌圈。 抑菌效果判断标准：抑菌 直 径 在 6～10 mm 之 间 为 略 微 ； 抑 菌 直 径 在 11～15 mm 之 间 为 一 般 ；抑 菌 直 径 在 16～25 mm 之 间 为 较 好 ；抑 菌 直 径 在 26～35 mm 之 间 为 显 著 ；抑 菌 直 径 在 35 mm 以 上 为 强 烈 。
溶剂 石油醚 乙酸乙酯 正丁醇
水
表 1 核桃青皮提取率 提 取 物 质 量 /g 20.43 13.70 5.30 10.41
提 取 率 /％ 16.09 10.79 4.17 10.30
2.2 系统溶剂法萃取液抑菌效果比较 从表 2 可以看出，系统溶剂法回流萃取液中，
95%乙醇提取液粗提物除对啤酒酵母无抑菌效果 外，对细菌有较好的抑菌效果，对青霉和黑曲霉抑 菌效果较差；石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取液 中，石油醚萃取液和乙酸乙酯萃取液对 6 种供试 菌均有抑制效果，石油醚萃取液对大肠杆菌和枯 草 芽 孢 杆 菌 抑 制 效 果 显 著 ， 抑 菌 圈 直 径 为 33.5 mm ，对 金 黄 色 葡 萄 球 菌 抑 制 效 果 强 烈 ，抑 菌 圈 直
随着生活水平的提高,健康意识的增强, 人们 对天然无公害、无污染产品的需求越来越多。从这 一目的出发, 国内外学者对天然产物提取成分在 抗菌、抑菌方面作了许多工作, 其中从资源丰富 的 植 物 中 寻 找 高 效 低 毒 的 杀 菌 、抑 菌 成 分 , 并 由 此 开发无公害植物源杀菌剂, 已成为该研究领域的 方向和热点[1]。
95% 乙 醇 、四 氯 化 碳 、石 油 醚（30 ～60 ℃）、丙 酮 、乙酸乙酯、正丁醇、氯化钠均为分析纯；琼脂
收 稿 日 期 ：2012-03-08 ； 修 订 日 期 ：2012-03-21 基 金 项 目 ： 新 疆 生 产 建 设 兵 团 塔 里 木 盆 地 生 物 资 源 保 护 利 用 重 点 实 验 室 开 放 课 题 （BR0806 ） 作 者 简 介 ： 龚 斌 荣 （1976- ） ， 男 ， 湖 南 邵 阳 人 ， 助 理 工 程 师 ， 主 要 从 事 经 济 林 专 业 研 究 。 通 讯 作 者 简 介 ： 司 杰 （1983- ） ， 男 ， 山 东 藤 县 人 ， 助 理 农 艺 师 ， 主 要 从 事 园 林 绿 化 方 面 的 研 究 工 作 。
3 结论
在系统溶剂中，极性由小到大顺序依次是石 油醚＜乙酸乙酯＜正丁醇＜丙酮＜乙醇＜水，极性最 小的是石油醚，该提取物中物质的极性也最低，从 对 6 种对象菌的抑制作用看，石油醚萃取物有最 强抑制作用，对 3 种细菌的抑制作用明显好于对
表 3 核 桃 青 皮 提 取 液 最 小 抑 菌 浓 度 （Mic）
摘 要：以苯甲酸钠为对照组，分别研究核桃青果皮的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇和水提取液对几种常见食品微生物
的抑菌效果。结果表明，核桃青果皮提取液对细菌具有较强的抑制作用，啤酒酵母次之，乙酸乙酯和石油醚提取物的抑菌效果
优于其它溶剂。
关 键 词 ：核桃青果皮；提取；抑菌
中 图 分 类 号 ：S664.1
注入小孔，每一样品重复 3 次，同时各菌种用蒸馏 水、95%乙醇做一组空白对照。将细菌置 37 ℃恒 温箱中培养 24 h，真菌置 28 ℃培养 48～72 h，做 好标记。待培养时间到后，观察菌种的生长情况， 测量抑菌圈的直径，取平均值。 1.3.4 最 小 抑 菌 浓 度(Mic)的 测 定 无菌条件下， 将 提 取 液 原 液 用 无 菌 水 稀 释 , 得 50% 、25% 、 12.5%、6.25%、3.125%、1.563% 6 个浓度梯度, 在 各平皿内分 别 加 入 2 mL 不 同 浓 度 的 提 取 液 , 每 个浓度 3 个重复, 然后倒入 10～12 mL 培养液 (细 菌培养用牛肉膏蛋白胨琼脂培养基, 真菌培养用 马铃薯琼脂培养基), 充分混匀, 冷却凝固后, 用移 液枪移取 1 mL 菌悬液于平皿中，用涂布棒涂抹均 匀，将细菌置 37 ℃恒温箱中培养 24 h，真菌置 28 ℃ 培养 48～72 h，做好标记，待培养时 间 到 后 ，观 察 菌种的生长情况。
核桃 （胡桃） 是我国分布较广的重要树种之 一，在新疆亦有大面积种植，主要集中在南疆的和 田、墨玉、叶城、温宿 4 个县区，产量大且品质高[2]。 核桃青果皮是采收核桃时的 废 弃 物 [3]，含 有 如 鞣 酸质、胡桃醌、胡桃甙、柠檬烯、香豆素、黄酮体等[4] 多种生物活性物质。目前, 有关核桃青果皮提取 物的提取及抗菌活性方面的研究较少。笔者以核 桃青果皮为原料，以其提取物为研究对象，对其抑 菌作用作进一步探讨，确定提取物最低抑菌浓度，
表 2 系统溶剂萃取液对供试真菌抑菌效果
抑 菌 圈 直 径 /mm
菌种
95% 乙醇 回流相
石油 醚萃 取相
乙酸 乙酯 萃取相
正丁 醇萃 取相
水相
大肠杆菌
23.00 33.50 28.50 16.00 -
枯草芽孢杆菌 22.33 33.50 30.50 12.25 -
金黄色葡萄球菌 21.67 35.50 27.25 16.00 -
2.3 最小抑菌浓度(MIC)的确定 此项试验中，依据表 2 萃取相抑菌效果的试
验，选择抑菌效果最好的石油醚来做最小抑菌浓 度试验。从表 3 可以看出，石油醚萃取液对大肠杆 菌和枯草芽孢杆菌的最小抑菌浓度为 12.5%；对 金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为 6.25%；对青 霉最小抑菌浓度为 50%; 对黑曲霉基本没有抑菌 作用；对啤酒酵母最小抑菌浓度为 100%。本项试 验更证明了核桃青皮提取液对细菌的抑菌效果要 比真菌好。
图 1 系统溶剂法提取核桃青皮工艺流程图
1.3.2 菌 种 的 活 化 及 菌 悬 液 的 制 备 预先将供 试菌种用适宜的培养基进行活化, 细菌在 37 ℃培 养 24 h，霉菌和酵母菌在 28 ℃培养 48～72 h。量 取 10 mL 无菌水于试管中, 然后再将活化好的菌 种用接种针挑取 3～4 环，将菌苔放入无菌水中,充 分振荡摇匀, 得菌悬液备用。 1.3.3 抑 菌 试 验 在超净工作台上将灭菌后的 培养液倒入无菌培养皿中，每皿 15～20 mL。待冷 却凝固后, 用 无 菌 移 液 管 吸 取 1 mL 菌 悬 液 到 平 皿上, 用涂布棒将菌悬液轻轻涂匀，取灭菌的打 孔器在每皿上打孔，用移液枪吸取 25 μL 提取液
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天津农业科学
第 18 卷
径达到了 35.5 mm；乙酸乙酯萃取液对大肠杆菌、 金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌抑制效果显著， 抑 菌 圈 直 径 分 别 为 28.5 mm、27.5 mm 和 30.5 mm，对 3 种真菌抑制效果一般；正丁醇萃取液对 大肠杆菌和金黄色葡萄球菌抑制效果较好，对枯 草芽孢杆菌抑制效果一般，对青霉效果略微，其他 无抑制效果；水相均无抑制效果。
文 献 标 识 码 ：A DOI 编 码 ：10.3969/j.issn.1006－6500.2012.02.014
Study on Bacteriostasis of Systematic Solvents Extracts from Walnut Green Peel GONG Bin-rong1, LIU Hua-ying2，SI Jie3
天津农业科学 Tianjin Agricultural Sciences 贮藏加工
2012，18（2）：46-48
核桃青果皮系统溶剂提取物抑菌作用研究
龚斌荣 1，刘华英 2，司 杰 3
（1.阿克苏地区实验林场实验站，新疆 阿克苏 843000；2.新疆塔里木大学 生命科学学院，新疆 阿拉尔 843300；3.新疆塔里木大学 后勤 管理处绿化中心，新疆 阿拉尔 843300）
菌种
提 取 液 浓 度 /%
Байду номын сангаас
水
100 50 25 12.5 6.25 3.125 1.563 对 照
大肠杆菌
- - - - + ++ +++ +++
枯草芽孢杆菌 - - - - + ++ +++ +++