鸡新城疫病毒逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)技术的初步建立
鸡传染性支气管炎病毒实时荧光ＲＴ－ＰＣＲ检测方法的建立与初步应用
２０２３年第６期（总第４０９期）畜禽业试验研究鸡传染性支气管炎病毒实时荧光ＲＴ－ＰＣＲ检测方法的建立与初步应用崔鹤馨１，呼延含蓉２通信作者１．吉林省畜牧兽医科学研究院，吉林长春１３００２１；２．吉林省动物疫病预防控制中心，吉林长春１３００２１摘 要 鸡支气管炎的大规模暴发和流行将导致养殖场雏鸡死淘率增加，产蛋鸡产蛋品质下降，产蛋量不足。
要想最大化降低鸡传染性支气管炎暴发，基层兽医技术人员应该加大检测效率，快速、精准地检测阳性病例，便于后续消杀与净化，最大程度减少感染源，切断传染途径。
基于此，总结荧光ＲＴ－ＰＣＲ检测方法的建立与应用，旨在进一步提高鸡传染性支气管炎病毒的检出时效性和精准度。
关键词 鸡传染性支气管炎病毒；ＲＴ－ＰＣＲ；建立；应用ｄｏｉ：１０．１９５６７／ｊ．ｃｎｋｉ．１００８－０４１４．２０２３．０６．００４ 引言鸡传染性支气管炎属于鸡二类传染病，以呼吸困难、打喷嚏、 音、咳嗽为典型临床症状，该类病症主要由传染性支气管炎病毒引起，属于呼吸道系统传染病，可以通过垫草、饮水、饲料等渠道传播。
如果养殖环境通风不良，饲养密度过大或舍内阴湿、高温等均容易诱发该病，冬季发病最为严重。
鸡传染性支气管炎主要危害１～２周龄雏鸡，在雏鸡中发病率较高，为２％～５％，如果检验、诊断、防控不及时可能导致整个鸡舍内产蛋鸡、成年鸡染病，因此应该对疑似病鸡进行及时检测，为后续隔离、治疗等提供科学依据。
文章主要以荧光ＲＴ－ＰＣＲ检测方法为例，分析该类检测方法在鸡传染性支气管炎病毒中的诊断和应用，旨在进一步发挥该类分子生物学检测技术在鸡传染性支气管炎中的检测作用。
试验材料１．１ 病料采集在２０２２年４月某养鸡场选择疑似传染性支气管炎病例６例，疑似病鸡日龄为７～３４ｄ，主要临床症状为流泪、流鼻涕、打喷嚏，夜间有明显嘶哑叫声，张嘴呼吸，咳嗽，鼻部肿胀，部分疑似病鸡食欲不振，缩头闭目，拉黄色稀粪。
为对病鸡进行进一步确诊，同时便于后续分离病毒，选择病死鸡支气管、气管等病毒易增殖的主要部位作为病料采集部位。
环介导等温扩增技术及其在重大动物疫病诊断中的应用
环介导等温扩增技术及其在重大动物疫病诊断中的应用崔基贤;李清竹【摘要】环介导等温扩增技术(1oop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种新型恒温扩增技术.LAMP技术不需要特殊的精密仪器设备,结果观察和判定直观,且具有成本低廉、操作简单、反应时间短、特异性强、灵敏度高等优点.因此特别适合现场快速检测及基层普及应用,具有很高的实用推广价值.作者就LAMP技术的原理、反应过程、操作过程及其在禽流感、口蹄疫、高致病性蓝耳病和猪瘟等重大动物疫病诊断中的应用等作一综述.%A novel isothermal amplification method, termed loop- mediated isothermal amplification (LAMP), which need no special precision instruments at work and have the advantage of low cost, simplicity of operation, rapidity, high specificity,efficiency, may be especially suitable for on-site fast detection and grassroots popularization applications.The principle, reaction and operation process of LAMP and its application in viruses detection of graveness animal disease were reviewed.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2011(038)006【总页数】4页(P80-83)【关键词】环介导等温扩增;重大动物疫病;应用【作者】崔基贤;李清竹【作者单位】辽宁省动物疫病预防控制中心,辽宁省动物医学研究院,辽宁沈阳110164;辽宁省动物疫病预防控制中心,辽宁省动物医学研究院,辽宁沈阳110164【正文语种】中文【中图分类】Q78随着现代分子生物学的不断发展和传统核酸扩增技术的改进,新型核酸扩增技术不断涌现。
《2024年改良的环介导等温扩增技术用于阴沟肠杆菌核酸以及碳青霉烯酶的快速检测》范文
《改良的环介导等温扩增技术用于阴沟肠杆菌核酸以及碳青霉烯酶的快速检测》篇一改良的环介导等温扩增技术用于阴沟肠杆菌核酸及碳青霉烯酶的快速检测一、引言随着生物科技的不断发展，对于微生物疾病及其耐药性的检测与控制成为当今科研领域的重点研究方向。
其中，阴沟肠杆菌作为重要的病原体之一，其传播及抗药性的变化引发了科研人员的高度关注。
因此，建立快速、准确的检测技术是保障医疗安全和推动医药科技发展的重要课题。
本文将重点介绍改良的环介导等温扩增技术（Loop-Mediated Isothermal Amplification, LAMP）在阴沟肠杆菌核酸及碳青霉烯酶的快速检测中的应用。
二、环介导等温扩增技术概述环介导等温扩增技术是一种基于DNA恒温扩增技术的核酸扩增方法，其原理是通过特殊的引物设计，利用Bst DNA聚合酶在恒定温度下进行DNA扩增。
这种技术具有操作简便、时间短、灵敏度高、特异性强的优点，因此在病原体检测、基因诊断等领域得到广泛应用。
三、改良的环介导等温扩增技术针对传统LAMP技术的不足，本文提出了一种改良的环介导等温扩增技术。
该技术通过优化引物设计、调整反应条件等方式，提高了检测的准确性和灵敏度，同时降低了非特异性扩增的风险。
此外，改良后的LAMP技术还结合了荧光定量PCR的技术特点，实现了实时监测扩增过程，从而更准确地判断检测结果。
四、在阴沟肠杆菌核酸及碳青霉烯酶检测中的应用（一）阴沟肠杆菌核酸检测利用改良的LAMP技术，可以快速、准确地检测阴沟肠杆菌的核酸。
通过设计特异性引物，结合LAMP技术的恒温扩增特性，可以在短时间内实现阴沟肠杆菌核酸的大量扩增。
同时，通过荧光定量PCR技术的实时监测，可以准确判断扩增结果，为临床诊断和治疗提供有力支持。
（二）碳青霉烯酶检测碳青霉烯酶是阴沟肠杆菌产生的一种重要抗药性酶，其检测对于评估病原菌的耐药性和指导临床治疗具有重要意义。
通过改良的LAMP技术，可以实现对碳青霉烯酶的快速、准确检测。
LAMP检测综述戴婷婷
L A M P检测综述戴婷婷集团标准化办公室：[VV986T-J682P28-JP266L8-68PNN]环介导等温扩增技术的应用研究进展戴婷婷1，陆辰晨2，郑小波2（1南方现代林业协同创新中心，南京林业大学林学院，江苏南京210037；2南京农业大学植物保护学院，江苏南京210095；）摘要：环介导等温扩增技术（Loop–mediated isothermal amplification，LAMP）采用特异识别靶序列上6个位点的4条引物及一种具有链置换活性的DNA聚合酶，在等温条件（60℃~65℃）下60 min左右进行核酸扩增，其扩增效率可达到109~1010个数量级，具有特异性强、灵敏度高、等温、操作简单和检测结果快速等优点，已广泛应用于病毒、细菌、寄生虫、菌物等病原物的检测中。
本文对LAMP技术原理及其在病原物检测中的应用做了简要综述。
关键词：环介导等温扩增技术；应用；检测；病原物中图分类号：文献标志码：文章编号：Application Research Progress Of Loop-Mediated IsothermalAmplificationDAI Ting-ting1; LU Chen-chen2; ZHENG Xiao-bo2(1Southern China Collaborative Innovation Center of Sustainable Forestry, College of Forestry, Nanjing Forestry University, Nanjing, Jiangsu 210037, China；2College of Plant Protection, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China)Abstract：A new method of gene amplification called Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) has been developed in recent years. LAMP assay possess characteristic of simpleness, fleetness and high specificity. The whole procedure is very simple and rapid which can be completed in less than 80 min under isothermal conditions employing a set of six specially designed primers of a target gene, by incubating all the reagents in a single tube. LAMP does not require a thermal cycler and can be performed simply with a heating block or water bath. Considering the advantags of rapid amplication, simple operation and easy detection, LAMP has potential applications for diagnosis as well as surveillance of infectious diseases in developing countries without requiring sophisticated equipment or skilled personnel. LAMP has been widely applied to the detection of such pathogens as virus，bacteria, parasite, fungi etc. This article summarized the principle of LAMP，and the application in detection of pathogenic microorganisms.KEY WORDS：Loop-mediated isothermal amplification; application; detection; pathogenic microorganisms核酸扩增技术是分子生物学领域的一项重要的研究手段，核酸扩增技术主要包括常规PCR 为基础的变温扩增技术以及等温扩增技术两大类。
H5亚型禽流感病毒RT-LAMP可视化检测技术的建立
Ｄｅ ｖ ｅ ｌ ｏ ｐ ｍｅ ｎｔ ｏ ｆ ａ ｒ ｅ ｖ ｅ ｒ ｓ ｅ ｔ ｒ ａ ｎ ｓ ｃ ｒ ｉ ｐ ｔ ｉ ｏ ｎ ｌ ｏ ｏ ｐ－ｍ ｅ ｄｉ ａ ｔ ｅ ｄ ｉ ｓ ｏ ０ ｔ ｈ ｌ ｌ ｅ ｒ ｍａ ｌ ａ ｍ＠ｌ １ ｉ ｃ ｉｃ ｆ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｓ ｓ ａ ｙ Ｙ ｆ ［ ｏ ｒ Ｖ ￣ ｉ Ｓ Ｕａ ａ ｌ ｄｅ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｈ５ ｓ ｕｂ ｔ ｙ ｅ ｐ ｅ ａ ｖ ｉ ａ ｎ ｉ ｎ ｌｕｅ ｆ ｎｚ ａ ｖ ｉ ｒ ｕｓ
件和体系进行优化 。【 结果 】 优化 的Ｒ Ｔ — Ｌ Ａ ＭＰ 技术操作简便迅 速 ， 常规 水浴锅 中５ ０ ａ ｒ ｉ ｎ 可完成 ， 能特异性 地检测 出Ｈ ５
亚型Ａ Ｉ Ｖ， 但对其他Ｈ Ａ亚型Ａ Ｉ Ｖ、 禽 呼吸道 病原体无交叉扩增反应 ， 灵敏度是 常规Ｒ Ｔ — Ｐ Ｃ Ｒ的ｌ ０ 倍； 反应结束后 无需打 开反应管盖 ， 即可根据反应液 的颜 色变化对结果进行判定 。【 结论 】 建立的Ｈ ５ 亚型Ａ Ｉ Ｖ Ｒ Ｔ — Ｌ Ａ ＭＰ 可视化检测技术具有
ｆ ｏ ｕ ｒ ｐ ｉ ｒ ｍｅ ｒ ｓ ｓ ｐ ｅ ｃ ｉ ｉ ｆ ｃ ｔ ｏ ｔ ｈ ｅ ｓ ｉ ｘ ｓ ｉ ｔ ｅ ｓ ｏ ｆ ＨＡ ｇ ｅ ｎ ｅ ｗｅ ｒ ｅ ｄ ｅ ｓ ｉ ｇ ｎ ｅ ｄ，ｔ ｈ ｅ ｌ ｆ ｕ ｏ ｒ ｅ ｓ ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ｅ ａ ｇ ｅ ｎ ｔ ｓ（ Ｃ ａ ｌ ｃ ｅ ｉ ｎ ａ ｎ ｄ Ｍｎ Ｃ １ ２ ）ｗｅ ｒ ｅ ａ ｄ ｄ ｅ ｄ
Ｈ ５ 亚型禽 流感病毒 Ｒ Ｔ — Ｌ Ａ ＭＰ 可视化 检测 技术 的建 立
彭 宜，谢芝勋 ，刘加波 ，庞耀珊 ，邓 显文，谢志勤 ，谢 丽基 ，范 晴 ，罗思思
新城疫病毒逆转录环介导等温扩增检测方法的建立
新城疫病毒逆转录环介导等温扩增检测方法的建立杜景娇;薛强;邹明强;滕文锋;郭浩;但晓雅【期刊名称】《中国预防兽医学报》【年(卷),期】2011(33)12【摘要】To establish a rapid method for detection of Newcastle disease virus (NDV), a reverse transcription loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP) assay was developed with a set of 6 specially primers which recognized 8 distinct sequences of NDV fusion gene. The detection results demonstrated that the RT-LAMP assay was 100-fold higher sensitivity compared with conventional RT-PCR, and had no cross-reaction with other chicken viruses. Furthermore, RT-LAMP assay was completed the amplification of the target gene at 65 °C thermostat water bath in half hour and the amplification results were able to be detected by agarose gel electrophoresis or even jugded by naked eye. These results indicated that the NDV RT-LAMP assay developed in this study was convenience, highly sensitive and specific.%为建立一种新城疫病毒(NDV)的简便、快速、高灵敏度的检测方法,本研究根据NDV融合蛋白基因(F基因)设计合成6条特异性引物,在恒温水浴中进行核酸扩增反应,对反应温度、反应时间以及反应液中Mg2+浓度进行优化,获得最佳反应条件,结果经凝胶电泳分析并在可见光下直接观察.整个RT-LAMP检测用时0.5 h,检测敏感度比RT-PCR高100倍,对禽流感病毒、鸡传染性支气管炎病毒和鸡传染性喉气管炎病毒无交叉反应.本研究建立的NDV RT-LAMP检测方法速度快、不需要高精密的仪器,而且具有灵敏度高、特异性强,操作简单等特点,有望在核酸扩增检测方法中取代RT-PCR技术.【总页数】4页(P945-948)【作者】杜景娇;薛强;邹明强;滕文锋;郭浩;但晓雅【作者单位】中国检验检疫科学研究院,北京 100123;大连医科大学,辽宁大连116044;中国检验检疫科学研究院,北京 100123;中国检验检疫科学研究院,北京100123;大连医科大学,辽宁大连 116044;中国检验检疫科学研究院,北京 100123;内蒙古医学院,内蒙古呼和浩特 010059;中国检验检疫科学研究院,北京 100123;江苏大学,江苏镇江 212013【正文语种】中文【中图分类】S852.65【相关文献】1.对虾桃拉综合征病毒环介导逆转录等温扩增快速检测方法的建立 [J], 徐海圣;王美珍;戎华南2.大蒜X病毒逆转录环介导等温扩增检测方法的建立 [J], 赵桐;李长红;周前进;陈先锋;陈炯;陈剑平3.鸡新城疫病毒逆转录环介导等温扩增（RT-LAMP）技术的初步建立 [J], 赵晓彤;石霖;薛树山;吴运谱;熊永忠;王宏燕4.3型鸭甲型肝炎病毒逆转录环介导等温扩增技术快速检测方法的建立 [J], 张映;范书才;张兵;陈玲;秦义娴5.草鱼呼肠孤病毒逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法的建立 [J], 张金凤;曾令兵;张辉;周勇;肖艺;苏岚;高正勇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
逆转录环介导等温核酸扩增技术(RT-LAMP)在H5N1禽流感病毒基因检测中的应用
第 ２ ４卷 第 ３期 ２ ０ ０ ８ 年 ５ 月
病
毒
学
报
ＶｏＩ２ ．４
Ｍａ ｙ
ＮＯ ３ ．
２０ ０ ８
ＣＨＩ ＮＥＳＥ Ｊ ０ＵＲＮＡＬ Ｒ０ Ｌ ０Ｆ ＶＩ ０ＧＹ
逆 转 录环 介 导等 温 核 酸 扩增 技 术 （ Ｔ Ｌ ＭＰ） Ｈ Ｎ１禽流 感 病 毒 Ｒ －Ａ 在 ５
逆转 录环 介导 等 温核 酸 扩 增技 术 （ Ｔ＿ ＡＭＰ Ｒ Ｌ ） 最初 由 Ｎｏｏ 等人 设计 并应 用 于 各种 病 毒 及 其它 ｔｍｉ 病原 体基 因的检测 （ 具体 原 理参见 文 献）１。该 技术 ［ ］ 分别 使用 特异 对 应于靶 序列 中 ８个基 因区段 的 ３ 对 特异 引 物 ， 在反 转 录酶 和 Ｂ ｔ 并 ｓ ＤＮＡ 聚合 酶 的作用 下 对靶 序列 进行 等 温核 酸 扩 增 反 应 ， 个 检 测 反 应 整 只需 １ ５ ． 口 ］ ． ～２ ５ｈ 。本文 首 次 采 用 Ｒ － ＡＭＰ技 ＴＬ 术 对 Ｈ５ 亚 型禽 流 感 病 毒 的 实 验 感 染 动 物 标 本 Ｎ１ 和培养 病毒 样 品进 行 了检 测 ， 扩增 产 物 作 了 内切 对 酶验证 和测 序分 析 ， 对 这 种 方 法 的 特异 性 和灵 敏 并 度进行 了 进 一 步 验 证 。同 时 ， 这 种 方 法 与 Ｒｅｌ 将 ａ —
基 因检 测 中的 应 用
李启 明 ，马 学军 ， 寒春 ， 蕊 匡治 州 高 周 ， ，侯云 德
（ ． 国 疾 病 预 防 控 制 中心 １中 病 毒 病 预 防控 制所 病 毒 基 因 工 程 国家 重 点 实 验 室 ， 京 １ ０ ５ ； 北 ００ ２ ２ 北 京 金 迪 克 生 物 技 术 研 究 所 ， 京 １０ ７ ） ． 北 ０ １ ６
lamp环介导等温扩增技术
lamp环介导等温扩增技术LAMP环介导等温扩增技术是一种用于检测DNA或RNA的方法，具有快速、高度敏感和特异性等优点。
下面我们来详细介绍一下这种技术的原理和应用。
一、原理LAMP技术是一种环介导等温扩增方法，与PCR不同的是，LAMP不需要高精度的温度控制和特异性引物，只需要4-6个引物就可扩增目标序列。
LAMP反应的基本步骤为：首先，在等温条件下，外部引物（F3和B3）和内部引物（FIP和BIP）结合在DNA目标序列上，形成一个环形结构；然后，在BIP的3'端内部引物（LF和LB）的作用下，DNA目标序列不断的进行扩增，最终形成一个由数以百万计的拷贝构成的扩增产物。
在反应中，LF和LB作为内部补体引物，增强了反应的特异性和扩增效率。
二、优点1、高度敏感：在LAMP扩增反应中，由于不需要复杂的环境条件和反应体系，扩增过程高效，形成的扩增产物数量极多，可以检测到非常微弱的目标DNA或RNA信号。
2、特异性强：LAMP反应需要多个引物结合于目标序列，而且引物是从多个区域的序列中选择设计的，所以扩增的产物只会与目标序列高度特异结合，不会出现交叉反应的问题。
3、环境友好：LAMP扩增只需要一个热水浴，不需要PCR反应所需的高精密温控仪器，同时反应体系中不含有有毒有害的物质，对环境及实验者均无危害。
三、应用LAMP技术已广泛应用于临床医学、食品安全、环境检测和生物技术等领域。
1、临床医学：LAMP技术可以高效、快速、准确地检测病原微生物、基因突变和药物耐药性等，对于疾病的快速诊断和精准治疗提供了有力支持。
2、食品安全：LAMP技术可以检测微生物、病毒和其他有害物质，对于食品安全监管起到了重要作用。
3、环境检测：LAMP技术可以应用于环境污染的检测、植物病害的检测以及水质检测。
4、生物技术：LAMP技术可以用于基因组学、遗传学和分子病理学等领域的基础科研。
总之，LAMP技术作为一种新兴的DNA或RNA检测技术，具有快速、高效、经济和特异性强等优点，已成为分子生物学和生命科学领域的焦点研究。
rt-lamp 原理
rt-lamp 原理
RT-LAMP（逆转录-环介导等温扩增技术）是一种用于核酸检测的分子生物学技术，其原理如下：
1. 逆转录，首先，RNA（或者是一些DNA病毒）被逆转录酶转录成互补的DNA，这一步骤使得RNA也能够被扩增。
2. 环介导，RT-LAMP技术使用4-6个特异性引物来识别目标DNA或RNA序列。
这些引物包括两对外部引物和两对内部引物。
通过逆转录酶和DNA聚合酶的作用，引物将目标序列进行扩增。
3. 等温扩增，RT-LAMP在恒温条件下进行，无需复杂的温度变化步骤。
内部引物的结构使得DNA链能够在等温条件下进行扩增。
总的来说，RT-LAMP技术通过逆转录、环介导和等温扩增的方式，能够在简单的恒温条件下快速扩增核酸样本，从而实现对目标DNA或RNA序列的检测。
这种技术在病毒检测、基因表达分析等领域具有广泛的应用前景。
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鸡新城疫病毒RT-PCR检测方法的建立及应用
急性 、 烈性、 高 度 接 触 性 传 染 病ｕ ］ 。该 病 死 亡 率 极
高， 传 播速度 快 ， 是 目前 危害养鸡 业 最严 重 的疾 病之
一
。
新 城疫 病毒 （ Ｎ Ｄ Ｖ） 属禽 副黏病 毒 Ｉ型 （ ＡＭＰ Ｖ一
１ ） ， 为 有囊膜 的 单股 负链 Ｒ ＮＡ 病毒 ， 基 因组 大 小约 １ ５ ｋ ｂ ， 编码 ６种 病 毒结 构 蛋 白， 分 别为 核 衣壳 蛋 白 （ ＮＰ ） 、 磷 酸化蛋 白（ Ｐ） 、 基质 蛋 白 （ Ｍ） 、 融合 蛋 白
（ Ｇｕ ａｎ ｇ ｘｉ Ａｎ ｉ ｍａｌ Ｄｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ Ｐｒ ｅ ｖ ｅ ｎ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ Ｃｏ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ Ｃｅ ｎ ｔ ｅ ｒ， Ｎａ ｎ ｎ ｉ ｎ ｇ， Ｇｕ ａｎ ｇ ｘｉ ， ５３ ０ ０ ０１ ， Ｃｈ ｉ ｎ ａ）
步 摸索 。 因此 ， 本 研 究根 据 Ｇ ｅ ｎ Ｂ ａ ｎ ｋ 上 发 表 的
作者简介 ： 陈 贤德 （ １ ９ ６ ３ ～） ， 男， 青 海 湟 中人 ， 本科 ， 兽医师， 主要 从 事 动 物 疫痛 防控 和 动 物 卫 生 监 督 工 作 。
Ｄｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ Ａｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｏ ｆ Ａｎｔ ｉ ｂ ｏ ｄｉ ｅ ｓ Ａｇ ａ ｉ ｎ ｓ ｔ Ｍ ａ ｉ ｎ Ｓ ｗｉ ｎｅ
设计 一对 引物 ， 扩增 ２ Ｏ １ ｂ ｐ特 异性核 酸 片段 ， 建 立 了检 测 Ｎ ＤＶ 的 ＲＴ — Ｐ Ｃ Ｒ方 法。特异 性试 验 结果表 明 ， 针 对 Ｎ ＤＶ 能扩 增 出 ２ Ｏ ｌ ｂ ｐ的核酸 片段 ， 而对传 染性 支 气管炎病毒 （ Ｉ Ｂ Ｖ） 、 禽流 感病毒 （ ＡＩ Ｖ） 均无 特异 性 条带 出现 。敏 感性试验 结果表 明 ， 该方 法的最低 检 出量 为 １ ０ Ｐ ｇ的模 板 。利 用该方 法对 １ ０株 从 青 海 、 内蒙 、 吉林 及 河北分 离的疑 似鸡 ＮＤ Ｖ 毒株进 行检 测 ， 结 果均 为 阳性 。上述 结果表 明 ， 本 试验 建立 的 Ｒ Ｔ — Ｐ Ｃ Ｒ 方法特 异 性强、 稳 定性好 。该方 法 的建立为 ＮＤ Ｖ 的检 测及 流行病 学调查提 供 了可 靠的手段 。 关键词 ： 新城 疫病毒 ； Ｆ基 因 ； 逆转 录一 聚合酶链 反应
环介导等温可视扩增(LAMP)检测禽肺炎病毒方法的建立
传染性造血器官坏死病毒环介导等温扩增检测方法的建立和初步应用
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ａ ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｌｏｏｐ￣ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｓｏｔｈｅｒｍａｌ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｒｏｕｔ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｈａｅｍａｔｏ￣ ｐｏｉｅｔｉｃ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓ( ＩＨＮＶ) ｉｎ ｂｏｔｈ ｏｆ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ａｎｄ ｆｉｅｌｄ ｗａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ������ Ａ ｓｅｔ ｏｆ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｒｉｍｅｒｓ ｗｅｒｅ ｄｅｓｉｇｎｅｄ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ＩＨＮＶ Ｎ ｇｅｎｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ������ ＩＨＮＶ ＲＮＡ ｗａｓ ｕｓｅｄ ａｓ ａ ｔｅｍｐｌａｔｅ ｆｏｒ ＲＴ￣ＬＡＭＰ ｉｎ ａ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｍｉｘｔｕｒｅ ｃｏｎ￣ ｔａｉｎｉｎｇ ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ ａｎｄ Ｂｓｔ ＤＮＡ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ������ Ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｓａｍｐｌｅｓ ｅｘｈｉｂｉｔｅｄ ａ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｇｒｅｅｎ ｃｏｌｏｒ ｗｈｅｒｅａｓ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｓａｍｐｌｅｓ ｅｘｈｉｂｉｔｅｄ ａ ｒｅｄｄｉｓｈ ｂｒｏｗｎ ｃｏｌｏｒ������ Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｗａｓ ６４ ℃������ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｔｅｓｔｓ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｃａｐａｂｌｅ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ ＩＨＮＶ ｈａｄ ｎｏ ｃｒｏｓｓ ａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ＳＶＣＶꎬ ＨＲＶꎬ ＶＨＳＶ ａｎｄ Ｈ２ Ｏ������ Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｔｅｓｔ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｃｏｕｌｄ ｄｅｔｅｃｔ １������ ０ × １０ －４ μｇ / μＬ ＩＨＮＶ ＲＮＡ������ Ｉｎ ｓｕｍｍａｒｙꎬ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｗａｓ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ｆｉｅｌｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＩＨＮＶ ａｎｄ ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ ｐｅｒｆｏｒｍ ｑｕａｒａｎｔｉｎｅ ｏｆ ｍａｓｓ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ａｎｄ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙꎬ ｒａｐｉｄｉｔｙꎬ ｓｉｍｐｌｅꎬ ｌｏｗ ｃｏｓｔꎬ ａｎｄ ｗｉｔｈｏｕｔ ｒｅｌｙｉｎｇ ｏｎ ａｎｙ ｓｐｅｃｉａｌ ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ������ Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓꎻ ｔｒｏｕｔꎻ ｌｏｏｐ￣ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｓｏｔｈｅｒｍａｌ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎꎻ Ｎ ｇｅｎｅ
鸡新城疫病毒和禽肺炎病毒二重RT-PCR检测方法的建立及应用
鸡新城疫病毒和禽肺炎病毒二重RT-PCR检测方法的建立及应用谢志勤;王盛;刘加波;庞耀珊;梁亮;冯务玲;谢芝勋;邓显文;谢丽基;范晴;罗思思;黄莉;黄娇玲;张艳芳【期刊名称】《南方农业学报》【年(卷),期】2017(048)003【摘要】[目的]建立一次性可同时扩增鉴别鸡新城疫病毒(NDV)和禽肺炎病毒(APV)的二重RT-PCR,为有效防控鸡新城疫和禽肺炎病毒病提供技术支持.[方法]根据GenBank已发表NDV的F基因序列(GenBank登录号JX840454)和APV的F 基因序列(GeneBank登录号AF187154)分别设计2对特异性引物,应用这2对引物建立可同时检测鉴别NDV和APV的二重RT-PCR,对扩增条件进行优化,并通过特异性试验、敏感性试验和临床样品检测等验证其实用性.[结果]优化后的二重RT-PCR可特异性扩增出参试NDV毒株(LaSota株、F48E9株、I株)及APV/MN-10毒株的目的条带,其大小分别为247和424 bp,而其他对照参试毒株在247和424 bp处均无特异条带出现.二重RT-PCR针对NDV和APV的最低检出限均为10 pg的RNA.应用建立的二重RT-PCR对132份从广西采集的病鸡样品进行检测,结果得到NDV阳性样品26份、APV阳性样品2份,与血清学方法的鉴定结果一致.随机选取的2份NDV阳性PCR产物与NDV(GenBank登录号JX840454)的F基因序列一致,同源性达100%;2份APV阳性PCR产物与APV(GenBank登录号AF187154)的F基因序列也完全一致,同源性达100%.[结论]针对NDV和APV建立的二重RT-PCR具有特异性好、灵敏度高、简便快速的特点,可用于临床快速鉴别诊断,为有效防控鸡新城疫和禽肺炎病毒病提供了技术支持.【总页数】6页(P546-551)【作者】谢志勤;王盛;刘加波;庞耀珊;梁亮;冯务玲;谢芝勋;邓显文;谢丽基;范晴;罗思思;黄莉;黄娇玲;张艳芳【作者单位】广西兽医研究所/广西动物疫病病原生物学与诊断重点实验室, 南宁530001;广西兽医研究所/广西动物疫病病原生物学与诊断重点实验室, 南宁530001;广西兽医研究所/广西动物疫病病原生物学与诊断重点实验室, 南宁530001;广西兽医研究所/广西动物疫病病原生物学与诊断重点实验室, 南宁530001;南宁市良凤农牧有限责任公司, 南宁 530031;南宁市良凤农牧有限责任公司, 南宁 530031;广西兽医研究所/广西动物疫病病原生物学与诊断重点实验室, 南宁 530001;广西兽医研究所/广西动物疫病病原生物学与诊断重点实验室, 南宁530001;广西兽医研究所/广西动物疫病病原生物学与诊断重点实验室, 南宁530001;广西兽医研究所/广西动物疫病病原生物学与诊断重点实验室, 南宁530001;广西兽医研究所/广西动物疫病病原生物学与诊断重点实验室, 南宁530001;广西兽医研究所/广西动物疫病病原生物学与诊断重点实验室, 南宁530001;广西兽医研究所/广西动物疫病病原生物学与诊断重点实验室, 南宁530001;广西兽医研究所/广西动物疫病病原生物学与诊断重点实验室, 南宁530001【正文语种】中文【中图分类】S858.31【相关文献】1.鸡新城疫病毒和禽肺炎病毒二重RT-PCR检测方法的建立及应用 [J], 谢志勤;谢芝勋;邓显文;谢丽基;范晴;罗思思;黄莉;黄娇玲;张艳芳;王盛;刘加波;庞耀珊;梁亮;冯务玲;2.H9亚型禽流感病毒和禽肺病毒二重RT-PCR检测方法的建立 [J], 谢志勤;王盛;张民秀;奉彬;刘加波;庞耀珊;谢芝勋;范晴;邓显文;谢丽基;罗思思;黄莉;黄娇玲;张艳芳3.禽肺炎病毒实时荧光定量 RT-PCR 检测方法的建立 [J], 谢志勤;谢芝勋;刘加波;庞耀珊;邓显文;谢丽基;范晴;罗思思4.鸡新城疫病毒、H9亚型禽流感病毒和禽肺炎病毒三重RT-PCR检测方法的建立[J], 谢志勤;王盛;奉彬;刘加波;谢芝勋;邓显文;谢丽基;范晴;罗思思;黄莉;黄娇玲;张艳芳5.鸡新城疫病毒RT-PCR检测方法的建立及应用 [J], 李凤琴; 叶超因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
反转录-环介导等温扩增技术（LAMP）快速检测马铃薯病毒
反转录-环介导等温扩增技术（LAMP）快速检测马铃薯病毒陈恩发;李其义;邓宽平;卢扬;彭慧元【摘要】RT-Lamp detection technology was established by designing four specific primers according to coat protein gene sequences of PVX,PVY and PLRV to probe potato virus detection method with lowercost,rapidity,accuracy and high sensitivity.The results showed that the lower limit of sensitivity of RT-LAMP detection method is virus count of 10 copies.PVX,PVY and PLRV can be successfully detected by the established RT-LAMP detection method with lower cost,rapidity,accuracy and high sensitivity in 1 h.%为寻求低成本快速准确灵敏度高的马铃薯病毒检测方法，根据马铃薯 X 病毒（Potato virus X，PVX）、马铃薯 Y 病毒（Potato virus Y，PVY）和马铃薯卷叶病毒（Potato leafroll virus，PLRV）的外壳蛋白基因序列设计4条特异引物，建立 LAMP 检测技术。
结果表明：LAMP 检测方法灵敏度下限是10个拷贝的病毒量，该方法检测 PVX、PVY 和 PLRV 特异性好，灵敏度高，1 h 可完成检测，且检测成本低。
【期刊名称】《贵州农业科学》【年(卷),期】2015(000)003【总页数】4页(P74-77)【关键词】马铃薯X病毒;马铃薯Y病毒;马铃薯卷叶病毒;反转录-环介导等温扩增技术 (RT-LAMP);病毒检测【作者】陈恩发;李其义;邓宽平;卢扬;彭慧元【作者单位】贵州省生物技术研究所，贵州贵阳 550006;贵州省种子管理站，贵州贵阳 550002;贵州省生物技术研究所，贵州贵阳 550006;贵州省生物技术研究所，贵州贵阳 550006;贵州省生物技术研究所，贵州贵阳 550006【正文语种】中文【中图分类】S435.32马铃薯病毒是导致马铃薯退化最主要的原因，也是马铃薯上最主要的病害之一，每年造成了巨大的经济损失，不仅降低马铃薯的产量，也影响马铃薯的品质。
新城疫病毒RT-PCR一步法的建立及应用
新城疫病毒RT-PCR一步法的建立及应用耿岗【摘要】为建立一种快速的新城疫病毒病原检测方法,根据GenBank上登录的NDV F基因序列,利用生物学软件设计合成一对特异性引物,通过反应条件的优化,建立了检测NDV的RT-PCR一步法.该方法对传染性支气管炎病毒、传染性法氏囊病病毒、传染性喉气管炎病毒的扩增结果均为阴性,检测的敏感性达1 ngRNA.临床初步应用显示该检测方法特异性强、敏感性高,可以用于新城疫病毒的临床快速检测.【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2012(033)012【总页数】4页(P141-144)【关键词】新城疫病毒;逆转录-聚合酶链反应;检测【作者】耿岗【作者单位】青海省海西州乌兰县畜牧兽医工作站,青海乌兰817100【正文语种】中文【中图分类】S852.65新城疫病毒属于副黏病毒科（Paramyxoviridae）副黏病毒亚科（Paramyxovirinae）中的禽腮腺炎病毒属（Avulavirus），是一种不分节段的单链、负链RNA病毒［1-2］。
由NDV引起的新城疫（Newcastle disease，ND）是一种多病型的高度接触性、急性、烈性传染病，可感染火鸡、家禽以及野禽类，具有传播速度快、发病率高、病死率高等特征，已经在世界范围内引起了4次大流行，给全球养禽业带来了巨大的经济损失［3-8］。
该病也是困扰我国养禽业的重要疫病，几十年来一直是我国养禽业坚持预防免疫控制的主要传染病之一［9-11］。
该病的存在严重制约着我国养禽业的健康发展，同时对我国禽类产品的出口、食品安全以及人类健康都存在着潜在的危害［11］。
因此，加强NDV诊断技术的研究，对预防和控制本病以及人类健康都具有十分重要的现实意义。
NDV常规的病毒分离技术和免疫血清学检测方法存在操作复杂、费时费力、检测周期较长等缺点，不能满足快速、准确诊断的需要。
鉴于此，本研究建立了一种敏感、特异、准确、简单、快速的一步法RT-PCR方法，为ND的早期诊断、流行病学调查等提供一种有效的检测技术手段。
RT-PCR鉴别鸡新城疫病毒强弱毒株检测方法的建立
RT-PCR 鉴别鸡新城疫病毒强弱毒株检测方法的建立摘要：本文探究了RT-PCR 技术在鸡新城疫强弱毒株检测中的应用。
通过优化RNA 抽提、逆转录反应和PCR 扩增条件，建立了一种有效的RT- PCR 检测方法，可快速鉴别新城疫病毒强弱毒株。
实验结果表明，该方法具有高灵敏度和特异性，能够在基因水平对新城疫病毒进行准确鉴别。
关键词：RT-PCR，新城疫病毒，强弱毒株，鉴别一、引言新城疫是一种由新城疫病毒引起的急性传染病，严重影响了家禽养殖业的发展。
目前，防治新城疫的有效措施之一是根据病毒的毒力进行分级，以便采取相应的控制措施。
因此，快速鉴别新城疫病毒强弱毒株对于精确防控新城疫具有重要作用。
传统的新城疫病毒鉴别方法主要是依靠细胞培养、血清学等技术。
但这些方法消耗时间长、操作繁琐，且存在滞后性和灵敏度低等不足之处。
最近几年，随着分子生物学技术的发展，RT-PCR 技术具有快速、准确、高效、灵敏的特点，在新城疫病毒的检测鉴别中得到广泛应用。
本文旨在探究利用RT-PCR 技术建立新城疫病毒强弱毒株检测方法，以提高疾病的诊断速度和准确度，为家禽养殖业的健康发展提供保障。
二、材料与方法2.1材料（1）新城疫病毒强毒株和弱毒株；（2）RNA 纯化试剂盒、逆转录试剂盒、PCR 试剂盒；（3）双向引物（强毒株：F 5'-TGGCCCACAGCTTATCGCGC-3'，R5'-CGCGTAACCGCGACCCAACT-3'；弱毒株：F 5'- CGCCGAGCTCGTCCTTCAAG-3'，R 5'-CGACGGACCTCAGGGAACTG-3'）。
2.2方法2.2.1RNA 抽提首先，提取新城疫病毒强毒株和弱毒株的RNA。
在无菌条件下，采用RNA 纯化试剂盒提取病毒RNA，按照说明书进行操作。
2.2.2逆转录反应利用逆转录试剂盒对RNA 进行逆转录反应，合成cDNA 模板。
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１ ． ３ 引物 的 设 计 根据Ｇ ｅ ｎ Ｂ ａ ｎ ｋ 上登 录 的新 城疫 病 毒 的 Ｆ 基 因 的保 守 区 序列 ，
利用 在线 生物 软 件Ｐ ｒ ｉ ｍｅ ｒ Ｅ ｘ ｐ ｌ ｏ ｒ ｅ ｒ Ｖ ４ 软件 设计 出相应 Ｒ Ｔ — Ｌ Ａ Ｍ Ｐ ￣ ｌ 物 ，引物 由上海 生工 生物 技术有 限公 司合成 。引物 的序列如 表 １ 所
２ ． 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，黑龙江哈尔滨 １ ５ ０ ０ ０ １ ）
［ 摘 要］ 本研 究设 计 了针对鸡新 城疫病毒 （ Ｎ Ｄ）的Ｆ 基 因保 守区６ 个特异性部位 的４ 条 引物 ，建立 了Ｎ Ｄ Ｖ 的逆转录环媒 恒温 检测方法。该方法在 恒温水浴锅 中作用 １ ｈ 即可得 到其特有 的阶梯状条带，加入 荧光素后结果 肉眼可 直接观察 。本方法特异性
高 ，敏 感 性是 荧光 Ｒ Ｔ — Ｐ Ｃ Ｒ 的１ Ｏ 倍。
［ 关键词］鸡新城疫病毒
检测方法
环介导等温核 酸扩增
鸡新 城疫 （ Ｎ Ｄ） 是 由新城 疫病 毒 （ Ｎ Ｄ Ｖ） 引 起 的一种 高度接 毒 （ Ｉ Ｂ ＤＶ）、传 染 性支 气管 炎毒 株 （ Ｉ Ｂ Ｖ）、禽 流感病 毒
对该病 的快 速准 确检测 。 原 的快速检 测 。
１ 材料和方 法
１ ． １ 毒 株
确定反应体系为 ：１ Ｏ Ｌ ２ ｘＵ — Ｌ Ａ ＭＰ Ｍｉ ｘ ，２ Ｌ ２ ５ ｍＭ Ｍ ｇ Ｃ １ ２ ，２ Ｌ模板 Ｒ Ｎ Ａ，２ Ｌ 弓 Ｉ 物混合物 （ １ ． ６ Ｍ Ｆ Ｉ Ｐ ，１ ． ６ Ｍ
Ａ Ｉ Ｖ）、传染 性喉 气 管炎 病毒 （ Ｉ Ｌ Ｔ Ｖ）的基 因 ，以提取 的上 述 触 性 禽类 的烈性 传 染病 ，世界 动 物卫 生 组织 将 此病 列 为Ａ 类 传染 （ 病 ，我 国将 其 列 为一类 传 染病 。 目前 ，针 对该 病毒 已经 建立 多种 Ｒ Ｎ Ａ 或Ｄ Ｎ Ａ 作 为模板 进行Ｒ Ｔ — Ｌ Ａ Ｍ Ｐ 反应 。 ． ６、 敏 感 性试 验 实验 室诊 断方 法 ，但 是 ，仍然 存 在耗 时长 、对 操 纵人 员 的要求 相 １ 将新城疫病毒分别稀释 １ ０ ～～１ ０ － ８ 共８ 个 梯 度 ，提 取 核 酸 之 对偏 高 、需 要贵 重仪 器等 缺 陷 ，并不 适合 养 殖场 和基 层兽 医 部 门 后 ，分别 用荧 光Ｒ Ｔ — Ｐ Ｃ Ｒ 方法 和优 化后 的Ｒ Ｔ — Ｌ Ａ ＭＰ 诊 断方法 进 行 种方 法 的检测结 果 。 环介 导等 温核 酸 扩增 技术 在普 通 恒温 水浴 锅 中 即可反 应 ，无 检 测 ，并 比较 ２ 需 昂贵 的仪器 ，１ ｈ 以 内即可完 成反 应 ，并 且具 备 操作 简单 、具有 ２ 结果与分析 ． １ 新城疫 ＲＴ — Ｌ ＡＭＰ 反应体系的确立 较高 的敏 感 性 和特异 性 的优 势 ，目前 ，已经 被成 功应 用 于多 种病 ２
基 础 科 学
中国畜牧兽医文摘
２ ０ １ ３ 年
２ ９ 卷
ห้องสมุดไป่ตู้
第９ 期
鸡新城疫病毒逆转录环介导等温 扩增 （ Ｒ Ｔ － Ｌ Ａ Ｎ Ｉ Ｐ ）技 术 的初 步 建 立
赵晓彤、 石 霖 薛树 山 吴运谱、 熊永忠 王宏燕 ’
（ １ ． 辽宁省动物 疫病预 防控制 中心，辽宁沈 阳 ｌ １ ０ １ ６ ４ ：
Ｂ Ｉ Ｐ ，０ ． ２ Ｍ Ｆ ３ ，０ ． ２ Ｍ Ｂ ３），１ ． ５ Ｌ Ｂ ｓ ｔ Ｄ Ｎ Ａ 聚 合酶 ，１ Ｌ
经过 灭 活 的鸡 新 城疫 病 毒 （ ＮＤＶ ）、 鸡 传 染 性 法 氏 囊 Ａ ＭＶ 酶 ，加水 补至２ ０ Ｌ 。将 反应体 系混 匀 ，置 于６ ４℃水 浴锅 中 病毒 （ Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ ）、传 染 性 支 气 管 炎 病 毒 （ ［ Ｂ Ｖ 。 ）、禽 流 感 病 毒 作用 １ ｈ ，８ ０℃１ ０ ａ ｒ ｉ ｎ灭活 Ｂ ｓ ｔ Ｄ Ｎ Ａ聚合 酶 。该 体 系下 的反应 产物 ％琼 脂糖 凝胶 上 电泳 可见 Ｌ Ａ Ｍ Ｐ 反 应 的清 晰 的阶梯 状条 带 ，且 （ Ｈ ９ Ｎ ２）、传 染性 喉气 管炎病 毒 （ Ｉ Ｌ Ｔ ｖ） 均 由中 国农 业科 学 院哈 于 ２
示：
图１ ）。
１ ２ ３ ４ ５ ６ ７
表 １ 引物 序 列
引物名称
引物序列 （ ５ ’ ＿ ３ ’ ）
Ｆ Ｉ Ｐ： Ｃ Ｇ Ｃ Ｃ Ｔ Ａ Ａ Ｇ Ｇ Ａ Ｔ Ａ Ａ Ａ Ａ Ｃ Ａ Ｔ Ｔ Ｇ Ｃ ＡＴ Ｇ ＡＣ Ｃ Ｃ Ｇ Ｇ Ｇ Ｔ Ａ Ｔ Ｃ Ａ Ｔ Ａ Ｔ Ｃ Ｇ Ｃ Ａ Ｂ Ｉ Ｐ ： ＡＡ Ｃ ＴＴ Ｔ Ａ Ａ Ｇ Ｇ Ｃ Ｔ Ｃ Ａ Ｇ Ｔ Ｇ Ｇ Ｇ Ｇ Ａ Ａ Ｔ Ｔ Ｇ Ｃ Ｃ Ｔ Ｇ Ｔ Ｔ Ａ Ｔ Ｔ Ａ Ｔ Ｔ Ａ Ｃ Ｔ Ｔ Ｇ Ａ Ｇ Ａ Ａ Ｆ ３： Ｇ Ａ Ｔ Ｇ Ａ Ｃ Ａ ＡＣ Ａ ＴＧ Ｔ Ａ Ｇ Ａ Ｔ Ｇ Ｔ Ｇ Ｔ Ａ Ｂ ３： Ｃ Ｃ Ｃ Ａ Ａ Ｇ Ｃ ＴＣ Ａ ＧＴ Ｔ Ｇ Ａ Ｇ Ａ Ｔ
尔滨 兽 医研究 所相 关研 究组提供 。
１ ． ２ 试 剂
加 入Ｓ ｍ ａ ｒ ｔ Ｇ ｒ ｅ ｅ ｎ 染料 后 ，反 应产 物在 紫 外灯 下 显现 荧 光 ，而 阴性 对 照无荧 光反 应 。
Ｕ — Ｌ Ａ Ｍ Ｐ通 用型 Ｄ Ｎ Ａ快 速扩增 试剂 盒和Ｓ ｍａ ｒ ｔ Ｇ ｒ ｅ ｅ ｎ染料 为北 ２ ． ２ 特 异 性试 验 京 美 来博 公 司产 品 ；Ｔ Ｒ Ｉ ｚ ｏ ｌ 试剂 为 Ｉ ｎ ｖ ｉ ｔ ｒ ｏ ｇ ｅ ｎ 公 司产 品 。新 城疫 荧 以本试 验建 立 的Ｒ Ｔ — Ｌ Ａ ＭＰ 反应 体 系扩增 Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ 、Ｉ Ｂ Ｖ 、Ａ Ｉ Ｖ 、 Ｉ Ｌ １ 、 Ｖ 的基 因 ，结果 均为 阴性 ，而对 Ｎ Ｄ 的扩增 结 果表 现为 阳性 （ 见 光Ｒ Ｔ — Ｐ Ｃ Ｒ 诊 断试剂 盒为 深圳 匹基公 司产 品 。