α-淀粉酶活力的测定
α-淀粉酶酶活力测定实验(碘比色法)
酶活力测定的定义 （碘比色法——目视）
酶活力定义：在60℃下1小时内将1克淀粉转化为糊 精的酶量称一个酶活力单位（5~10分钟反应完成）。 计算公式：
60 48 N 酶活力单位 20 2% N 0.5 ( / mL) t t
ｔ——为反应达到终点需要的时间（分钟），要求反应时间在5~10内完成
酶活力测定的方法
碘比色法（有相应的国家标准） 在一定反应条件下，1小时转化1g淀粉变为糊精的酶量定义 为1个酶活力单位 3，5-二硝基水杨酸比色法（DNS法） 在一定反应条件下，1分钟反应生成1mg麦芽糖的酶量定义 为1个酶活力单位 注意：去除β-淀粉酶的干扰 医学上的一些测定方法（专用试剂盒，通过生化仪器反应 测定，需要微量快速）
标准终点色溶液
1、第一种标准终点色溶液 取1mL标准糊精液和3mL标准稀碘液混合。 2、第二种标准终点色溶液 A液：精确称取氯化钴（CoCl.6H2O） 40.2493g和重铬酸钾（K2CrO7）0.4878g， 用蒸馏水定容至500ml。 B液：精确称取络黑T40mg，用蒸馏水定容 至100ml。 同时取A液40ml、B液5ml、混合后置于冰箱 中待用。混合液在15天内使用有效。
酶活力的测定方法（两类）： 单位时间内底物的减少量或产物的增加量 反应完一定量底物的时间长短
淀粉酶的基本情况介绍 ——四大类
酶名 别名
作用键类型 作用键位置 水解键长度 跨越分支 产物 水解限度
α -淀粉酶
淀粉-1，4-糊精苷 酶、液化酶 α -1，4 键内>键端 2或6糖单位 跨越 麦芽糖、糊精 30%-90%
Ｎ——为酶的稀释倍数（控制反应时间）
酶活力测定步骤
发酵液（酶液） 2%淀粉液20mL+5mLpH6.0缓冲液 预热5min（60℃） 预热5min（60℃）
可见分光光度法测定α-淀粉酶活力
５
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化 学 与 生 物 工 程 ２０２０,Vol．３７No．０３ www．
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２０２０．
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张雪娇,田欢,刘春叶,等 ．可见分光光度法测定 α
Ｇ淀粉酶活力[
J]．化学与生物工程,
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DNS法测定α淀粉酶活力的方法
生物学研究中关于糖测定中常用 的方法
菲林试剂滴定——还原糖，常量分析 DNS比色法——还原糖，微量分析 蒽酮比色法——总糖，微量分析
配制系列浓度稀释液的方法
线性稀释——稀释液的浓度梯度是相同的 （0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0……）；
对数稀释（倍数稀释）——系列溶液的浓 度比是一常数，取决于稀释梯度——2倍稀 释（1、1/2、1/4、1/8……）；10倍 稀释（1、1/10、1/100、 1/1000……）；
调和浓度稀释——系列溶液的浓度为连续 排列整数的倒数（1，1/2，1/3，1/4， 1/5……）。
α-淀粉酶酶活力测定的原理
底物（反应物）为淀粉——碘比色法（反 应一定量淀粉为糊精的时间） 产物为麦芽糖、糊精等——麦芽糖为还原 糖，可以用测定还原糖的方法来测定其生 成量（如DNS法），从而计算出酶活力单 位。
计算公式：根据标准曲线计算。
3，5-二硝基水杨酸（DNS）试剂 配制说明
21g 氢氧化钠（先加入溶解）；
182g 酒石酸钾钠（同上）；
6.3g DNS（3，5-二硝基水杨酸），加 热完全溶于上述溶液中；
5g 重蒸苯酚（冷却后加入）；
5g 无水亚硫酸钠（冷却后加入）；
完全溶解后定容至1000ml，贮存时间越 长越稳定。
酶 活 力 测 定 步 骤 （ 流 程 ）
蒸馏水 （mL）
2.0 1.6 1.2 0.8 0.4 0
麦芽糖含量 （mg）
0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0
DNS试剂 （mL）
2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
加入完成混匀后沸水浴5min，定容至25mL混匀比色。
预留发酵液酶活力测定 需要稀释倍数
实验一 α-淀粉酶活力的测定
颜色变化终点要照像，并多媒体型实验结果 单独标注班级和小组名提交或图片型实验结果 直接写入在实验报告书里。
[实验报告书书写要求]
1. 实验报告书的编写要参考教师提出的写作格式规范。 2. 即：题目、作者（包括同组成员）、单位（班级和组别）、
酶活力单位（g/ml）=(60/T×20×2%×N)÷0.5
60 —酶活定义中反应时间为60min； T —反应时间（min）； 20 —可溶性淀粉的毫升数； 2% —可溶性淀粉浓度； N —酶液稀释倍数； 0.5 —测定时所用的稀酶液量（ml）。
表 1 α-淀粉酶活力测定结果
X
[实验结果处理要求]
酶活力单位gml60t202n05实验结果计算实验结果计算重复数反应时间min酶活力gmlmin要求实验过程中淀粉的颜色变化过程录像或颜色变化终点要照像并多媒体型实验结果单独标注班级和小组名提交或图片型实验结果直接写入在实验报告书里
实验一 α-淀粉酶活力的测定
[实验性质] 验证性实验 [实验学时] 2学时 [实验目的] (1) 掌握淀粉酶糖化淀粉的原理；
[实验步骤]
第一步：待测酶液的配制； 第二步：标准色的配制； 第三步：样品的酶解反应； 第四步：计算。
1. 待测酶液的制备
α-淀粉酶
1.000 g
①
50 mL
2. 标准色的配制
150mL
60℃,30 min
250 mL
③可溶性淀粉 2.0g
酶液
2%淀粉液
A液
②
B液
8.0 mL 1.0 mL
3. 样品测定步骤
中文摘要、中文关键词、英文摘要、英文关键词、前言、材 料与方法、结果与讨论、结论、参考文献等顺序。 2. 报告书的篇幅要求2000字以上。 3. 参考文献必须5篇以上，并至少有一篇英文。 4. 提交时间限为每周一 下午3点。先交到课代表，由课代表汇 总之后按时送到任课老师办公室。 5. 领取的报告书要妥善保管，期末考试时作参考。
测定α淀粉酶活性
测定α淀粉酶活性降落数值是粮食检验中，评价小麦面粉等粮食品质的一项重要指标，反映了小麦籽粒中a一淀粉酶活性的大小：a一淀粉酶活性低，则降落数值高；反之，a一淀粉酶活性高，则降落数值低。
ST006降落值仪本产品适用于谷物、面粉及其它含有淀粉的产品中a —淀粉酶活性的测定，是粮食贮藏、面粉加工、食品加工等领域中质量检定的重要测量仪器。
本仪器是按照Hagbery—Perten法对谷物和面粉中a —淀粉酶活性指标进行测定，符合国家标准执行GB/T10361-2008《谷物降落数值测定法》。
仪器原理：小麦粉或其它谷物中含大量的淀粉、在沸水浴中，悬浮液能迅速糊化，同时淀粉中的a一淀粉酶使淀粉不同程度的被水解，淀粉糊的粘度将下降，因此，在一定条件下，小麦粉糊化物的粘度，反映了a一淀粉酶活性的大小。
当水温达到100℃时，将装有麦粉糊的试管放入浴缸内，用粘度计搅拌锤，以2次/秒的速度开始搅拌，60秒后，锤停止在最高位置。
锤靠自身重量经过被酶液化的麦酶湖悬浮液在热凝胶中降落一定距离所需的时间，用（S秒）表示降落数值。
实际意义：在粮食收购及面粉加工中，降落数值测定仪具有重要的意义。
在粮食收购中，有关部门可以根据入库小麦降落数值，进行分类分仓储存，避免发芽小麦与好的小麦互混，降低小麦品质，造成不必要的经济损失；在面粉加工中，小麦加工最佳区为降落数值在200s—300s，其他区域的小麦— 1 —要进行合理搭配。
小麦粉降落数值在150s以下，必须搭配95％左右没有发芽的小麦，加工后的面粉才能保证各项指标全部合格。
不同面食制品对面粉中α-淀粉酶活性要求不一样，如面包用粉的降落数值为250～350秒；糕点用粉为≥160秒；酥性饼干用粉为≥150秒；饺子、馒头用粉为≥250秒；面条用粉为≥200秒等。
小麦粉的加工根据降落数值的指导，更加的科学合理。
— 2 —。
α-淀粉酶测定的操作规程
α-淀粉酶测定的操作规程1、用途：测定人血清中或尿液中α-淀粉酶的酶活浓度。
2、原理：α-淀粉酶与α-葡萄糖苷酶偶联，水解特异性底物4,6-亚乙基-4-硝基苯酚-α-庚糖，产生对-硝基苯酚，对-硝基苯酚生成速率与α-淀粉酶的活性成正比，在405nm波长下用速率法检测。
3、适用仪器：奥林巴斯AU480型全自动生化分析仪.4、样本要求：4.1、样本种类：新鲜无溶血血清或尿液。
4.2、样本采集：常规静脉采血约2ml，不抗凝。
置普通管中，或采用含有分离胶的真空采血管。
尿液保存时应将pH值调节至7.0。
4.3、样本干扰：对反映吸光度有干扰的样本，包括溶血和浑浊的样本都可能影响检测结果遇上述情况建议重新采集标本。
4.4、样本保存：血清样本2℃—8℃可稳定7天，-20℃可保存一个月，忌反复冻融。
尿液样本2℃—8℃可稳定10天.5、检测方法：5.1、试剂的准备：试剂开瓶即可使用。
5.2、检测步骤：2、动生化分析仪操作步骤：参数设置→试剂装载→校准→质控→样品加载→测定→结果审核→报告。
5.3、校准：用K因素进行试剂空白校准，也可使用Diazyme公司校准品进行校准操作，当试剂更换批号、出现质控漂移、仪器做完保养后及重要零件更换时，须重新校准。
5.4、结果计算：全自动生化分析仪会自动给出检测结果。
3、6、参考范围：(各医院应根据本地区实际情况建立自己的参考范围。
）7、注意事项：7.1、试剂具有一定的酸碱性，避免直接接触皮肤和眼睛，切勿吞咽。
7.2、使用后的器具应按照规定处理，扔入指定的垃圾箱内，不可随处乱扔，防止环境污染和二次使用。
7.3、由于运输过程产生渗液或漏夜的产品，或在运输贮存中没有按照说明书要求进行维护的试剂，不可使用。
7.4、试剂只用于体外诊断。
8、参考文献：中华人民共和国卫生部医政司，全国临床检验操作规程（第三版），东南大学出版社，2006。
王惠萱、李雪梅、王冈，临床检验操作手册，云南科技出版社，2008.陆永绥、李清华、张伟民主编，临床检验自动化仪器分析标准操作规程，浙江大学出版社，2006.。
α-淀粉酶测定标准操作程序
α－淀粉酶测定标准操作程序1.摘要α－淀粉酶试剂盒适用于定量测定人血清、肝素化血浆、尿液样本中α－淀粉酶的活力。
2.适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测血清、血浆中α－AMY的浓度。
3.职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定α－AMY浓度的工作人员要严格按照本SOP程序进行,室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4.检测方法上海科华生物工程股份有限公司的α－AMY试剂测定采用CNPG3方法。
5.原理底物CNPG3在α－AMY催化下产生的 2－氯－4－硝基苯酚（CNP）引起波长405nm 处吸光度上升，上升的速率与α－淀粉酶的活力成正比。
5CNPG3−−→−AMY3CNP+2CNP2+3G3+2G6.仪器日立7600自动生化分析仪7.试剂7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2试剂瓶内主要成分：MES缓冲液（PH6.0）、醋酸钙、硫氰酸钾、CNPG3。
表面活性剂、防腐剂7.3试剂稳定性：试剂避光保存于2-8℃，若无污染，可稳定至失效期，本试剂有效期为12个月。
试剂不可冰冻。
试剂打开后冷藏于分析中可保存28天。
7.4试剂准备：试剂为即用式。
8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用某某公司提供的标准品对自动分析仪进行校准。
按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品响应量通过合适的数学模型绘制校准曲线。
8.2质控品某某公司提供的生化复合定值质控血清做为室内质控品。
每日在测定前做一次质控。
该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。
8.3质控数据管理：按程序对检验后的质控后结果进行转换，及时质控数据进行分析处理，如出现失控值，应及时分析失控原因，并填写好相关失控记录。
8.4质控判断规则：按《Westgard多规则质控方法测定标准操作程序》8.5室间质评：分别参加某地区室间质评，对回报的室间质评结果按《室间质量评价程序》进行处理。
酶活力测定讲解
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２.试剂 ? Folin- 酚试剂见“蛋白质含量测定”。 ? 0.4mol/L 碳酸钠溶液。 ? 0.4mol/L 三氯乙酸溶液。 ? 缓冲溶液
①PH7.5 磷酸缓冲液，适用于中性蛋白酶。 ②pH3.0 乳酸缓冲液，适用于酸性蛋白酶。 ③pH10.5 硼酸缓冲溶液，适用于碱性蛋白酶。
取两个100ml三角瓶分别于空白瓶和样品瓶中各加底物溶液4ml和磷酸缓冲液5ml于空白瓶加入95乙醇15ml40水浴预热5min然后在两瓶中各加待测酶液1ml立即混匀计时40水浴中准确反应15min在样品瓶中立即补加95乙醇15ml终止反应取出于空白瓶和样品瓶中各加酚酞指示液005mollnaoh标准溶液滴定直至微红并保持30s不退为其终点记录消耗005mollnaoh标准溶液的体积201951035计算酶活力定义
上述各种缓冲溶液，均须用 pH计校正。
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10g/L 酪蛋白溶液：称取酪蛋白 1.000g ，准确至 0.001g ，用少量 0.5mol/L NaOH 溶液（若酸性 蛋白酶则用浓乳酸 2～3滴）湿润后，加入适量 的各种适宜 pH 的缓冲溶液约 80mL ，在沸水浴 中边加热边搅拌，直至完全溶解，冷却后，转 入100mL 容量瓶中，用适宜的 pH 缓冲溶液稀 释至刻度。此溶液在冰箱内贮存，有效期为 3d 。
１.原理 α-淀粉酶水解淀粉为小相对分子质量的
糊精和少量的麦牙糖及葡萄糖，使淀粉 与碘呈蓝紫色反映逐渐变红棕色直至消 失，观察并测定颜色的消失速度可以衡 量酶活力的大小。
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２.试剂 原碘液：同“分光光度法”。 稀碘液：同“分光光度法”。
20g/L 可溶性淀粉溶液：同“分光光度法”
二、α-淀粉酶活力的测定2010(精)
3.2 器材（每组）
15ml大试管10支 5ml移液管10支 1ml移液管5支 10ml移液管10支 比色皿1套（4个） 双蒸水1瓶（50ml） 洗瓶1个 玻璃平皿1套 50ml小广口瓶（棕色）2个 50ml 容量瓶 1个 100ml 容量瓶 1个 500ml 试剂瓶2个 100ml 试剂瓶2个 250ml 三角瓶2个 200ml烧杯2个 500ml烧杯1个 记号笔1支、吸耳球、称量纸、药勺、试管架、 研钵、纱布
2.实验原理
α-淀粉酶能够将淀粉分 子中的α-1，4糖苷键随机切 成长短不一的短链糊精、少量 麦芽糖和葡萄糖，而使淀粉对 碘的呈蓝色特性反应逐渐消失， 呈现棕红色，其颜色消逝的速 度与酶活性有关，可以用来表 示淀粉酶水解的程度，因而能 购通过反应后溶液的吸光度值 衡量酶的活力。
3.试剂和溶液
3.4 磷酸缓冲液（pH6.0） 4.52g磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O） 和0.8g柠檬酸（C6H8O7·H2O），定容至 100ml。pH计校正后使用。
3.5 盐酸溶液（0.1M/L） 100ml
4. 仪器及器材
4.1 仪器
电子天平
恒温水浴锅 分光光度计 记时器
2台
3.1 原碘液 称取2.2g碘和4.4g碘化钾完全 溶解后定容至100ml，储存于棕色瓶 中（教师准备）。 3.2 稀碘液 吸取原碘液2ml，加20g碘化钾 用水溶解并定容至500ml。 3.3 可溶性淀粉溶液 称取2.000g（精确到0.001g） 可溶性淀粉于烧杯中，加适量蒸馏 水调成浆糊状物，边搅拌边加入沸 水90ml，搅拌加热至完全透明冷却 后定容至100ml，现配现用。
生物技术专业系统实验（四）
淀粉酶活力的测定
收集1管的同学，将0.05 mL稀释到15 mL 收集2管的同学，将0.05 mL稀释到10 mL
1、分别计算0时刻、5 min时刻的A540nm平均值。 2、根据图表中的实验结果，并利用实验 “3,5-二
硝基水杨酸比色法测定糖的含量”中制作的标准 曲线，计算淀粉酶的活力。
需要详细过程。
5 min时刻吸光值
5 min时刻还原糖mg数
0 min时刻吸光值
0 min时刻还原糖mg数
二者相减，计算酶活力。 1 U=1 mg 还原糖/min·mL 酶*稀释倍数
七. 思考题
1、在测定酶活力时应注意哪些反应条件？为什么？ 2、本实验中两次加入NaOH溶液的意义是什么?
八、分析
1.三种酶活力大小顺序是怎样，为什么是这样？ 2.酶液的稀释倍数是否要改变。 3.计算酶液的总活力、回收率。
操作
0号管 0时刻 5min时刻 0时刻 5min时刻 0时刻 5min时刻 B1 B1’ F1 F1’ B2 B2’ F2 F2’ B3 B3’ F3 F3’
淀粉酶液 (ml)
0.3
0.2
0.5
H2O (ml) 3.5 pH 6.8缓冲液 0.3 ％ NaCl
预热
各 1 ml 各 1 ml 摇匀， 37 ℃ 水浴 2 min
实验七 淀粉酶活力的测定
一、实验目的
掌握测定淀粉酶活力的原理和基本方法
二、实验原理
α-淀粉酶-酶活力GB24401-2009
n——样品的稀释倍数
样品酶活力X
ห้องสมุดไป่ตู้监督员：检验员：
陕西省酿造发酵产品质量监督检验站
原始记录表
No：______日期：_____年____月____日环境温湿度：_____
记录类别：中温α-淀粉酶——酶活力
产品名称：记录物品编号：
执行方法标准：
主要仪器
名称
编号
规格
精度
鉴定合格有效截止日期
电子天平
酸度计
恒温水浴
分光光度计
所用溶液配制
溶液名称
配制
原碘液
稀碘液
可溶性淀粉溶液（20g/L）
磷酸缓冲液(pH6.0)
盐酸溶液(0.1moL/L)
结果记录
样品称取量m(g)=稀释倍数n=
样品编号
吸光度(A)
对应酶浓度(c) (u/mL)
酶浓度(c)平均值(u/mL)
样品酶活力(u/g)
极差相对值(%)
1
2
活力计算：
X=c×n
式中：X——样品的酶活力，u /g(u/mL)
实验四 α-淀粉酶的固定化及其酶活测定
酶活力测定
吸取20.0 mL可溶性淀粉溶液于烧杯中，加入磷酸缓冲液
5 mL，摇匀后，置于40℃±0.2℃恒温水浴中预热8 min；
加入1g固定化酶，立即计时，100r/min条件下准确反应5 min；
立即用移液管吸取1.0 mL反应液，加到预先盛有0.5 mL
盐酸溶液和5. 00 mL稀碘液的试管中，摇匀，并以0.5 mL 盐酸溶液和5.00 mL稀碘液为空白，于660 nm波长下，用 10 mm比色皿迅速测定其吸光度(A)。根据吸光度查表A.1， 求得测试酶液的浓度。
三、仪器和试剂
仪器：
电子天平、分光光度计、水浴锅、烧杯、玻棒、 量筒、试管、量筒、移液管、注射器（带7号针 头）、纱布等。 试剂：
海藻酸钠、无水氯化钙、无水磷酸氢二钠、氯 化钠、苯甲酸、可溶性淀粉、碘酸钾、碘化钾、 浓盐酸。
四、实验方法
配A液：
取0.75 g海藻酸钠溶在25 ml蒸馏水中， 沸水浴（勿用电炉直接加热）充分溶胀。自 然冷却。
作中Ca2+的作用有何区别？
酶的固定化方法
海藻酸钙凝胶包埋法
称取一定量的海藻酸钠，溶于水，配制成一定浓 度的海藻酸钠溶液一定浓度的氯 化钙溶液中，形成球状固定化酶胶粒。
海藻酸钙凝胶包埋法制备固定化酶的操作简便， 条件温和，通过改变海藻酸钠的浓度可以改变凝 胶的孔径，还适合于多种细胞的固定化。
五、酶活力计算
中温α-淀粉酶制剂的酶活力按下式计算: X1 = c× n 式中: X1—样品的酶活力，u/mL或u/g c—测试酶样浓度，u/mL或u/g n—样品的稀释倍数（可通过反应时间和加入 固定化酶的量来控制） 。 所得结果表示至整数。 允许差： 平行试验相对误差不得超过5%
六、思考题
α-淀粉酶活力的测定
α-淀粉酶活力的测定α-淀粉酶活力的测定姓名___学号___ 一、实验目的:1. 掌握α-淀粉酶活力测定的基本原理及其实验方法。
二、实验原理: α-淀粉酶- 是一种内切酶- 只能水解α-1, 4糖苷键- 不能水解α-1,6糖苷键- 不能水解α-1,6糖苷键附近的α-1,4糖苷键- 产物为糊精、低聚糖、麦芽糖和少量葡萄糖α-淀粉酶活力测定的方法1(反应底物: 可溶性淀粉2(反应环境: 60?，pH为6.0，常压。
3(产物: 还原性葡萄糖4(活力测定方法:1)测定还原糖产生速度2)测定淀粉遇碘显色力下降的速度3)测底物粘度下降的进度• 还原糖与黄色的 3,5- 二硝基水杨酸显色反应来测定.• 生成物颜色的深浅与还原糖的量成正比.• 以每克酶在一定时间内生成的还原糖(麦芽糖)量表示酶活大小.三、试剂与仪器:1、仪器(1)电子天平(2)容量瓶 100mL(3)试管(4)恒温水浴锅(5)紫外可见分光光度计(6)烧杯 250 mL2(试剂(1)1% 可溶性淀粉溶液:称取可溶性淀粉(以绝干计)1. 000g(精确至0.001g，用水调成浆状物(在搅动下缓缓倾入70mL沸水中。
然后，以30mL水分几次冲洗装淀粉的烧杯，洗液并入其中，加热至完全透明，冷却，定容至100mL。
此溶液需要当天配制。
(2)0.4mol/L 氢氧化钠: 称取 1.6g 氢氧化钠，溶于少量蒸馏水，定容至100 mL.1(3)磷酸缓冲液(pH6.0): 称取磷酸氢二钠(Na2HPO4?12H2O)45.23g、柠檬酸(C6H8O7?H2O)8.07g，用水溶解并定容至1000mL。
配好后用pH计校正。
(4)3,5- 二硝基水杨酸:精确称取 1g 3,5- 二硝基水杨酸溶于 20mL 1mol/L 氢氧化钠中,加入 50mL 蒸馏水,再加入 30g 酒石酸钾钠,待溶解后用蒸馏水稀释至100mL ,盖紧瓶塞,防止CO2进入.(5)麦芽糖标准液(1mg/ml):称取0.100g麦芽糖,溶于少量蒸馏水,定容至100mL .(6)α-淀粉酶:枯草芽孢杆菌生成，最适pH 5.5-7.5,最适温度 50~70? 四、测定步骤:1. 麦芽糖标准曲线的制作:取25ml刻度试管7支,编号.分别加入麦芽糖标准液(lmg/ml) 0, 0.2, 0.6, 1.0,1.4, 1.8,2.0 ml ,然后用吸管向各管加蒸馏水使溶液达 2.0ml ,再各加 3 , 5 -二硝基水杨酸试剂2.0m1 ,置沸水浴中加热5min .取出冷却,用蒸馏水稀释至25 m1 .混匀后用分光光度计在520 nm 波长下进行比色,记录吸光度.以吸光度为纵坐标,以麦芽糖含量(mg)为横坐标,绘制标准曲线.2. 待测酶液的制备:称取酶粉0.1g，精确至0.0002g，先用少量的磷酸缓冲液溶解，并用玻璃搅拌棒捣研，将上清液小心倾入容量瓶中，沉渣部分再加入少量缓冲液，如此捣研3-4次，最后全部移入容量瓶中，用缓冲液定容至100mL，摇匀。
实验一α-淀粉酶活力的测定
结果处理与计算
数据处理
根据实验数据，我们计算了酶活力、 反应速率等参数。
图表绘制
我们使用图表展示了实验结果，以便 更直观地分析数据。
结果分析
酶活力比较
通过比较不同浓度酶液的酶活力，我们可以得出酶活力与酶浓度 之间的关系。
反应速率分析
通过分析反应速率，我们可以了解酶促反应的动力学特征。
结论总结
综合以上分析，我们可以得出实验一α-淀粉酶活力测定的结论， 并为其应用提供依据。
用紫外可见分光光度计在540nm波长处测定各管 的吸光度值。
数据记录与处理
01
记录实验数据，计算α-淀粉酶活力。
02
根据实验数据绘制标准曲线和酶 活性曲线。
04
结果分析
数据记录
实验数据
在实验过程中，我们记录了不同浓度 酶液处理后的反应时间、温度、pH值 等数据。
实验误差
在实验过程中，我们尽量减小误差， 如使用精确的测量工具、多次测量取 平均值等。
05
实验总结与讨论
实验总结
01
实验原理
本实验通过测定α-淀粉酶催化淀粉水解生成可溶性糖的速率，从而确定
酶活力的大小。
02 03
实验步骤
准确称取适量淀粉和底物溶液，加入试管中，加入适量酶液，在适宜温 度下恒温水浴一定时间，然后加入碘液和氢氧化钠溶液终止反应，最后 用斐林试剂进行滴定。
实验结果
通过滴定结果计算出α-淀粉酶活力的大小。
DNS溶液
称取3，5-二硝基水杨酸6.3g，溶解于50mL蒸馏水中，加入2mol/L氢氧化钠溶液 16.8mL，再加入20%酒石酸钾钠溶液10mL和2mol/L硫酸溶液20mL，混合均匀后 加热至80℃，不断搅拌，直至溶液呈透明。冷却后用蒸馏水定容至100mL，避光保 存。
测定α-淀粉酶活力的方法
实验五激活剂、抑制剂、温度及PH对酶活性的影响一、目的要求通过实验加深对酶性质的认识，了解测定α-淀粉酶活力的方法。
二、实验原理酶是生物体内具有催化作用的蛋白质，通常称为生物催化剂。
酶催化的反应称为酶促反应。
生物催化剂催化生化反应时具有：催化效率好、有高度的专一性、反应条件温和、催化活力与辅基，辅酶，金属离子有关等特点。
For personal use only in study and research; not for commercial use能提高酶活力的物质，称为激活剂。
激活剂对酶的作用有一定的选择性，其种类多为无机离子和简单的有机化合物。
使酶的活力中心的化学性质发生变化，导致酶的催化作用受抑制或丧失的物质称为酶抑制剂。
氯离子为唾液淀粉酶的激活剂，铜离子为其抑制剂。
应注意的是激活剂和抑制剂不是绝对的，有些物质在低浓度时为某种酶的激活剂，而在高浓度时则为该酶的抑制剂。
如氯化钠达到约30%浓度时可抑制唾液淀粉酶的活性。
酶促反应中，反应速度达到最大值时的温度和PH值称为某种酶作用时的最适温度和PH值。
温度对酶反应的影响是双重的：一方面随着温度的增加，反应速度也增加，直至最大反应速度为止；另一方面随着温度的不断升高，而使酶逐步变性从而使反应速度降低。
同样，反应中某一PH范围内酶活力可达最高，在最适PH的两侧活性骤然下降，其变化趋势呈钟形曲线变化。
食品级α-淀粉酶是一种由微生物发酵生产而制备的微生物酶制剂，主要由枯草芽孢杆菌、黑曲霉、米曲霉等微生物产生。
但不同菌株产生的酶在耐热性、酶促反应的最适温度、PH、对淀粉的水解程度，以及产物的性质等均有差异。
α-淀粉酶属水解酶，作为生物催化剂可随机作用于直链淀粉分子内部的α-1,4糖苷键，迅速地将直链淀粉分子切割为短链的糊精或寡糖，使淀粉的粘度迅速下降，淀粉与碘的反应逐渐消失，这种作用称为液化作用，生产上又称α-淀粉酶为液化淀粉酶。
α-淀粉酶不能水解淀粉支链的α-1,6糖苷键，因此最终水解产物是麦芽糖、葡萄糖和α-1,6键的寡糖。
α淀粉酶酶活定义
α-淀粉酶（Alpha-amylase）是一种酶，它催化淀粉分解成较小的碳水化合物，如糊精和麦芽糖。
α-淀粉酶酶活定义指的是这种酶的活性，即它在一定条件下催化淀粉分解的能力。
酶活通常以单位时间内催化反应的量来表示，例如单位时间内分解的淀粉量或生成的糊精量。
α-淀粉酶酶活的单位通常是国际单位（International Units, UI），1 UI的α-淀粉酶在一定条件下（如一定的温度、pH值、底物浓度等）能够在1分钟内分解一定量的淀粉。
酶活的测定通常需要一个标准化的过程，包括底物的准备、酶的稀释、反应条件的设定、反应时间的控制以及产物的定量分析。
常用的定量方法包括滴定法、比色法、光谱法等。
在实际应用中，α-淀粉酶广泛用于食品工业，如面包制作、酿酒和洗涤剂生产中，也在医学和生物化学研究中作为研究工具。
α-和β-淀粉酶活性的测定
α-和β-淀粉酶活性的测定α-淀粉酶能将淀粉分子的α-1.4糖苷键任意切断成长短不一的短链糊精及少量麦芽糖和葡萄糖，使淀粉对碘呈蓝紫色的特异反应消失，以该颜色消失的速度计算酶的活力。
β-淀粉酶是从淀粉的非还原性末段分解2个葡萄糖单位的α-1.4糖苷键生成麦芽糖。
因此可用DNS法测定溶液中还原糖的含量。
1.仪器设备分光光度计、恒温水浴等。
2.操作方法1）粗酶液制备取新鲜植物材料10g，洗净、剪碎，按1：2（w/v）比例加20ml0.1mol/L NaAc缓冲液（含6mmol/L CaCl2，pH5.0）及少量石英砂研磨，一层尼龙布过滤。
滤液在20000r/min离心20min，取上清液用10mmol/L NaAc缓冲液透析。
过夜后用20000r/min离心10min，取上清液定容，备用。
2）绘制β-极限糊精标准曲线称取100mgβ-极限糊精，加少量水调成糊状，倾入10ml沸蒸馏水，不断的搅拌、加热，煮至透明。
流水冷却后定容至10ml，即每毫升含10mgβ-极限糊精。
取25～200μlβ-极限糊精（0.25～2.0mg）加水定容至0.5ml，再加5.0ml0.01%I2-KI溶液于560nm处测定其光密度（OD）值。
以光密度为纵坐标，β-极限糊精含量为横坐标绘制β-极限糊精标准曲线。
3.α-淀粉酶活力测定（植物生理学通讯，1986，4：63）取0.1~0.5ml粗酶液（相当于含0.1～0.2g鲜重），加0.5mlβ-极限糊精，加10mmol/L NaAc缓冲液定容至1.0ml，摇匀后在30℃保温。
隔不同时间取0.1ml反应液加5.0ml0.01%的I2-KI试剂，0.4ml H2O，摇匀后在560nm处测其光密度。
按OD值查标准曲线。
计算单位为：mgβ-极限糊精降解/g（鲜重）·h。
4.β-淀粉酶活力的测定（麦芽糖浆生产工艺，上海市轻工业局科技情报研究所出版1989,171)。
1)酶反应在具塞试管中加5ml2%可溶性淀粉，1ml0.1mol/L NaAc（pH5.0）缓冲液，3.9ml H2O，在37℃预热5min，加0.1ml酶液，保温30min后煮沸10min。
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α－淀粉酶活力的测定
一、实验目的
通过本实验，使学生掌握α-淀粉酶活力测定的基本原理、方法和操作技能。
二、实验原理
α-淀粉酶能将淀粉分子链中的α-1,4葡萄糖苷键随机切断成长短不一的短链糊精、少量麦芽糖和葡萄糖，而使淀粉对碘呈蓝紫色的特异性反应逐渐消失，呈红棕色，其颜色消失的速度与酶活力有关，故可通过固定反应后的吸光度计算其酶活力。
三、实验试剂和仪器
（一）试剂
1. 原碘液
称取碘（I2）11g，碘化钾（KI）22g，用少量水使碘完全溶解，然后定容至500mL，贮于棕色瓶中。
2. 稀碘液
吸取原碘液2.00mL，加碘化钾20g，用水溶解并定容至500mL，贮于棕色瓶中。
3. 20g／L可溶性淀粉溶液
称取可溶性淀粉（以绝干计）2 000g．精确至0.001g，用水调成浆状物．在搅动下缓缓倾入70mL沸水中。
然后，以30mL水分几次冲洗装淀粉的烧杯，洗液并入其中，加热至完全透明，冷却，定容至100mL。
此溶液需要当天配制。
注：采用浙江菱湖食品化工联合公司生产的可溶性淀粉。
4. 磷酸缓冲液（pH6.0）
称取磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）45.23g、柠檬酸（C6H8O7·H2O）8.07g，用水溶解并定容至1 000mL。
配好后用pH计校正。
（二）仪器
1. 分光光度计应符合GB 9721的有关规定
2. 秒表
3. 恒温水浴（60±0.2）℃
4. 试管25mm×2000mm
四、实验步骤
1. 待测酶液的制备
称取酶粉l-2g，精确至0.0002g（或吸取液体酶100mL），先用少量的磷酸缓冲液溶解，并用玻璃搅拌棒捣研，将上清液小心倾入容量瓶中，沉渣部分再加入少量缓冲液，如此捣研3-4次，最后全部移入容量瓶中，用缓冲液定容至刻度（将估计酶活力除以4，即酶活力应在3.7-5.6IU／mL范围内），摇匀。
通过4层纱布过滤，滤液供测定用。
2. 测定
（1）吸取可溶性淀粉溶液20.0mL于试管中，加入缓冲液5.00mL，摇匀后，于（60±0.2）℃恒温水浴中预热5min。
（2）加入稀释好的待测酶液1.00mL，立刻记时，摇匀，准确反应5min。
（3）立即吸取反应液1.00mL于稀碘液5.00mL中，摇匀，并以稀碘液作空白，于660nm波长下，用10mm比色皿，迅速测定其吸光度（A）。
根据其吸光度查表，求得测试酶液的浓度（C）。
五、实验结果整理
样品酶的活力根据以下公式计算：
X=c×n
式中：X－样品的酶活力[IU/g(IU/mL)]
c－样品酶液的浓度(IU/mL)
n－样品的稀释倍数
所得结果表示至整数。
平行实验相对误差不得超过2%。