犬瘟热病毒重组囊膜糖蛋白(H／F)全长质粒的构建

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犬瘟热病毒分离株N、H、F蛋白基因的变异分析

犬瘟热病毒分离株N、H、F蛋白基因的变异分析王旭荣;王小辉;张世栋;李世宏;潘虎;严作廷【摘要】通过RT-PCR方法扩增到犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)分离株GS0812-4的N、H、F蛋白基因,然后克隆入pGEM-T Easy载体并进行序列分析和抗原表位预测分析.结果表明,GS0812-4分离株的N、H、F蛋白基因与其他分离株相应序列的核苷酸同源性分别为93.2％～97.8％、90.3％～97.3％、93.2％～97.8％,其推定的氨基酸同源性分别为96.6％～98.7％、91.3％～97.9％和96.6％～98.7％;GS0812-4分离株N、H、F蛋白基因与疫苗株相应序列的核苷酸同源性分别为93.1％～93.8％、89.4％～90.5％、93.1％～93.8％,其推定的氨基酸同源性分别为96.4％～97.3％、89.3％～91.3％、96.4％～97.3％.由基因系统发育树可知,GS0812-4与疫苗株处于不同的分支,其中与MKY-KM08的亲缘关系最近,但GS0812-4在N、H、F3个基因系统发育树上与其他同一毒株的亲缘关系远近不同.H、F蛋白的抗原表位预测结果表明,GS0812-4与MKY-KM08和疫苗株的抗原表位均有差异.说明GS0812-4是野毒株,与MKY-KM08属于同一基因型,来源于同一毒株,但两毒株间的H蛋白和F蛋白的抗原表位仍有差异.%The nucleoprotein (N), haemgagglutinin protein (H)and fusion protein (F) genes of canine distemper virus (CDV) isolate GS0812-4were obtained by RT-PCR and sequenced after being cloned directly into the pGEM-T Easy. The sequences of N,H and F genes of GS0812-4 were compared with sequences and antigen epitope of other CDV strains in Gen-Bank by BLAST and DNAStar software. The results showed that the N,H and F of GS0812-4 shared 93. 2% to 97. 8% ,90. 3% to 97. 3%,93. 2% to 97.8% of nucleotide homology, and 96. 6% to 98. 7%,91. 3% to 97.9% and 96.6% to 98.7% ofamino acid identity with that of referenced strains, respectively. However, The N, H and F genes of the GS0812-4 shared only 93.1% to 93. 8%,89. 4% to 90. 5% and 93.1% to 93. 8% of nucleotide homology, and 96.4% to 97. 3% ,89. 3% to 91.3% and 96. 4% to 97. 3% of amino acid homology with that of vaccine strains, respectively. Phylogenetic tree showed thatGS0812-4 was different from the vaccine strain of the branch, it had a recent genetic relationship and MKY-KM08. But GS0812-4 compared with other strains of different genetic distance relationships. H, F protein epitope prediction results showed that GS0812-4 epitope was different from and MKY-KM08 and vaccine strains. Results showed that GS0812-4 was the wild strain, and the GS0812-4 strain was MKY-KM08 belonged to the same genotype, derived from the same strain, but there were still differences between epitopes.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2011(038)008【总页数】7页(P71-77)【关键词】犬瘟热病毒;H蛋白;H蛋白;F蛋白;变异分析【作者】王旭荣;王小辉;张世栋;李世宏;潘虎;严作廷【作者单位】中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所中国农业科学院临床兽医学研究中心,甘肃兰州 730050;中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所中国农业科学院临床兽医学研究中心,甘肃兰州 730050;中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所中国农业科学院临床兽医学研究中心,甘肃兰州 730050;中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所中国农业科学院临床兽医学研究中心,甘肃兰州 730050;中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所中国农业科学院临床兽医学研究中心,甘肃兰州 730050;中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所中国农业科学院临床兽医学研究中心,甘肃兰州 730050【正文语种】中文【中图分类】Q78犬瘟热（canine distemper，CD）是由犬瘟热病毒（canine distemper virus，CDV）感染引起的急性高度接触性传染病，在非免疫动物中发病率和致死率很高。

犬瘟热病毒N蛋白基因真核表达质粒的构建与瞬时表达

了瞬时表达。
关键词：犬瘟热病毒；白基因；Ｎ蛋真核表达载体；瞬时表达
中图分类号：８２６５￥５．５文献标识码：Ａ文章编号：０１４３（０２Ｊ３—０６０１０ — ３０２１０５０— ５
ＣｏｓｒｔｏｎａｉｎｐｅｓｏｆＥｕａｙｔｃＥｘｅｓｏａｍｉｎｔｕｃｉｎａｄＴｒｎｓｅｔＥｘｒｓｉｎｏｋｒｏｉｐｒｓｉｎＰｌｓｄ
新疆农业科学２１，９３：６５４０２４（）５０— ６
ＸｎｉｎｇｃｌｒｌｃｅｃｓｉａｇＡｒｕｔａＳｉｅｊｉｕｎ
ｄｉ１．０８ｊｉｎ１０ — ３０２１．３０５ｏ：０６４／．ｓ．０１４３．０２０．２ｓ
犬瘟热病毒Ｎ蛋 ห้องสมุดไป่ตู้基因真核表达质粒的构建与瞬时表达
简子健，马素贞，申卫红，翟少华，森赵
（新疆农业大学动物医学学院，乌鲁木齐８０５）３０２
摘
要：目的】【构建犬细小病毒（Ｐ）Ｐ因真核表达质粒，ＣＶＶ２基为研究核酸疫苗奠定基础。【方法】考参
１７ｐ的ＣＶＮ蛋白基因片段，２ｂ５Ｄ并构建了真核表达质粒ｐＤＡ．（＋）一ＣＶＮ，瞬时表达的小白鼠肝ｃＮ３１Ｄ从
脏总ＲＡ中可扩增到目的条带。【Ｎ结论】构建了犬瘟热病毒Ｎ蛋白基因真核表达质粒，小白鼠体内进行并在
ｆｒＮｏｅｎＧｅｅｏｎｎｓｅｅｒｓ（０ＰｒｔｉｎｆＣａｉｅＤｉｔｍｐｒＶｉｕＣＤＶ）

检测犬瘟热病毒抗体的重组N蛋白-ELISA方法的建立及应用

（．ｏｌｇｆｎｍａｔｈｉｌＪｌｇｉｌｒｌｉｅｓｙ，ｈｎｃｕ３１，ｈｎ；．ｉｏｉｇＥｔ — ｘｔｎｐｃｉｎａｄＱａａｔｅ１Ｃｌｅｏｉｌｅｎｃ，ｉｎＡｒｕｔａＵｎｖｒｉＣａｇｈｎ１０８Ｃｉａ２ＬａｎｎｎｒＥｉＩｓｅｔｎｕｒｎｉｅａｃａｉｃｕｔ１ｙｏｎＢｒａ，ｌｎ１６０，ｈｎ；．ｏｌｇｆＶｔｒａｄｃｎ，ｈｎａｇＡｇｉｌｒｌｉｅｓ，ｈｎａｇ１０６，ｈｎ）ｕｅｕＤａｉ０１Ｃｉａ３ＤｌｅｏｅｅｉｒＭｅｉｉｅＳｅｙｎｒｕｔａＵｎｖｒｉＳｅｙｎ１１１Ｃｉａａ１ｅｎｙｃｕｙｔ
维普资讯
第３０卷第８期
２０年８月０８
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
中国预防兽
医学报
Ｖｏ．０．１３Ｎｏ．８
Ａｕｇ．２００８
ＣｈｉｅｅＪｒａｌｏｆＰｅｎｉｅＶｅｅｉｒＭｅｉｉｅｎｓｏｕｎｒｖｅｔｖｔｒｎａｙｄｃｎ
检测犬瘟热病毒抗体的重组Ｎ蛋白一ＬＳＥＩＡ方法的建立及应用
简中友，贾资ｚ，王全凯，徐立秋，胡传伟，李叶，李振荣
ｆ１吉林农业大学动物科技学院，吉林长春１０６；２辽宁出入境检验检疫局，辽宁大连１６０３０２．１０１３沈阳农业大学畜牧兽医学院，辽宁沈阳１０６）．１１１

表达犬瘟热病毒融合蛋白基因重组腺病毒的构建与鉴定

表达犬瘟热病毒融合蛋白基因重组腺病毒的构建与鉴定鞠会艳;高玉伟;杨松涛;夏咸柱【期刊名称】《东北农业大学学报》【年(卷),期】2010(041)009【摘要】利用pVAX1载体的表达元件CMV启动子和poly(A)多聚腺苷酸信号构建了含犬瘟热病毒融合蛋白基因(F)的重组犬腺病毒.首先,利用酶切、连接等实验方法构建了含CDV启动子F蛋白基因表达盒的转移质粒pVAXΔE3LPF.再以含CAV-2 SY株全基因组的pPoly2-CAV-2为载体,构建重组质粒pCAV-2-pVAXLPF,利用脂质体介导方法转染MDCK细胞,转染3次后,细胞出现了典型的犬腺病毒感染样病变.电镜负染和切片观察、酶切、PCR扩增及测序鉴定的结果表明,成功构建了含犬瘟热病毒融合蛋白基因的重组犬腺病毒,表达的融合蛋白分子质量为72 ku.在MDCK细胞上连续传30代试验表明重组病毒CAV-2-pVAXLPF具有良好的遗传稳定性.【总页数】8页(P89-96)【作者】鞠会艳;高玉伟;杨松涛;夏咸柱【作者单位】吉林大学农学部,长春,130062;军事医学科学院军事兽医研究所,长春,130062;军事医学科学院军事兽医研究所,长春,130062;军事医学科学院军事兽医研究所,长春,130062;吉林大学农学部,长春,130062;军事医学科学院军事兽医研究所,长春,130062【正文语种】中文【中图分类】S852.655【相关文献】1.犬瘟热病毒核蛋白基因重组腺病毒的构建、鉴定与表达 [J], 鞠会艳;夏咸柱;高玉伟;杨松涛;邹啸环;黄耕;李彦舫2.HIV-1 Tat基因重组原核表达载体的构建及融合蛋白的表达纯化与功能鉴定 [J], 邱会平;程晓东;卢春3.犬瘟热病毒核蛋白基因重组腺病毒的构建、鉴定与表达 [J], 鞠会艳;夏咸柱;高玉伟;杨松涛;邹啸环;黄耕;李彦舫4.表达大熊猫源犬瘟热病毒H蛋白复制缺陷型重组腺病毒的构建及鉴定 [J], 陈廷炜;孟宪踊;王铁成;高玉伟;冯娜;夏咸柱5.表达大熊猫源犬瘟热病毒H蛋白复制缺陷型重组腺病毒的构建及鉴定 [J], 陈廷炜;孟宪踊;王铁成;高玉伟;冯娜;夏咸柱因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

犬瘟热病毒F蛋白分子生物学研究进展

犬瘟热病毒F蛋白分子生物学研究进展
许红丽;易立;王建科;杨莘;程世鹏
【期刊名称】《特产研究》
【年(卷),期】2011(033)002
【摘要】犬瘟热病毒融合蛋白是囊膜糖蛋白,是产生中和抗体的主要保护性抗原,结构相对保守.融合蛋白介导病毒囊膜和细胞膜融合,决定病毒在宿主体内扩散的能力,在病毒的致病性及免疫原性上具有重要作用.因此,对犬瘟热融合蛋白基因及其蛋白的结构和功能进行研究具有重要的意义.本文从蛋白结构、蛋白功能、核酸序列比对等多方面对融合蛋白进行了阐述.
【总页数】5页(P52-56)
【作者】许红丽;易立;王建科;杨莘;程世鹏
【作者单位】中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室,吉林吉林132109;中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室,吉林吉林132109;中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室,吉林吉林132109;中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室,吉林吉林132109;中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室,吉林吉林132109
【正文语种】中文
【中图分类】Q939.4
【相关文献】
1.犬瘟热病毒核衣壳蛋白分子生物学研究进展 [J], 罗彬;易立;王建科;程世鹏
2.犬瘟热病毒分子生物学特征研究进展 [J], 乔军
3.犬瘟热病毒分子生物学研究进展 [J], 高娃;杨敬;陈振文
4.犬瘟热病毒分子生物学研究进展 [J], 王琛;袁宝;任文陟
5.犬瘟热病毒分子生物学研究进展 [J], 杨敬;李永清
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嵌合犬瘟热病毒rHBF-vacH 株的构建及鉴定

. All Rights Reserved.
BU Yan, FENG Chu-chu, YAN Xi-jun, XUE Xiang-hong ※
(Institute of Special Animal and Plant Sciences of Chinese Academy of Agricultural Sciences, Changchun 130112, China)
毒 rHBF-vacH。犬瘟热病毒的囊膜蛋白 H 和 F，决定着犬瘟热病毒宿主嗜性和致病性，也是产生免疫保护的关键抗原。因此，本研究
以 GenBank 中公布的犬瘟热病毒疫苗毒株 Onderstepoort 序列（AF378705）为模板，利用 Primer Premier 6.0 设计特异性引物，扩增
其 H 基因，将 Onderstepoort 的 H 基因定向克隆至 pcDNA3.2-HBF-1 中，筛选获得正确的全长重组质粒 pcDNA3.2-HBF-vacH 之后，
通过病毒拯救，获得嵌合病毒 rHBF-vacH，最后，通过免疫荧光、RT-PCR 和电镜观察，初步鉴定嵌合病毒 rHBF-vacH 的基因组中携
6
Special Wild Economic Animal and Plant Research
DOI：10.16720/ki.tcyj.2021.055ຫໍສະໝຸດ 特产研究嵌合犬瘟热病毒
株的构建及鉴定
卜研，冯楚楚，闫喜军，薛向红※
（中国农业科学院特产研究所，吉林长春 130112）
摘要：为了明确我国犬瘟热病毒流行毒株的关键毒力基因及其致病机制，本研究构建了一株表达疫苗毒株 H 基因的嵌合犬瘟热病
: To clarify the key virulence gene and its pathogenic mechanism of the epidemic canine distemper virus in China, a chimeric canine distemper virus rHBF-vacH strain expressing the H gene of the vaccine strain was constructed. As known that the enveloped proteins H and F of canine distemper virus determine its host tropism and pathogenicity, and they are the key protective antigens. Therefore, the specific primers to amplify the H gene of Onderstepoort strain with the Primer Premier 6.0 soft based on the whole genome sequence as a template of Onderstepoort (AF378705) published in GenBank was designed. Then the H gene of Onderstepoort to the restriction sites in pcDNA3.2HBF-1, a full-length infectious clone of an isolate canine distemper virus HBF-1 strain was cloned, which would obtain a correct recombinant plasmid pcDNA3.2-HBF-vacH. The chimeric virus rHBF-vacH was recovered by co-transfections of pcDNA3.2-HBF-vacH and three helper plasmids pcDNA3.2-N, pcDNA3.2-P and pcDNA3.2-L expressing N protein, P protein and L protein, respectively. The chimeric virus rHBF-vacH was preliminarily identified by immunofluorescence, RT-PCR and electron microscope observation. The results demonstrated that the chimeric virus rHBF-vacH reacted strongly with the canine distemper virus specific anti-N monoclonal antibodies, carried an H gene of Onderstepoort strain. It wasn't its original wild type H gene, it was round-shapes with envelope membrane of about 200nm size, the typical morphology of canine distemper virus. The construction and identification of chimeric virus rHBF-vacH in the present study provided a basis to further clarify the role of canine distemper virus H gene in pathogenicity of canine distemper virus epidemic strains in China, which would provided an evidence for the precise design of canine distemper vaccine in future.

犬瘟热病毒H、F和N基因的克隆及原核表达

犬瘟热病毒H、F和N基因的克隆及原核表达作者：包福祥，阿米娜等来源：《兽医导刊》 2018年第4期犬瘟热病毒(Canine distemper virus, CDV) 为负链RNA 病毒，属于副黏病毒科麻疹病毒属，可引起犬科、鼬科和浣熊科动物的急性、高度接触性、致死性疾病，该病的主要传染源为患病动物和隐性感染的带毒动物。

目前，犬瘟热常年发生，呈散发、地方流行，传染性强、发病率和死亡率高，是养犬业、经济动物养殖和野生动物危害最大的疾病之一。

CDV 由15 616个核苷酸组成，编码基因按3’～5’端排序依次为：3’端前导序列、核衣壳蛋白基因（N）、磷蛋白基因（P）、基质蛋白基因（M）、融合蛋白基因（F）、血凝素蛋白基因（H）、聚合酶蛋白基因（L）和5’端引导序列。

研究表明，CDV 的N、F 和H 三种蛋白在病毒感染和宿主免疫方面起主要作用。

因此，H、F 和N 蛋白的克隆和表达将对CDV 的诊断和治疗具有非常重要的意义。

一、材料和方法1. 材料（1）主要试剂。

英特威犬四联疫苗（宠必威）由内蒙古农业大学教学兽医院刘俊平教授提供；Trizol 试剂为Invitrogen 产品；反转录试剂盒购自Promega 公司；T4 连接酶为NEB 公司产品；Ex-Taq DNA 聚合酶、凝胶回收试剂盒、质粒小提试剂盒、DL2000、DL5000Maker、pMD19-T（Simple）Vector、EcoRI、XhoI、BamHI 限制性内切酶均购自Takara 公司；大肠杆菌Trans-T1 感受态、Transetta (DE3) 感受态购自北京全式金公司；Ni-NTA Sefinose(TM) Resin 购自生工生物工程( 上海) 股份有限公司；SDS-PAGE 凝胶试剂盒购自碧云天公司。

（2）PCR 引物。

根据GenBank 中发表的CDVOnderstepoort 毒株基因序列，用Primer premier 5 软件设计了三对特异性引物H1/H2、N1/N2、F1/F2，引物序列如表1 所示，并在PCR 产物上、下游分别引入酶切位点，引物由生工生物工程( 上海) 股份有限公司合成。

犬瘟热病毒水貂株H与F蛋白基因原核表达重组质粒的构建及表达

犬瘟热病毒水貂株H与F蛋白基因原核表达重组质粒的构建及表达苏凤艳;温铁峰;宗颖;王全凯【期刊名称】《华南农业大学学报》【年(卷),期】2012(033)003【摘要】将克隆质粒pMD-18T-H和pMD-18T-F分别进行双酶切,获得纯化的H 基因和F基因,在T4 DNA连接酶的作用下,亚克隆到原核表达载体pET28a(+)上,获得原核重组质粒pET28a-H和pET28a-F.将原核重组质粒转化大肠埃希菌Escherichia coli Rosetta2( DE3)中进行表达,SDS-PAGE结果显示H基因和F基因分别表达相对分子质量约为31 400和38 200的融合蛋白,Western-blot检测结果显示,表达蛋白均可与CDV标准阳性血清呈阳性反应,表明原核表达的CDV H 蛋白和F蛋白在反应原性上具有与天然H蛋白和F蛋白同样的特性,可作为CDV 诊断用抗原,为CDV的免疫预防研究奠定基础.【总页数】4页(P417-420)【作者】苏凤艳;温铁峰;宗颖;王全凯【作者单位】吉林农业大学中药材学院,吉林长春130118;吉林农业大学中药材学院,吉林长春130118;吉林农业大学中药材学院,吉林长春130118;吉林农业大学中药材学院,吉林长春130118【正文语种】中文【中图分类】S852.65【相关文献】1.犬瘟热病毒水貂分离株F基因真核表达载体的构建与表达 [J], 苏凤艳;宗春苗;王卓聪;丁庆东;王全凯2.犬瘟热病毒GZ2株的分离鉴定及 H 基因原核表达质粒构建 [J], 曾智勇;周莉;汤德元;刘志杰;梁海英3.犬瘟热病毒GZ-Z株H基因原核表达载体的构建 [J], 薛磊4.犬瘟热病毒水貂分离株F1基因的克隆表达 [J], 张蕾;柴秀丽;张大鹏;张海玲;赵建军;高晗;白雪;徐磊;闫喜军5.犬瘟热病毒水貂分离株F基因的克隆及原核表达 [J], 袁小远;单虎;王志亮;李俊因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

犬瘟热病毒F蛋白基因片段的克隆与表达及其表达产物抗原性的初步鉴定

犬瘟热病毒F蛋白基因片段的克隆与表达及其表达产物抗原性的初步鉴定许莎琼;傅志强;华修国;朱建国;刘金明;吴祖立【期刊名称】《上海交通大学学报（农业科学版）》【年(卷),期】2006(024)001【摘要】本研究采用RT-PCR法扩增出犬瘟热病毒标准疫苗株的融合蛋白基因(F 基因)片段约1499 bp,克隆到pMD18-T载体,酶切鉴定后用一对特异性的引物扩增约732 bp的F蛋白基因片段.并把该基因定向克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,转化到宿主菌BL21(DE3)后进行了表达并纯化了该表达产物,Western印迹显示表达产物有良好的抗原性.【总页数】5页(P70-74)【作者】许莎琼;傅志强;华修国;朱建国;刘金明;吴祖立【作者单位】上海交通大学,农业与生物学院,上海,201101;中国农科院,上海家畜寄生虫病研究所,上海,200232;上海交通大学,农业与生物学院,上海,201101;上海交通大学,农业与生物学院,上海,201101;中国农科院,上海家畜寄生虫病研究所,上海,200232;上海交通大学,农业与生物学院,上海,201101【正文语种】中文【中图分类】S858.292【相关文献】1.犬瘟热病毒水貂株H与F蛋白基因原核表达重组质粒的构建及表达 [J], 苏凤艳;温铁峰;宗颖;王全凯2.TTMV ORF1基因的原核表达及表达产物抗原性初步鉴定 [J], 阿荣;朱彩霞;杨志彪;李培锋;华修国3.犬瘟热病毒N蛋白基因的克隆、原核表达及其表达产物抗原性鉴定 [J], 申卫红;马素贞;陈胜男;刘腾飞;陶玉成;简子健4.犬瘟热病毒血凝蛋白在昆虫细胞中的表达与抗原性分析 [J], 全传松;姜骞;于作;李博韬;李连峰;曲连东5.犬瘟热病毒疫苗株H蛋白基因片段的克隆与表达及表达产物抗原性的初步鉴定[J], 王好;钱爱东;刘晔;扈荣良因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

表达犬瘟热H基因重组伪狂犬病毒的构建及生物学特性研究

表达犬瘟热H基因重组伪狂犬病毒的构建及生物学特性研究李业伟;孙程龙;韩乃君;王颖;扈荣良【期刊名称】《农业科学与技术（英文版）》【年(卷),期】2011(012)006【摘要】[目的]构建表达犬瘟热Onderstepoort株H蛋白的重组伪狂犬病毒,并研究其生物学特性。

[方法]通过RT-PCR方法获得Onderstepoort株H基因,插入pcDNA3.1（＋）建立好完整的真核细胞表达盒并将此表达盒亚克隆到转移载体p8AA上。

在此基础上再将报告基因LacZ的表达盒插入转移载体,命名为p8AAZH。

将p8AAZH与伪狂犬病毒（PRV）Bartha-K61株基因组共转染至BHK-21细胞中进行基因重组包装出毒,待细胞病变后收集病毒液。

通过蓝色蚀斑筛选、PCR、电镜观察以及Weste%[Objective] The aim was to construct a recombinant pseudorabies virus expressing canine distemper virus H gene and investigate its biological characters.[Method] H gene of canine distemper virus（CDV）strain Onderstepoort was produced by RT-PCR,inserted into pcDNA3.1（＋）vector to construct a expression cassette,which was then subcloned into transfer vector p8AA,prior to the insertion of LacZ expression cassette.The resulting new transfer vector was named as p8AAZH.Subsequently,p8AAZH was co-transfected with the genome of pseudorabies virus（PRV）Bartha-K61 into BHK-21 cells to enable gene recombination and virus package,and the virus solution was collected as cytopathic effect occurring.A series of procedures including blue plaque purification,PCR identification,observation under electronmicroscope and Western blot were carried out to screen the recombinant pseudorabies virus and identify the protein expression of targetgene.Meanwhile,growth curve of the recombinant virus was determined in BHK-21 cells.[Result] The H gene had been inserted into the genome of Bartha-K61 strain,and RPRV-H was the same as Bartha-K61 in the one-step growth curve and cytopathic effect in BHK-21 cells.[Conclusion] The recombinant pseudorabies virus was constructed,and the insertion of H gene did not influence proliferation of recombinant virus,which laid a foundation for development of recombinant canine distemper virus vaccine.【总页数】4页(P897-900)【作者】李业伟;孙程龙;韩乃君;王颖;扈荣良【作者单位】吉林大学畜牧兽医学院,吉林长春130062;吉林大学畜牧兽医学院,吉林长春130062;吉林大学畜牧兽医学院,吉林长春130062;军事医学科学院军事兽医研究所,吉林长春130122;军事医学科学院军事兽医研究所,吉林长春130122【正文语种】中文【中图分类】S因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

串联IL-2的犬瘟热病毒F-H融合基因重组乳酸杆菌的构建与表达

串联IL-2的犬瘟热病毒F-H融合基因重组乳酸杆菌的构建与表达苏凤艳;李哲;李艳芝;王春凤;曾范利【摘要】为了研发犬瘟热乳酸杆菌载体疫苗,更好地预防犬瘟热,试验采用重叠延伸PCR(SOE-PCR)技术扩增IL2-F-H融合基因,将IL2-F-H融合基因亚克隆至穿梭载体pSIP409上,构建pSIP-IL2-F-H重组表达载体,并电转化至植物乳杆菌NC8感受态细胞中,构建串联水貂白细胞介素-2 (IL-2)的犬瘟热病毒(CDV) F-H融合基因重组乳酸杆菌;利用SDS-PAGE和Western-blot检测IL2-F-H融合蛋白的表达情况.检测表明,重组乳酸杆菌表达了分子量约为80.16 kDa的IL2-F-H融合蛋白,且该融合蛋白能与CDV抗体发生反应,具有反应原性.%In order to study and develop the Lactobacilli carrier vaccine of canine distemper,the IL2-F-H fusion gene was amplified by gene splicing by overlap extension PCR (SOE-PCR).The IL2-F-H fusion gene was sub-cloned into shuttle carrier pSIP409 to construct a recombinant plasmid (named as pSIP-IL2-F-H).Then the recombinant plasmid was transformed into Lactobacillus plantarum competence cells by electroporation.Recombinant Lactobacillus containing a IL2-F-H fusion gene of canine distemper virus (CDV) was constructed.SDS-PAGE and Western-blot were used to detect the expression of IL2-F-H fusion gene.Results showed that the recombinant Lactobacillus expressed a fusion protein (nearly 80.16 kDa in size) which reacted with CDV antibody.【期刊名称】《上海交通大学学报（农业科学版）》【年(卷),期】2017(035)004【总页数】6页(P83-88)【关键词】犬瘟热病毒;IL2-F-H融合基因;乳酸杆菌;表达【作者】苏凤艳;李哲;李艳芝;王春凤;曾范利【作者单位】吉林农业大学中药材学院,长春130118;吉林农业大学中药材学院,长春130118;吉林省伊通满族自治县畜牧工作总站,吉林伊通130700;吉林省动物微生态制剂工程研究中心,长春130118;吉林农业大学中药材学院,长春130118【正文语种】中文【中图分类】S852.65犬瘟热是严重危害毛皮动物养殖业的一种急性、热性、高度接触性传染病,其病原为犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)。

犬瘟热病毒N蛋白基因真核表达质粒的构建与瞬时表达

犬瘟热病毒N蛋白基因真核表达质粒的构建与瞬时表达简子健;马素贞;申卫红;翟少华;赵森【摘要】[目的]构建犬细小病毒(CPV) VP2基因真核表达质粒,为研究核酸疫苗奠定基础.[方法]参考GenBank中发表的CDV N蛋白基因序列设计引物,采用RT - PCR方法从疑似犬瘟热病犬全血样品中扩增CDV N蛋白基因,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+).经测序验证后,小白鼠尾静脉注射瞬时表达CDV N蛋白基因,8h取其肝脏提取总RNA,进行RT - PCR方法扩增.[结果]在病犬的全血样品中扩增得到1 572 bp的CDV N蛋白基因片段,并构建了真核表达质粒pcDNA3.1(+)- CDV N,从瞬时表达的小白鼠肝脏总RNA中可扩增到目的条带.[结论]构建了犬瘟热病毒N蛋白基因真核表达质粒,并在小白鼠体内进行了瞬时表达.%[Objective] In order to further study the DNA vaccine against CDV, The eukaryotic expression plasmid, pcDNA3.1 - VP2 was constructed in this paper.[ Method ] One pair of the primers was designed according to the nucleocapsid (N) protein gene sequences of CDV published in GenBank. CDV N protein gene fragment was amplified from the total RNA template in the whole blood samples infected with CDV by RT - PCR. The cloned N protein gene of CDV was cloned into eukaryotic expression vector pcDNA3.1 ( + ) to construct a eukaryotic expression plasmid pcDNA3. 1 - CDV N. After sequencing, identifying, the pcDNA3.1 ( + ) - CDV N was injected into mice in vena caudal to induce the transient expression of CDV N. The total RNA was abstracted from murine livers at 8 h after injection and the target strap was obtained by RT - PCR from the total RNA. [ Result] A 1 572 bp of CDV N gene fragment was obtained from blood samples in clinicallyinfected dogs by RT - PCR. The eukaryotic expression Plasmid, pcDNA3. 1 - CDV N was constructed and 1 572 bp of a bright stripe was found from the total RNA of murine livers by RT - PCR. [ Conclusion] The eukaryotic expression plasmid, pcDNA3. 1 - CDV N was successfully constructed and expressed in murine bodies.【期刊名称】《新疆农业科学》【年(卷),期】2012(049)003【总页数】5页(P560-564)【关键词】犬瘟热病毒;N蛋白基因;真核表达载体;瞬时表达【作者】简子健;马素贞;申卫红;翟少华;赵森【作者单位】新疆农业大学动物医学学院,乌鲁木齐830052;新疆农业大学动物医学学院,乌鲁木齐830052;新疆农业大学动物医学学院,乌鲁木齐830052;新疆农业大学动物医学学院,乌鲁木齐830052;新疆农业大学动物医学学院,乌鲁木齐830052【正文语种】中文【中图分类】S852.65+5【研究意义】犬瘟热(Canine distemper,CD)是由犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)引起的、累及犬科(尤其是幼犬)、鼬科及浣熊科动物的高度接触传染性、致死性传染病[1]。

重组犬瘟热病毒F－H融合基因乳酸菌的构建及表达

重组犬瘟热病毒F－H融合基因乳酸菌的构建及表达苏凤艳;李哲;李艳芝;王春凤;曾范利【期刊名称】《中国兽药杂志》【年(卷),期】2016(050)009【摘要】为了构建重组犬瘟热病毒（CDV）F －H 融合基因工程乳酸菌，采用重叠延伸 PCR（SOE－PCR）技术扩增 CDV F －H 融合基因。

将 F －H 融合基因亚克隆至穿梭载体 pSIP409多克隆位点上，构建 pSIP －F －H 表达重组子，并电转化至植物乳杆菌 NC8感受态细胞中。

利用 SDS －PAGE 和Western blotting 检测 F －H 融合蛋白的表达情况。

结果表明，成功地扩增了 CDV F －H 融合基因，构建了 pSIP －F －H 重组表达质粒，并电转化至乳酸杆菌感受态细胞中。

SDS －PAGE 和 Western blotting检测表明，重组乳酸杆菌表达了分子量约为62．96 ku 的 F －H 融合蛋白，且该蛋白能与 CDV阳性抗体反应，具有反应原性。

%In order to construct Lactobacillus containing a F-H fusion gene of canine distemper virus(CDV),the F-H fusion gene was amplified by gene splicingby overlap extension PCR(SOE -PCR).The F-H fusion gene was sub -cloned into shuttle carrier pSIP409 to construct a recombinant plasmid(named as pSIP-F-H).Then the recombinant plasmid pSIP-F-H was elec -transformed into Lactobacillus plantarum competence cells.SDS-PAGE and Western -blot were used to detect the expression of F-H fusion protein.In results,the F-H fusion gene of CDV was amplified successfully.The recombinant plasmid pSIP-F-H was constructed and elc -transformed into Lactobacillus plantarum competence cells successfully.Results of SDS -PAGE andWestern -blot showed that recombinant Lactobacillus expressed a fusion protein (nearly 62.96 ku in size)and the protein can react with CDV positive antibody.【总页数】7页(P15-21)【作者】苏凤艳;李哲;李艳芝;王春凤;曾范利【作者单位】吉林农业大学中药材学院吉林长春 130118;吉林农业大学中药材学院吉林长春 130118;吉林省伊通满族自治县畜牧工作总站吉林伊通 130700;吉林省动物微生态制剂工程研究中心吉林长春 130118;吉林农业大学中药材学院吉林长春 130118【正文语种】中文【中图分类】S852.6【相关文献】1.犬瘟热病毒水貂株H与F蛋白基因原核表达重组质粒的构建及表达 [J], 苏凤艳;温铁峰;宗颖;王全凯2.串联IL-2的犬瘟热病毒F-H融合基因重组乳酸杆菌的构建与表达 [J], 苏凤艳;李哲;李艳芝;王春凤;曾范利3.梅毒螺旋体Gpd-IL-2融合基因原核表达重组体的构建、表达及免疫活性的初步研究 [J], 赵飞骏;张晓红;余坚;刘双全;曾铁兵;张跃军;吴移谋4.梅毒螺旋体Gpd-IL-2融合基因原核表达重组体的构建、表达及免疫活性的初步研究 [J], 赵飞骏;张晓红;余坚;刘双全;曾铁兵;张跃军;吴移谋5.表达禽流感病毒NP和M2融合基因重组乳酸菌的构建及鉴定 [J], LI Qiong-yan;YANG Gui-lian;ZHANG Cheng-sai;ZHAO Jin-hui;JIN Yu-bei;YANG Wen-tao;WANG Chun-feng因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

犬瘟热病毒囊膜糖蛋白在杆状病毒-昆虫细胞系统中的表达及鉴定

犬瘟热病毒囊膜糖蛋白在杆状病毒-昆虫细胞系统中的表达及鉴定虞一聪;冯娜;闫飞虎;盖微微;王铁成;王化磊;郑学星;赵永坤;黄耕【期刊名称】《畜牧兽医学报》【年(卷),期】2015(046)006【摘要】为表达具有天然构象的犬瘟热病毒(CDV)囊膜糖蛋白融合蛋白(F)和血凝素蛋白(H),本研究扩增小熊猫源CDV驯化致弱株LP的F、H基因,克隆至pFastBacTMl载体中,测序验证后转化至DH10BacTM感受态细胞,同源重组获得穿梭质粒rBacmid-F、rBacmid-H,将其分别转染Sf9细胞获得重组杆状病毒rpFB-F、rpFB-H,并将表达的重组融合蛋白(rF)和血凝素蛋白(rH)进行IFA和Western blot鉴定.以犬抗CDV高免血清对重组杆状病毒感染细胞进行IFA鉴定,在感染细胞的细胞膜上可见特异性荧光反应;以鼠抗F、H蛋白的主要抗原表位区多克隆抗体对重组杆状病毒感染细胞进行Western blot检测,可见相对分子质量为63和68 ku左右的条带,分别为重组融合蛋白(rF)和血凝素蛋白(rH),大小与预期相符.两种囊膜糖蛋白在杆状病毒-昆虫细胞系统中均成功表达,且具有良好的反应原性.本研究为CDV病毒样颗粒疫苗的开发等工作奠定了基础.【总页数】8页(P981-988)【作者】虞一聪;冯娜;闫飞虎;盖微微;王铁成;王化磊;郑学星;赵永坤;黄耕【作者单位】吉林农业大学动物科学技术学院,长春130118;军事医学科学院军事兽医研究所,吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室,长春130122;军事医学科学院军事兽医研究所,吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室,长春130122;中国农业科学院长春兽医研究所,长春130122;军事医学科学院军事兽医研究所,吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室,长春130122;军事医学科学院军事兽医研究所,吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室,长春130122;军事医学科学院军事兽医研究所,吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室,长春130122;军事医学科学院军事兽医研究所,吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室,长春130122;中国农业科学院长春兽医研究所,长春130122;军事医学科学院军事兽医研究所,吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室,长春130122;中国农业科学院长春兽医研究所,长春130122;军事医学科学院军事兽医研究所,吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室,长春130122;中国农业科学院长春兽医研究所,长春130122;军事医学科学院军事兽医研究所,吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室,长春130122【正文语种】中文【中图分类】S852.659.5【相关文献】1.鸭圆环病毒Cap基因在昆虫细胞杆状病毒系统中的表达及鉴定 [J], 张兴晓;邹金峰;相琪旺;王鑫;陈琳;谢之景;姜世金2.汉坦病毒囊膜糖蛋白G2在毕赤酵母GS115中的表达及鉴定 [J], 李璞媛;白文涛;张芳琳;吴兴安;胡刚;刘艳丽;王海涛;张伟;徐志凯3.抗牛传染性鼻气管炎病毒囊膜gD糖蛋白的单链抗体在昆虫细胞中表达及活性检测 [J], 吴靖;许健;黄秀芬;沈俊俊;何后军;李永清4.鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白在昆虫细胞-杆状病毒表达系统中的分泌表达及免疫原性分析 [J], 洪家兵;王萍;王晓玥;于非可;刘文晓;李永清5.用细菌/杆状病毒系统在昆虫细胞中表达HIV-2外膜糖蛋白gp105和跨膜糖蛋白gp36 [J], 张应玖;金宁一;金善荣;王宏伟;沈家骢因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

CpG-ODN增强表达犬瘟热病毒H蛋白重组质粒免疫效果的分析

CpG-ODN增强表达犬瘟热病毒H蛋白重组质粒免疫效果的分析徐向明;朱善元;张泉;薛整风;李厚达【期刊名称】《畜牧兽医学报》【年(卷),期】2008(39)12【摘要】为提高犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)重组质粒的免疫应答水平,合成4条CpG-寡脱氧核苷酸(CpG-oligodeoxynueleotides,CpG-ODN);通过体外淋巴细胞增殖试验确定1条刺激活件最显著的CpG-ODN,序列为5'-TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3'.将30只健康毕格犬随机均分为2大组,每大组再分为5小组,分别以不同的剂最肌肉注射CDV附着蛋白(H)重组质粒peDNA-H和选定的CpG-ODN.在免疫后的第2、4、6周分别测定各组动物的抗CDV中和抗体和γ-干扰素水平.结果表明选定的CpG-ODN对提高抗CDV中和抗体效价和干扰素水平具有一定作用,且与对照组差异显著(P<0.05);但不同剂量的质粒pcDNA-H和CpG-ODN的效果不同,其中以30 μg/只的CpG-ODN和50 μg/只的pcDNA-H的剂量组合效果最佳.以选定剂量的CpG-ODN和pcDNA-H免疫5只健康毕格犬,同时以质粒peDNA-H与生理盐水作为对照;4周后所有动物均接种CDV组织匀浆毒.结果发现试验组动物均未出现犬瘟热临床症状,且攻毒后第3周CDV检测为阴性,而pcDNA-H对照组和生理盐水对照组动物的CDV检测阳性率为2/5和5/5;这表明CpG能够明显促进重组质粒pcDNA-H的免疫保护作用.【总页数】6页(P1737-1742)【作者】徐向明;朱善元;张泉;薛整风;李厚达【作者单位】江苏畜牧兽医职业技术学院,泰州,225300;江苏畜牧兽医职业技术学院,泰州,225300;扬州大学兽医学院,扬州,225009;扬州大学兽医学院,扬州,225009;扬州大学兽医学院,扬州,225009【正文语种】中文【中图分类】S852.4【相关文献】1.犬瘟热病毒水貂株H与F蛋白基因原核表达重组质粒的构建及表达 [J], 苏凤艳;温铁峰;宗颖;王全凯2.马疱疹病毒1型gB糖蛋白表位与小鼠C3d串联重组质粒免疫效果分析 [J], 李静;鲍子磊;范斌;胡月;宋焕堂;刘建华3.增强口服DNA疫苗和表达HIV包膜糖蛋白病毒载体免疫效果的策略 [J], WierzbickiA;张涛4.犬瘟热病毒血凝蛋白在昆虫细胞中的表达与抗原性分析 [J], 全传松;姜骞;于作;李博韬;李连峰;曲连东5.非典型犬瘟热病毒核衣壳蛋白基因序列分析及其在大肠杆菌中的表达 [J], 毕振威;王永山;范红结;王智群;吴晓悠;马金荣;欧阳伟;张海彬因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

犬瘟热病毒OP株囊膜糖蛋白H基因的克隆与表达

犬瘟热病毒OP株囊膜糖蛋白H基因的克隆与表达徐向明;崔治中;徐建生;秦爱建;殷俊;杨玲;陈璐;宗卫峰;李厚达【期刊名称】《中国预防兽医学报》【年(卷),期】2002(024)006【摘要】根据发表的犬瘟热病毒OP-CDV毒株序列设计两对引物,以犬瘟热病毒OP-CDV株感染Vero细胞收获病毒提取的RNA为模板,做RT-PCR扩增出H基因的5＇端和3＇端大小为945bp、904bp的两个片段,两片段部分重叠,覆盖了H 基因的全部编码序列.将PCR产物按正确的阅读框架定向克隆进pGEX-6p-1载体中谷胱甘肽-S-转移酶(GST)基因的下游,将重组质粒转化进宿主菌BL21中,在37℃1.0mM IRTG诱导下,H基因分段获得了良好的表达,表达产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,确定其表达的融合蛋白质大小分别为59kDa、58kDa,将表达产物回收后混合免疫小鼠.IFA显示免疫小鼠血清能与病毒感染细胞呈现特异反应,表明体外表达H基因保留了天然蛋白部分抗原性.【总页数】4页(P436-439)【作者】徐向明;崔治中;徐建生;秦爱建;殷俊;杨玲;陈璐;宗卫峰;李厚达【作者单位】扬州大学畜牧兽医学院,江苏,扬州,225009;山东农业大学动物科技学院,山东,泰安,271018;扬州大学畜牧兽医学院,江苏,扬州,225009;扬州大学畜牧兽医学院,江苏,扬州,225009;扬州大学畜牧兽医学院,江苏,扬州,225009;扬州大学畜牧兽医学院,江苏,扬州,225009;扬州大学畜牧兽医学院,江苏,扬州,225009;扬州大学畜牧兽医学院,江苏,扬州,225009;扬州大学畜牧兽医学院,江苏,扬州,225009【正文语种】中文【中图分类】S852.65+5;Q785【相关文献】1.犬瘟热病毒中国分离株囊膜糖蛋白基因免疫小鼠诱发的抗体应答 [J], 徐向明;崔治中;殷俊;杨玲;吴宝金;薛整风;李厚达2.猪乙型脑炎病毒广西分离株FC792的囊膜糖蛋白E基因克隆及生物信息学分析[J], 李斌;卢冰霞;秦毅斌;赵武;梁家幸;韦超文;何颖;苏乾莲;陈忠伟;闭炳芬;段群棚;李莹莹;姜佳佳;梁保忠;黄伟坚3.REV分离株囊膜糖蛋白基因的克隆及序列分析 [J], 吉荣;赵文明;钱莉;李余慰;崔治中4.信鸽新城疫病毒P／Anhui／1109株囊膜糖蛋白基因的遗传进化及氨基酸差异性位点分析 [J], 赵磊5.犬瘟热病毒OP株核蛋白基因的克隆与表达 [J], 宗卫峰;徐向明;杨玲;殷俊;陈璐;李厚达因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

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Ａｎ噍．喙啦如Ｔｅｅｏｅａｃｎｓｎｒｖｅｕｒｔａｃｅｆａｉｅｄｓｍｐｒｉｓ（Ｄ．Ｉ０ＩｏｄｖｌｎｗｖｃｉｄｉｏｅｈｒｅｃｉｓｎｉｅｅｒｐｅａｍｐｔｃｎｖｎｏｃｎｔｖｕＣＶ）Ｍ捌ｂｄｔｅＩｌＷｉｔ，ｌｈｈ
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ｐＩ１Ｃ．．ｐＩ１ｃＦ和Ｃ－一ｃＨ质粒，正反向鉴定正确后，ＳｌＩＭｌＩ用ａ和ｕ酶分别对ｐＩ１、Ｃ．１ｐＩＶＥＦＣ．．ｐＩ．ＣｃＦｅＨ、ＣＤ．ＧＰ质粒进行双酶切，分别回收目的片段ｃ．、ｌ片段和载体片段ｐＩＤ，ｃ — １Ｆｃ－ＨＣ．Ｖ．将ｌＦ和ｃ－分别插入载体ｐＩＤＶＣｌＨＣ．Ｃ．中，通过ＰＲ和酶切的方法进Ｃ
．疫２１年第２０１８卷第６期
持人：胡藕祥ｚｄｊ＠ｓａｏｇｗｙｉ．ｒｎｃｎ
犬瘟热病毒重组囊膜糖蛋白（／）ＨＦ全长质粒的构建
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（．１军事医学科学院军事兽医研究所，吉林长春
２吉林农业大学，．吉林长春
摘
１０６；３０２
ｌ０６）３０２
１０６；．０２３吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室，３吉林长春
要：目的开发新型疫苗和改良目前使用的犬瘟热病毒（Ｄ疫苗。ｃｖ）方法以犬瘟热弱毒株ＣＶＲ２／Ｄ／－８为模板，Ｐｅ０用ｉｎ
中图分类号：８２６５５文献标识码：￥５．９Ａ文章编号：０５９４２１）６０４ — ５１０ — ４Ｘ（０１０－０００
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