饲料非常规检测手册

非常规项目检测方法手册二00八年九月目录一、饲料中粗纤维含量的测定------------------------------3二、中性洗涤纤维检测方法--------------------------------5三、油脂TBA值的测定方法--------------------------------6四、KOH溶解度的测定方法--------------------------------7五、尿素酶活性(快速简单的估测方法)----------------------8六、挥发性盐基氮(半微量定氮法) -------------------------9七、枸溶磷含量的测定-----------------------------------11八、水溶液磷含量的测定---------------------------------12九、油脂中过氧化值的测定-------------------------------12十、皂化价的测定---------------------------------------13 十一、油脂酸价的测定---------------------------------15 十二、玉米脂肪酸值测定方法---------------------------15 十三、油脂碘价的测定---------------------------------19 十四、真蛋白的测定-----------------------------------21 十五、糊化度的测定-----------------------------------22 十六、配合饲料混合均匀度的测定-----------------------25 十七、玉米酒精糟浆液测定判断-------------------------26一、饲料中粗纤维含量的测定1、原理用浓度准确的酸和碱，在特定条件下消煮样品，再用乙醇除去可溶物，经高温灼烧扣除矿物质的量，所余量为粗纤维，它不是一个确切的化学实体，只是在公认强制规定的条件下测出的概略成分，其中以纤维素为主，还有少量半纤维素和木质素。

2、试剂本方法试剂使用分析纯，水为蒸馏水。

标准溶液按GB601制备。

2.1硫酸(GB 625)溶液0.128±0.005mol/L：氢氧化钠标准溶液标定，7ml/1000。

2.2氢氧化钠(GB 629)溶液，0.313±0.005mol/L：邻苯二甲酸氢钾法标定13.04g/1000ml。

2.3酸洗石棉HG 3-1062。

2.4 95%乙醇(GB 679)。

2.5乙醚(HG 3-1002)。

2.6正辛醇(防泡剂)。

3、仪器设备3.1实验室用样品粉碎机。

分样筛：孔径1mm，(18目)。

3.3分析天平：感量0.0001g。

3.4电加热器(电炉)，可调节温度。

3.5电热恒温箱(烘箱)：可控制温度在130℃。

3.6高温炉：有高温计可控制温度在500℃～600℃。

3.7消煮器：有冷凝球的600mL高型烧杯或有冷凝管的锥形瓶。

3.8抽滤装置：抽真空装置，吸滤瓶和漏斗。

(滤器使用200目不锈钢网或尼龙滤布)。

3.9古氏坩埚：30mL，预先加入酸洗石棉悬浮液30mL(内含酸洗石棉0.2～0.3g)再抽干，以石棉厚度均匀，不透光为宜。

上下铺两层玻璃纤维有助于过滤。

3.10干燥器，以氯化钙或变色硅胶为干燥剂。

3.11粗纤维测定仪器：国内外生产的符合本标准测定原理，且测定结果一致的仪器。

4、操作步骤称取1～2g试样，准确至0.0002g，用乙醚脱脂，(含脂肪大于10%必须脱脂，含脂肪不大于10%，可不脱脂)，放入消煮器(3.7)，加浓度准确且已沸腾的硫酸溶液(2.1)200mL和1滴正辛醇，立即加热，应使其在2min内沸腾，调整加热器，使溶液保持微沸，且连续微沸30min，注意保持硫酸浓度不变。

试样不应离开溶液沾到瓶壁上。

随后抽滤，残渣用沸蒸馏水洗至中性后抽干。

用浓度准确且已沸腾的氢氧化钠溶液(2.2)将残渣转移至原容器中并加至200mL，同样准确微沸30min，立即在铺有石棉的古氏坩埚上过滤，先用25mL硫酸溶液洗涤，残渣无损失地转移到坩埚(3.9)中，用沸蒸馏水洗至中性，再用15mL乙醇(2.4)洗涤，抽干。

将坩埚(3.9)放入烘箱(3.5)，于130±2℃下烘干2h，取出后在干燥器(3.10)中冷却至室温，称重，再于550±25℃高温炉中(3.6)灼烧30min，取出后于干燥器中(3.10)冷却至室温后称重。

推荐方法：称1～2g试样(脱脂步骤同手工方法)于G2玻璃沙漏斗中，用坩埚夹将漏斗插入热萃取器；从顶部加入预先煮沸的硫酸溶液200mL和两滴正辛醇，将加热旋扭开到最大位置，待溶液沸腾后，将旋扭调到合适位置，使溶液保持微沸30min，抽滤，用沸蒸馏水洗至中性，加入预先煮沸的氢氧化钠溶液200mL，同样准确微沸30min，抽滤，用沸蒸馏水洗至中性，将坩埚(3.9)转移至冷萃取器，加入25mL95%乙醇，抽干，将漏斗转移到烘箱(3.5)，于130±2℃下烘干2h，取出后在干燥器(3.10)中冷却至室温，称重。

再放入500±25℃高温炉(3.6)中灼烧1h，干燥器(3.10)中冷却至室温后称重。

型号不同的仪器具体操作步骤见该仪器使用说明书。

5、计算粗纤维(%)＝(m1-m2)/m式中：m1──130℃烘干后坩埚及试样残渣重，g；m2──550℃(或500℃)灼烧后坩埚及试样残渣重，g；m──试样(未脱脂)质量，g。

6、注意事项：每个试样取两平行样进行测定，以算术平均值为结果。

粗纤维含量在10%以下，绝对值相差0.4。

粗纤维含量在10%以上，相对偏差为4%。

二、中性洗涤纤维检测方法1、试剂（1）中性洗涤剂（3%十二烷基硫酸钠）准确称取18.6g乙二胺四乙酸二钠（C10H14N2O8Na2·2H2O ）和6.8g硼酸钠（Na2B4O7·10H2O ），一同放入1000mL 烧杯中，加入600mL蒸馏水，加热溶解后，加入30g十二烷基硫酸钠(C12H25NaO4S )和10mL乙二醇乙醚,搅拌并微热使其溶解;另称取4.56g无水磷酸氢二钠，置于另一烧杯中，加200mL蒸馏水微微加热溶解后，倒入第一个烧杯中，在容量瓶中稀释至1000mL。

此溶液PH值在6.9-7.1左右。

（PH值一般不需要调整）（2）无水亚硫酸钠A•R2、步骤（1）称量0.5-1.0g(准确至0.001g)样品于250mL三角烧瓶中(样品粉碎20-40目)。

（2）向三角烧瓶中加入事先煮沸的中性洗涤剂100mL,消泡剂3滴，加约0.5无水亚硫酸钠。

（3）在三角烧瓶上放置一个漏斗，将三角烧瓶放在电炉上保持微沸1h.其间要多次适量的向三角瓶中补充一些蒸馏水(保持100mL)。

（4）煮沸完毕后冷却10min,将已恒重的G1(G0)砂芯坩埚安在抽滤瓶上，将三角瓶内的物质全部移入砂芯坩埚中，抽滤，并用适量的沸水冲洗2次。

（5）用20mL丙酮冲洗两次，抽滤。

（6）取下坩埚在105ºC烘干到恒重(约3-4h),冷却后称重。

3、计算NDF%=(烘干后总重量—空坩埚重量)/样品质量*100指标：NDF<32% 质量佳，NDF<35% 合格。

三、油脂TBA值的测定方法1、原理油脂受到光、热、空气中氧的作用，发生酸败反应，分解出醛、酸之类的化合物。

丙二醛就是分解产物的一种，它能与TBA（硫代巴比妥酸）作用生成粉红色化合物，在532nm波长处有吸收高峰，利用此性质即能测出丙二醛含量，从而推导出油脂酸败的程度。

2、试剂2.1 TBA水溶液：准确称取TBA0.288g溶于水中，并稀释至100mL（如TBA 不易溶解，可加热至全溶澄清，然后稀释至100mL），相当于0.02M；2.2 三氯乙酸混合液：准确称取三氯乙酸（分析纯）7.5g及0.1gEDTA，用水溶解，稀释至100mL；2.3 氯仿（分析纯）；2.4 丙二醛标准溶液：称取0.315g1，1，3，3-四乙氧基丙烷，溶解后稀释至1000mL，此溶液每mL相当于丙二醛100μg，置于冰箱内保存。

准确吸取10mL，稀释至100mL，此溶液每mL相当于丙二醛10μg，备用。

3、操作步骤（1）标准曲线的绘制准确吸取每相当于丙二醛10μg的标准溶液0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mL置于纳氏比色管中，加水至总体积为5mL，加入5mLTBA溶液，然后按样品测定步骤进行，测得光密度绘制标准曲线。

（2）样品测定：准确称取融化均匀的油脂样品30g，置于100mL有盖三角瓶内，加入50mL 三氯乙酸混合液，振摇半小时（保持油脂融溶状态，如冷结即在70℃水浴上略微加热使之融化后继续振摇）用双层滤纸过滤，除去油脂。

滤液重复用双层滤纸过滤一次。

准确移取上述滤液5mL置于25mL比色管内，加入5mLTBA溶液，混匀，加塞，置于90℃水浴内保温40min，取出，冷却1h，摇匀，静置，分层，吸出上清液于532nm波长比色，对照标准曲线得到微克数（同时作空白试验）。

4、计算丙二醛含量（mg/kg）=C×505×m式中C—从标准曲线查得丙二醛的微克数(ug)m---样品质量（g）四、KOH溶解度的测定方法1、试剂（1）0.2%的氢氧化钾(KOH)溶液，相当于0.042当量,pH为12.5。

（2）其它试剂为凯氏定氮所需的试剂。

（3）称取2.360g KOH于溶量瓶中，加水溶解并稀释至1000mL。

注意补充KOH试剂的纯度。

2、测定步骤（1）称取1.5g过60目筛的豆粕，置于250mL烧杯中，加入75mL0.2%的KOH溶液，在磁力搅拌器上搅拌20分钟；（2）之后，移入50mL溶液于离心管中，以2700转／分的速度离心10分钟。

（3）取15mL上清液进行凯氏定氮。

（4）用标准定氮法测定15mL溶液中的蛋白质含量，若按此法测定，该15mL 上清液相当于0.3g原样本。

3、计算方法蛋白溶解度(%)=0.3g样本的粗蛋白含量／原样本的粗蛋白含量。

注：当比较不同豆粕样品时，它们的粒度应一致的，样品在0.2% KOH溶液中搅拌的时间也应一致。

五、尿素酶活性（快速简单的估测方法）一、尿素－苯酚磺法1、原理：在有指示剂酚红存在的条件下，豆粕（饼）中的尿素酶活性可按尿素转变成氨的方法定性测定。

2、设备（1）稀硫酸（H2SO4)0.2N或更稀些，带滴管。

（2）尿素一苯酚磺试剂。

a 将1.2克苯酚磺溶解于30mL0.2N的NaOH中。

b 用蒸馏水将之稀释至约300mL。

c 加入10g尿素并溶解之。

d 用蒸馏水稀释至2L。