2020版药典微生物限度标准
中国药典2020微生物限度检查法
我国药典2020微生物限度检查法1.引言我国药典2020版本中，微生物限度检查法是保证药品质量和安全的重要工具。
微生物限度指的是药品中的微生物数量的限定，包括细菌、酵母和霉菌等。
微生物限度检查法的执行对于药品的生产和使用至关重要，它能够保证药品在生产、存储和使用过程中不受到微生物污染，从而确保药品的质量和安全。
2.微生物限度检查法的内容和流程微生物限度检查法主要包括取样、制备试液、接种培养和菌落计数等步骤。
首先要进行取样，从样品中取得代表性的样品；然后是制备试液，将取得的样品溶解或稀释；接下来是接种培养，将制备好的试液接种到适当的培养基上培养；最后是菌落计数，根据培养后的菌落数量来确定微生物的限度。
3.微生物限度检查法的意义微生物限度检查法的实施，可以有效地控制药品中微生物数量的合理范围内，防止药品在生产、储存和使用过程中因微生物污染而导致药品变质、降解或产生毒性。
采用微生物限度检查法，可以杜绝因微生物污染而引起的医源性感染，保障患者用药安全。
4.对我国药典2020微生物限度检查法的个人观点和理解微生物限度检查法是药品质量控制中不可或缺的一部分，它直接关系到患者的用药安全和药品的治疗效果。
我国药典2020版本对微生物限度检查法做了全面更新和完善，包括对检查方法、标准和限度值的详细规定和说明，这对于药品的生产企业和监管部门都具有重要的指导意义。
在日常生产和监管中，执行我国药典2020版的微生物限度检查法，将有助于提高药品的质量和安全水平，保护患者的用药权益，为人民健康事业做出贡献。
5.总结我国药典2020版本中的微生物限度检查法，是药品质量控制中的重要环节。
通过严格执行微生物限度检查法，可以有效地控制药品中微生物数量，防止药品因微生物污染而造成质量问题和安全隐患。
我国药典2020版的微生物限度检查法的更新和完善，将为药品生产和监管提供科学的依据和指导。
在实践中要严格执行微生物限度检查法，确保药品质量和安全，保障患者的用药权益。
2020年药典中药饮片微生物限度检查法
2020年药典中药饮片微生物限度检查法在当今社会，中药饮片作为一种传统的中华医药制剂形式，其应用与研究已经历了漫长的历史。
为了确保中药饮片的质量安全，不仅需要对其有效成分进行分析检测，还需要对微生物限度进行检查。
而在2020年的药典中，围绕中药饮片微生物限度的检查法进行了更新和完善。
1. 背景及重要性：中药饮片是中华传统医学中的重要组成部分，其作为一种应用广泛的中药剂型，一直受到人们的青睐。
然而，由于中药饮片的原料和制剂过程相对复杂，很容易受到环境和操作等因素的影响，从而导致微生物的污染和滋生。
如果这些微生物超出了一定的限度，将对中药饮片的质量和安全造成不可忽视的影响，严重时可能对人体造成危害。
制定并完善中药饮片微生物限度检查法，对于保证中药饮片的质量安全具有重要意义。
2. 检查项目及标准：2020年药典中关于中药饮片微生物限度检查法的更新，将主要针对以下几个方面进行严格的检查：大肠菌群、霉菌和酵母菌。
这些微生物对中药饮片的污染可能性较高，因此对其限度的检查也显得尤为重要。
大肠菌群是指以大肠埃希菌为代表的一类微生物，其数量的增加可能会导致中毒等严重后果；而霉菌和酵母菌则会对中药饮片的有效成分造成破坏，同时也可能对使用者的健康带来风险。
根据2020年药典，对这些微生物的限度进行了更为严格的规定，以保证中药饮片的质量安全。
3. 检查方法及要求：随着科技的不断进步，中药饮片微生物限度的检查方法也在不断更新和完善。
目前，常用的检查方法主要包括菌落总数法和培养方法。
菌落总数法是指通过将中药饮片放入培养基中，培养一定时间后观察菌落的数量来判断其中微生物的含量；而培养方法则是指通过将中药饮片制成悬浊液，然后通过不同的培养基培养显微生物，进而得到微生物的数量和种类。
这些方法在有效检查微生物限度的也要求操作人员需严格掌握检查方法和操作规程，确保检查结果的准确性和可靠性。
4. 作者个人观点：作为一名从事中药研究的从业者，笔者深切地理解并赞同2020年药典中对中药饮片微生物限度检查法的更新和完善。
微生物限度标准
微生物限度标准微生物限度标准是用于评估和控制药品、食品和化妆品中微生物污染水平的指导性标准。
这些标准的制定可维护公众健康和安全。
本文将介绍微生物限度标准的相关内容，包括其适用范围、制定依据和方法以及常见的限度标准指标。
微生物限度标准的适用范围主要涵盖药品、食品和化妆品三个领域。
药品微生物限度标准旨在保证药品的质量和安全性，确保不会因微生物的污染而导致严重的感染或其他不良反应。
食品微生物限度标准用于控制食品中的微生物污染，防止食源性疾病的传播。
化妆品微生物限度标准则用于评估和控制化妆品中的微生物污染，以免对皮肤和健康产生不良影响。
微生物限度标准的制定依据主要包括法规、法律、相关行业协会和组织的建议、国际标准以及科学研究成果。
各国法规和法律对于微生物限度标准的制定有明确要求，例如药典中规定的微生物检测项目和要求。
行业协会和组织通常会发布相关指南或建议，例如美国药典或欧洲药典中的相关章节。
国际标准也对微生物限度标准进行了规范，例如国际标准组织（ISO）发布的相关标准。
此外，科学研究也为微生物限度标准的制定提供了重要的依据，例如对微生物的生存、传播、致病机制和控制方法的研究成果。
微生物限度标准的制定方法主要包括微生物检验方法、限度标准的确定和验证。
微生物检验方法是评估样品中微生物污染水平的关键步骤。
常用的微生物检验方法包括培养法、PCR法、快速试剂法等。
不同的样品和微生物指标可能需要不同的检验方法。
限度标准的确定通常参考法规和法律的要求，同时结合科学研究成果和行业实践。
确定限度标准时，通常考虑微生物的种类、数量和致病性等因素。
验证是确保限度标准的有效性和可执行性的过程，通常包括实验室内验证和现场验证。
常见的微生物限度标准指标包括大肠菌群、金黄色葡萄球菌、真菌和酵母菌等。
大肠菌群是评估食品和水质安全的重要指标，常用作食品污染指示菌。
金黄色葡萄球菌是食源性疾病的重要病原微生物，常用于评估食品加工过程的卫生状况。
2020版《中国药典》微生物限度计数—沙门菌
表 1 控制菌检査用培养基的促生长能力、抑制能力和指示特性
控制菌
培养基
特性
试验菌
耐胆盐革兰阴 肠道菌增菌液体培养基
促生长能力 大肠埃希菌、铜绿
性菌
假单胞菌
抑制能力 金黄色葡萄球菌
紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基 促生长能力+ 大肠埃希菌、铜绿
1.3 阴性对照 为确认试验条件是否符合要求，应进行阴性对照试验， 阴性对照试验应无菌生 长。如阴性对照有菌生长，应进行偏差调查。 2 培养基适用性检查
液体培养基促生长能力检查
固体培养基促生长能力检查
分别接种不大于 100cfu 的试验菌（见表 1）于 用涂布法分别接种不大于 100cfu 的试验菌
3.2 适用性试验 按控制菌检查法取规定量供试液及不大于 100cfu 的试验菌接 入规定的培养基中 ↓ 依相应的控制菌检查方法，在规定的温度及最短时间下培养 ↓ 应能检出所加试验菌相应的反应特征。 ↓
结果判断 上述试验若检出试验菌，按此供试液制备法和控制菌检查方 法进行供试品检查
3.3 供试品检查 阳性对照试验 阳性对照试验方法同供试品的控制菌检查,对照菌的加量应不大
规定的最短培养时间下培养
↓
↓
试验菌应不得生长
被检培养基上试验菌生长的菌落大小、形态特 征、指示剂反应情况等应与对照培养基一致。
液体培养基促 生长能力检查
固体培养基促 生长能力检查
培养基抑制能 力检查
培养基指示特 性检查
RV 沙门菌增菌 30～35℃培养
—
30～35℃培养
—
液体培养基
2020版药典微生物限度计数—沙门菌
2020版药典微生物限度计数—沙门菌2020版本药典(1) 菌种及菌液制备1) 菌液制备将铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、沙门菌分别接种在胰酪大豆胨琼脂培养基上，35℃条件下培养24小时，将新鲜培养物用pH7.0的0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液。
(2) 控制菌检查方法适用性试验控制菌检査用培养基的适用性检查项目包括促生长能力、抑制能力及指示特性的检查，各培养基的检查项目及所用的菌株见表1。
表1 控制菌检査用培养基的促生长能力、抑制能力和指示特性沙门菌菌检查方法适用性试验1、RV沙门菌增菌液体培养基促生长能力检查：分别接种不大于l00cfu的乙型副伤寒沙门菌于被检培养基和对照培养基中，在35℃条件下培养18小时。
2、RV沙门菌增菌液体培养基抑制能力检查：分别接种不大于l00cfu的金黄色葡萄球菌于被检培养基和对照培养基中，在35℃条件下培养24小时。
3、木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基促生长能力检查：分别接种不大于l00cfu的乙型副伤寒沙门菌于被检培养基和对照培养基中，在35℃条件下培养18小时。
4、木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基指示特性检查：分别接种不大于l00cfu的乙型副伤寒沙门菌于被检培养基和对照培养基中，在35℃条件下培养18小时。
5、木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基抑制能力检查：分别接种不大于l00cfu的乙型副伤寒沙门菌于被检培养基和对照培养基中，在35℃条件下培养24小时。
6、三糖铁琼脂培养基指示特性检查：分别接种不大于l00cfu的乙型副伤寒沙门菌于被检培养基和对照培养基中，在35℃条件下培养18小时。
7、三糖铁琼脂培养基抑制能力检查：分别接种不大于l00cfu的乙型副伤寒沙门菌于被检培养基和对照培养基中，在35℃条件下培养18小时。
(3) 沙门菌检査1) 供试液制备和增菌培养取10g供试品直接接种至90ml的胰酪大豆胨液体培养基中，混匀，35℃培养24小时。
【2020版中国药典】通则-非无菌微生物限度检查
【2020版中国药典】通则-非无菌微生物限度检查1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法
微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。
当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合规定的微生物限度标准时，应按下述规定进行检验，包括样品的取样量和结果的判断等。
除另有规定外，本法不适用于活菌制剂的检查。
学习：将旧版的“相应”更换为“规定”，更便于按照1107进行判定执行。
微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要求。
检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
洁净空气区域、工作台面及环境应定期进行监测。
学习：将旧版的“单向流空气区域”更换为“洁净空气区域”。
计数方法
……供试品检查时，应根据供试品理化特性和微生物限度标准等因素选择计数方法，检测的样品量应能保证所获得的试验结果能够判断供试品是否符合规定。
所选方法的适用性须经确认。
……
提示：后文增加了对于“贵重药品、微量包装药品”的检验量的更全面的表述，因注意结合此处的要求。
计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性试验
……菌液制备……取黑曲霉的新鲜培养物加人适量含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或……
学习：此处改动同无菌检查法，将“3~5ml”的具体量调整为“适量”，便于根据孢子的量灵活掌握菌液制备方法。
培养基适用性检查
微生物计数用的商品化的预制培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。
学习：类似于无菌检查法，此处将“成品培养基”修改为“商品。
中国药典2020微生物限度检查
中国药典2020微生物限度检查
中国药典2020中对微生物限度的检查要求如下：
1.总菌落数限度：需满足以下要求：
- 不应含有大肠埃希菌或粪链球菌。
- 对无菌制品，其总菌落数规定不应超过制定的标准。
- 必须符合产品特性和验证的任何特定需求。
2.酵母和霉菌限度规定：
- 对无菌制品，每克中不应含有可繁殖的酵母和霉菌。
- 对非无菌制品，每克中不应含有可繁殖的酵母和霉菌。
建议
进行采样和检测多数生物制品样品。
3.大肠菌群限度规定：
- 每克中不应含有大肠菌群。
对某些产品（如消毒剂指定的测定），可以采用其他方法或者规定了合适分析方法的产品例外。
4.针对特定微生物的检查：
- 对某些产品，药典可能要求进行特定微生物的检查，以确保
产品的安全性和质量。
需要注意的是，这只是中国药典2020中关于微生物限度检查
的一般要求，具体的规定可能因产品类型和特性而有所不同。
因此，在进行微生物检查时，需根据产品的特定需求和合适的分析方法进行操作。
在实际生产和质量控制过程中，还需严格按照相关法规和标准进行操作，确保产品质量和安全性。
2020年版《中国药典》通则 —“非无菌药品微生物限度标准”
2020年版《中国药典》通则“非无菌药品微生物限度标准”（蓝色字体表示新增内容，红色字体表示删减内容）非无菌药品的微生物限度标准是基于药品的给药途径和对患者健康潜在的危害以及药品的特殊性而制订的。
药品生产、贮存、销售过程中的检验，药用原料、辅料及、中药提取物及中药饮片的检验，新药标准制订，进口药品标准复核，考察药品质量及仲裁等，除另有规定外，其微生物限度均以本标准为依据。
1.制剂通则、品种项下要求无菌的及标示无菌的制剂和原辅料应符合无菌检查法规定。
2.用于手术、严重烧伤、严重创伤的局部给药制剂应符合无菌检查法规定。
3.非无菌化学药品制剂、生物制品制剂、不含药材原粉的中药制剂的微生物限度标准见表 1。
表 1 非无菌化学药品制剂、生物制品制剂、不含药材原粉的中药制剂的微生物限度标准给药途径需氧菌总数（cf u/g、cf u/m l或cf u/10c m2）霉菌和酵母菌总数（cf u/g、c fu/m l或cfu/10cm2）控制菌口服给药①固体制剂液体及半固体制剂103102102101不得检出大肠埃希菌（1g 或1ml）；含脏器提取物的制剂还不得检出沙门菌（10g 或10ml）口腔黏膜给药制剂齿龈给药制剂鼻用制剂102101不得检出大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌（1g、1ml 或 10cm2）耳用制剂皮肤给药制剂102101不得检出金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌（1g、1ml 或10cm2）呼吸道吸入给药制剂102101不得检出大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、或 10ml ） 阴道、尿道给药制剂102101不得检出金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌（1g 、1ml 或 10cm 2）；中药制剂还不得检出梭菌（1g 、 1ml 或 10cm 2）直肠给药 固体制剂103102 不得检出金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌（1g 或 1ml ）其他局部给药制剂102102不得检出金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌（1g 、1ml 或 10cm 2）注 ①化学药品制剂和生物制品制剂若含有未经提取的动植物来源的成份及矿物质还不得检出沙门菌（10g 或 10ml ）。
2020版药典中关于纯化水和注射水的要求
2020版药典中关于纯化水和注射水的要求2020版药典中关于纯化水和注射水的要求纯化水的要求纯化水在药物生产中具有重要的作用，2020版药典对其要求有以下几点：1.纯度要求：纯化水应当符合国际药典中规定的相关要求，如欧洲药典(EP)、美国药典(USP)等。
2.微生物限度：纯化水应符合微生物限度的要求。
根据药典，纯化水应当不存在大肠杆菌、霉菌、酵母菌等有害微生物。
3.化学指标：纯化水的各项化学指标应按照国家相关标准要求进行测试，包括总溶解固体含量、重金属含量、无机盐和有机杂质含量等。
具体例子如下：•微生物限度的要求：纯化水样品应按照规定的方法进行微生物限度测试，如培养基培养法、细菌总数法等。
测试结果应在规定的范围内，确保纯化水的微生物水平符合要求。
•化学指标的要求：纯化水样品应按照规定的方法进行化学指标测试。
例如，总溶解固体含量可以使用电导率法进行测定；重金属含量可以使用原子吸收光谱法或者电感耦合等离子体发射光谱法进行测定。
注射水的要求注射水是一种应用广泛的药物配制溶剂，2020版药典对其要求有以下几点：1.纯度要求：注射水应当符合国际药典中规定的相关要求，如欧洲药典(EP)、美国药典(USP)等。
2.微生物限度：注射水应符合微生物限度的要求，不得存在大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等病原微生物。
3.化学指标：注射水的各项化学指标应按照国家相关标准要求进行测试，包括总溶解固体含量、重金属含量、无机盐和有机杂质含量等。
具体例子如下：•微生物限度的要求：注射水样品应按照规定的方法进行微生物限度测试，如微生物计数法、培养方法等。
测试结果应在规定的范围内，确保注射水不含有任何病原微生物。
•化学指标的要求：注射水样品应按照规定的方法进行化学指标测试。
例如，总溶解固体含量可以使用电导率法进行测定；重金属含量可以使用原子吸收光谱法或者电感耦合等离子体发射光谱法进行测定。
以上是2020版药典关于纯化水和注射水的要求的简要介绍，这些要求的实施有助于保证纯化水和注射水的质量和安全性，从而确保药物的有效性和可靠性。
2020版《中国药典》微生物限度计数—酵母菌及霉菌
2020版药典微生物限度计数—酵母菌及霉菌2020版本药典(1)菌液制备取白色念珠菌的新鲜培养物，用0.9%无菌氣化钠溶液制成103cfu/ml的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物加5ml含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氣化钠溶液，将孢子洗脱。
然后，使用移液枪吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氣化钠溶液制成103cfu/ml的黑曲霉孢子悬液。
菌液制备后保存在2℃冰箱，在24小时内使用。
(2) 计数培养基适用性检査接种不大于l00cfu的白色念珠菌和黑曲霉的菌液至胰酪大豆胨琼脂培养基平板，35℃条件下培养4天；接种不大于l00cfu的白色念珠菌和黑曲霉的菌液至沙氏葡萄糖琼脂培养基平板，25℃条件下培养4天。
每一试验菌株平行制备2管或2个平皿。
同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
(3) 计数方法适用性试验1) 供试液制备取供试品10g，用胰酪大豆胨液体培养基制备成1:10供试液。
2) 接种和稀释按下列要求进行供试液的接种和稀释，制备微生物回收试验用供试液。
所加菌液的体积不超过供试液体积的1%。
1、试验组取上述制备好的供试液，加入试验菌液，混匀，使每lml供试液中含菌量不大于l00cfu。
2、供试品对照组取制备好的供试液，以稀释液代替菌液同试验组操作。
3、菌液对照组取不含中和剂及灭活剂的相应稀释液替代供试液，按试验组操作加入试验菌液并进行微生物回收试验。
3) 供试品中微生物的回收取20ml温度不超过45℃的胰酪大豆胨琼脂或沙氏葡萄糖琼脂培养基，注人直径90mm的无菌平皿，凝固，制成平板，采用无菌操作台风干的方法使培养基表面干燥。
每一平板表面接种上述照“供试液的制备”和“接种和稀释”制备的供试液0.1ml。
胰酪大豆胨琼脂培养基平板在35℃条件下培养3天，沙氏葡萄糖琼脂培养基平板在25℃条件下培养4天。
同法测定供试品对照组及菌液对照组菌数。
2020版《中国药典》微生物限度计数—需氧菌
2020版药典微生物限度计数—需氧菌2020版本药典(1)菌液制备取铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌的新鲜培养物，用0.9%无菌氣化钠溶液制成103cfu/ml的菌悬液。
然后，使用移液枪吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氣化钠溶液制成103cfu/ml的黑曲霉孢子悬液。
菌液制备后保存在2℃冰箱，在24小时内使用。
(2) 计数培养基适用性检査接种不大于l00cfu的铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉、金黄色葡萄球菌的菌液至胰酪大豆胨琼脂培养基平板和胰酪大豆胨液体培养基管，35℃条件下培养3天。
每一试验菌株平行制备2管或2个平皿。
同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
(3) 计数方法适用性试验1) 供试液制备取供试品10g，用胰酪大豆胨液体培养基制备成1:10供试液。
2) 接种和稀释按下列要求进行供试液的接种和稀释，制备微生物回收试验用供试液。
所加菌液的体积不超过供试液体积的1%。
1、试验组取上述制备好的供试液，加入试验菌液，混匀，使每lml供试液中含菌量不大于l00cfu。
2、供试品对照组取制备好的供试液，以稀释液代替菌液同试验组操作。
3、菌液对照组取不含中和剂及灭活剂的相应稀释液替代供试液，按试验组操作加入试验菌液并进行微生物回收试验。
3) 供试品中微生物的回收取20ml温度不超过45℃的胰酪大豆胨琼脂或沙氏葡萄糖琼脂培养基，注人直径90mm的无菌平皿，凝固，制成平板，采用无菌操作台风干的方法使培养基表面干燥。
每一平板表面接种上述照“供试液的制备”和“接种和稀释”制备的供试液0.1ml。
胰酪大豆胨琼脂培养基平板在35℃条件下培养3天，沙氏葡萄糖琼脂培养基平板在25℃条件下培养4天。
同法测定供试品对照组及菌液对照组菌数。
计算各试验组的平均菌落数。
(4) 供试品检查供试品的检验量为10g，检査计数方法按适用性试验确认的计数方法进行供试品中需氧菌总数的测定。
2020版《中国药典》微生物限度计数—耐胆盐革兰阴性菌
选择和分离培养取相当于0.1g 、0.01g 和0.001g 供试品的预培养 物分别接种至9ml体积肠道菌增菌液体培养基中，35℃培养24小时。 上述每一培养物分别划线接种于紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基平板上，
35℃培养24小时。(具体流程见下页)
(具体流程见下页)
耐胆盐革兰氏阴性菌计数方法
1.培养基适用性检查和控制菌检查方法适用性试验
供试品的控制菌检查按经方法适用性试验确认的方法进行。取 供试品，用胰酪大豆胨液体培养基作为稀释剂制成1:10供试液，混 匀，在25℃条件下培养，培养时间使供试品中的细菌充分恢复但不 增殖(2小时)。 2) 定性试验
取相当于10ml供试品的上述预培养物接种至适宜体积90ml肠道 菌增菌液体培养基中，35℃培养24小时后，划线接种于紫红胆盐葡 萄糖琼脂培养基平板上，35℃培养24小时。如果平板上无菌落生长， 判供试品未检出耐胆盐革兰阴性菌。 3) 定量试验
（见表 1）于被检培养基和对照培养基ห้องสมุดไป่ตู้板上
↓
↓
在相应控制菌检查规定的培养温度及不短于 在相应控制菌检查规定的培养温度及不长于
规定的最长培养时间下培养
规定的最短培养时间下培养
↓
↓
试验菌应不得生长
被检培养基上试验菌生长的菌落大小、形态特 征、指示剂反应情况等应与对照培养基一致。
液体培养基促生 固体培养基促生 培养基抑制能力 培养基指示特性
长能力检查
长能力检查
检查
检查
肠道菌增菌液体 30～35℃培养
—
30～35℃培养
—
培养基
24 小时
48 小时
紫红胆盐葡萄糖
—
30～35℃培养 30～35℃培养 30～35℃培养
2020版药典微生物变更细则解读
控制菌检查
供试品检查
阳性对照试验 供试品进行控制菌检查时，应做阳 性对照试验。取阳性对照菌于相应选择性培养基
平皿上划线接种，按供试品的控制菌检查方法培
养，观察菌落生长情况。阳性对照试验应检出相
应的控制菌。
100μl
阴性对照试验 取增菌液0.1ml，照相应控制菌检
查法检查，作为阴性对照。阴性对照应无菌生长。
基本要求： 微生态活菌制品的制备方法、工艺应能保证
成品含有足够的活菌数量，保持其稳定性，同时 应防止外源因子的污染。生产和检定用设施、原 材料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例” 的有关要求。
生产用菌种
生产用菌种应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定
• 名称及来源； • 种子批的建立：三级种子批应分别冻干，
附录3 微生态活菌制品杂菌检查法
新增：
如果供试品本身对某些试验菌具有较强的抑菌 性能，影响试验菌的回收。在此情况下，应根 据原辅料的杂菌负载、生产工艺及产品特性进 行风险评估，保证检验方法的可靠性；在药品 生产、贮藏各个环节中，应严格遵循GMP的指 导原则，以降低产品受杂菌污染的风险。
附录3 微生态活菌制品杂菌检查法
铜绿假单胞菌
项目
供试品检查中 铜绿假单胞菌 结果判定及下 一步鉴定指导
2015版药典
2020版药典
如平皿上无菌落生长或生长的菌 供试品平皿上若 落与阳性对照菌落形态特征不符， 有疑似菌落生长， 判供试品未检出铜绿假单胞菌； 取菌落分离、纯 如平皿生长的菌落与上述菌落形 化后采用氧化酶 态特征相符或疑似，应挑选2-3个 试验及适宜的鉴 菌落，分别放在接种于营养琼脂 定试验，确证是 培养基斜面上，培养18-24小时。 否为制品中的目 取斜面培养物进行革兰氏染色、 的菌或铜绿假单 镜检及氧化酶试验，鉴别是否为 胞菌 制品中的目的菌或铜绿假单胞菌
2020版药典中沉降菌培养时间
2020版药典中沉降菌培养时间
2020版药典中，关于沉降菌的培养时间，在不同的试验条件下会有所不同。
以下是一些常见的沉降菌测试方法及其培养时间的参考：
1. USP<61>常规微生物限度试验：将待检样品与适量的营养培养基充分混合，培养0.5至5小时的时间（通常是1小时），并在30-35℃下孵育5天。
2. USP<62>霉菌和酵母菌限度试验：将待检样品与适量的营养培养基充分混合，培养5-7天的时间，在20-25℃下对霉菌进行观察，在30-35℃下对酵母菌进行观察。
3. USP<71>瓶外生物负荷试验：将积极菌液和多样菌液两个直径均为19毫米的渗透松弛度袋，吸附于不同规格的不锈钢网栅表面，进行培养。
积极菌液在20-25℃下孵育5-7天，多样菌液在30-35℃下孵育3-5天。
需要注意的是，药典中给出的培养时间仅供参考，具体的培养时间应该根据实验条件、待检样品的特性和分离培养的目的灵活确定。
对于某些要求更为严格的检测，可能需要更长或更短的培养时间。
同时，也需要注意不同检测方法的适用范围及其局限性。
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2020版药典微生物限度标准
药典微生物限度标准是指医药产品中存在的微生物限制标准，其主要目的是保证医药产品的质量、安全和有效性。
药典微生物限度标准涉及的微生物主要包括菌落总数、大肠杆菌、沙门氏菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌等。
菌落总数限度标准是指医药产品中存在的各种微生物的总群落数量，是衡量产品微生物污染程度的重要参数。
药典中对菌落总数的限制标准主要是基于药品的用途和使用条件，例如注射用药品应该保持高度无菌状态，因此其菌落总数标准应该更加严格，一般要求不得超过100CFU/g；而口腔贴剂或口服制剂等，则对菌落总数要求相对较低，一般不得超过1000 CFU/g。
大肠杆菌限度标准是指医药产品中是否存在含量超标的大肠杆菌，该细菌主要通过消费者口腔、消化系统进入医药产品中，通常是在制造过程中由于公共卫生方面的不合规或人员操作不当所导致的。
由于大肠杆菌对人体的健康有较大的危害性，药典对其限度标准要求十分严格，不得检出或检出数量应该极为有限。
沙门氏菌限度标准是指医药产品中是否存在含量超标的沙门氏菌，该细菌主要通过消费者口腔、消化系统进入医药产品中，而且对人体的健康有较大威胁。
药典对沙门氏菌限度标准同样也要求十分严格，不得检出或检出数量应该极为有限。
铜绿假单胞菌限度标准是指医药产品中是否存在含量超标的铜绿假单胞菌，该细菌主要通过环境污染以及人员操作不当所导
致的。
铜绿假单胞菌主要对生命体内部健康有较大的危害性，能够引起各种感染和疾病，因此药典对其限度标准要求同样也十分严格。
金黄色葡萄球菌限度标准是指医药产品中是否存在含量超标的金黄色葡萄球菌，该细菌能够引起多种感染和疾病，对人体健康有较大危害性，因此药典也对其限度标准要求十分严格。
总之，药典微生物限度标准是医药产品质量控制中的重要指标，能够保证医药产品的质量、安全和有效性，其限度标准应该根据产品用途和使用条件而定，同时也需要制定严格的检测标准和检测程序，确保其准确性和可靠性。