蜂胶中酚类化合物的分析研究进展
蜂胶中酚酸类成分的药代动力学研究
ａ ｃ ｉ ｄ， Ｐ—ｃ ｏ ｕ ｍａ ｒ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ， ｆ ｅ ｒ ｕ ｌ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ， ｉ ｓ ｏ ｆ ｅ ｒ ｕ ｌ ｉ ｅ ａ ｃ ｉ ｄ， ３， ４一ｄ ｉ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｘ ｙ —
ｉ ｎ ｎ ａ ｍｉ ｅ ａ ｃ ｉ ｄ浓度范 围分别为 ０ ． ８～ ８ １ ． ６ ｇ ／ ｍ ｌ ， ０ ． ８一 一 ７ ８ ． ４ ｍ ｌ ， １ ． １ 仪器 Ａ ｇ ｉ ｌ ｅ ｎ ｔ １ １ ０ ０高效 液相色谱 仪 （ Ａ ｇ ｉ ｌ ｅ ｎ ｔ Ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｅ ｓ ， ｃ Ｇ ｅ ｒ ｍ ａ ｎ ｙ ） ， 配有 四元泵 、 真空脱气 机 、 自动进 样器 、 二极管 阵列检 ０ ． ８～ ８ ０ ． ０ ｇ ／ ｍｌ ， １ ． ０～ ９ ９ ． ２ ｇ ／ ｍ ｌ 和 １ ． ５～１ ５ １ ． ６ ｇ ／ ｍ ｌ 。对 照 品溶 测器 。Ｂ Ｔ ２ ５ Ｓ型电子天平 ；ＨＣ Ｇ一 ３ ６ Ａ氮 吹仪 ； ２—１ ６ Ｋ型 冷冻 液储存 于 ４ ℃， 备用 。 高速 离心 机 ； ＭＳ １型涡旋混 合器 ； Ｔ １ ８型 内切 式组 织匀 浆机 ； １ ０ ０ ２ ． ３ 内标溶液的制备 取替 哨唑 （ ｔ ｉ ｎ ｉ ｄ ａ ｚ ｏ ｌ ｅ ） 对 照品约 １ ． Ｏ ０ ｍｇ ， １ ０ ０ ０ ｌ 微量取样器 。 精 密称定 ， 置２ ５ ｍ ｌ 量瓶 中， ８ ０ ％ 甲醇水 溶液溶解并 定容至 刻度 ， １ ． ２ 药 品与试 剂 对 照 品 ｅ ａ ｆ ｆ ｅ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ， Ｐ—ｃ ｏ ｕ ｍａ ｒ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ， ｆ ｅ ｒ ｕ ｌ ｉ ｃ 摇 匀 ， 即得浓度为 ４ ０ ． ０ ｍｌ 的内标储备液 ， 储存于 ４℃ ， 备用 。 ａ ｃ ｉ ｄ ， ｉ ｓ ｏ ｆ ｅ ｒ ｕ ｌ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ和 ３ ， ４一 ｄ ｊ ｍ ｅ ｔ ｈ ０ ｘ ｙ ｃ ｉ ｎ ｎ ａ ｍｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ为得笔 者 由原 ２ ． ４ 色谱条件 Ｚ ｏ ｒ ｂ ａ ｘ Ｅ ｘ ｔ ｅ ｎ ｄ—Ｃ １ ８ 色谱柱 ， Ｚ ｏ ｒ ｂ ａ ｘ Ｅ ｘ ｔ ｅ ｎ ｄ—Ｃ １ ８ 保 蜂胶 中分离得到 ， 纯度均大 于 ９ ８ ％； Ｔ ｉ ｎ ｉ ｄ ａ ｚ ｏ ｌ ｅ 购 自中国药 品生 物 护柱 （ ２ ０ ｍ ｍ ｘ ４ ｍ ｍ， ５ ｍ） （ Ｐ ａ ｌ ｏ Ａ ｌ ｔ ｏ ， Ｃ Ａ， Ｕ Ｓ Ａ） ； 流动 相 ： （ Ａ） 制品检定 所。 甲醇 一（ Ｂ ）０ ． ２ ％冰醋酸水溶 液 （ ）梯度洗脱 ： ０～１ ５ ｍｉ ｎ ： Ａ ７ ％升 至 ２ ８％ ， Ｂ ７ ３％ 降 至 ７ ２ ％； １ ５～３ ５ ａ ｒ ｉ ｎ ： Ａ ２ ８％ 升 至 ５ ２ 甲醇 、 冰醋 酸 为 色谱 纯 （ Ｔ Ｅ Ｄ Ｉ Ａ， Ｔ Ｅ Ｄ Ｉ Ａ Ｃ Ｏ ＭＰ Ａ Ｎ Ｙ， Ｉ Ｎ Ｃ ． ， ２ Ｕ Ｓ Ａ） ， 其他为分析纯 （ 国药集 团化 学试剂 有 限公 司） ； 纯净 水 由 ％ ， Ｂ ７ ２ ％ 降至 ４ ８ ％； 流速 ： １ ． ０ ｍ ｌ ／ ｍ ｉ ｎ ； 检 测波 长 ： ３ ２ ０ ｎ ｎ ｌ ； 进样 Ｍｉ ｌ ｌ ｉ —Ｑ纯水制备系统置备。 量： １ ０ ｌ ； 柱温 ： ３ ５℃ ； 蜂胶 乙醇提取物 （ Ｅ Ｅ Ｐ ） 的提取过程为 ： 干燥蜂胶药材粉 碎后 ３ 结 果 ． １ 方 法的专属性 将供试 动物的空白血浆 色谱 网（ 图 １一Ａ） 与 用９ ５ ％乙醇提取完全后 ， 石油 醚脱 脂 ， 乙酸乙酯萃取 至颜色不 再 ３ 图１ 一Ｂ ） 及给 加深为止 ， 减压浓缩后真 空干燥 ， 得Ｅ Ｅ Ｐ ， 经 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ检测其 中含有 空 白血浆 中加入待测物和内标物后得到的色谱图 （ ｃ ａ ｆ ｆ ｅ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ２ ２ ． ９ ｍｇ ／ ｇ ， Ｐ—ｅ ｏ ｕ ｍａ ｒ ｉ ｅ ａ ｃ ｉ ｄ ９ ． ０ ｍｇ ／ ｇ， ｆ ｅ ｒ ｕ ｌ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ４ ． ２ 药后不同时间大 鼠血浆色谱 图（ 图 １一Ｃ） 进行 比较 ， 结 果表 明血 被 测物峰形 ｍ ｇ ／ ｇ ， ｉ ｓ ｏ ｆ ｅ ｒ ｕ ｌ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ １ ３ ． ３ ｍ ｇ ／ ｇ和 ３ ， ４一 ｄ ｉ ｍ ｅ ｔ ｈ ０ ｘ ｙ ｃ ｉ ｎ ｎ ａ ｍ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ３ ７ 浆中所含 内源性物质不干扰被测物和 内标物的测定 ，
蜂胶的研究应用进展_郦金龙
蜂胶（propolis）是蜜蜂从植物芽孢或树干破皮伤处采集来的树脂（树胶），并混入蜜蜂上颚腺的分泌物，与蜂蜡、少量花粉等加工而成的一种具有芳香气味和黏性的胶状固体物质。
蜂胶是蜜蜂用于维持整个群体健康的有效物质，一个5—6万只的蜂群一年只能生产蜂胶100—150g，因此被誉为“紫色黄金”。
近代研究，特别是近10年的研究证明，蜂胶所含有的丰富而独特的生物活性物质，使其具有抗菌、消炎、止痒、抗氧化、增强免疫、降血糖、降血脂、抗肿瘤等多种功能，对人体有着广泛的医疗、保健作用，是一种具有较高保健功能的产品。
本文主要对蜂胶的活性成分组成、蜂胶的提取、蜂胶品质的鉴定以及蜂胶的功能与应用等蜂胶研究的最新进展进行了综述。
1 蜂胶化学成分的多样性及功能1.1 蜂胶中的主要化学成分及差异性[1,2]天然蜂胶的基本成分一般是：树脂树香复合物39％—53％、多酚类12％—17％、多糖类2％—3％，蜂蜡19％—35％、杂质（含花粉等）8％—12％。
各类蜂胶中已知的化学成分达300余种。
主要包括高良姜素、乔松素等71种黄酮类化合物，肉桂酸、咖啡酸、阿魏酸等59种芳香酸与芳香酸酯类化合物，肉桂醇等24种酚类、醇类和17种醛与酮类化合物，25种氨基酸，50种脂肪酸与脂肪酸酯，19种萜类化合物，6种甾体化合物，9种糖类化合物，25种烃类化合物等。
同时，蜂胶中含有微量的维生素B族以及丰富的矿物质与微量元素。
摘 要：蜂胶含有丰富而独特的生物活性物质，对人体有着广泛的医疗、保健作用，现已成为各国科学研究的热点，并成为新兴的保健品。
本文主要概述了近些年来蜂胶的研究应用进展，主要包括蜂胶的化学成分以及蜂胶的提取，蜂胶中黄酮类化合物的结构、性质、功能，蜂胶中黄酮类化合物的分离提纯以及测定等，并对其研究应用作出展望。
关键词：蜂胶；提取；总黄酮；总酚；功能蜂胶的研究应用进展郦金龙1，赵文婷1，王 盼1，苏春元1，刘 欢2，李辉尚3，殷丽君1（1中国农业大学食品科学与营养工程学院，北京 100083；2中国水产科学研究院质量与标准研究中心，北京 100141；3中国农业科学院农业信息研究所，北京 100081）由于蜂胶的产生受所处产地的地理环境因素影响很大，因此，来自于不同产地的蜂胶品种，在化学成分组成上也存在着细微的差异。
蜂胶的研究进展
等 用蜂胶对 乳酸杆菌进行 体外抑 菌试验 ， 与 ７ 并 种有 抗菌作 用的 中药进行对 照。结果显示 ： 蜂胶 的平均抑 菌环 明显太 于其
它 ７ 中药 。 种 ２２ 抗病毒作用 ． 蜂 胶能抑 制水泡性 口腔病毒 、 单纯疱疹 病毒
作用加强 ， 当作用 ２ 时 ， ４ｈ 从低浓度 到 高浓度均呈 现 出较强 的 活化作用。李淑华 等“ 报道用单 克 隆抗体 拄术 检测 实验 小 鼠
蜂胶 的化 学成 分很复杂… ， 从 中分离鉴定出的成分有黄酮类 、 已 萜烯类 、 醌类 、 酷类 、 醇类 、 酚类 、 醚类、 有机 酸和大量 的 氨基 酸、
酶类 、 维生素 Ｂ、 维生素 、 维生素 、 生素 Ｅ和维生素 Ａ以 维 及矿物质等。含有大量 的黄 酮类 、 萜烯类化 合物是蜂 胶的重要 特征 ， 已从蜂胶 中分 离鉴 定的黄 酮化合物有 ３ 现 ０余种 ， 包括 白
２ 蜂 胺的生理药理作用
用 。体外实 验表 明， 能显 著的抑翻 氧 自由基在体外 引发 的 蜂胶 小 鼠肝微粒体脂质 过氧化反 应 体内实验 表 明， 蜂胶 可有效 的 抑 制四氧嘧啶引发小 鼠肝脏 自由基 的升 高 ， 降低肝脏 ＭＤ Ａ的含
量， 蜂腔对 四氧喀啶致 小鼠肝脏 损伤有 显著的保 护作 用。韩德 文等 给小鼠灌服蜂胶 黄酮后 ， “ 对小鼠脑 Ｎ Ｏ含量 进行观察 ， 结 果 表明： 低脑组织 Ｎ Ｏ含量 ， 提示蜂胶 黄酮 可以抑制 Ｎ Ｏ的细胞
毒作用 。多数资料报道 ， 蜂胶 中起抗 氧化作 用的主 要成分之 一 是黄酮类化合物 ， 也有资 料显示 蜂胶 中众 多的其 它类化合 物亦 有抗氧化作用 ， 阿魏酸 咖啡酸等含有酚羟基的有机酸可 消除 自 由基 ， 抑制氧化反应和 自由基反应 ， 具有保肝和抗肝脂质过氧化
蜂胶中五种酚酸对脂质代谢的影响
蜂胶中五种酚酸对脂质代谢的影响作者：张雨豪乔江涛张红城来源：《农产品加工·下》2019年第10期摘要：蜂胶是西方蜜蜂从植物嫩芽或者渗出液中采集的树脂及挥发性物质，并混入自身分泌物形成的胶状物质。
蜂胶的成分非常复杂，主要是多酚类化合物，具有显著的抗氧化、抗炎症、抗糖尿病和调控脂代谢等生物活性。
对中国蜂胶中主要的5种酚酸类成分（咖啡酸、阿魏酸、异阿魏酸、肉桂酸、亚桂皮乙酸）进行研究。
采用MTT法检测了这些成分对人肝细胞L02的细胞活性影响，并通过构建细胞脂质累积模型，评价筛选出具有较好改善脂质代谢紊乱效果的有效成分。
关键词：蜂胶;酚酸;脂代谢紊乱中图分类号：TQ464 ; ; 文献标志码：A ; ; doi：10.16693/ki.1671-9646（X）.2019.10.036Abstract：Propolis is the resin and volatile substances collected by honeybees from plant buds or exudate and mixed with their own secretions to form a colloidal substance. The composition of propolis is very complex，mainly polyphenols，with significant antioxidant，anti-inflammatory，anti-diabetes and regulation of lipid metabolism and other biological activities. In this paper，the main five phenolic acids（caffeic acid，ferulic acid，iso-ferulic acid，cinnamic acid and acycloacetic acid）in Chinese propolis were studied. The effects of these components on the viability of L02 human hepatocytes were examined by MTT assay. The effective components with good effect on lipid metabolism disorder were selected by the evaluation of cellular lipid accumulation model.Key words：propolis;phenolic acid;lipid metabolism disorder随着生活水平的日益提高，人们在日常饮食中摄入的碳水化合物和脂类的总量有了显著增加，伴随内分泌失调，很多人正面临着由于体内脂质代谢紊乱而导致的一系列代谢问题[1-3]。
蜂胶的抗氧化及抑菌作用
蜂胶抗氧化和抑菌作用的研究进展蜂胶(Propolis) 是蜜蜂从植物花苞及树干上采集的树胶，并混入颚腺分泌物和蜂蜡等物质加工而成的一种具有芳香气味的胶状固体物质，是防护病原微生物、修补巢房和内环境消毒杀菌的高效清洁剂[1-3]。
蜂胶素有“自然界中的紫色黄金” 之称，是一种对健康有很大作用的天然营养品。
大量研究表明：蜂胶中起药理作用的主要有效成分是黄酮类化合物，其具有增强免疫功能、抗菌消炎、排除毒素、增强免疫、软化血管、净化血液、改善微循环、抗氧化、抗病毒、抗癌作用，此外，还能调节大鼠的血糖水平，调节体内蛋白质代谢，对肾脏有保护作用，促进组织再生等广泛的生物学作用。
我国已有将蜂胶作为主要原料的准字号药品，2005 版《中国药典》第一部已经收录蜂胶。
随着蜂胶的多种神奇医疗作用逐渐揭示，国际蜂胶消费量迅速增长，国内外学者对蜂胶的功能研究日益深入，尤其在蜂胶的抗菌活性方面进行了广泛的研究。
经研究蜂胶提取物对革兰阳性菌的抑制效果较好。
而有关蜂胶抗氧化作用报道也较多，均表明蜂胶及所含黄酮类化合物对动物体内的多种自由基有显著的抑制或直接清除作用。
文章综合近几年蜂胶研究进展对蜂胶的抗氧化和抑菌作用综述如下。
1. 蜂胶的主要化学成分及其提取方法1.1 蜂胶的主要化学成分目前，已从蜂胶中分离鉴定出的化学成分有黄酮类、萜烯类、醌类、酯类、醇类、酚类、醚类、有机酸和大量的氨基酸、酶类、维生素B1、维生B2、维生素B6、维生素E和维生素 A 以及各种矿物质等。
蜂胶总酚含量很高，要高出蔬菜、水果、植物药材的几万倍至几百万倍。
蜂胶中的酚类化合物主要包括黄酮类化合物和酚酸类化合物以及它们的缩合体。
含有大量的黄酮类、萜烯类化合物是蜂胶的重要特征。
现已从蜂胶中分离鉴定的黄酮类化合物135 种，其中黄酮及黄酮醇类化合物46 种，二氢黄酮及二氢黄酮醇类36 种, 11 种异黄酮类化合物。
查耳酮和二氢查耳酮类17 种，以及最近几年从蜂胶中鉴定出的新黄酮类似物25 种。
毛细管电泳电化学检测法测定蜂胶中的黄酮和酚酸
此外 ,缓冲液浓度是影响被测物迁移时间和分 离度的另一重要因素 。迁移时间和分离度随缓冲 液 浓 度 升 高 而 增 大。然 而 较 高 的 浓 度 ( > 50 mmoL /L )会引起被测组分的峰电流降低 , 产生较高的焦耳热 ,影响分离度和重现性 。综合考 虑峰电 流 、分 离 度 、分 析 时 间 和 缓 冲 容 量 , 选 择 50 mmoL /L (pH为 912)的硼砂为运行缓冲液 。 21113 分离电压和进样时间 改变分离电压 ,测 定槲皮素 、乔松素 、高良姜素 、咖啡酸 、对香豆酸和 阿魏酸的迁移时间与分离电压的关系 (混合标准 溶液的浓度 :槲皮素 : 110 ×10 - 5 g /mL ,乔松素 : 210
Vol130. No. 3 2011 - 3
80%甲醇 ,超声提取 30 m in,于 4 ℃静置过夜 ,经 0122μm 聚 丙 乙 烯 滤 膜 过 滤 , 滤 液 于 4 ℃避 光 保存 。 2 结果与讨论 211 电泳条件的选择 21111 检测电极电位 改变检测电位 ,测定槲皮 素、乔松素 、高良姜素 、咖啡酸 、对香豆酸和阿魏酸的 峰高与检测电位的关系 (混合标准溶液的浓度 :槲皮 素 : 110 ×10- 5 g /mL ,乔松素 : 210 ×10- 6 g /mL ,其余 均为 210 ×10- 5 g /mL ) 。提高检测电极电位峰电流 升高 ,峰电流在 + 0160 V 处快速上升 , 至 + 0190 V 后峰电流上升幅度减小 ,继续提高电极电位虽然可 以提高峰电流 ,但此时本底电流大幅增加 ,噪音明显 提高。综 合 考 虑 选 择 检 测 电 位 为 + 019 V ( vs. SCE) ,此时信噪比较高 ,电极的稳定性较好 。 21112 运行缓冲液的酸度和浓度 本实验选用硼 酸盐作为运行缓冲液 ,因为在碱性溶液中硼酸会与 多酚中的邻二酚羟基或邻二醇羟基形成配合阴离 子而增加溶解度 ,减少了因吸附造成的峰拖尾等 影响 。
蜂胶的研究进展
·研究探讨·277蜂胶的研究进展吉林工商学院食品工程学院 吉林长春 130062 田海娟【摘要】蜂胶是蜜蜂从不同的植物上采集到的一种天然的活性物质，含有黄酮类、多酚类、酶类、氨基酸类、维生素类及矿物质等化学成分,具有抗病毒、抗氧化和增强免疫等保健功能。
本文从蜂胶的化学成分、药理作用、提取、应用等方面对近年来的研究成果进行了简要的综述，并预测了蜂胶研究的发展趋势。
【关键词】蜂胶 应用研究 现状蜂胶是蜜蜂将胶源性植物上采集的树胶和树脂,混入其上颚腺分泌物与蜂蜡等加工而成的一种天然物质。
常温下蜂胶为不透明、不规则的胶状固体，颜色有黄褐色、棕褐色、灰褐色、青绿色或黑色。
蜂胶具有多种生理保健功能，在国际上有着“紫色黄金”的美誉。
一、蜂胶的性质 1、蜂胶的化学成分 蜂胶是一种天然的活性物质，蜂胶的化学成分非常复杂，药理活性也很多样。
世界各地不同产区蜂胶的化学成分常常有很大的差异[1]。
蜂胶的化学成分依赖于采集地植物的特异性和当地气候特征。
一般情况下，蜂胶是由50%~55%的树脂类芳香油，30%~40%的蜂蜡、5%~10%的花粉所组成[2]。
化合物主要包括类黄酮化合物和有机酸类化合物，酯、醛、醇类化合物，以及烯、烃、萜类化合物等。
此外，蜂胶内还含有VB1，VPP，VA，VC，VE，多种氨基酸，10余种矿物质和20多种微量元素。
2、蜂胶的理化性质及功能 蜂胶是不透明的固体，呈棕褐色、棕红色或灰褐色，有时带有青绿色，少数近似黑色。
蜂胶表面光滑或粗糙，折断面呈砂粒状，切面与大理石外形相似[3]。
天然新鲜蜂胶有令人喜爱的树脂香味，燃烧时发出乳香气，味微苦、略带辛辣味，嚼之粘牙。
蜂胶具有一定的黏性和可塑性，在36℃时开始变软，15℃时变硬变脆、可粉碎，60~70℃时融化成黏稠液体，并分离出蜂蜡。
蜂胶具有抗菌、抗氧化，降血糖、抗肿瘤、改善心血管系统功能、增强免疫力等功能。
二、蜂胶的提取国外用于药品和食品的蜂胶，几乎全部采用和蜂胶的提取方法基本上可分为醇溶和水溶两种。
蜂花粉酚类化合物的抗氧化性能研究-蜂花粉与抗氧化
Strohl M J 等用乙酸乙酯、乙醇、己烷萃取蜂花粉所得萃取液 DPPH 自 重于蜂花粉总体功能的讨论，因此应用先进的方法分别和鉴定各种功能成
由基半抑制浓度分别 41.9�?.2 、104.5�?.5 、212.0�?.5�%eg/ml ， 份，建立蜂花粉多种功能成分的标准，应用多种抗氧化测定方法进行综合
蜂花粉中的苯丙素与总抗氧化能力之间成剂量-效应关系，在 6～13mg/g 活性，自由基去除率为 90% 的 BHT 和 BHA 做标准品，得到蜂花粉对自由
范围内线性关系良好。石玉平等利用羟自由基去除率评价油菜蜂花粉萃取 基抑制率 35%，而有机溶剂花粉萃取物对自由基抑制率到达 39%～53%，其
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萃取液抗氧化的能力为：乙酸乙酯萃取液＞乙醇萃取液＞己烷萃取液。油 推断，开发蜂花粉相关功能性食品和生活用品将是一个热点。
菜蜂花粉酶解物和水提物抗氧化试验说明，酶解物去除羟自由基和超氧阴
〔单位：长江大学生命科学学院〕
离子自由基的能力明显高于水提物，在 50mg/ml 时，对羟自由基的抑制
率比水提物高约 30% ，去除超氧阴离子自由基的能力高约 20% ，而抑制
花粉中萃取酚类化合物常用的弱酸性醇-水体系是 2% 的 HCl 和 96%(V/V)
蜂花粉(bee pollen)是蜜蜂在植物花朵采集花粉上加入一些花蜜和
的乙醇 。混合有机溶剂破坏酚类分子间氢键和减弱酚类的缔合能力比纯
唾液形成的团粒状物，包括蛋白质、不饱和脂肪酸、碳水化合物、酚类、 溶剂能力大。常以 60%(V/V) 、80%(V/V) 的乙醇作为溶剂，而以 80%(V/V)
防和治疗 糖尿病，癌瘤，心血管疾病，所以蜂花粉酚类化合物的讨论越 而提高。酚类去除活性氧能力与酚羟基金属络合能力和氢的奉献多少有关。
研究发现蜂胶具有抗癌特性！
研究发现蜂胶具有抗癌特性！凋亡是预防癌症发展的最重要过程之一。
波兰科学家小组研究了蜂胶乙醇提取物及其酚类化合物对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导的癌细胞凋亡的影响。
TRAIL是一种与跨膜受体结合的蛋白，可促进癌细胞的凋亡途径，而对正常组织没有毒性，因此TRAIL介导的凋亡可能是癌症免疫化学预防的良好靶标，尤其是在对TRAIL介导的细胞毒性具有抗性的肿瘤的情况下。
将HeLa细胞和两种类型的前列腺癌细胞：激素敏感性LNCaP细胞株和激素抵抗性DU145细胞株与蜂胶乙醇提取物或其13种酚类化合物（含或不含TRAIL）孵育48小时。
然后，使用3- [4,5-二甲基噻唑-2-基] -2,5-二苯基四唑鎓和乳酸脱氢酶测定法测量细胞毒性，而标记凋亡细胞外膜上存在的磷脂酰丝氨酸后，用流式细胞术检测凋亡细胞的死亡,事实证明，蜂胶乙醇提取物与TRAIL有很强的协同作用，表现出细胞毒性作用并以剂量依赖的方式诱导所研究癌细胞的凋亡。
因此，它能够敏化TRAIL抗性细胞并增强TRAIL诱导的细胞凋亡。
对蜂胶酚类化合物的研究取得了类似的结果，在芹菜素和CAPE 施用后对所有细胞类型以及山奈酚和高良姜素在前列腺癌细胞施用后观察到的效果最强。
两年后，同一研究小组对LNCaP细胞系进行了类似的研究。
然而，在这种情况下，仅研究了蜂胶乙醇提取物的影响，但另一方面，还分析了更多变量：在两个时间点进行测量，另外，使用以下方法评估细胞表面受体TRAIL-R1和TRAIL-R2的表达流式细胞仪。
事实证明，蜂胶乙醇提取物的细胞毒性和凋亡作用在48小时后比24小时后强，并且观察到TRAIL-R2受体显著上调，这表明蜂胶通过TRAIL-R2表达调节来敏化癌细胞。
此外，Szliszka教授及其团队在类似的实验模型上研究了蜂胶及其主要酚类化合物。
除了MTT，LDH和流式细胞仪用于评估细胞毒性，凋亡和TRAIL受体表达外，还进行了基于酶联免疫吸附试验的测试以测量NF-кB结合活性，并进行了DePsipher染色以评估线粒体膜的潜力。
蜂胶成分检测方法进展
46 中国蜂业蜂胶成分检测方法进展经现代科学分析，已从蜂胶中分离出300多种化学成分，其中有黄酮类化合物、酸、醇、酚、醛、酯、醚以及烯、萜类化合物和多种氨基酸、脂肪酸、酶类、维生素、微量元素等。
蜂胶因其化学成分复杂且生物学活性广泛而成为国内外研究与开发的热点。
1 蜂胶成分检测的标准目前，我国有关蜂胶的相关标准（见表1）。
现有的这些蜂胶相关标准主要从蜂胶形态、色泽、气味、滋味、总黄酮含量、氧化时间、乙醇浸出物、白杨素、高良姜素含量等指标评价蜂胶质量，对蜂胶质量控制起到了一定作用。
但缺少特征鉴别和特征成分含量检测指标等项目，从而影响产品质量控制和监管的有效实施。
2 蜂胶成分检测的方法2.1 蜂胶感官的判别（见表2）■ 毛日文 杨琴 蒋云云 邵兴军2.2 蜂胶中黄酮类物质的检测蜂胶总黄酮含量是一个重要的标志性成分指标。
现行蜂胶总黄酮的主要测定方法（见表3）。
对总黄酮的检测不同的企业在检测方法上存在差异，所测数据与实际含量可能存在较大的偏差。
杨琴，马海燕[1]等对蜂胶提取物及蜂胶保健食品的质量标准及质量安全控制进行了分析，用以上方法对同一批蜂胶浸膏的黄酮含量进行了检测，发现结果相差很大。
对比分析蜂胶总黄酮成分不同的检测方法，笔者认为采用高效液相色谱法测定其中某几种黄酮的含量，再以它们的总和乘以一个相应的系数，可以相对准确反映蜂胶中总黄酮的真实含量。
南垚、周立东对蜂胶及杨树叶、芽中的水杨苷和芦丁两种糖苷的含量进行了HPLC 测定，结果在蜂胶样品中均表1 我国有关蜂胶的相关标准QUALITY CONTROL没有检测出这两种糖苷。
因此他们提出，在蜂胶中可能不含有苷类物质。
而在我国蜂胶的国家标准和行业标准中，对蜂胶中黄酮类物质的测定，采用了比色法和高效液相色谱法，都以芦丁作为标准物质，因此这些方法值得商榷。
2.3蜂胶中酚酸类化合物的检测有机酸成分也是蜂胶的成分之一，现酚酸类化合物检测方法执行的国家质检总局颁布了《GB/T23196-2008 蜂胶中阿魏酸含量的测定方法液相色谱-紫外检测法》[2]。
蜂胶的研究进展
蜂胶的研究进展摘要：蜂胶是一种天然安全具有多种生物活性的物质,具有高效的抗氧化、抑菌、成膜等特性, 该文就蜂胶的化学成分、药理作用、临床作用、生物活性和蜂胶精制、分析方法以及其市场分析与发展趋势进行了简要阐述。
同时探讨蜂胶在食品工业领域中的应用方向和蜂胶的发展前景。
Abstract:As a multifunctional bioactivity ingredients,propolis can be used as ant oxidative,antibacterial agent and coating-preservative agent. It is characteristic of natural,nutritional and safe. The chemical functional compositions,clinical functions,pharmacology functions，physiological functions,and its market analysis development tendency were reviewed in detail。
At the same time,the detail inquires into the application of propolis in the food territory and the development prospects of propolis .关键词：蜂胶作用成分临床药理食品分析Key words: propolis functional compositions food market analysis physiological functions clinical functions pharmacology前言在当今高节奏、污染多的生活环境中，人们希望健康、渴望长寿,希望“回归自然”天然、无毒、高效的物质成了人们追求的目标。
蜂胶中多酚类成分分析及其抗氧化活性
results were obtained in Hep G2 cellular assays. Our results indicated that propolis with strong antioxidant capacity usually
contained large amounts of polyphenolic compounds.
准确称取一定质量的标准品，用色谱甲醇将其超声 溶解，将其配制成一定浓度的标准品储备液。根据各种 标准品的出峰时间及强度，进行相应的混合。利用混合 标准品工作液进行下面的色谱定性和定量分析。 1.3.3 HPLC的分析条件
Shim-Pack PREP-ODS（250 mm×4.6 mm，5 μm） 色谱柱；柱温：35 ℃；检测波长：280 nm；流速： 0.65 mL/min；进样量10 μL；流动相：B相，甲醇（含 0.1%乙酸）；A相，0.1%乙酸水溶液。所用的梯度洗 脱程序如下：0～10 min，25%～27% B；10～45 min， 27%～37% B；45～58 min，37%～49% B；58～80 min， 49% B；80～125 min，49%～72% B；125～150 min， 72%～85% B[8-10]。 1.3.4 样品中各组分的定量
Abstract: In order to evaluate the polyphenolic composition and antioxidant activity of propolis collected from different
蜂胶的最新研究进展
性有 很 大的变 异 。
主要含异戊二烯 香豆酸和二萜类 ；古 巴红蜂胶中
１ 有关蜂胶化学成分 多样性问题
主要含异戊二烯苯并酮等 。
为了理解什么原因引起蜂胶化学成分 的不同 ，
令人惊奇的是蜂胶中不 同的化学成份具有相同
必需关注蜂胶的植物来源。蜂胶的化学成份依赖于 的活性类型甚至是相 同的活性剂量。因此 ，结合化学
（ＣＡＰＥ）和几种类似物（包括两种新的甘油酯替代苯 地蜂胶 的抗氧化活性。他们利用 ＨＰＬＣ及质谱测试
乙烯酸 ）。Ｎａｇａｏｋａ等在荷兰蜂胶 中也发现了相 同的 样品的主要成份 ，通过 ＨＰＬＣ鉴定并定量了 １６种蜂
抗氧化物质。Ｕｓｉａ等从 中国蜂胶 中分离出许多抗增 胶 的 １７种酚类化合物。结果发现抗氧化性蜂胶含有
域的热门课题 ，已发表大量的有关蜂胶的文献。尤其 功效 ，其他的生物学活性也都相似 ，而具有此功能的
近年来 ，由植物化学家和药理学家共同努力所做的 化学成份却有很大不 同。白杨型（欧洲 ）蜂胶中主要
大量研究表明，不 同的蜂胶样 品其化学和生物学活 含黄烷 酮 、黄酮 、酚酸及其酯 ；勾滕 型（巴西 ）蜂胶中
ｆ１．郑州大学生物工程系，郑州 ４５０００１；２．中国农业科学院蜜蜂研究所 ，北京 １０００９３；
３．河南进 出口检疫检疫局动检处 。郑州 ４５０００３）
摘 要 ：本文总结 了蜂胶 药理 学研究的最新进展 ，讨论 了由于蜂胶化学成分差异性 而引起的生物学研 究
的问题 ，概述 了近期蜂胶研究的进展及趋势 ，即对化学特性 已知蜂胶的生物学研 究、生物活性原理研 究、不同
生的活性物质。这些物质中的许多都和“白杨型”蜂 山奈酚和苯乙基咖啡酯等抗氧化物。这个小组还利
一种蜂胶中酚类化合物的微提取方法[发明专利]
![一种蜂胶中酚类化合物的微提取方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/340ebd2cbb4cf7ec4bfed023.png)
专利名称：一种蜂胶中酚类化合物的微提取方法
专利类型：发明专利
发明人：曹君,胡雨涵,王秋燕,彭黎卿,杨娟,董新,杜丽晶申请号：CN201811639009.1
申请日：20181229
公开号：CN109608428A
公开日：
20190412
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及天然药物提取技术领域，针对目前提取蜂胶中活性成分的方法工艺复杂、耗时且需使用大量有机溶剂的问题，公开了一种蜂胶中酚类化合物的微提取方法。
该方法包括将蜂胶加入溶剂中，超声提取；冷却、离心得上清液；取上清液，加入吸附剂分散液，回旋振荡，过滤，洗脱、干燥后溶于乙醇，得提取混合液；将提取混合液离心后进行超高效液相色谱分析。
该方法以离子液体为萃取溶剂进行提取，取代传统方法中的有毒有机溶剂，有利于环境的保护。
然后通过使用少量的吸附剂和洗脱溶剂来实现较大的富集因子，并且在较短的样品制备时间下能获得优异的回收率。
且此法灵敏度高，精密度好，准确性好。
有机溶剂消耗少，提取时间短，检测限低，环保等。
申请人：杭州师范大学
地址：310015 浙江省杭州市余杭区余杭塘路2318号
国籍：CN
代理机构：杭州杭诚专利事务所有限公司
代理人：尉伟敏
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中国蜂胶中酚类化合物的色谱分析方法研究
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羟基肉桂酸（见图１ｔ３）是由肉桂酸衍生而来的，结构上具有ｃ６．Ｃ３特点。植物中最 常见的羟基肉桂酸有４种，分别是：ｐ．香豆酸、咖啡酸、阿魏酸和芥子酸。羟基肉桂酸
宁酸、莽草酸以及酒石酸形成酯类化合物刚。
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摘要
酚类化合物是广泛存在于植物中的一类具有多种生物活性的化合物，主要包 括黄酮类化合物和酚酸类化合物。本论文采用高效液相色谱／二极管阵列检测器／
电喷雾质谱法（ＨＰＬｃ／ＤＡＤ／ＥｓＩ－Ｍｓ８），研究了中国蜂胶中的酚类化合物的组成和
题再撰写的文章一律注明作者单位为西北大学。 保密论文待解密后适用本声明。
学位论文作者签名：２§』ｉ数指导教师签名：堡建
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西北大学学位论文独创性声Ｈ胄
蜂胶浸膏中7种多酚化合物的高效液相色谱法分析
蜂胶浸膏中7种多酚化合物的高效液相色谱法分析
索志荣;曹炜;秦海燕
【期刊名称】《食品科学》
【年(卷),期】2008(029)008
【摘要】目的:建立测定蜂胶浸膏中7种多酚化合物的高效液相色谱分析方法,并用该方法测定我国不同省份的9个蜂胶浸膏样品.方法:采用反相高效液相色谱检测法,色谱柱为Zorbax SB-C18柱(150mm × 4.6mm,5.0μm),流动相为甲醇-0.1%甲酸,梯度洗脱,流速为1.0ml/min,检测波长为280nm,柱温为30℃.结果:7种多酚化合物得到很好的分离,线性关系良好.结论:该方法是一种快速简便、灵敏准确的分析方法,可以为蜂胶的质量控制提供科学依据.
【总页数】3页(P496-498)
【作者】索志荣;曹炜;秦海燕
【作者单位】西南科技大学,四川,绵阳,621010;西北大学,陕西,西安,710069;西南科技大学,四川,绵阳,621010
【正文语种】中文
【中图分类】O657.72
【相关文献】
1.超临界萃取啤酒花浸膏及其萃余物中多酚化合物提取的研究 [J], 刘玉梅;顾小红;汤坚;刘奎钫
2.高效液相色谱法分析啤酒花浸膏中的6种酸性成分 [J], 蔡小明;夏璐;孙元社;李
彤;夏明珠
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4.高效液相色谱法测定甘草流浸膏中赭曲霉毒素A的含量 [J], 欧阳吉德;邓湘波;康乐;刘冠琼
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４・
养
蜂
科
技
２０ 年第 ５ Ｏ６ 期
蜂胶中酚类化合物的分析研究进展
季文静 ， 胡福 良 （ 浙江大学动物科学学院， 杭州 ３０２ ） １ ９ ０
蜂胶具有广泛的生物学活性 ， 被广泛应用
于 民间 医药 中。
滤， 重复以上程序 以确保酚完全收 回。另一种
方法是将样品放在 ７℃下振荡溶解 ３ｍｎ 过 ０ ０ ｉ， 滤后在减压状态下脱水干燥 ， 并再溶解。
２ 分 光光度 测定法
蜂胶 的化学 成分极 为复杂 ， 其组成取决于 采集地的植 物种类 以及 当地的地理和气候特
征 。据 鉴定 ， 多数 的 蜂 胶 由 ５％树 脂 （ 要 大 ０ 主
３ｃ ４ —３０ ４ ３０ ｌ ０ ８℃，０～ ７℃。分离柱有： Ｂ ９℃， Ｄ１
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供参考。
１ 样 品制 备
色谱技术 中的薄层色谱 法（Ｌ ）气相色 ＴＣ 、
在分析测试前必须对蜂胶进行提纯。提纯
谱法（ Ｃ 、 Ｇ ）高效液相色谱法（ ｍ ） 和毛细管电 泳法（ Ｅ 是酚类分析中常用的方法。 Ｃ）
在薄层色谱法 （Ｌ ） ， Ｔ Ｃ 中 固相硅胶广泛用
后， 制备成精细粉末 ， 然后称重 ， 溶解到溶剂中。
最常用的溶剂是浓度为 ７ ％或 ８％的乙醇， ０ ０ 能 提取得到富含多酚的脱蜡蜂胶 。用 ８ ％乙醇 ０
于分离非极性类黄酮和异类黄酮。紫外光照或
书试剂喷雾可以检测结果。 气相色谱法 （ Ｃ 能对酚类化合物进行定 Ｇ） 性和定量测定 ， 因而是应用最广泛的测定方法。
提取 的类黄酮 （ 特别是堪 非素、 刺槐黄素和异 鼠李素 ） ２Ｏｍ处 有最 高 的 吸收峰。而用 在 ９ｈ ７ ％乙醇提取的类黄酮则 是松属素和樱 花素， ０
也可以用 Ｆｌ — ｉ ａｅ （ ｏｎ Ｃ ｅ ｔ 弗林） ｉ ｏ ｌｕ 方法测定
类黄酮总量。将检测溶剂、 蒸馏水、 弗林试剂和
碳酸钠溶剂混合 ， 样品放置保存并在 ７０ｍ处 ６ｒ ｉ
测 吸光 率 。
３ 色谱测 定法
来蜂胶中酚类化合物的分析研究进展进行了综 述， 旨在为蜂胶 中酚类化合物的研究和开发提
梯度或冲提方式 洗提。用 Ｄ Ｄ Ｐ Ｄ Ｕ Ａ 、Ａ 、 ｖ检测
的波 长 有 ２ ４ ｍ、 ６ ｎ ｌ２ ８ ｍ、 ９ ｈ ３Ｏ ｍ、 ５ ｎ ２ ５ ｎ、 ６ ｎ ２Ｏ ｍ、 １ ｈ
３０ｍ、６ｈ 以及 ｌｏ～６Ｏｍ。提 取 系 统 为 ： ４ ｎ ３Ｏｍ ９ ５ｈ 甲醇 索 式 抽 提 ，０ ８ ％、５ 的 乙 醇 提 取 。 ７ ％、０ ９ ％
溶液和 Ｄ Ｐ ５ ℃水浴里加热 ５ｒｎ 用甲醇 Ｎ在 ０ ０ｉ ａ ，
冲洗。在冷却到室温以后 ， 混合物用氢氧化钾 的 甲醇 溶 液 冲 洗。最 后 再 用 甲 醇 冲洗 ， 在
４６ｍ处 测 吸光度 。 ８ｎ
色谱法（Ｌ ）气相色谱法（ Ｃ 、 Ｔｃ 、 Ｇ ）高效液相色谱
法（ 舢 ） 毛 细 管 电泳 法 （ Ｅ 。本 文对 近 年 和 Ｃ）
酚类化舍物的组成和含量可能会因为蜂胶 来源的不同而有所变化 ， 这些差异会影响蜂胶 的生物活性和临床特性 ， 因此对蜂胶 中酚类化 合物的分析显得极为重要 。 蜂胶 中的酚类 化合物分析程序包括提取 、
分离 和定量 。分析 方法包 括 ： 分光 光度法 、 薄层
确定黄烷酮和黄烷酮醇的含量 ， 因为黄烷酮与 ＤＰ Ｎ 在酸性介质中作用形成有色的苯腙。测试
甲醇 ： 酸 （ｏ ６ ）０ Ｏ％ ０ １ 甲酸 ： 乙 ４ ：ｏ ， ．８ ．％ 乙腈 ，
水： 乙腈 （７ ５ ２ ５ ｖ ） ． ９ ． ：． ，／ 。Ｃ 乙腈， ｖ 水。利用
ｃｎ ａｉａ ｏｔｍ （５ ｏｅｃｐｌ ￣ｅ］ ｌ ｍ ２ｍ×０ ２ ｍ ． ． ， ｏ － ．５ ｍ ｉｄ ） Ｂ ｒ ｏ
分光光度法可用于测定类黄酮和酚总量、 总的黄烷酮／ 黄烷酮醇比值和总的黄酮， 黄酮醇
由类黄酮和酚酸组成 ）３ ％蜂蜡、０ 、 ０ １％香精油 、
５ ％花粉和 ５ ％其他有 机化合物制成。由于多 酚（ 包括类黄酮 、 酚酸和相应的酯 ） 具有抑制特
异性酶、 替代一些激素和神经递质、 清除自由基 的作 用 ， 因而 多酚被 认 为是 蜂胶 中主要 的生 物
用 ６ ％乙醇提取得到最多的是异樱花素 、 ０ 橡黄 素和堪非醇。此外 ， 甲醇、 己烷和丙酮以及三氯
甲烷也 可使 用 。溶 液 在 室 温 下 放 置 ２ｈ并 过 ４
Ｇ 法分析蜂胶 中的酚类化合物采用 的温度范 Ｃ
围有 ：５～３０ 。０ ８ １℃ １０～３０ ，０ ２５ ，ｏ １℃ ５ ８ ℃ ４
ｓｉ ｔ ｃｐｌｒ ｅ］ ｍ （０ ｍ ×０ ３ ｍ ｉｄ ） ｉｃ ｅ ａｉａ ｏｍ ｌａ ｌｙ ｔ ２ｍ ．ｍ ． ． ， Ｃ Ｐ ］ ｍ （０ ０ ２ｍ ． ． ， ｌ ｓｅ］ ｍ Ｂ ５ｅ ｔ ｏ ｍ ３ ｍ× ．５ ｍ ｉｄ ） Ｇａ ｏｍ ｓ ｔ （２ ２ ｍ×０ ２ ｍ ｉｄ ） Ｆ ｓｄｓｉ ａｉａ １ｍ ．ｒ ． ． ， ｕｅ ｉｃ ｃｐｌｒ Ｏ ａ ｌａ ｌ ｙ（
活性 物质 。
比值。氯化铝法可用来确定蜂胶中黄酮和黄酮
醇含 量 。
样品在 甲醇 和氯 化 铝 的 甲醇溶 液 （／） ｗｖ 里
溶解 ， 混合并放置 ３ｍｎ ０ ｉ后在 ４５ｍ处测吸光 ２ｎ
度 。用 ２４一ｄｎｒ ｈｎｌ ｄａｉｅ（ Ｎ ）可 以 ， ｉｔｐｅｙ ｙｒ ｎ Ｄ Ｐ ｉｏ ｈ ｚ