25株艰难梭菌多位点序列分型
艰难梭菌
免疫防御现致力于活疫苗的研究。主要
分为3类，即减毒突变株、用不同载体菌构建
的杂交株以及营养缺陷减毒株。例如链霉素
依赖株（streptomycin
dependent
strain, Sd）。
真菌性肠炎的发病机制
菌、 放线菌、毛霉菌、曲菌、隐珠菌等，其 中以白色念珠菌肠炎最为多见。
通常情况下，医用酒精都不能杀灭艰难梭菌。 以前抗生素是艰难梭菌的克星，但随着滥用抗 生素的日益普遍，艰难梭菌对抗生素也产生了 的耐药性。研究人员呼吁，人们要养成良好的 生活习惯，饭前便后是用肥皂洗手，普通感冒 不要乱服抗生素。
发病机理
艰难梭菌是由于服用抗生素后 打破了肠内菌群的平衡 从而导致艰难梭菌累计了大量的数量 产生大量的外毒素A和B。
白色念珠菌（白假丝酵母 菌）
真菌性肠炎的症状
一般可无特殊症状和体征，因此诊断真菌性 肠炎有一定困难。诊断本病主人依据有长期 粘液样腹泻、便秘交替出现的病史，并经抗 生素、磺胺等久治不愈
白色念珠菌累及结肠，约有85.5%的患者出 现腹胀，泡沫样腹泻，或便秘交替出现。早 期为粘液样称便，偶有便血或带血丝，其特 点是粘稠似蛋清附于大便上，或全部粘液便。 后期为脓性或脓血样稀便，或无明显的脓血 便。出血多时为暗红色糊状粘液便。腹痛及 压痛不明显。
白色念珠菌（白假丝酵母菌）
白色念珠菌（Monilia albican 或 canidia Albicans）， 是一种深部感染真菌，通常存在于正常人口腔，上呼 吸道，肠道及阴道，一般在正常机体中数量少，不引 起疾病，属于机会致病性真菌。当机体免疫功能或一 般防御力下降或正常菌群相互制约作用失调，则本菌 大量繁殖并改变生长形式（芽生菌丝相）侵入细胞引 起疾病。
志贺菌的抵抗力比其它肠道杆菌弱。
医学：艰难梭菌
01
包括其生长繁殖机制、耐药性产生的分子机制等，为
新药研发提供理论支持。
探索艰难梭菌感染的免疫机制
02 研究感染后机体的免疫应答，寻找免疫干预的有效途
径。
艰难梭菌感染与宿主细胞相互作用的研究
03
揭示艰难梭菌如何侵染和破坏宿主细胞，为治疗提供
新思路。
深入开展艰难梭菌感染的流行病学调查
01
艰难梭菌感染的流行病学特征研究
艰难梭菌感染的预防措施
勤洗手
保持手部卫生是预防感染的重要措施。在接触公共场所物品或处 理食物前，务必彻底洗手。
分餐制
避免共用餐具和食物，采用分餐制可以降低交叉感染的风险。
提高免疫力
保持健康的生活方式，包括合理饮食、适量运动和充足的睡眠， 有助于提高免疫力，降低感染风险。
艰难梭菌感染的疫苗研究进展
疫苗研发
目前针对艰难梭菌感染的疫苗正处于研发阶段。一些研究团队正在探索基于毒素的疫苗和基于菌株的疫苗，以期提供 更有效的免疫保护。
临床试验
疫苗研发完成后，需进行临床试验以评估其安全性和有效性。这些试验通常涉及一定数量的志愿者，并分为不同阶段 进行。
疫苗推广
一旦疫苗获得批准并证明其有效性，下一步就是将其推广到更广泛的人群中。这需要制定相应的接种计 划和宣传教育活动，以提高公众对疫苗的认识和接受度。
免疫治疗方法的探索
利用免疫手段激活机体免疫系统，提高抵抗力， 控制感染。
3
预防措施的改进和完善
针对流行病学调查结果，制定和实施有效的预防 措施，降低感染风险。
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感谢您的观看
了解不同地区、不同人群的感染率和传播途径，为防控提供依据。
02
院内感染艰难梭菌的毒素检测及核糖体分型研究
院内感染艰难梭菌的毒素检测及核糖体分型研究章黎华;董丹凤;江岑;彭奕冰【摘要】目的了解艰难梭菌临床分离株的毒力情况,并运用核糖体分型技术进行流行病学研究.方法采集住院腹泻患者的未成形粪便标本,无水乙醇处理后接种CDMN选择培养基行艰难梭菌分离培养,并通过革兰染色、耐氧试验和凝集试验行菌落鉴定；提取菌株DNA,选择特异性引物用PCR法扩增毒素基因tcdA和tcdB；核糖体分型针对细菌基因组16S～23S rDNA间区序列进行扩增,并根据电泳带型的多态性实现分型.结果共计分离得44株艰难梭菌,3种毒素型分别为A+B+型、A-B+型和A-B-型,分别占 57％、34％和9％；18种核糖体型中以R8 型和R4 型为主,分别占 20％和18％.结论本研究临床分离的艰难梭菌菌株中,毒素型以A+B+型为主,核糖体分型存在相对优势的型别；无证据提示存在院内艰难梭菌感染的暴发流行.%Objective To investigate the virulence of Clostridium difficile clinical isolates, and conduct an epidemiologic study by PCR-ribotyping for the strains. Methods The unfonned stool samples from hospitalized patients with diarrhea were collected, and were inoculated onto CDMN selective culture media after pretreatment with dehydrated alcohol tor the culture of Clostridium difficile. Isolates were identified by Cram staining, oxygen tolerance test and agglutination assay. Bacterial genome DNA was extracted from the Clostridium difficile strains, and toxin gene tcdA and tcdB were amplified by PCR with specific primers. Meanwhile, PCR-ribotyping was performed through amplification of the genomic 16S-23S rDNA intergenic spacer region sequence, followed by electrophoresis to distinguish different ribotypes according to the polymorphism of thebands. Results Forty-four Clostridium difficile strains were divided into 3 toxin types: A + B + strains, A - B + strains and A - B - strains, which accounted for 57% , 34% and 9% , respectively. All the strains belonged to 18 ribotypes. mainly rihotype R8 (20%) and ribotype R4 ( 18%). Conclusion fn the study, the Clostridium difficile clinical isolates were mainly A + B + strains, and there existed relatively predominant ribotypes. but no evidence suggested nosoeomial outbreak of Clostridium difjicile infection.【期刊名称】《上海交通大学学报（医学版）》【年(卷),期】2012(032)011【总页数】4页(P1436-1439)【关键词】艰难梭菌;感染;毒素;核糖体分型【作者】章黎华;董丹凤;江岑;彭奕冰【作者单位】上海交通大学医学院附属瑞金医院检验科,上海200025;上海交通大学医学院附属瑞金医院检验科,上海200025;上海交通大学医学院附属瑞金医院检验科,上海200025;上海交通大学医学院附属瑞金医院检验科,上海200025【正文语种】中文【中图分类】R37艰难梭菌(Clostridium difficile)广泛存在于自然界和人与动物的粪便中，是一种专性厌氧的革兰阳性芽孢杆菌。
〖医学〗艰难梭菌
2 分离培养
放线菌培养比较困难，为厌氧或微需氧，初 次分离加入5% CO2能促进生长。在血琼脂平板 上 ，在厌氧情况下,37℃培养4-6d后，可见白色 或淡黄色粗糙而不规则的结节状或臼齿状菌落， 菌落紧贴于培养基表面
初分离时菌落表面粗糙，多次人工传代后变 为光滑、不溶血
（二）致病性
脾切除术后状态、长期嗜酒或营养不 良。 （二）体佂 呼吸频率>30次/分；脉搏≥120次/分 ；血压 <90/60m mHg; 体温≥40℃或≤35℃；意识障碍；存在肺 外感染 病灶如 脑膜炎 ，甚至 败血症 （感染 中毒症 ）。 （三）实验室和影像学异常 血白细胞计数>20X109/L；呼吸空气时 动脉血 氧分压 （PaCO2）>50m mHg; 血肌酐>106umol/L或血尿素氮>7.1mmol /L；血 红蛋白 <90g/L或血
① 屏障作用受损手术、拔牙和肠穿孔等 使细菌侵入非正常寄居的部位
② 菌群失调长期使用抗生素使体内一种 或几种厌氧菌得到优势增长，破坏了正常 菌群的平衡。如脆弱拟杆菌对氨基糖苷类 抗生素有耐药性
③ 抵抗力降低在治疗中使用激素、免疫 抑制剂或X线，恶性肿瘤、糖尿病和大面积烧 伤等均可造成免疫功能下降
④ 局部组织供血障碍如血管损伤、造成 局部厌氧微环境，有助于厌氧菌生长繁殖
红细胞比 容<0.30；血浆 白蛋白 25g/L；感染 中毒症 或弥散 性血管 内凝血 的证据 ，如血 培养阳 性、代 谢性酸 中毒、 凝血酶 原时间 和部分 激活的 凝血活 酶时间 延长、 血小板 减少； X线胸片病变累及一个肺叶以上、出 现空洞 、病灶 迅速扩 散或出 现胸腔 积液。
重症肺炎目前还没有普遍认同的标准， 如果肺 炎患者 需要呼 吸支持( 急性呼 吸衰竭 、气体 交换恶 化伴高 碳酸血 症或持 续低氧 血症) 、循环 支持(血 流动力 学障碍 、外周 低灌 注)和需要加强监护和治疗(肺炎引起 的感染 中毒症 或基础 疾病所 致的其 他器官 功能障 碍)可认 为重症 肺炎。 目前许 多国家 制定了 重症肺 炎的诊 断标准 ，虽然 有所不 同，但 均注 重肺部病变的范围、器官灌注和氧合 状态。
国内外艰难梭菌感染现状分析
国内外艰难梭菌感染现状分析许星星;罗芸;王贤军;金大智【摘要】艰难梭菌是一种革兰阳性厌氧芽孢杆菌,也是抗生素相关性腹泻的主要病原菌之一.近年来,由于高毒力菌株核糖体027型的出现,导致艰难梭菌感染在世界范围内的暴发和流行.目前,艰难梭菌分子流行病学研究进展迅速,不同地区的艰难梭菌具有不同的感染特点.北美和欧洲等发达国家的流行病学特征已经比较清楚,该菌在中国的研究起步较晚,但近几年的研究也初步呈现出中国艰难梭菌感染现状和分子特征.本文从艰难梭菌感染的临床表现、危险因素、国内外感染现状等角度进行综述,为后续进一步推进中国艰难梭菌感染防控及分子流行病学研究提供数据参考.%Clostridium difficile (C. difficile) is a Gram-positive anaerobic bacillus and also one of microbial pathogens causing antibiotic-associated diarrhea. In recent years, the emergence of hyper-virulent ribotype 027 strains results in the worldwide epidemics of C. difficile infection (CDI). At present, numerous researches on C. difficile molecular epidemiology in the world have been conducted rapidly, and the molecular epidemiological characteristics vary in different regions. The characteristics of molecular epidemiology in developed countries including North America and Europe are relatively clear. Although the researches on CDI in China have lagged, the latest studies have showed molecular characteristics and current situation of CDI in China. This paper aims to review the latest advances of clinical manifestations, risk factors and current situation of CDI, in order to provide data evidence for further prevention and control of CDI, as well as C. difficile molecular epidemiology study in China.【期刊名称】《传染病信息》【年(卷),期】2018(031)002【总页数】6页(P175-180)【关键词】艰难梭菌感染;危险因素;临床表现;现状【作者】许星星;罗芸;王贤军;金大智【作者单位】310006,浙江中医药大学附属杭州市第一医院检验科;310051 杭州,浙江省疾病预防控制中心微生物检验所;310051 杭州,浙江省疾病预防控制中心微生物检验所;310006,浙江中医药大学附属杭州市第一医院检验科;310051 杭州,浙江省疾病预防控制中心微生物检验所【正文语种】中文【中图分类】R378艰难梭菌是梭菌属中一种专性厌氧、产毒素或非产毒素的革兰阳性芽孢杆菌，其孢子在环境中可存活数月乃至更长的时间，产毒性艰难梭菌是医院内感染和抗生素相关性腹泻最常见病原菌之一[1]。
艰难梭菌感染性腹泻讲义
研究显示：甲硝唑与万古霉素对轻中度CDI患者治疗效果相同，对重症CDI 而言，万古霉素疗效优于甲硝唑。( P < .02）；但最新III期临床研究显示， 对全部患者而言，万古霉素旳疗效均优于甲硝唑( P = .034) 。
免疫球蛋白支持疗法，疗效尚不明确。
手术指征：肠穿孔，中毒性巨结肠和急腹症，经内科保守治疗失败旳重症 CDI，死亡率高。
小区取得性感染
门诊抗生素使用： CDC研究显示：门诊病 人旳抗生旳素暴露率较23 年前升高；医疗机构旳抗 生素暴露率高于非医疗机 构( P < .01) 家庭组员患CDI 质子泵克制剂不是小区取 得性CDI旳独立危险原因 食物、动物和卫生水平与 CDI无有关性
危险原因
抗生素数量 抗生素使用时间 抗生素种类： 高风险:克林霉素、喹诺酮类、二代及以上头孢菌素类、 中度风险:青霉素类、大环内脂类、碳青霉烯类、万古霉素、甲硝唑 低风险:氨基糖苷类、四环素、甲氧苄啶、磺胺类、利福平
并发症：低血压，休克，中毒性巨结肠，肠穿孔，急 性腹膜炎 肠外症状少见，涉及菌血症，自发性腹膜炎
临床分型
类型 症状
肠镜
预后
轻型 2-3 黄色粘液便 可伴发烧、腹痛
粘膜正常或轻度水 停用抗生素后自愈 肿，米粒样隆起
中型 大便每日10余次 蛋花便 血便 假膜 （经典） 伴发烧、腹痛
中性粒细胞升高
药物治疗，预后好
指标：①白细胞进行性升高： WBC>15*10^9/L，CRP进行性升高；②肌酐 不小于1.5倍原则值，③低白蛋白血症 (<2.5 mg/L)；④NAP78/ BK/078 和 NAP1/BI/027菌株旳感染；其中 NAP1/BI/027菌株感染复发率高。
结肠粘膜>6cm
应用气相色谱法鉴定艰难梭菌
材料与方法
仪器 型气相色谱仪 四川分析仪器厂 岛津
数据处理机 厌氧罐等∀
色谱条件
选用长 内径为
的不锈钢色谱柱 填
充∗
目上海试剂厂 白色担体加
固定液为 改性聚乙二醇
采用
氢火焰检测器 氮气作载气 载气流速
Ù色
谱柱柱温 ε 汽化室温度 ε 检测室温度
ε 桥电流为
∀
试剂和培养基
乙醚
氯仿
关键词 气相色谱法 艰难梭菌
分类号
Ù
前言
应用气相色谱法检测细菌的终末代谢产物 作 为细菌的一种快速诊断的方法 国外文献早有报 道∗ ∀
我 们 应 用 此 法 鉴 定 艰 难 梭 菌 Χλοστριδ ιυ δ ιφ φ ιχιλε 的 株临床分离株和 株对照参考株 分 析它们的脂肪酸代谢产物的气相色谱图 发现它们 的色谱图非常相似 均出现乙酸 异丁酸 丁酸 异戊 酸 异己酸 丙酸 戊酸峰 其中乙酸 丁酸 异己酸峰 较高 其次为异丁酸 异戊酸峰 而丙酸峰和戊酸则 较低 结果与国外报道一致 ∀
色
均较多 而异丁酸
异戊酸
戊酸 的含量
较少 丙酸的含量则甚微∀ 其中异己酸的含量最多∀
在
时 株艰难梭菌的色谱图中均出现
一个低平的色谱峰 此峰与
等 报道的 甲
苯 酚峰相似∀
等认为 甲 苯 酚峰 己酸峰
的高低及是否出现与培养基有关 也与加入的标本
量有关∀
艰难梭菌是引起抗生素伪膜性肠炎的主要病原
菌之一 临床分离鉴定此菌按常规方法较费时费力
盛入带玻塞的试管内 加
三氟
化硼甲醇液 混匀 塞紧玻塞 置室温下过夜 反应完
毕后 再加入 ∗
氯仿 振摇提取∀
临床腹泻患者艰难梭菌的感染情况和分子流行特征
临床腹泻患者艰难梭菌的感染情况和分子流行特征目的了解临床腹泻患者艰难梭菌的感染情况和分子流行特征，为控制医院感染和临床诊疗提供依据。
方法收集2016年1～12月浙江省嘉兴市第二医院临床腹泻患者粪便标本852份作为实验组，同期健康体检成人粪便标本310份作为对照组，厌氧培养获得艰难梭菌的阳性率，并结合毒素基因型和多位点序列分型进行综合分析。
结果实验组852份粪便标本中共分离到108株艰难梭菌，阳性率为12.68%，而对照组310份粪便标本分离到8株，阳性率为2.58%，两组比较差异有统计学意义（P 0.05）；实验组多位点序列分型发现32种ST型，其中ST54是相对流行的型别，另外CC48是相对流行的克隆群。
结论临床腹泻患者艰难梭菌的感染率较高，亟需引起临床重视并加强院感防控，预防暴发流行。
标签：艰难梭菌；毒素基因；多位点序列分型；eBURST分析艰难梭菌（Clostridium difficile，CD）属于革兰阳性厌氧芽孢杆菌，其芽孢能在环境下生存较长时间，并能抵抗多种理化因素，是院内重要的感染病原菌[1-2]。
艰难梭菌感染（Clostridium difficile infection，CDI）的症状表现不一，轻者引起腹泻，严重者引发伪膜性肠炎，且常伴有中毒性巨结肠、肠穿孔、感染性休克等并发症，甚至最终导致死亡[3-5]。
研究表明，CDI的发病率已经高于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（Methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA）引起的感染，成為院内感染首要病因[6-7]，但我国迄今为止尚未有针对CDI诊断和治疗的指南、行业标准出台。
本文旨在通过了解临床腹泻患者CDI情况，并结合毒素基因检测和多位点序列分型揭示其毒力和亲缘关系特征，为临床针对性治疗和院感防控提供依据。
1 资料与方法1.1 一般资料纳入2016年1～12月浙江省嘉兴市第二医院（以下简称“我院”）临床腹泻患者852例为实验组，其中男487例，女365例；年龄18～101岁，平均（65.45±16.48）岁。
艰难梭菌
真菌性疾病的预防和治疗
预防：一尽量避免大剂量长时间的使用抗生素、皮质
类固醇激素和免疫抑制剂药物，多服用维生素C；二经 常注意保持皮肤清洁卫生；三皮肤皱褶处，尽量避免 潮湿或肥皂制剂。
治疗：1.一般治疗和对症治疗卧床休息，消化道隔离。
给予易消化、高热量、高维生素、低脂肪饮食。限制 进食牛奶以防腹胀。避免刺激性、多渣食物，防止诱 发肠穿孔。2.抗真菌治疗首选制霉菌素口服。重症或 口服有困难者选用氟康唑或二性霉素B合用氟胞嘧啶 （5-氟胞嘧啶）静脉滴注。
二、致病性与免疫性
（一）致病物质 侵袭力和内毒素，有的菌株能产生外毒素。 （二）所致疾病 细菌性痢疾。我国主要为B群和D群。 传染源：病人和带菌者 传播途径：粪-口途径 感染几乎只局限于肠道，一般不侵入血液。 典型的急性细菌性痢疾：潜伏期1～3天，突 然发病，常有发热、腹痛、脓血黏液便，伴有里 急后重（tenesmus）。
耐药性
本菌对某些抗生素耐药。尤其是克林霉 素，长期使用，容易引起菌群失调，使 耐药的艰难梭菌被药物选择出后大量繁 殖而致病，导致抗生素相关性腹泻。
艰难梭菌引起的疾病
1.抗生素相关性腹泻（antibioticassociated diarrhoea，AAD)： 在体内的潜伏期为5-10天，之后导致大 量的棕色或水状腹泻，持续1周左右。
造成初级的破坏
然后外毒素B进而发挥更大的破坏。
传播途径
艰难梭菌是主要的院内腹泻的代表
其中通过手，器材和染菌杂物传播 其孢子可在环境中幸存几年 环境的检测中通常可检测出艰难梭菌。
传播途径
近年来，不断有报道医院内暴发艰难梭 菌。2005年因感染艰难梭菌而导致的死 亡人数，已经是1997年的两倍。 通常情况下，医用酒精都不能杀灭艰难 梭菌。以前抗生素是艰难梭菌的克星， 但随着滥用抗生素的日益普遍，艰难梭 菌对抗生素也产生了的耐药性。研究人 员呼吁，人们要养成良好的生活习惯， 饭前便后是用肥皂洗手，普通感冒不要 乱服抗生素。
人感染猪链球菌病诊疗方案
人感染猪链球菌病诊疗方案卫生部关于印发《人感染猪链球菌病诊疗方案》的通知卫医发[2006]461号各省、自治区、直辖市卫生厅局，新疆生产建设兵团卫生局:人感染猪链球菌病是由猪链球菌感染人而引起的人畜共患疾病，对人类健康造成严重威胁。
,,,,年，四川省发生了人感染猪链球菌病疫情，导致,,人死亡。
为了提高我国人感染猪链球菌病的诊疗水平，实现人感染猪链球菌病早期诊断、早期治疗，我部委托中华医学会组织编写了《人感染猪链球菌病诊疗方案》。
现印发给你们，以指导各地人感染猪链球菌病医疗救治工作。
二??六年十一月二十九日附件:人感染猪链球菌病诊疗方案人感染猪链球菌病是由猪链球菌(streptococcus suis)感染人而引起的人畜共患性疾病。
从事猪的屠宰及加工等人员为高危人群，本病主要通过皮肤的伤口而感染。
临床表现为发热、寒战、头痛、食欲下降等一般细菌感染症状，重症患者可合并中毒性休克综合征(toxic shock syndrome, TSS)和链球菌脑膜炎综合征(streptococcusmeningitis syndrome, SMS)。
1968年丹麦学者首次报道了3例人感染猪链球菌导致脑膜炎并发败血症病例，1975年荷兰也出现了散发病例的报道。
此后，中国香港、英国、加拿大、德国、法国、美国、澳大利亚、比利时、巴西、西班牙、日本、泰国、瑞典及中国内地陆续有人感染猪链球菌病的报道。
截至2000年，全球已报道了200多例人感染猪链球菌病病例，报道病例较多的国家或地区普遍养殖业发达或有食用猪肉的习惯，病例呈高度散发态势。
在我国，1998年江苏省报告了人感染猪链球菌病，发病25例，死亡14例;2005年6月至8月，四川省发生的人感染猪链球菌病爆发疫情，为国内外迄今为止见于报道的最大规模人感染猪链球菌病疫情，发病数204例，死亡38例。
【病原学】猪链球菌属链球菌(streptococcus)科，革兰染色阳性，呈球形或卵圆形。
临床儿童感染肺炎支原体的临床分型以及CARDS TX基因的验证
临床儿童感染肺炎支原体的临床分型以及CARDS TX基因的验证麦荣嘉黄研马丹娟邓文喻广东省妇幼保健院，广州510010通信作者：麦荣嘉，Email：【摘要】目的了解临床肺炎支原体（MP）分离株的临床分型以及验证获得性呼吸窘迫综合征毒素（CARDS TX）的基因序列保守性。
方法收集本院2019年的儿童感染MP的呼吸道标本165例，使用液体培养分离获得MP菌株，并快速循环聚合酶链反应（Rapid-Cycle PCR）鉴定MP的分型和验证CARDS TX基因。
通过比对CARDS TX序列，分析本院临床分离的MP菌株的CARDS TX基因序列保守性。
结果根据酚红指示剂显色结果，分离25株MP菌株以及通过Rapid-Cycle PCR鉴定均为运用CARDS TX引物，均能扩增CARDS TX基因序列。
通过比对MP临床株的CARDS TX基因序列与M129序列同源性，发现一致性达99.88%。
结论本院分离的25例MP菌株均为P1-1型，并且临床MP分离株的CARDS TX基因具有高度保守性，可作为研究MP感染的核心靶标。
【关键词】肺炎支原体；基因分型；CARDS TX基因基金项目：广东省医学研究项目（A2020432）Clinical genotypes of mycoplasma pneumoniae in children and verification of community acquired respiratory distress syndrome toxin TX geneMai Rongjia,Huang Yan,Ma Danjuan,Deng WenyuGuangdong Province Maternal and Child Health Hospital,Guangzhou510100,ChinaCorresponding author:Mai Rongjia,Email:【Abstract】Objective To understand the clinical types of mycoplasma pneumoniae isolates and to verify the conservatism of community acquired respiratory distress syndrome toxin (CARDS TX)gene.Methods The respiratory tract samples of children infected by mycoplasma pneumoniae were collected from our hospital in2019.The MP strains were isolated by liquid culture;and the types of mycoplasma pneumoniae was identified by Rapid Cycle PCR,and the CARDS TX gene was verified.By comparing the CARDS TX sequences,the conserved CARDS TX gene sequences of MP strains isolated from our hospital were analyzed.Results According to the resultsof phenol-red indicator,25MP strains were isolated and identified by Rapid Cycle PCR using CARDS TX primers,and CARDS TX gene sequences could be amplified.By comparing the homology between CARDS gene sequences of clinical MP strains and M129,it was found that the concordance was 99.88%.Conclusion The25strains isolated in our hospital are typeⅠ.The clinical MP isolates' CARDS TX genes are highly conservative.CARDS TX gene can be used as a core target in research of MP infection.【Key words】Mycoplasma pneumoniae;Genotypes;CARDS TX geneFund program:Medical Research Project in Guangdong(A2020432)DOI：10.3760/cma.j.issn.1007-1245.2021.11.006收稿日期2021-03-04本文编辑吴琴娟引用本文：麦荣嘉,黄研,马丹娟,等.临床儿童感染肺炎支原体的临床分型以及CARDS TX基因的验证[J].国际医药卫生导报,2021,27(11):1607-1610.DOI:10.3760/cma.j.issn.1007-1245.2021.11.006.肺炎支原体（mycoplasma pneumoniae，MP）是一种无细胞壁、形态呈高度多样性、能通过除菌滤器、能在无生命培养基中生长繁殖的最小原核细胞型微生物。
艰难梭菌医学课件
染。
及时治疗
一旦发现艰难梭菌感染，应立即采 取有效治疗措施，避免病情加重。
追踪观察
对于感染患者，应追踪观察其病情 变化，及时调整治疗方案，确保治 愈效果。
03
艰难梭菌感染治疗策略
药物治疗：抗生素选择与应用原则
抗生素选择
根据艰难梭菌感染的严重程度和病原 体类型，选择适当的抗生素进行治疗 。常用的抗生素包括甲硝唑、万古霉 素等。
建议
加强国际合作与交流，共同研究艰难梭菌感染的防治策略；加强公众教育和宣传，提高公 众对艰难梭菌感染的认识和预防意识；加强医疗机构的培训和管理，提高临床医生的诊断 和治疗水平。
THANKS
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艰难梭菌医学课件
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目录
• 艰难梭菌概述 • 艰难梭菌感染预防措施 • 艰难梭菌感染治疗策略 • 艰难梭菌感染预后评估与康复
指导 • 艰难梭菌感染病例分享与讨论 • 总结与展望
01
艰难梭菌概述
艰难梭菌定义与分类
艰难梭菌定义
艰难梭菌是一种革兰氏阳性厌氧 性梭状芽胞杆菌，广泛存在于自 然环境、动物和人类肠道中。
鼓励患者保持积极乐观的心态，减轻焦虑、抑郁等不良情绪，提 高康复信心。
营养指导
根据患者的病情和营养状况，制定个性化的饮食计划，保证营养均 衡，促进康复。
生活建议
指导患者养成良好的生活习惯，如保持个人卫生、避免过度劳累、 增强免疫力等，预防疾病复发。
05
艰难梭菌感染病例分享与讨论
病例一：急性腹泻患者诊断与治疗过程回顾
保持饮食均衡，摄入足够 的营养物质，增强身体免 疫力。
避免滥用抗生素
艰难梭菌医学课件
艰难梭菌手术治疗手段
手术切除病变部位
对于由艰难梭菌感染引起的肠梗阻、肠穿孔等严重并发症，可能需要进行手术 治疗。手术切除病变部位可以有效地缓解症状，改善患者的生活质量。
结肠切除术
对于慢性反复发作的艰难梭菌感染患者，可能需要进行结肠切除术。结肠切除 术可以消除病变部位，减少复发风险。
04
艰难梭菌预防措施
保持患者周围环境的清洁和卫生，定期进行消毒处理。 患者使用过的衣物、床单、毛巾等物品应进行高温清洗或消毒，以杀死艰难梭菌。 患者的排泄物和分泌物应进行妥善处理，避免对周围环境造成污染。
艰难梭菌感染患者饮食及营养补充措施
01
02
03
患者应遵循高蛋白、高热量、 易消化的饮食原则，以增强身 体免疫力。
多食用新鲜蔬菜、水果和全谷 类食物，补充维生素和矿物质 。
病例二：免疫系统缺陷导致艰难梭菌感染
总结词
免疫系统缺陷是引发艰难梭菌感染的另一个重要因素。
详细描述
患者因免疫系统缺陷导致抵抗力下降，从而引发艰难梭菌感染。
诊断与治疗
医生需了解患者的免疫系统状况和症状表现，及时进行粪便培养和 组织活检，确诊后采取抗生素治疗。
病例三：胃肠道疾病导致艰难梭菌感染
01
02
菌、乳酸菌等。
免疫增强剂
免疫增强剂可以增强患者的免疫 力，提高抵抗力，辅助治疗艰难 梭菌感染。常见的免疫增强剂包
括胸腺肽、转移因子等。
艰难梭菌免疫治疗手段
免疫球蛋白治疗
免疫球蛋白是一种抗体，可以增强患 者的免疫力，提高抵抗力，辅助治疗 艰难梭菌感染。
疫苗接种
接种疫苗可以刺激机体产生免疫力， 预防艰难梭菌感染。目前尚无针对艰 难梭菌的特异性疫苗，但可接种针对 其他相关病原体的疫苗。
艰难梭菌医学课件
感染症状
患者出现腹泻、腹痛、发 热等感染症状，抗生素治 疗效果不佳。
检测结果
粪便培养和组织活检检测 到艰难梭菌阳性。
案例二：老年患者住院期间发生艰难梭菌感染
患者情况
一名85岁男性，因骨折住 院治疗，身体状况较差， 需要长期卧床。
感染症状
患者在住院期间出现严重 的腹泻、腹痛、发热等感 染症状，抗生素治疗效果 不佳。
命名
艰难梭菌的命名源自其形态特征，因其菌落形态类似梭状而 得名。
艰难梭菌的分类及分布
分类
艰难梭菌属于梭菌属，分为A、B、C、D四个亚型，其中A型最具致病性。
分布
艰难梭菌广泛分布于自然界，如土壤、水源、食品等，也可寄生于人体肠道 ，是医院内感染的重要病原体之一。
艰难梭菌的致病性及危害
致病性
艰难梭菌的致病性主要与其分泌的毒素有关，可引起肠道毒素性疾病、腹泻、肠 炎等。
肠易激综合征患者常有腹部不适或腹痛，伴 有排便习惯改变，粪便化验检查无异常，与 艰难梭菌感染相似。
04
艰难梭菌的治疗及预防措施
艰难梭菌的治疗方案
抗生素治疗
艰难梭菌感染常用抗生素包括甲硝唑、克林霉素 等，医生应根据病情选择合适药物，并严格遵守 治疗周期。
纠正脱水
艰难梭菌感染可能导致严重腹泻，应注意补充水 分，防止脱水。
强化食品卫生
加强食品生产和流通环节的卫生监 管，确保食品安全，预防艰难梭菌 感染的传播。
加强国际合作
加强与其他国家和地区在艰难梭菌 防治方面的交流与合作，共同应对 公共卫生挑战。
05
艰难梭菌的临床案例分析
案例一：长期抗生素治疗导致艰难梭菌感染
01
02
03
患者情况
儿童艰难梭菌感染现状和预防措施_
㊃专题㊃通信作者:张琳,E m a i l :l z h a n g79@126.c o m 儿童艰难梭菌感染现状和预防措施郭 城,张 琳(河北医科大学第三医院儿科,河北石家庄050050) 摘 要:艰难梭菌(C l o s t r i d i u md i f f i c i l e ,C D )是造成院内感染和抗生素相关性腹泻最重要的病原,由于广谱抗生素的大量使用,使得C D 感染(C D I )发病率在全球范围内呈上升趋势,成为严重的公共卫生问题㊂目前虽没有中国儿童C D 的流行病学研究数据,但国内儿童疾病诊治过程中存在较为严重的抗生素滥用㊁且临床对其认识不足,C D I发病率可能比国外更高㊂本文从C D 致病机制㊁流行现状㊁危险因素和预防措施等方面进行介绍,以期为防控C D I 提供依据㊂关键词:梭菌感染;治疗病学;综合预防;儿童中图分类号:R 517.5 文献标志码:A 文章编号:1004-583X (2018)05-0398-04d o i :10.3969/j.i s s n .1004-583X.2018.05.008C u r r e n t s t a t u s a n d p r e v e n t i v em e a s u r e s o f C l o s t r i d i u md i f fi c i l e i n f e c t i o n i n c h i l d r e n G u oC h e n g ,Z h a n g Li n D e p a r t m e n t o f P e d i a t r i c s ,t h eT h i r d H o s p i t a l o f H e b e iM e d i c a lU n i v e r s i t y ,S h i j i a z h u a n g 050050,C h i n a C o r r e s p o n d i n g a u t h o r :Z h a n g L i n ,E m a i l :l z h a n g79@126.c o m A B S T R A C T :C l o s t r i d i u md i f f i c i l e (C D )i s t h em o s t i m p o r t a n t c a u s e o f h o s p i t a l -a c q u i r e da n da n t i b i o t i c -a s s o c i a t e d d i a r r h e a .D u e t o t h e e x t e n s i v e u s e o f b r o a d -s p e c t r u ma n t i b i o t i c s ,t h e i n c i d e n c e o f C l o s t r i d i u md i f f i c i l e i n f e c t i o n (C D I )i s o nt h er i s e w o r l d w i d e ,a n dh a sb e c o m eas e r i o u s p u b l i ch e a l t h p r o b l e m.A l t h o u g he p i d e m i o l o gi c a ld a t ao fC D I c o n c e r n i n g C h i n e s e c h i l d r e n i s u n a v a l i a b l e ,t h e a b u s i v e u s e o f a n t i b i o t i c s i n t h e i r d i a gn o s i s a n d t r e a t m e n t i s u n d e n i a b l e ;a n dc o n c e r n e dc l i n i c a lk n o w l e d g ea w a i t si m p r o v e m e n t .T h e s ef a c t o r sa d d e dt o g e t h e r m a y c o n t r i b u t et o d o m e s t i c i n c i d e n c eo f C D I h i g h e r t h a n t h a t o f f o r e i g n c o u n t r i e s .T h i s a r t i c l e i n t r o d u c e s t h e p a t h o g e n i c m e c h a n i s m ,e p i d e m i o l o g y,r i s k f a c t o r s a n d p r e v e n t i v em e a s u r e s o fC Dt o p r o v i d eb a s i s f o r p r e v e n t i o na n d c o n t r o l o fC D I .K E Y W O R D S :C l o s t r i d i u m i n fe c t i o n s ;e p i d e m i o l o g y ;u n i v e r s a l p r e c a u t i o n s ;c h i ld 张琳,河北医科大学第三医院儿科主任㊁主任医师㊁教授,博士生导师,国家级有突出贡献的中青年专家㊂曾获吴阶平医学研究二等奖,河北省科技进步二㊁三等奖㊂兼任中华预防医学会微生态分会委员,儿科学组副组长;中华医学会消化学分会儿科学组副组长,微生态学组委员;中华医学会儿科分会消化学组委员;中国医师协会内镜分会儿科专业常务委员;国家卫计委儿童消化内镜专家组成员;中华医学会肠内肠外分会儿科学组委员;中华医学会消化内镜分会儿科学组委员;河北省微生态学会主任委员;河北省医师协会儿科分会候任主任委员;河北省儿科分会副主任委员;河北省围产医学会副主任委员;河北省医师学会新生儿分会副主任委员㊂参与教育部‘儿科学“教材编写,兼任‘中华儿科杂志“㊁‘中国微生态学杂志“等多家杂志编委㊂艰难梭菌(C l o s t r i d i u md i f fi c i l e ,C D )是一种厌氧的革兰阳性芽孢杆菌,分布于健康人和动物的肠道及粪便中,属于条件致病菌,产毒株可分泌毒素A ㊁B 和二元毒素(CD T )而致病㊂C D 也是造成院内感染和抗生素相关性腹泻最重要的病原㊂艰难梭菌感染(C l o s t r i d i u md i f f i c i l e i n f e c t i o n ,C D I )存在医院环境中已超过30年,由于广谱抗生素的大量使用和其他引起肠道菌群紊乱的原因,以及个体易感性等因素,使得C D I 发病率及其严重程度在全球范围内呈上升趋势,在欧洲和北美等国家出现了C D 的高毒力流行菌株(如N A P 1/B I /027)以及C D 相关性腹泻(C l o s t r i d i u m d i f f i c i l e a s s o c i a t e dd i a r r h e a ,C D A D )的地区性暴发流行,已成为严重的公共卫生问题[1-2]㊂C D 在婴幼儿及儿童的作用存在争议,一方面C D 与儿童多种疾病存在关联,如自限性分泌性腹泻㊁伪膜性大肠炎,中毒性巨结肠㊁肠穿孔和感染性休克等;另一方面,在儿童无症状C D 定植比较常见(2%~75%),这与年龄㊁出生方式和喂养有关[3]㊂研究显示,西方国家儿童医院和社区获得性C D I(h o s p i t a l -a c q u i r e d C D I ,H A -C D I ;c o mm u n i t y -a c qu i r e dC D I ,C A -C D I )发生率明显增加,对于住院儿童其发生率在12.8~40/10000[4-5]㊂目前虽没有㊃893㊃‘临床荟萃“ 2018年5月5日第33卷第5期 C l i n i c a l F o c u s ,M a y 5,2018,V o l 33,N o .5Copyright ©博看网. All Rights Reserved.中国儿童C D I的流行病学研究数据,但国内儿童疾病诊治过程中存在较为严重的抗生素滥用㊁且临床对其认识不足,C D I发病率可能比国外更高㊂本文从C D致病机制㊁流行现状㊁危险因素和预防措施等方面进行介绍,以期为防控C D I提供依据㊂1C D I致病机制C D是一种专性厌氧的革兰阳性芽孢杆菌,分布于健康人和动物的肠道及粪便中,属于条件致病菌,可作为人体正常肠道菌群的一部分而无任何临床症状㊂C D无症状定植在1月内婴儿为25%~30%, 1月至1岁为10%~25%,1岁以上为5%~10%,分析原因是婴儿肠道系统中可能缺乏毒素细胞内化的毒素受体,或母乳可能中和毒素A和B[6]㊂健康成年人C D携带率约2%~4%,在医院环境中,无症状携带率可能更高㊂这些C D定植分离株可以是毒素阴性的㊁非致病性菌株,或者致病性C D菌株(正常肠道菌群抑制其过度生长)㊂健康状态下,肠道中双歧杆菌㊁拟杆菌㊁优杆菌等优势菌群可抑制肠道中C D,C D是否致病主要取决于该菌的数量和产生毒素的量㊂当患者应用抗生素治疗引起肠道菌群紊乱㊁外科手术或免疫功能低下时,部分耐药C D或原有C D异常增殖而导致患者发病,这属于内源性感染;也可通过粪-口途径方式传播引起外源性或交叉感染㊂人体感染C D,首先破坏了肠道正常菌群结构,具有代谢活性的滋养体在结肠内增殖和定植,并产生和释放两种致病毒素即毒素A(肠毒素)及毒素B(细胞毒素),除此之外,C D可分泌其他毒素因子如纤连结合蛋白A(f i b r o n e c t i n b i n d i n gp r o t e i nA,F b p A)㊁菌毛㊁c w p84半胱氨酸蛋白酶等㊂毒素通过肠道上皮细胞和胞内多种信号通道使蛋白质糖基化,从而导致机体组织细胞凋亡,降低肠黏膜屏障功能,引发结肠炎症,导致相应临床表现,其表现形式主要受两种因素制约,即感染菌株的毒力和宿主的免疫应答㊂轻者为携带者状态,重者可发展为伪膜性肠炎㊁中毒性巨结肠或脓毒症等㊂2C D I流行现状1978年确定了C D为抗生素相关性结肠炎/伪膜性结肠炎的病原菌[7],其后十年间,制定了诊断和有效的治疗措施,并发现C D I是抗生素应用的并发症㊂在世纪之交,这种情况开始发生变化,C D I在欧洲和北美洲大范围爆发㊂1993-2008年,美国被诊断为C D I的住院人数从85700例增加到336600例,增加了4倍[8]㊂2011年美国疾控中心(C e n t e r f o r D i s e a s eC o n t r o l,C D C)报告,美国C D I发病约为453000,大约死亡29000例[9],C D I流行病学变化与C D新发菌株的出现有关,即B I/N A P1/027,以及最近的多位点序列分型S T1菌株㊂L o o等[10]发现存在该菌株的住院患者中55%发生C D I,其他菌株仅占29%,同时50%可能易引起复发性C D I,而且这些菌株与其他菌株相比,死亡率增加1倍[11]㊂2011年C D C新兴感染计划(E m e r g i n g I n f e c t i o n sP r o g r a m, E I P)数据显示,该菌是导致医疗相关性C D I和社区相关性C D I的主要原因㊂2015年最新E I P数据显示,尽管其是医疗保健相关C D I的第一原因,但它已下降为社区相关C D I的第二常见因素[12]㊂E I P监测的另一个重要发现是,更多C D I病例发生在医院以外,认为可能与之前入院前未监测C D I有关㊂C D I复发是患者发病的重要来源,10%~30%病例出现至少一次的复发性C D I发作㊂首次复发后,随之第二或第三复发的风险可达30%[13]㊂2000年之前,C D I报道死亡率<2%,C D I流行病发生改变之后,报道死亡率达4.5%~5.7%,流行期间死亡率可达6.9%~16.7%[14]㊂儿童人群中C D出现了上述流行病学的变化,一些证据显示西方国家儿童H A-C D I和C A-C D I发生率有明显的增加,发生率12.8~40/10000住院儿童[4-5]㊂在一项美国的对照研究,1991-1997和2004-2009年间儿童C D I的发病率从2.6/100000增加至32.6/100000[18]㊂由于C D I的高发病率㊁严重性和高成本,需要有效的预防传播㊁感染和复发的策略㊂3C D I相关危险因素目前已证实,一些危险因素可引发C D I,包括:①任何途径暴露于C D孢子如医院环境;②抗生素治疗㊁化疗㊁肠蠕动抑制剂等应用,可引起肠道菌群的紊乱,利于C D的侵袭和繁殖;③宿主相关因素如高龄㊁严重基础疾病㊁免疫功能低下如化疗,H I V阳性患者等[15]㊂C D I最重要危险因素仍是抗生素的广泛和不合理的使用㊂在美国,57%~75%儿童C A-C D I患者在住院前3个月内使用了抗生素[16]㊂美国一项研究发现,3年前抗生素暴露儿童较未暴露儿童C D I发病率显著增加[17]㊂另一项研究也报告了H A-C D I与在30天内应用头孢菌素(O R=3.32;95%C I= 1.10~10.01)和存在胃肠道喂养装置(O R=2.59; 95%C I=1.07~6.30)存在关联[18],故医院以及长期护理机构㊁环境污染和频繁应用抗生素是C D I的重要危险因素㊂一些研究者报道了酸抑制剂增加了C D I的发生风险[19],而其他研究者经过校正共存条件,并未确认增加了C D I的风险[20]㊂在意大利的一㊃993㊃‘临床荟萃“2018年5月5日第33卷第5期 C l i n i c a l F o c u s,M a y5,2018,V o l33,N o.5Copyright©博看网. All Rights Reserved.项儿科回顾性病例研究发现,质子泵抑制剂(P P I)的使用与C D I存在显著关联,H2受体拮抗剂和C D I 之间不存在关联[21]㊂目前没有发现C D I与年龄㊁早产儿(<37孕周)有关的报道,胃肠手术㊁激素及免疫抑制剂应用2周与C D I有关[22]㊂其他研究表明免疫抑制和重症疾病与C D I之间有着密切的联系㊂炎症性肠病(I B D)㊁先天性巨结肠㊁器官移植㊁胃造瘘术/空肠造口和囊性纤维化均会影响C D I的发生风险㊂4C D I的预防与控制目前预防C D I的两项主要措施是预防医院C D I 患者传播和降低C D I发生风险㊂故临床上对于C D I 的早期发现就显得十分重要,快速正确的诊断才能具体治疗和减少传播㊂同样,临床上也要避免C D I 的误诊,这会影响C D I的预防工作㊂4.1诊断在接受抗菌药物治疗过程中,患儿一旦出现腹泻㊁发热㊁腹痛㊁白细胞增高等,要高度警惕C D I㊂C D I的确诊依赖于粪便中检测到C D毒素或细菌培养出产毒素株㊂2017年美国C D I[23]临床指南推荐:只有腹泻患者的粪便才需要检测C D,C D毒素基因核酸扩增试验(N A A T s)如聚合酶链反应(P C R)等优于毒素A+ B酶免疫测定(E I A),作为C D I的标准诊断试验㊂谷氨酸脱氢酶(G D H)筛选试验筛选C D,可用于毒素A +B酶免疫测定(E I A)之后的两步或三步算法,但这种策略的敏感性低于N A A T s㊂由于婴儿无症状C D携带率很高,不宜常规推荐新生儿或伴有腹泻的小于12个月的婴儿检测C D I, 1~2岁腹泻患儿不应常规进行C D试验,除非排除了其他感染或非感染原因㊂对于大于2岁儿童,建议C D试验用于长期腹泻或恶化的腹泻患者或有危险因素如炎症性肠病或存在免疫抑制或存在相关暴露如接触医疗保健系统或最近应用抗生素的人群㊂4.2感染控制措施医院环境是C D来源的最主要危险因素㊂研究显示,即使患者没有检出C D I也没有C D定植,其病房环境中依然可以分离到C D㊂长期护理机构C D产毒株携带率可高达148%[24],如之前有C D I暴发过的长期护理机构,其携带率更高达300%,住院患者感染C D的风险随住院时间延长呈线性增长㊂因此,环境控制十分重要,这包括对环境表面进行C D检测㊁对环境进行彻底有效的清洁和消毒,基于医院的感染控制措施能显著降低C D I发生率[25]㊂早期监测C D I可早期治疗,并同时早期采取控制措施㊂感染控制与流行病学专业协会推荐:①对高度怀疑有C D I风险因素的患者(最近或当前使用抗生素㊁使用抗肿瘤药物,高龄,最近住院,或居住在长期护理中心,曾经获得过C D I)进行C D检测;②倡导医生应用快速㊁敏感性高㊁特异度高的C D诊断试剂;③若C D阳性要及时通知医生,积极进行合适的治疗和采取预防措施㊂M u t o等[26]研究报道,通过上述综合措施,医院C D感染率5年间由7.2/1000降至4.8/1000㊂2017年美国C D I临床指南推荐[23]提示:①尽量为C D I患者提供单独房间减少传染给其他人的机会,患者多时,尽量把相同病源的患者集中于一个房间,不要把有多重耐药的C D I患者集中于一个房间㊂②接触隔离和手卫生是防控C D I的关键,进入C D I 病房或护理C D I患者时,医护人员和访视者应使用一次性隔离衣和手套㊂接触C D I患者去除手套后,常规用肥皂,水或基于酒精的手消毒剂进行手消毒㊂③在C D I疫情或高发区,建议用肥皂和水消毒代替基于乙醇的消毒剂㊂如果有可能直接接触粪便或粪便污染的地区,建议优先用肥皂和水洗手㊂B o b u l s k y等[27]研究表明,C D I患者治疗2周后皮肤表面仍存在C D的污染,应继续进行接触预防措施,C D I高发地区要延长接触预防措施直至出院㊂4.3抗生素管理抗生素的广泛和频繁应用是导致C D A D的高危因素,因85%C D A D患者接受过抗生素治疗㊂克林霉素㊁头孢菌素(特别是三代头孢菌素)㊁广谱青霉素㊁氟喹诺酮是导致C D A D的常见危险因素,特别是氟喹诺酮类药物的大量应用是近年来引起高毒力菌株在欧美地区暴发流行的主要危险因素,抗生素应用的种类越多㊁剂量越大㊁疗程越长,发生C D A D的风险也就越高㊂合理使用抗生素可有效预防C D I,包括:①减少高危抗生素(如克林霉素㊁喹诺酮类药物和头孢菌素)治疗的频率㊁持续时间和抗生素的数量;②严格执行抗生素管理方案;③根据当地流行病学和存在的C D菌株选择适宜抗生素㊂要考虑限制氟喹诺酮类抗生素㊁克林霉素和头孢菌素类药物的应用(外科预防性使用抗生素除外)㊂抗菌药物合理使用后可在流行期间降低C D I发病率60%㊂4.4益生菌应用目前尚无足够证据推荐益生菌在临床试验之外一级预防C D I㊂一些荟萃分析表明,益生菌(L G G和布拉氏酵母菌)能降低抗生素相关性腹泻的发生风险,但是益生菌降低C D I的研究有限㊂G a o等[28]临床研究表明,225例住院患者服用L a c t o b a c i l l u s a c i d o p h i l u s C L1285和L.c a s e i L B C80R能有效预防抗生素相关性腹泻和C D I㊂但㊃004㊃‘临床荟萃“2018年5月5日第33卷第5期 C l i n i c a l F o c u s,M a y5,2018,V o l33,N o.5Copyright©博看网. All Rights Reserved.目前无足够证据支持常规使用益生菌预防C D I㊂人们一直努力研究和制定措施进行C D I防治,但在医院和社区的环境中,C D I仍然普遍存在,尤其在滥用抗生素治疗的儿童中㊂抗生素的管理和环境的消毒仍是控制感染的必要条件,有效益生菌制剂和疫苗将有可能成为未来C D I防控的重要手段㊂参考文献:[1] M a g i l l S S,E d w a r d s J R,B a m b e r g W,e t a l.M u l t i s t a t e p o i n t-p r e v a l e n c e s u r v e y o fh e a l t hc a r e-a s s o c i a t e di n f e c t i o n s[J].NE n g l JM e d,2014,370(13):1198-1208.[2] L oV A,Z a c u rGM.C l o s t r i d i u md i f f i c i l e i n f e c t i o n:,a nu p d a t eo ne p i d e m i o l o g y,r i s kf a c t o r s,a n dt h e r a p e u t i co p t i o n s[J].C u r rO p i nG a s t r o e n t e r o l,2012,28(1):1-9.[3] A z a d M B,K o n y aT,M a u g h a n H,e ta l.G u t m i c r o b i o t ao fh e a l t h y C a n a d i a ni n f a n t s:p r o f i l e sb y m o d eo fd e l i v e r y a n di n f a n t d i e t a t4m o n t h s[J].C MA J,2013,185(5):385-394.[4] K h a n n a S,B a d d o u r L M,H u s k i n s W C,e t a l.T h ee p i d e m i o l o g y o fC l o s t r i d i u m d if f i c i l ei n f e c t i o ni nc h i l d r e n:ap o p u l a t i o n-b a s e d s t u d y[J].G a s t r o e n t e r o l o g y,2013,56(10): 1401-1406.[5] N i c h o l s o n M R,T h o m s e nI P,S l a u g h t e r J C,e ta l.N o v e l r i s kf a c t o r s f o rr e c u r r e n tC l o s t r i d i u m d i f f i c i l e i n f e c t i o ni nc h i l d r e n[J].JP e d i a t rG a s t r o e n t e r o lN u t r,2015,60(1):18-22.[6] L e e sE A,M i y a j i m aF,P i r m o h a m e d M,e ta l.T h er o l eo fC l o s t r i d i u m d i f f i c i l e i n t h e p a e d i a t r i c a n d n e o n a t a l g u t-an a r r a t i v e r e v i e w[J].E u r JC l i nM i c r o b i o l I n f e c tD i s,2016,35(7):1047-1057.[7] Kök s a l F.T h e r o l e o f C l o s t r i d i u m d i f f i c i l e i n a n t i b i o t i c-a s s o c i a t e d e n t e r i t i s[J].M i k r ob i y o lB u l,1985,19(2):109-1011.[8] L u c a d o J,G o u l d C,E l i x h a u s e r A.C l o s t r i d i u m d i f f i c i l ei n f e c t i o n s(C D I)i n h o s p i t a ls t a y s,2009[D B/O L].H C U PS t a t i s t i c a l B r i e f#124.J a n u a r y2012.A g e n c y f o rH e a l t h c a r eR e s e a r c ha n dQ u a l i t y,R o c k v i l l e,M D.h t t p://w w w.h c u p-u s.a h r q.g o v/r e p o r t s/s t a tb r i e f s/s b124.p d f.11,75-79(2012).[9] L e s s aF C,M uY,B a m b e r g WM,e t a l.B u r d e n o f C l o s t r i d i u md i f f i c i le i nf e c t i o ni nt h e U n i t e d S t a t e s[J].N E ng lJ M e d,2015,372(9):825-834.[10] L o oV G,B o u r g a u l tAM,P o i r i e rL,e t a l.H o s t a n d p a t h o g e nf a c t o r s f o rC l o s t r i d i u m d i f f i c i l e i n f e c t i o na n dc o l o n i z a t i o n[J].NE n g l JM e d,2011,365(18):1693-1703.[11] R a oK,M i c i c D,N a t a r a j a n M,e ta l.C l o s t r i d i u m d i f f i c i l er i b o t y p e027:r e l a t i o n s h i p t oa g e,d e t e c t a b i l i t y o f t o x i n sAo rB i ns t o o lw i t hr a p i dt e s t i n g,s e v e r e i n f e c t i o n,a n d m o r t a l i t y[J].C l i n I n f e c tD i s,2015,61(2):233-241.[12] C D C.2015A n n u a l R e p o r t f o r t h e E m e r g i n g I n f e c t i o n sP r o g r a mf o rC l o s t r i d i u md i f f i c i l e I n f e c t i o n[D B/O L].h t t p s://w w w.c d c.g o v/h a i/e i p/A n n u a l-C D I-R e p o r t-2015.h t m l[13]S h e i t o y a n-P e s a n tC,A b o uC h a k r aC N,Pép i n J,e t a l.C l i n i c a la n dh e a l t h c a r eb u r d e no fm u l t i p l er ec u r r e n c e so fC l o s t r id i u md i f f i c i le i nf e c t i o n[J].C l i n I n f e c tD i s,2016,62(5):574-580.[14] M a g i l l S S,E d w a r d s J R,B a m b e r g W,e t a l.M u l t i s t a t e p o i n t-p r e v a l e n c e s u r v e y o fh e a l t hc a r e-a s s o c i a t e di n f e c t i o n s[J].NE n g l JM e d,2014,370(13):1198-1208.[15] M o n n i e rA L,Z a h a rJ R,B a r b u tF.U p d a t eo n C l o s t r i d i u md i f f i c i l e,i n fe c t i o n s[J].Méd e c i n e E t M a l a d i e sI nf e c t i e u s e s,2014,44(8):354-365.[16]S a n d o r aT J,F u n g M,F l a h e r t y K,e ta l.E p i d e m i o l o g y a n dr i s k f a c t o r s f o rC l o s t r i d i u m d i f f i c i l e i n f e c t i o ni nc h i l d r e n[J].P e d i a t r I n f e c tD i s J,2011,30(7):580-584.[17] K l e i nE J,B o s t e rD R,S t a p p J R,e t a l.D i a r r h e ae t i o l o g y i nac h i ld re n's h o s p i t a l e m e r g e n c y d e p a r t m e n t:a p r o s p e c t i v e c o h o r ts t u d y[J].C l i n I n f e c tD i s,2006,43(7):807-813.[18] C r e w s J D,A n d e r s o nL R,W a l l e rD K,e t a l.R i s kf a c t o r s f o rc o mm u n i t y-a s s o c i a t e dC l o s t r id i u m d i f f i c i l e-a s s o c i a te dd i a r r h e ai n c h i l d r e n[J].P e d i a t r I n f e c tD i s J,2015,34(9):919-923.[19] D i a l S,D e l a n e y J,B a r k u n A N,e ta l.U s eo f g a s t r i ca c i d-s u p p r e s s i v e a g e n t s a n d t h e r i s k o f c o mm u n i t y-a c q u i r e dC l o s t r i d i u md i f f i c i l e-a s s o c i a t e dd i s e a s e[J].J AMA,2005,294(23):2989-2995.[20] N o v a c kL,K o g a nS,G i m p e l e v i c hL,e t a l.A c i ds u p p r e s s i o nt h e r a p y d o e sn o t p r e d i s p o s et oC l o s t r i d i u m d i f f i c i l e i n f e c t i o n: t h e c a s eo f t h e p o t e n t i a lb i a s[J].P L o S O n e,2014,9(10): e110790.[21] T u r c o R,M a r t i n e l l i M,M i e l e E,e t a l.P r o t o n p u m pi n h i b i t o r sa sar i s kf a c t o rf o r p a e d i a t r i c C l o s t r i d i u m d i f f i c i l ei n f e c t i o n[J].A l i m e n tP h a r m a c o lT h e r,2010,31(7):754-759.[22] L e e sE A,M i y a j i m aF,P i r m o h a m e d M,e ta l.T h er o l eo fC l o s t r i d i u m d i f f i c i l e i n t h e p a e d i a t r i c a n d n e o n a t a l g u t--an a r r a t i v e r e v i e w[J].E u r JC l i nM i c r o b i o l I n f e c tD i s,2016,35(7):1047-1057.[23] M c D o n a l dL C,G e r d i n g D N,J o h n s o nS,e t a l.C l i n i c a l P r a c t i c eG u i d e l i n e sf o r C l o s t r i d i u m d i f f i c i l eI n f e c t i o ni n A d u l t sa n dC h i l d r e n:2017U p d a t eb y t h eI n f e c t i o u sD i s e a s e sS o c i e t y o fA m e r i c a(I D S A)a n dS o c i e t y f o rH e a l t h c a r eE p i d e m i o l o g y o fA m e r i c a(S H E A)[J].C l i n I n f e c tD i s,2018,66(7):987-994.[24] Z i a k a s P D,Z a c h a r i o u d a k i s I M,Z e r v o u F N,e t a l.A s y m p t o m a t i cc a r r i e r so ft o x i g e n i c C.d i f f i c i l ei nl o n g-t e r mc a r e f a c i l i t i e s:a m e t a-a n a l y s i so f p r e v a l e n c ea n dr i s kf a c t o r s[J].P L o SO n e,2015,10(2):e0117195.[25]S u r a w i c zC M,B r a n d tL J,B i n i o n D G,e ta l.G u i d e l i n e sf o rd i a g n o s i s,t re a t m e n t,a n d p r e v e n t i o no fC l o s t r i d i u m d if f i c i l ei n f e c t i o n s[J].A mJG a s t r o e n t e r o l,2013,108(4):478-498.[26] M u t o C A,B l a n k MK,M a r s h J W,e t a l.C o n t r o l o f a no u t b r e a k o f i n f e c t i o n w i t h t h e h y p e r v i r u l e n t C l o s t r i d i u md i f f i c i l eB I s t r a i n i n a u n i ve r s i t y h o s p i t a l u s i n g a c o m p r e h e n s i v eb u n d l e a p p r o ac h[J].C l i nI n f e c tD i s,2007,45(10):1266-1273.[27] B o b u l s k y G S,A l-N a s s i s WN,R i g g s MM,e t a l.C l o s t r i d i u md i f f i c i le s k i n c o n t a m i n a t i o n i n p a t i e n t s w i t h C.d if f i c i l e-a s s o c i a t e dd i s e a s e[J].C l i n I n f e c tD i s,2008,46(3):447-450.[28] G a o XW,M u b a s h e r M,F a n g C Y,e t a l.D o s e-r e s p o n s ee f f i c a c y o fa p r o p r i e t a r y p r o b i o t i cf o r m u l a o f L a c t o b a c i l l u sa c i d o p h i l u s C L1285a n d L a c t ob ac i l l u s c a s e i L B C80R f o ra n t ib i o t i c-a s s oc i a t ed d i a r r he a a n d C l o s t r i d i u m d if f i c i l e-a s s o c i a t e dd i a r r h e a p r o p h y l a x i si na d u l t p a t i e n t s[J].A m JG a s t r o e n t e r o l,2010,105(7):1636-1641.收稿日期:2018-05-09编辑:武峪峰㊃104㊃‘临床荟萃“2018年5月5日第33卷第5期 C l i n i c a l F o c u s,M a y5,2018,V o l33,N o.5Copyright©博看网. 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细菌学检验-细菌的分型及其检测技术
? 所使用的培养基、质控菌株与其他菌不同。
第四节 分子生物学分型技术
? 核糖体分型（RT ）：16SrRNA ? 脉冲凝胶电泳分型（PFGE ）： ? 序列分型： ? 多位点序列分型技术（MLST ）：
第五节 色谱和质谱技术在细菌学 检验中的应用
? 对多组分混合物进行分离分析以及鉴定的 重要方法，可用于细菌细胞成分、代谢产 物等进行分析。
? 其环境要素是干燥、低温、缺氧、缺营养 以及添加保护剂等）
一、菌种保藏的注意事项
? 一般应保藏于低温、清洁和干燥处。 ? 无菌操作。 ? 根据菌种状况及时转接。 ? 控制传代次数。 ? 选择典型菌落，防止盲目传代。 ? 受损、衰退、变异细菌需复壮。 ? 用培养基保藏菌种时，应保藏两套。
二、菌种的保藏方法
中比较多地应用了此项技术
菌种
基本培养基 （液体）
检测、编码、查表、鉴定
适用于API鉴定细 菌有700多种
2、Enterotube 系统
不同培养基分装不同小槽中，同 步接种，培养后检测、查表、鉴定。
3、Biolog全自动或手动细菌 鉴定系统
在96孔的细菌培养板上检测微生物对不同发酵性 碳源利用情况进行的分类鉴定。
以上测试菌量的最低药物浓度。
微量液体稀释法 (microdilution test)
?原理：
? 聚乙烯板内含有各种稀释度的抗菌药物，实验时加入 100μl浓度为105 CFU/ml的菌液，盖上盖板，35℃16～20h 观察结果。孔底部清晰不出现细菌沉淀的最低抗菌药物浓 度即为该抗菌药物对细菌的最小抑菌浓度，通过CLSI标准 判断其敏感和耐药。
? 根据敏感谱或产生谱可进行细菌分型和流 行病学调查。
艰难梭菌感染ppt课件
2019
-
9
CONTENTS
01 病原体 04 流行病学
02
定义
05
诊断与评估
03
发病机制及高危因素
06
治疗及预后
2019
-
10
流行病学
院内感染病原体之一 院内暴露 无症状性定居者/携带者：医院内8-50%，康复和 存 在 于 3% 健 康 长期养老院内50% 人粪便中 院内传播方式： 医疗工作者的手、衣服、所用器械 密切接触的操作：直肠测温；口腔护理或吸痰；进 食或服药时；紧急插管； 手卫生不合格 患者间共用的器械消毒不恰当 缺乏有效的环境清洁
01 病原体 04 流行病学
02
定义
05
诊断与评估
03
发病机制及高危因素
06
治疗及预后
2019
-
16
治疗——控制感染传播，保护易感者
• 感染控制措施
• • • • 一次性器具，用完即丢弃；非一次性器具专人专用，用后严格消毒 手消毒+手套： 次氯酸钠全面消毒 隔离及穿防护服的效果尚待证明
• 筛查潜在感染者：现存争议，不推荐对无腹泻者进行常规筛查 • 暂不推荐治疗无症状感染者
2019
-
14
诊断与评估
有无腹膜炎体征 直肠指检排除其他疾病 判断受累范围 40%CDI阴性 严重度判断：腹水、显 著结肠壁强化、肠系膜 静脉气体、腹腔内积气 及气腹
-
体检
实验室检 查
判断病情严重度 评估其他脏器功能 有无败血症
放射学 检查
内镜检查
鉴别其他类型的结肠炎
2019
15
CONTENTS
培养
2019
敏感性高；不能区别急性感染和感染种类（非产毒性和非病理 性菌株也可在培养时生长，这些杂菌可能干扰检测结果），特 异性低；培养时间长，需要较高的设备与实验室专业水平 核酸扩增 染色体毒性基因：通常是毒素基因tcdA、 tcdB或毒素调控基因tcdC，快速，改善敏 13 感性和特异性；适合高毒力菌株进一步鉴 定
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·184·
临床检验杂志 2012 年 3 月第 30 卷第 3 期 Chin J Clin Lab Sci，Mar． 2012，Vol． 30，No． 3
临床检验杂志 2012 年 3 月第 30 卷第 3 期 Chin J Clin Lab Sci，Mar． 2012，Vol． 30，No． 3
·183·
文章编号： 1001-764X（ 2012） 03-183-04
25 株艰难梭菌多位点序列分型* ?
·临床检验技术研究·
严其容1 ，李文革2 ，许文荣1 ，程颖2 （ 1． 江苏大学基础医学与医学技术学院，江苏镇江 212013； 2． 中国疾病预防 控制中心传染病预防控制所医院感染室，北京 102206）
1 材料与方法
1． 1 菌株来源 收集 2010 年 1 ～ 12 月北京中日友 好医院门诊腹泻儿童及成人住院患者粪便分离的艰 难梭菌 25 株，其中来源于婴幼儿 10 株，成人 15 株。 粪便样 本 接 种 环 丝 氨 酸-头 孢 西 丁-果 糖-卵 黄 琼 脂 （ cycloserine-cefoxitin-fructose-egg yolk agar，CCFA） 培养基，厌氧环境下培养 48 h，挑取典型的单个菌 落（ 扁平、黄色毛玻璃样，马粪味，革兰染色阳性杆 菌） ，接种 脑 心 浸 液 琼 脂 （ brain heart infusion agar， BHI） 培养基，厌氧培养 24 h 后，按照乳胶凝集试验、 脯氨酸纸片法以及 BioMerieux 生化反应试剂盒说明 书操作进一步鉴定。若有不能确定的菌株，则提取 DNA 进行 16S rDNA 扩增后送北京擎科新业公司测 序鉴定。 1． 2 主要试剂与仪器 CCFA 琼脂基础及添加剂、 BHI 琼脂、卵黄乳液及 BioMerieux 生化鉴定试剂盒 （ Oxoid 公司） ，脯氨酸鉴定纸片（ Remel 公司） ，羊血 （ 北京兰伯瑞公司） ，细菌基因组 DNA 提取试剂盒、 PCR 产物纯化及胶回收试剂盒（ Qiagen 公司） ，PCR Premix Taq 酶（ TaKaRa 公司） ； 3730 XL 型测序仪及 BigDye terminator 测序盒 （ ABI 公司） ，凝 胶 成 像 仪 （ Bio-Rad 公司） ，BG-Submzd1 型电泳仪（ 百晶通公 司） ，Sensoquest Labcycler 型 PCR 仪（ Senso 公司） 。 1． 3 DNA 提取 接种艰难梭菌单菌落于 BHI 血平 板，培养过夜，用细菌基因组 DNA 提取试剂盒提取 25 株菌的 DNA，溶于 TE 缓冲液， － 20 ℃ 保存。 1． 4 管家基因的扩增与测序 根据 Lemme 等［2］的 方案，选取 7 个管家基因（ aroE，ddl，dutA，tpi，recA， gmk 及 sodA） 进行 PCR 扩增。反应体系： Taq premix 25 μL，上、下游引物（ 10 pmol / L） 各 1 μL，DNA 模 板 3 μL，ddH2 O 20 μL。循环参数： 95 ℃ 3 min； 95 ℃ 30 s ，退火温度（ 前 10 个循环从 60 ℃ 开始，每个 循环降低 1 ℃ 至 50 ℃ 后保持不变） 30 s，72 ℃ 30 s，共 40 个 循 环； 72 ℃ 延 伸 10 min。 根 据 David 等［3］的 方 案，选 取 7 个 管 家 基 因 （ adk，atpA，dxr， glyA，recA，soda，tpi） 进 行 PCR 扩 增。反 应 体 系 同 上。循环参数： 95 ℃ 15 min； 94 ℃ 30 s，50 ℃ 40 s， 72 ℃ 70 s，共 35 个循环； 72 ℃ 延伸 5 min。引物均 由北京擎科新业公司合成。扩增产物经胶回收试剂 盒纯化后根据上、下游引物（ 表 1） 用 BigDye terminator 测序试剂盒 在 3730 XL DNA 分 析 仪 上 进 行 Sanger 测序（ 北京擎科新业公司） 。测序峰图用 cromas 软件读取，用 Mega5 软件分析。
ห้องสมุดไป่ตู้
位基因，等位基因之间有 2 ～ 9 个多态性位点。dN / dS 为 0． 000 0 ～ 0． 280 6。等位基因图谱特征结果表明，Lemee 方案出现了
13 个 ST 型别（ ST1 /2 /3 /6 /7 /13 /31 /39 /48 / A / B / C / D） ，ST6（ 5） 为优势型别； David 方案共出现 11 个 ST 型别（ ST2 /3 /15 /35 /37 /
摘要： 目的 比较两种对艰难梭菌多位点序列分型（ MLST） 的方案并探讨不同来源艰难梭菌之间的关系。方法 选取来自不
同人群的 25 株艰难梭菌，分别用 Lemee 方案（ aroE，ddl，dutA，tpi，recA，gmk，sodA 管家基因） 和 David 方案（ adk，atpA，dxr，
* 基金项目： 国家自然科学基金（ 81101218） ； 中国疾病预防控制中心青年基金课题（ 2011A101） 。
作者简介： 严其容，1986 年生，女，硕士研究生，主要从事临床微生物学研究； 李文革，1966 年生，女，主管技师，主要从事厌氧菌及真菌 研究。严其容、李文革对本文同等贡献，同为第一作者。
型（ multilocus sequence typing，MLST） 是基于对细菌 6 ～ 10 个管家基因的序列进行分析的方法，已广泛 用于多种细菌的溯源性分析及种属结构的研究。本 研究 收 集 25 株 中 国 地 区 艰 难 梭 菌，比 较 Lemme 等［2］及 David 等［3］的方案是否符合该地区艰难梭菌 的研究，并初步探讨来自不同人群的艰难梭菌是否 存有某种关联。
中图分类号： R446． 5
文献标志码： A
Multilocus sequence typing of 25 Clostridium difficile isolates YAN Qi-rong1 ，LI Wen-ge2 ，XU Wen-rong1 ，CHENG Ying2 （ 1． School of Medical Science and Laboratory Medicine，Jiangsu University， Zhenjiang 212013，Jiangsu； 2． National Institute for Communicable Disease Control and Prevention，Chinese Center for Disease Control and Prevention，Beijing 102206，China） Abstract： Objective To compare two schemes of multilocus sequence typing for Clostridium difficile and understand the relationship of strains from variant sources． Methods Twenty-five isolates of Clostridium difficile isolates from variant human population were collected． Lemee's scheme （ aroE，ddl，dutA，tpi，recA，gmk，sodA） and David's scheme（ adk，atpA，dxr，glyA，recA，sodA，tpi） were performed respectively． START program and Bionumerics software were used to analyze the selected loci and investigate the characteristics of sequence type． Results Analysis of the loci revealed that ddl was a null locus in 2 isolates by Lemme's scheme． The other 6 loci displayed 3 to 5 alleles and the number of polymorphic sites of given allele varied from 3 to 11． The ratios of nonsynonymous to synonymous substitutions （ dN / dS） varied from 0 to 0． 261 1． Seven loci in David' scheme displayed from 3 to 5 alleles and the number of polymorphic sites varied from 2 to 9． The ratios of dN / dS was 0 to 0． 280 6． Thirteen ST types （ ST1 /2 /3 /6 /7 /13 /31 /39 /48 / A / B / C / D） were found by Lemme's profile and ST6（ 5） was the dominant type of sequence． Eleven STs（ ST2 /3 /15 /35 /37 /54 /55 /92 /99 /102 / 117） were generated by David's scheme． ST54（ 6） and ST37（ 5） were the dominant type of sequence． No specific ST was generated in the strains from children and adults． Conclusion For multilocus sequence typing of Clostridium difficile strains in China，David' s scheme is much more desirable． There was no significant correlation between ST type and specific host population． Key words： Clostridium difficile； molecular typing； multilocus sequence typing