TMB配方大全

1 。称取TMB １７．２mg(固体），加ＤＭＳＯ１ml 溶解，然后加醋酸钠缓冲液（０．１ｍｏｌ／ｌ，ｐＨ５．５）６６ml，此为底物A

底物B ,取双蒸水100ml，加３０％H2O2１７微升

使用时A：B 液等体积混匀即可．

称取TMB 20mg(固体），先用无水乙醇10ml 溶解，充分振荡（试剂瓶要干净，干燥），加双蒸水定容到100 ml，此为底物A

底物B ,取1水柠檬酸 2.1g，无水Na2HPO4 2.82g，0.75%的过氧化氢尿素0.64ml，双蒸水定容至100ml(无须调PH值，应在4.5-5.0范围。

使用时A：B 各取5ml 混匀，可用于一块96孔板显色。

过氧化氢脲比H2O2稳定，不必如H2O2现用现配，都起供氢体的作用。

2

TMB(10mg/5ml无水l乙醇) 0.5ml

底物缓冲液10ml

0.75%过氧化氢32ul

底物缓冲液:

0.2M磷酸氢二钠25.7ml

0.1M柠檬酸24.3ml

加蒸馏水50ml

TMB使用液：

TMB （10mg/5ml，无水乙醇）0.5ml

底物缓冲液10ml

0.75% H2O2 32 Ul

3.

TMB加入2.5ml无水酒精中,可加热至37℃～40℃直到TMB完全溶解。

将TMB配成1%浓度，4 ℃保存半年以内使用。

使用前，用pH5.0磷酸—柠檬酸底物液9.9ml加入0.1ml（1mgTMB）1%TMB液，再按每毫升TMB加入30% H2O21ul混匀后立即使用。

2NH2SO4终止后，450nm测定OD值。

4.

HRP的底物：

A液：0.02%H2O2 ；用0.1M柠檬酸-0.2M磷酸氢二钠，PH4.5～5.0稀释。

B液：TMB-HCl：0.4‰；用50mM柠檬酸钠，浓HCl调PH值为2.8的溶液溶解。

A液，B液各50ul使用。可使用起来显色比较缓慢，OD值较PIERCE的底物稍偏低一点。

5.

1、TMB粉末，溶于N，N－二甲基甲酰胺，配成10mg/mL。

2、底物缓冲液：0.2Mol/LNa2HPO4 25.7mL

0.1Mol/L柠檬酸24.3mL

水50mL

3、H2O2

用时10mg/mL TMB 165uL

底物缓冲液11mL

H2O2 3.3uL

酶标板中每孔加100Ul。

6.

1.底物液A：TMB200mg，无水乙醇（或DMSO）100ml,加双蒸水至1000ml。

2.底物B缓冲液（0.1ml/L柠檬酸-0.2ml/L磷酸氢二纳，pH5.0-5.4）:

Na2HPO4 14.60g，柠檬酸9.33g，0.75%过氧化氢尿素6.4ml，加三蒸水至

1000ml，调至pH5.0-5.4

3.将底物液A和底物B按1：1混合即成TMB-过氧化氢尿素应用液。

这种方法简单、方便、节约试剂，同时过氧化氢尿素较过氧化氢稳定，更

能够确保准确性，荐议大家与我共同分享。哦，但是还有一点要注意，一

次不要配太多，A液久置易变色。

7.

Substrate 'Stock' Solution

·58mg Tetramethylbenzidine (TM

·5ml DMSO

·Dissolve TMB in DMSO - wear gloves, and use fume cupboard.

·Cover container in tin foil, label as 'toxic'.

·Store at room temperature in toxic cupboard for up to 1 month.

Substrate 'Working' Solution

·100ml of TMB stock solution per 10ml of substrate buffer.

·10ml of H2O2 per 10ml of substrate buffer.

8.

1,称取3,3’,5,5’-四甲基联苯胺（TMB）0.08g，加40ml二甲亚砜溶解，加60ml甲醇，混匀，加100ml底物缓冲液在暗处搅拌2小时至溶解，室温静置4小时。

2,取50μL TMB(10 mg TMB溶于1mL二甲基甲酰胺中)溶液+10 mL底物缓冲液+10μL30%过氧化氢，混均。

9.

底物液

底物：(TMB-H2O2溶液) pH 5.5

底物缓冲液(PH5.0，0.1M 柠檬酸-0.2M Na２HPO４·12H2O):

1.84g Na２HPO４.12H2O和0.47g 柠檬酸，加水到100ml，调节pH值5.0-5.4

或9.2g Na２HPO４.12H2O和2.35g 柠檬酸，加水到500ml，调节pH值5.0-5.4

50ml 0.75% H２O２:取30% H２O２1.25ml,总体积调整为50ml.

TMB(四甲基联苯胺)使用液:取200mg TMB溶解于100ml无水乙醇中。-20℃保存。

临用时配：

TMB(2mg／ml无水乙醇) 0.5ml

底物缓冲液(PH5.5)9.5ml

0.75％H２O２42ul

10.

底物显色液A液：

醋酸钠13.6g

柠檬酸 1.6g

H2O2（30%）0.3ml

dH2O 500ml

底物显色液B液（避光保存）：

EDTA-Na 0.2g

柠檬酸0.95g

甘油50ml

TMB(四甲基联苯胺) （用DMSO溶解为10mg/ml后在加）0.2g

dH2O 500ml加入A、B液各50微升，37℃显色。

底物显色液A液：

醋酸钠13.6g

柠檬酸1.6g

H2O2（30%）0.3ml

dH2O 至500ml

底物显色液B液（避光保存）：

EDTA-Na 0.2g

柠檬酸0.95g

甘油50ml

TMB(四甲基联苯胺) （用DMSO溶解为10mg/ml后在加）0.2g dH2O 至500ml