Hoechest 33258 染色说明
hoechst33258染色原理
hoechst33258染色原理Hoechst 33258染色原理及其应用一、引言Hoechst 33258是一种广泛应用于细胞生物学和分子生物学研究中的DNA染色剂。
它能够与DNA结合形成荧光复合物，通过荧光显微镜观察，可以对细胞核进行定位和分析。
本文将介绍Hoechst 33258染色原理及其应用。
二、Hoechst 33258染色原理Hoechst 33258是一种荧光染料，其化学结构中含有两个吡啶环和一个三嗪环。
该染料可以通过静电作用与DNA结合，形成稳定的染色复合物。
Hoechst 33258与DNA的结合是通过静电相互作用和氢键形成的。
静电相互作用是指Hoechst 33258的阳离子部分与DNA 的阴离子部分之间的吸引力。
氢键是指Hoechst 33258与DNA之间氢键的形成，通过吡啶环与DNA中的腺嘌呤碱基之间的氢键相互作用。
三、Hoechst 33258染色的步骤Hoechst 33258染色一般包括以下几个步骤：1. 细胞固定：将待染色的细胞进行固定，常用的方法有甲醛固定、乙醛固定等。
2. 细胞透化：使用适当的透化剂，如Triton X-100等，使细胞膜通透。
3. Hoechst 33258染色：将Hoechst 33258溶液加入到细胞中，使其与DNA结合。
4. 荧光显微镜观察：使用荧光显微镜观察染色结果，Hoechst 33258与DNA结合后产生蓝色荧光。
四、Hoechst 33258染色的应用1. 染色体分析：Hoechst 33258可以用于染色体的分析，通过观察染色体形态和数量的变化，可以研究染色体的结构和功能。
2. 细胞核定位：Hoechst 33258与DNA结合后产生荧光信号，可以用于细胞核的定位。
通过观察荧光信号的位置和强度变化，可以判断细胞核的形态和位置。
3. 细胞凋亡检测：细胞凋亡是一种重要的细胞死亡方式，Hoechst 33258可以用于检测细胞凋亡。
C1018%20Hoechst33258染色液
17.Zhao Y, Shen S, Guo J, Chen H, Greenblatt DY, Kleeff J, Liao Q, Chen G, Friess H, Leung PS. Mitogen-activated protein kinases and chemoresistance in pancreatic cancer cells. J Surg Res. 2006 Dec;136(2):325-35.
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5. Zhu Chunlei, Zhang Chaodong and Wang Yunjie. The study of apoptosis induced by methylene blue (MB) on C6 cell and MB enhances BCNU therapy of experimental rat C6 glioma. Zhongliu. 2004;24(1): 21-24.
Hoechst33258 荧光染色法
Hoechst33258 荧光染色法【试剂盒不同，固定染色时间不同。
】
①人肝癌细胞HepG2经常规传代培养至对数期，弃去旧培养液，用0.25%胰蛋白酶溶液消化后制成单细胞悬液，调整细胞密度为1× 106 /ml，接种于6孔培养板中。
置于37°C、5%CO2 恒温细胞培养箱中培养24h后，观察细胞贴壁情况。
②待贴壁细胞密度达到80%后，弃去培养液，用PBS小心冲洗细胞两遍，加入不同浓度的人参皂苷转化物溶液200μl，继续培养24h。
③24h后消化收集细胞，1000r/min离心5min，弃去上清液；用PBS重悬细胞，1000r/min离心洗涤2 次；
④第二次离心洗涤后留少许上清，用微量加样器吸取细胞在洁净载玻片上涂片，室温自然干燥；随即使用甲醇∶冰醋酸(3∶1)固定液固定15 min；
⑤晾干后于暗处用Hoechst 33258 染色工作液(10mg/l)避光染色10 min后用双蒸
水冲洗5min，抗淬灭封片液封片；
⑥置于激光共聚焦显微镜下，激发波长350nm，发射波长460nm，观察细胞凋亡情况并拍照。
①人肝癌细胞HepG2经常规传代培养至对数期，弃去旧培养液，用0.25%胰蛋白酶溶液消化后制成单细胞悬液，调整细胞密度为5×105/ml，接种于6孔培养板中。
置于37℃、5%CO2 恒温细胞培养箱中培养24h后，观察细胞贴壁情况。
②待贴壁细胞密度达到80%后，弃去培养液，用PBS小心冲洗细胞两遍，一孔加入含10%胎牛血清的完全培养液，其余各孔分别加入高、中、低3个浓度的人参皂苷转化物溶液与顺铂溶液200μl，继续培养48h。
③倒置显微镜下观察各组细胞生长情况和形态变化。
Hoechst 染色
本人收集的激光共聚焦常见荧光染料染色方法zuohy(2008-09-19 17:33:43)一、Hoechst 33258染色1、试剂盒组成固定液 50 mlHoechst 33258染色液 50 ml抗荧光淬灭封片液 5 ml说明书 1 份保存条件：4℃保存，Hoechst 33258染色液需4℃避光保存。
本试剂盒自订购之日起六个月内有效。
2、注意事项：需荧光显微镜或激光共聚焦显微镜。
需PBS或0.9%NaCl溶液。
需盖玻片与载玻片。
荧光物质均易发生淬灭，染色后的样品宜避光保存。
在使用抗淬灭封片液的情况下可以减缓淬灭，但仍宜尽量避光。
3、使用说明：1）贴壁细胞A. 取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用细胞培养级PBS或0.9%NaCl等溶液洗涤三遍，再用细胞培养液洗涤一遍。
将盖玻片置于六孔板内，种入细胞培养过夜，使约为50%-80%满。
B. 刺激细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入0.5ml固定液，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。
C. 去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。
洗涤时宜用摇床，或手动晃动数次。
D. 加入0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分钟。
也宜用摇床，或手动晃动数次。
E. 用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。
F. 滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，尽量避免气泡。
使细胞接触封片液，切勿弄反。
G. 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。
激发波长在350nm左右，发射波长在460nm左右，详细图谱请参考下图。
2）悬浮细胞A. 离心收集细胞样品于1.5ml离心管内，加入0.5ml固定液，缓缓悬起细胞，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。
B. 离心去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。
洗涤期间手动晃动。
C. 最后一次离心后吸去大部分液体保留约50ml液体，再缓缓悬起细胞，滴加至载玻片上，尽量使细胞分布均匀。
常见细胞核荧光染料
细胞核荧光染料（PI DAPI Hoechst33342）Hoechest 33258 是膜透性的,因此在活细胞时候能轻松进入;DAPI是半透性的,有选择性的进入.因此Hoechest 33258 一般用来染活细胞,可以长驱直入;DAPI一般是染固定细胞.2、两者都可以用紫外看，参见以下的激发发射波长Hoechst 33258的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm；Hoechst 33258和双链DNA结合后，最大激发波长为352nm，最大发射波长为461nm。
DAPI的最大激发波长为340nm，最大发射波长为488nm；DAPI和双链DNA结合后，最大激发波长为364nm，最大发射波长为454nm。
Hoechst 33342/PI双染色法1．悬浮生长的细胞在培养状态下加入Heochst 33342，终浓度为1μg/ml；帖壁生长的细胞用含有0.02％EDTA的0.25％胰蛋白酶消化成单细胞悬液，离心，弃上清，用1ml全培养液重悬细胞，加入Heochst 33342，终浓度为1μg/ml，37℃孵育7～10min。
2．4℃500～1000r/min离心弃去染液。
3．加入1.0ml PI染液，4℃避光染色15min。
??碘化丙啶染色???? 1．原理? 碘化丙啶(propidium iodide，PI)不能穿人完整的活细胞膜中，即正常细胞和凋亡细胞在不固定的情况下对PI拒染，而坏死细胞由于失去膜的完整性，PI可进入细胞内与DNA结合，根据此特点，使用PI染色可鉴别死细胞。
如果对活细胞染色必须在染色前进行固定，以增加细胞膜对染料的通透性。
???? 2．溶液配制? 使用0．01mol／LPBS(pH 7．4)配制终浓度为0．5mg／ml的PI工作液。
???? 3．染色程序??? (1)单层细胞培养标本经预冷70％乙醇固定1小时，4℃；??? (2)0．01mol／LPBS(pH 7．4)冲洗；??? (3)沥干后加入PI工作液，室温孵育15分钟；??? (4)冲洗后封片。
Hoechst33258染色液
Hoechst 33258染色液简介：Hoechst 33258也称bisBenzimide H 33258或HOE 33258，分子式为C 25H 24N 6O · 3HCl 。
Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低，常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。
Hoechst 33258也用于普通的细胞核染色、DNA 染色。
Leagene Hoechst 33258染色液可直接用于固定细胞或组织的细胞核染色，也可直接用于活细胞或组织的细胞核染色。
组成：操作步骤(仅供参考)：(一)固定的组织细胞染色1、对于细胞或组织样品，固定后冲洗去除固定剂。
如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst 33258染色，如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的Hoechst 33258染色。
2、室温放置，轻轻吸除Hoechst 33258染色液。
4、用无菌的PBS 或生理盐水清洗2～3次。
5、直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。
(二)活细胞染色1、取96、24、6孔板培养细胞至合适状态，按96孔板加入100μl 、24孔板加入500μl 、6孔板加入1ml 的比例，加入适当的Hoechst 33258染色液，染液必须充分覆盖细胞。
2、在适宜于细胞培养的条件下培养。
3、轻轻吸除Hoechst 33258染色液。
4、用无菌的PBS 或生理盐水清洗2～3次。
5、进行荧光检测。
注意事项：1、 Hoechst 33258染色液的浓度适用于大多数常规染色的需要。
2、 荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽快检测。
活细胞或组织染色后宜立即观察。
3、 为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。
编号 名称 DA0010 Storage Hoechst 33258 Staining Solution 10ml -20℃ 避光 使用说明书1份4、避免反复冻融，否则容易失效。
hoechst33258染色原理
hoechst33258染色原理Hoechst 33258染色原理Hoechst 33258是一种广泛应用于细胞染色的荧光染料，其染色原理基于其特殊的荧光性质。
本文将介绍Hoechst 33258染色的原理以及其在生物学研究中的应用。
Hoechst 33258是一种DNA染料，可以通过与DNA的特异性结合来染色细胞核。
其结构中含有多个芳香环，并且具有两个亲水性基团。
这些特征使得Hoechst 33258能够与DNA的碱基发生作用，并形成稳定的染色复合物。
Hoechst 33258的染色原理可以分为两个步骤：细胞透过性和DNA结合。
Hoechst 33258可以通过细胞膜透过性进入细胞内。
细胞膜是由脂质双层组成的，具有一定的透过性，特别是对于小分子量的化合物。
Hoechst 33258具有较小的分子量和亲水性基团，因此可以通过细胞膜进入细胞。
Hoechst 33258与DNA的碱基发生作用，形成稳定的染色复合物。
DNA是由脱氧核苷酸组成的双链分子，在细胞核中起着储存和传递遗传信息的作用。
Hoechst 33258中的芳香环能够与DNA的碱基发生π-π堆积作用，特别是与腺嘌呤（A）和胸腺嘧啶（T）发生较强的结合。
这种结合使得Hoechst 33258能够选择性地染色细胞核，而不影响其他细胞结构。
Hoechst 33258的染色特点使其成为生物学研究中广泛应用的染料之一。
通过Hoechst 33258染色，可以直观地观察细胞核的形态和数量变化，进而研究细胞增殖、凋亡和分化等生物学过程。
此外，Hoechst 33258还可以用于检测DNA的含量和DNA损伤，以及细胞周期的研究。
在实验中，Hoechst 33258的使用方法相对简单。
首先，将Hoechst 33258溶解在适当的溶液中，再将其加入含有待染细胞的培养基中。
随后，将细胞与Hoechst 33258溶液共孵育一段时间，使其充分染色。
最后，使用荧光显微镜观察细胞，并通过荧光信号的强度和分布来分析细胞核的状态。
荧光,吉姆萨染色
用品： 培养肺癌细胞(95D) 荧光染料Hoechst33258 PBS (无Ca++ 、 Mg++)，PH 7.2 4%福尔马林、PBS配 荧光显微镜
步骤 1.单层培养细胞，用PBS洗2次； 2. 4%福尔马林固定10分钟后；用PBS洗1次 3.以5~10ug/mI Hoechst33258染色5~10分钟 水冲洗 4.荧光显微镜观察。
缓冲液的配置:Ⅰ 1/15mol KH2PO4 Ⅱ 1/15mol Na2HPO4 Ⅰ:Ⅱ=4:6 pH=6.9
染色液配置:1份原液+9份缓冲液
步骤：
1.单层培养细胞，PBS洗二次； 2.甲醇固定 10分钟; 3. 用滴管将配好的染色液布满整孔; 4.染10分钟，用自来水冲去染液； 5.显微镜计数，统计克隆形成率。
结果 凋亡细胞核呈强亮的兰色荧光及明显核形态，
正常细胞仅呈弱荧光，死细胞不被Hoechst332 染色。
细胞胞核Hoechst33258荧光染色
正常细胞
凋亡细胞
克隆形成率计数
Giemas染色法
适用细胞染色和染色体染色
用品：
原液的配置:
Giemsa 甘油
甲醇
0.25g 2 5ml 25ml
Hale Waihona Puke 汇报结束谢谢大家! 请各位批评指正
hoechest 染色
Hoechst是一种膜通透性的荧光染料，故正常细胞和中早期调亡细胞均可被Hoechst着色，但是正常细胞核Hoechst染色的形态呈圆形，淡蓝色，内有较深的蓝色颗粒；而调亡细胞的细胞核由于浓集而呈亮蓝色，或核呈分叶，碎片状，边集。
常用Hoechst33258和Hoechst33342，前者渗透性不如后者好，多用于活细胞染色，而后者活细胞和死细胞均可。
Hoechst33342 能透过胞膜完整的细胞,嵌入细胞核DNA ,使之发出明亮的蓝色荧光。
凋亡的细胞核染色增强,荧光更为明亮,呈圆状或固缩状、团块状结构。
非凋亡细胞核呈现荧光深浅不一的结构样特征。
二者形态迥然相异,很易判别。
Hoechst 染色方法：1. 贴壁细胞A. 取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用细胞培养级PBS或0.9%NaCl等洗涤三遍，再用细胞培养液洗涤一遍。
将盖玻片置于六孔板内，种入细胞培养过夜，使约为50%-80%满。
B. 刺激细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入固定液，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。
C. 去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，吸尽液体。
洗涤时宜用摇床，或手动晃动数次。
D. 加入终浓度为10μg/ml的Hoechst染色液，染色5分钟。
也宜用摇床，或手动晃动数次。
E. 用PBS或0.9%NaCl洗两遍。
F. 将贴有细胞的盖玻片盖于载玻片上，尽量避免气泡。
切勿弄反。
G. 荧光显微镜或激光共聚焦显微镜检测。
2. 悬浮细胞A. 离心收集细胞样品于1.5ml离心管内，加入固定液，缓缓悬起细胞，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。
B. 离心去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。
C. 最后一次离心后吸去大部分液体保留约50μl液体，再缓缓悬起细胞，滴加至载玻片上，尽量使细胞分布均匀。
D. 稍晾干，使细胞贴在载玻片上不易随液体流动。
E. 均匀滴加Hoechst染色液，染色5分钟。
荧光显微镜检测细胞凋亡
实验报告五（2015.5.27）荧光显微镜检测细胞凋亡（Hoechst 33258 染色）姓名：王亚斌班级：生物技术12（1）学号：2012332860026实验五：荧光显微镜检测细胞凋亡（Hoechst 33258 染色)一实验目的：1 了解荧光显微镜的构造并且学会使用荧光显微镜；2 通过荧光显微镜学会分析数据图片。
二实验原理：Hoechst 33258，分子式为C25H24N6O·3HCl，分子量为533.88, 水溶解度可达10mg/ml。
Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。
Hoechst 33258为特异性DNA染料，与 A-T 键结合，这种染料对死细胞或经70%冷乙醇固定的细胞可立即染色。
而活细胞的着色是渐进性的，在10min内可达饱和。
在荧光显微镜下，活细胞核呈弥散均匀荧光，出现细胞凋亡时，细胞核或细胞质内可见浓染致密的颗粒块状荧光。
三实验器材：1ml移液枪及枪头，荧光显微镜，培养贴壁细胞，PBS缓冲液，Hoechst 33258 染色液六孔板，培养箱四实验步骤和方法：1：加入适当量Hoechst 33258 染色液，注意必须充分覆盖住待染色样品。
通常六孔板加1ml/孔，96孔板加100μl/孔。
2：放入37°C培养箱中培养30min。
3：小心吸去染色液，用1ml PBS洗涤2-3次。
4 ：置于荧光显微镜下，选用340nm的激发光观察：在荧光显微镜下，活细胞呈弥散均匀荧光，凋亡细胞核或细胞质内可见浓染致密的颗粒块状荧光。
如果见到3个或3个以上的DNA荧光碎片被认为是凋亡细胞。
五实验结果防己诺林碱浓度为0uM 防己诺林碱浓度为2uM防己诺林碱浓度为2uM防己诺林碱浓度为4uM防己诺林碱浓度为6uM防己诺林碱浓度为8uM防己诺林碱浓度为10uM在上图可以看出，在防己诺林碱浓度为2um/ml的时候出现了染致密的颗粒块状荧光，也就是说在这个浓度下，细胞开始放生了凋亡，而且，在不断提高防己诺林碱浓度的情况下，视野里的凋亡细胞开始变多了，而且凋亡细胞数目要多于活细胞数目。
(word完整版)HOCHEST 染色的讨论
Hoechst染色的讨论Hoechst染色的具体步骤caspase8428:我看到资料上说，荧光染色的时候可以用DAB与荧光物质反应生成沉淀。
那么，Hoechst染色时，什么时候加DAB,浓度是多少，用什么稀释,最后怎么来终止反应？是不是还要用抗退色固片介质来封片? sunandsuny：Hoechst染色时无需用DAB来显色，它直接结合细胞的DNA ,经过紫外光激发后发出蓝色荧光。
如果你是用来染培养的细胞的话，可以参考下面的步骤（切片雷同）:细胞涂片：甲醇：冰乙酸（3:1）固定15分钟，PBS洗一次，加Hoechest 33258荧光染料37℃孵育15~30分钟，于荧光显微镜下观察。
凋亡细胞由于染色质固缩，细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染.操作比较容易的。
altbenair:想做肝癌细胞 hepG2。
看过很多帖子还有文献上的方法，但是都不太具体大都是这样:固定（福尔马林4%），pbs洗三遍，加hoechst孵育1H,将细胞悬液滴于载玻片上荧光显微镜检测.细胞悬液怎么做？我要做贴壁细胞用胰酶消化?drake015:。
1．贴壁细胞，让细胞自己在盖玻片上爬片。
操作如下：A. 取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用细胞培养PBS或0。
9％NaCl等溶液洗涤三遍，再用细胞培养液洗涤一遍。
将盖玻片置于六孔板内，种入细胞培养过夜,使约为50％—80％满。
B. 刺激细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入0。
5ml固定液，固定10分钟或更长时间(可4℃过夜）。
C。
去固定液，用PBS或0.9％NaCl洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。
洗涤时宜用摇床，或手动晃动数次。
D. 加入0。
5ml Hoechst 33258染色液，染色5分钟.也宜用摇床,或手动晃动数次。
E. 用PBS或0。
9%NaCl洗两遍，每次3分钟.F。
滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上,盖上贴有细胞的盖玻片，尽量避免气泡。
使细胞接触封片液，切勿弄反。
Hoechst 33258染色 protocol
Hoechst 33258染色一、原理Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的非嵌入性蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。
它们在细胞DNA聚AT富集区域的小沟处与DNA结合。
活细胞或固定细胞均可从低浓度溶液中摄取该染料，从而使细胞核着色，故又把此类染料称为DNA探针。
在荧光显微镜紫外光激发时，Hoechst-DNA发出亮蓝色荧光。
Hoechst 33258染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察细胞核形态或流式细胞仪检测，也可以用于常规的DNA染色。
用于细胞核染色时，推荐的Hoechst 33258工作浓度为0.5-10μg/ml。
二、操作步骤1. 凋亡细胞活染：⑴接种适量细胞于培养板中，诱导细胞凋亡后，吸尽培养板中的培养基，PBS漂洗5分钟；⑵加入Hoechest 33258荧光染料工作液，室温或37℃孵育15~30分钟；⑶PBS洗两遍，每次2~3分钟（选做步骤）；⑷荧光显微镜下观察。
2. 细胞固定染色：⑴接种适量细胞于培养板中，细胞诱导凋亡后，吸尽培养基，PBS漂洗5分钟；⑵甲醇：冰乙酸（3：1）固定15分钟，PBS漂洗5分钟；⑶加入Hoechest 33258（荧光染料工作液，室温或37℃孵育15~30分钟；⑷PBS洗两遍，每次2~3分钟（选做步骤）；⑸荧光显微镜下观察。
三、结果判断：该染料为DNA的特异性荧光探针，细胞核呈亮蓝色荧光1．形态学观察：凋亡细胞由于染色质固缩，细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。
细胞凋亡过程中细胞核染色质的形态学改变分为三期：Ⅰ期的细胞核呈波纹状（rippled）或呈折缝样（creased），部分染色质出现浓缩状态；Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化；Ⅱb期的细胞核裂解为碎块，产生凋亡小体。
2、凋亡率计算：计数至少10个含染色10-50细胞视野的细胞，细胞总数不少于300个。
凋亡细胞数凋亡率（%）=总细胞数四、注意事项：⑴Hoechst 33258对人体有害，请戴一次性手套操作。
hoechst 荧光染料
Hoechst染料：Hoechst 33258、Hoechst 33342 和Hoechst 34580编号：Hoechst 染料是用于染色DNA 的蓝色荧光染料家族的一部分。
这些双苯亚胺最初是由Hoechst AG 开发的，该公司对其所有化合物进行了编号，比如染料Hoechst 33342 是该公司生产的第33342 种化合物。
激发/发射光谱：有三种相关的Hoechst 染料：Hoechst 33258、Hoechst 33342 和Hoechst 34580。
三种染料都可被大约350 nm 的紫外光激发，并且都在461 nm 的最大发射波长附近发出蓝色/靛色荧光。
染料Hoechst 33258 和Hoechst 33342 是最常用的染料，激发/发射光谱也比较接近。
未结合染料在510-540 nm 范围内具有最大荧光发射。
差异：Hoechst 33342 的额外乙基使其更具亲脂性，渗透膜的能力比Hoechst 33258 更强。
可以向Hoechst 33258 中添加氯乙基，溴乙基，氯丙基等基团制备一系列Hoechst 33258 的氨基甲酸酯衍生物作为潜在的抗癌药。
溶解和储存：Hoechst染料可溶于水和有机溶剂，如二甲基甲酰胺或二甲基亚砜。
浓度最高可达10 mg/mL 。
避光时，水溶液在2-6°C 下可稳定至少六个月。
对于长期储存，溶液需在≤-20 °C 下冷冻。
工作液：使用PBS 或者其他合适缓冲液将母液稀释成0.5-10 μg/mL 工作液。
工作液浓度可根据自身实验需要进行调整。
染料与双链DNA 的小沟结合，优先选择富含腺嘌呤和胸腺嘧啶的序列。
尽管染料可以与所有核酸结合，但富含AT 的双链DNA 链可显着增强荧光。
Hoechst 染料具有细胞渗透性，可以与活细胞或固定细胞中的DNA 结合，通常用作另一种核酸染色剂（DAPI）的替代物。
因此，这些着色通常被称为超活体，这意味着细胞在这些化合物的处理下存活下来。
Hoechst_33258荧光染色观察药物诱导细胞凋亡
SOP13广东药学院药科学院新药筛选与药效评价中心Standard Operation Protocol（SOP）●技术方法名称:Hoechst33258荧光染色观察药物诱导细胞凋亡●基本原理:Hoechst 33258，也称bisBenzimide H33258或HOE33258。
分子式为C25H24N6O·3HCl，分子量为533.88，CAS Number 23491-45-4。
Hoechst 33258溶于水，溶解度可达10mg/ml。
Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。
用于细胞核染色时，推荐的Hoechst 33258工作浓度为0.5-10μg/ml。
Hoechst 33258 为特异性DNA 染料，与 A-T 键结合，这种染料对死细胞或经 70% 冷乙醇固定的细胞可立即染色。
而活细胞的着色是渐进性的，在 10min 内可达饱和。
在荧光显微镜下，活细胞核呈弥散均匀荧光，出现细胞凋亡时，细胞核或细胞质内可见浓染致密的颗粒块状荧光。
Hoechst 33258染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。
Hoechst 33258也常用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。
Hoechst 33258的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm；Hoechst 33258和双链DNA结合后，最大激发波长为352nm，最大发射波长为461nm。
●试剂与器材1. Hoechst 33258 贮存液：称取 Hoechst 33258 试剂1mg ，用 20ml 蒸馏水溶解后，滤过，4℃ 避光保存。
用时蒸馏水 10 倍稀释成染色液。
2. 封片液（ pH5.5 ）： 20mmol/L 柠檬酸； 50mmol/L 磷酸氢二钠； 50% 甘油，3. 细胞固定液 4%多聚甲醛，现配。
操作步骤1. 将贴壁细胞以5×105 /ml或其他适宜的密度接种于用35mm培养皿或其他培养器具中，35mm培养皿每孔1.5- 2ml，37℃ 、 5%CO 2孵箱中培养至细胞贴壁，加入实验药物，继续培养过夜。
HOCHEST 染色的讨论
Hoechst染色的讨论Hoechst染色的具体步骤caspase8428：我看到资料上说，荧光染色的时候可以用DAB与荧光物质反应生成沉淀。
那么，Hoechst染色时，什么时候加DAB，浓度是多少，用什么稀释，最后怎么来终止反应？是不是还要用抗退色固片介质来封片？sunandsuny：Hoechst染色时无需用DAB来显色，它直接结合细胞的DNA ，经过紫外光激发后发出蓝色荧光。
如果你是用来染培养的细胞的话，可以参考下面的步骤（切片雷同）：细胞涂片：甲醇：冰乙酸（3：1）固定15分钟，PBS洗一次，加Hoechest 33258荧光染料37℃孵育15~30分钟，于荧光显微镜下观察。
凋亡细胞由于染色质固缩，细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。
操作比较容易的。
altbenair:想做肝癌细胞hepG2。
看过很多帖子还有文献上的方法，但是都不太具体大都是这样：固定（福尔马林4%），pbs洗三遍，加hoechst孵育1H，将细胞悬液滴于载玻片上荧光显微镜检测。
细胞悬液怎么做？我要做贴壁细胞用胰酶消化？drake015: .1．贴壁细胞，让细胞自己在盖玻片上爬片。
操作如下：A. 取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用细胞培养PBS 或0.9%NaCl等溶液洗涤三遍，再用细胞培养液洗涤一遍。
将盖玻片置于六孔板内，种入细胞培养过夜，使约为50%-80%满。
B. 刺激细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入0.5ml固定液，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。
C. 去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。
洗涤时宜用摇床，或手动晃动数次。
D. 加入0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分钟。
也宜用摇床，或手动晃动数次。
E. 用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。
F. 滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，尽量避免气泡。
Hoechst33258染液
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电话：021-33921235 邮箱：bestbio@ 传真：021-60853530
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
MTS 细胞增殖与毒性检测试剂盒 Hoechst33342/PI 双染试剂盒 DAPI 染色试剂盒 细胞存活率检测试剂盒
的细胞核呈弥散均匀蓝色荧光，凋亡细胞核或细胞质内可见浓染致密的颗粒块状蓝色荧光， 颜色有些发白。如果见到 3 个或 3 个以上的 DNA 荧光碎片被认为是凋亡细胞。
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产品说明书
Hoechst33258 染色液
产品组成：
产品编号 规格
Hoechst 33258 染色液
BB-4411 100 -200 assays
1 ml
储存条件： 染液 2-8℃避光保存。 长期保存-20℃避光保存。
有效期： 一年。
注意事项： ● 本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。 ● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管 底，避免开盖时试剂损失。 ● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。 ● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。 ● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清 洗并彻底清除残留清洁剂。 ● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。
● 流式细胞仪或荧光显微镜
产品说明书
使用方法：
使用注意事项： ● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液
Hoechest 33258 染色说明
Hoechst 33258说明书Hoechst 33258CAS#：23491-45-423491-45-423491-45-423491-45-423491-45-4化学名：2’-(4-Hydroxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)-2,5’-bi-1H-benzimidazole, trih ydrochloride别名：Hoechst 33258，bisBenzimide H 33258，HOE 33258bisBenzimide H 33258或HOE 33258分子式：C25H24N6O · 3HCl分子量：533.88性质：1. 外观：黄色粉末2. 纯度：≥95%（HPLC）3. 产品描述：Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。
Hoechst 33258染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。
也常用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。
Hoechst 33258的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm。
Hoechst 33258和双链DNA结合后，最大激发波长为352nm，最大发射波长为461nm。
Hoechst 33258溶于水，溶解度可达10mg/mL。
4. 染色程序：（1）用PBS或合适的缓冲液制备10～50µM Hoechst33258染料。
（2）将1/10细胞培养基体积的Hoechst染料溶液加入细胞培养物中（可以用1/10浓度的Hoechst染料缓冲液代替培养基）。
（3）在37℃培养细胞10～20分钟。
（4）用PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。
（5）用带有352nm激发波长，461nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察细胞。
Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。
Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。
Hoechst 33258染色
Hoechst 33258染色固定液50 mlHoechst 33258染色液50 ml抗荧光淬灭封片液 5 ml说明书1 份保存条件：4℃保存，Hoechst 33258染色液需4℃避光保存。
本试剂盒自订购之日起六个月内有效。
注意事项：Ø 需荧光显微镜或激光共聚焦显微镜。
Ø 需PBS或0.9%NaCl溶液。
Ø 需盖玻片与载玻片。
Ø 荧光物质均易发生淬灭，染色后的样品宜避光保存。
Ø 在使用抗淬灭封片液的情况下可以减缓淬灭，但仍宜尽量避光。
使用说明：1. 贴壁细胞A. 取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用细胞培养级PBS或0.9%NaCl等溶液洗涤三遍，再用细胞培养液洗涤一遍。
将盖玻片置于六孔板内，种入细胞培养过夜，使约为50%-80%满。
B. 刺激细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入0.5ml固定液，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。
C. 去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。
洗涤时宜用摇床，或手动晃动数次。
D. 加入0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分钟。
也宜用摇床，或手动晃动数次。
E. 用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。
F. 滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，尽量避免气泡。
使细胞接触封片液，切勿弄反。
G. 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。
激发波长在350nm左右，发射波长在460nm左右，详细图谱请参考下图。
2. 悬浮细胞A. 离心收集细胞样品于1.5ml离心管内，加入0.5ml固定液，缓缓悬起细胞，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。
B. 离心去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。
洗涤期间手动晃动。
C. 最后一次离心后吸去大部分液体保留约50ml液体，再缓缓悬起细胞，滴加至载玻片上，尽量使细胞分布均匀。
D. 稍晾干，使细胞贴在载玻片上不易随液体流动。
HOCHEST_染色的讨论
Hoechst染色的讨论Hoechst染色的具体步骤caspase8428：我看到资料上说，荧光染色的时候可以用DAB与荧光物质反应生成沉淀。
那么，Hoechst染色时，什么时候加DAB，浓度是多少，用什么稀释，最后怎么来终止反应？是不是还要用抗退色固片介质来封片？sunandsuny：Hoechst染色时无需用DAB来显色，它直接结合细胞的DNA ，经过紫外光激发后发出蓝色荧光。
如果你是用来染培养的细胞的话，可以参考下面的步骤（切片雷同）：细胞涂片：甲醇：冰乙酸（3：1）固定15分钟，PBS洗一次，加Hoechest 33258荧光染料37℃孵育15~30分钟，于荧光显微镜下观察。
凋亡细胞由于染色质固缩，细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。
操作比较容易的。
altbenair:想做肝癌细胞hepG2。
看过很多帖子还有文献上的方法，但是都不太具体大都是这样：固定（福尔马林4%），pbs洗三遍，加hoechst孵育1H，将细胞悬液滴于载玻片上荧光显微镜检测。
细胞悬液怎么做？我要做贴壁细胞用胰酶消化？drake015: .1．贴壁细胞，让细胞自己在盖玻片上爬片。
操作如下：A. 取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用细胞培养PBS 或0.9%NaCl等溶液洗涤三遍，再用细胞培养液洗涤一遍。
将盖玻片置于六孔板内，种入细胞培养过夜，使约为50%-80%满。
B. 刺激细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入0.5ml固定液，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。
C. 去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。
洗涤时宜用摇床，或手动晃动数次。
D. 加入0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分钟。
也宜用摇床，或手动晃动数次。
E. 用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。
F. 滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，尽量避免气泡。
HOCHEST_染色
H o e c h s t染色的讨论H o e c h s t染色的具体步骤caspase8428：我看到资料上说，荧光染色的时候可以用DAB与荧光物质反应生成沉淀。
那么，Hoechst染色时，什么时候加DAB，浓度是多少，用什么稀释，最后怎么来终止反应？是不是还要用抗退色固片介质来封片？sunandsuny：Hoechst染色时无需用DAB来显色，它直接结合细胞的DNA ，经过紫外光激发后发出蓝色荧光。
如果你是用来染培养的细胞的话，可以参考下面的步骤（切片雷同）：细胞涂片：甲醇：冰乙酸（3：1）固定15分钟，PBS洗一次，加Hoechest 33258荧光染料37℃孵育15~30分钟，于荧光显微镜下观察。
凋亡细胞由于染色质固缩，细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。
操作比较容易的。
altbenair:想做肝癌细胞hepG2。
看过很多帖子还有文献上的方法，但是都不太具体大都是这样：固定（福尔马林4%），pbs洗三遍，加hoechst孵育1H，将细胞悬液滴于载玻片上荧光显微镜检测。
细胞悬液怎么做？我要做贴壁细胞用胰酶消化？drake015: .1．贴壁细胞，让细胞自己在盖玻片上爬片。
操作如下：A. 取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用细胞培养PBS 或0.9%NaCl等溶液洗涤三遍，再用细胞培养液洗涤一遍。
将盖玻片置于六孔板内，种入细胞培养过夜，使约为50%-80%满。
B. 刺激细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入0.5ml固定液，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。
C. 去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。
洗涤时宜用摇床，或手动晃动数次。
D. 加入0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分钟。
也宜用摇床，或手动晃动数次。
E. 用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。
F. 滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，尽量避免气泡。
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Hoechst 33258说明书
Hoechst 33258
CAS#：23491-45-423491-45-423491-45-423491-45-423491-45-4
化学名：
2’-(4-Hydroxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)-2,5’-bi-1H-benzimidazole, trih ydrochloride
别名：Hoechst 33258，bisBenzimide H 33258，HOE 33258bisBenzimide H 33258或HOE 33258
分子式：C25H24N6O · 3HCl
分子量：533.88
性质：
1. 外观：黄色粉末
2. 纯度：≥95%（HPLC）
3. 产品描述：
Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。
Hoechst 33258染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。
也常用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。
Hoechst 33258的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm。
Hoechst 33258和双链DNA结合后，最大激发波长为352nm，最大发射波长为461nm。
Hoechst 33258溶于水，溶解度可达10mg/mL。
4. 染色程序：
（1）用PBS或合适的缓冲液制备10～50µM Hoechst33258染料。
（2）将1/10细胞培养基体积的Hoechst染料溶液加入细胞培养物中（可以用1/10浓度的Hoechst染料缓冲液代替培养基）。
（3）在37℃培养细胞10～20分钟。
（4）用PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。
（5）用带有352nm激发波长，461nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察细胞。
Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。
Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。
Hoechst 33258染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。
Hoechst 33258也常用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。
Hoechst 33258的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm；
Hoechst 33258和双链DNA结合后，最大激发波长为352nm，最大发射波长为
461nm。
Hoechst 33258溶于水，溶解度可达10mg/ml。
用于细胞核染色时，推荐的Hoechst 33258工作浓度为0.5-10μg/ml。
Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。
Hoechst 33258染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。
Hoechst 33258也常用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。
Hoechst 33258的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm；
Hoechst 33258和双链DNA结合后，最大激发波长为352nm，最大发射波长为
461nm。
Hoechst 33258溶于水，溶解度可达10mg/ml。
用于细胞核染色时，推荐的Hoechst 33258工作浓度为0.5-10μg/ml。
Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性
较低。
Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞
的毒性较低。
Hoechst 33258染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察
或流式细胞仪检测。
Hoechst 33258也常用于普通的细胞核染色，或常
规的DNA染色。
Hoechst 33258的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm；
Hoechst 33258和双链DNA结合后，最大激发波长为352nm，最大发射波长为461nm。
Hoechst 33258溶于水，溶解度可达10mg/ml。
用于细胞核染色时，推荐的Hoechst 33258工作浓度为0.5-10μg/ml。
Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性
较低。
Hoechst 33258染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察
或流式细胞仪检测。
Hoechst 33258也常用于普通的细胞核染色，或常
规的DNA染色。
Hoechst 33258的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm；
Hoechst 33258和双链DNA结合后，最大激发波长为352nm，最大发射波长为461nm。
Hoechst 33258溶于水，溶解度可达10mg/ml。
用于细胞核染色时，推荐的Hoechst 33258工作浓度为0.5-10μg/ml。
储存条件：-20℃，避光保存
注意事项：
Hoechst 33258对人体有害，请注意适当防护。
荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。
为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作注意事项：。