抗酸染色概要(1)
医学微生物学实验二抗酸染色
抗酸染色法
将革兰氏高阳性细菌中的壁 酸 与背景染色分开，常用于 诊断 结核病和防治控制。
牛乳杆菌株的用途
抗酸染色中采用牛乳杆菌株 作为阳性 细胞壁酸标准菌， 以方便实验检测。
石蜡切片
为保证切片的纵向完整和平 面整齐， 采用质较软而黏稠 的石蜡先切得到小 块，再将 其切成0.3-10微米的块。
样本采集和处理
2. 涂层均匀度较差
可能是涂层次数不够多造成。
4. 样本质量差， 细胞数太小或涂片 太薄
不能达到有效检查的目的。
实验改进及展望
改进措施
我们将加强实验技术指导、提高实验室安全防 护意识，加强实验室管理和规范操作。若实验 过程中发现异常情况，第一时间停止操作并及 时向教师报告。
进一步应用
可以将该方法拓展解放到环保、医药、食品行 业甚至其他应用领域中，为各个领域提供快速、 准确、高效的检测方法。
4. 脱色
加热固定涂片
加热条件
采用显微镜加热载玻片的方法固定涂 片，温度 不宜过高，保持载玻片不会破裂。
加热必要性
涂片制得后，用火炙置于Bunsen燃 气表面，使细菌细胞壁的脂质软化、 附于玻片 上，避免在染色过程中脱 落和变形。
脱色
脱色原理
抗酸染色中用稀硝酸脱除背景色， 使细菌时为红色或粉红色，背景为蓝色。
脱色方法
用70%的乙醇脱色涂片或用1%的酸酒 母进行脱色，然后用自来水将药液冲洗干 净，以去除 剩余的沉淀。
抗酸染色
1
染色需知
抗酸染色必须在导师指导下指导进行，
染色方法
2
操作过程必须严格遵循实验室安全规 范。
将脱色后的涂片置于第一草酸液中5-
10分钟后，绿青色背景逐渐淡化，然
抗酸染色概要(1)
夹层杯抗酸染色制片法概要一：标本的预处理：消化和离心1.将标本至于夹层杯中加消化液消化至液体清亮（2~5分钟可灭活细菌）（若是其它容器取痰的，可小心的在痰上加些许消化液，待痰不再粘附其上后转入夹层杯）（夹层杯可装液体不超过杯身三分之二）（非痰类标本亦须加适量消化液消化）。
2.将本杯置于离心机内对称平衡放稳，以4500转/分钟转速离心5分钟，弃去液体（轻快的倒掉），放在干片机内烘烤（干片机提前开启至60度）。
二：染色：初染和洗脱和复染1.加A液在60度温度下染色5分钟。
2.B液脱色（尽量将红色脱净）。
3.C液复染一分钟。
（每次弃去染色液后需以缓慢小水流沿杯壁将杯中剩余液体洗清沥干）。
（加染液液量以可覆盖膜片为适量）三：制片：取片和阅片1.将染色后的片子烘干。
2.用取片针顶起杯底纳米膜片，用镊子夹出，轻轻印干水分，用中性胶倒封于玻片上，弃去保护膜。
（水分将会影响胶水对膜片的粘附）3.阅片。
（可利用“红十字”找寻视野）四：注意事项1.膜片上的细菌的保护：本制片法的原理为通过离心沉降并烘烤将目标菌粘附在膜片上后进行染色，在操作过程中必须避免直接冲刷、液体剧烈振荡、大力印擦等而将膜上已粘附的细菌冲走，这些失误会严重影响阳性率。
2.各标本间的交叉污染：标记混淆、杯中液体互溅、液体转移等将会使结果严重不可靠。
3.脱色的程度：脱色不完全将导致膜上非抗酸菌或其它物质也呈现红色，脱色过久过重会影响抗酸杆菌所着色，二者都将影响后续镜检。
4.B液：其重要成分为酒精盐酸，易挥发，用完务必盖好盖子。
5.操作时间段的把握：请有效利用机器与时间间隔，避免标本堆积。
抗酸染色
1. 掌握抗酸染色的原理和方法 2. 掌握结核分枝杆菌痰涂片的结果报告
二、实验原理： 实验原理：
分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质， 分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，包围在 肽聚糖的外面，一般水溶性染料不易进入，所以 肽聚糖的外面，一般水溶性染料不易进入， 分枝杆菌一般不易着色且一旦染色后不易脱色， 分枝杆菌一般不易着色且一旦染色后不易脱色， 所以要经过加热和延长染色时间来促使其着色。 所以要经过加热和延长染色时间来促使其着色。 因分枝菌酸与染料结合后， 因分枝菌酸与染料结合后，很难被酸性脱色 剂脱色，故分枝杆菌又称抗酸杆菌。 剂脱色，故分枝杆菌又称抗酸杆菌。
1、涂片要充分研磨，防止细菌成团 、涂片要充分研磨， 2、涂片大小、厚度要适中 、涂片大小、 3、固定温度合适 、 4、初染加热的温度，勿沸腾 、初染加热的温度， 5、染色时间 、 6、冲洗 、
三、实验材料： 实验材料：
细菌： 细菌：结核杆菌 染液：石炭酸复红液、 盐酸酒精、 染液：石炭酸复红液、3%盐酸酒精、碱性美 盐酸酒精 兰溶液 其它：接种环、酒精灯、 其它：接种环、酒精灯、载玻片等
四、实验方法
1、细菌涂片的制备 、 1）涂片：20mm*15mm厚涂片，竹签挑取，涂2-3遍 ）涂片： 厚涂片， 厚涂片 竹签挑取， 遍 2）干燥：自然干燥，或火焰 ）干燥：自然干燥， 3）固定：火焰固定，必须 ）固定：火焰固定，
3、油镜观察 油镜观察
五、实验结果： 实验结果：
1.结核杆菌呈红色，常堆积成团，排列无序，偶 结核杆菌呈红色，常堆积成团，排列无序， 结核杆菌呈红色 呈分枝状生长。 呈分枝状生长。 2.背景及非抗酸性细菌呈兰色。 背景及非抗酸性细菌呈兰色。 背景及非抗酸性细菌呈兰色
抗酸染色原理
抗酸染色原理抗酸染色是一种常见的生物组织学技术，广泛应用于医学、生物学、动物学等领域。
它的原理是利用酸性染料与切片中的细胞组织相互作用，并通过特定的处理过程来使染料显色。
本文将介绍抗酸染色的原理、应用及技术流程等方面。
一、抗酸染色的原理抗酸染色的原理是利用酸性染料与细胞中不同的生物化学结构发生反应。
在酸性条件下，酸性染料带有负电荷，能够结合细胞质中的阳离子，如核蛋白、粘多糖等。
这些阳离子结合后，染料被固定在细胞质中，从而形成可见的色彩。
一般来说，抗酸染色会选择一些带有芳香环结构的染料，如苏木精、伊红等，它们能够与细胞核及其他结构中的核酸、蛋白质等有机物结合，从而显色效果更为明显。
二、抗酸染色的应用抗酸染色在医学、生物学及动物学等领域中有广泛应用。
其中，它在组织学领域应用最广泛。
在组织切片染色中，抗酸染色被用于显示特定的细胞和组织结构，如细胞核、细胞膜、细胞质等。
通过观察染色后的组织切片，可以更好地了解细胞内各种结构的分布和形态，进而推断细胞的生理、病理过程。
因此，在组织学研究中，抗酸染色技术是必不可少的。
除此之外，抗酸染色还可以用于检测肿瘤、感染、免疫反应等病理过程中的细胞或病原体。
比如，在肿瘤组织切片染色中，淋巴细胞和嗜酸性粒细胞的染色可以帮助诊断和分级恶性淋巴瘤。
在感染组织切片染色中，抗酸染色可以检测到结核菌和分枝杆菌等病原体。
在免疫反应研究中，抗酸染色技术也有着重要的应用价值。
三、抗酸染色技术流程抗酸染色技术流程包括以下几个步骤：1. 取得组织样本组织样本可以是活体组织、死亡组织或培养细胞等。
对于取得的组织样本，需要进行必要的处理，如切片、固定、包埋等，以便后续处理。
2. 染色在抗酸染色中，主要选择苏木精、伊红等抗酸性染料。
通常先将切片置于染液中浸泡一定时间，使染料渗入组织样本内部，然后进行洗涤，以去除多余的染料。
洗涤后，还可以进行酸性解剖和再次染色等操作，以增强显色效果。
3. 脱水、清洁与封片通过脱水、透明化和封片等步骤，可以将染色后的切片制成玻璃片，并用石蜡或树脂等物质固定切片。
实验九_抗酸染色
实验九_抗酸染色一、实验目的：1.了解酸性染料的作用原理和特点；2.掌握抗酸染色的基本操作方法；3.学会酸性染料的染色方法，掌握酸性染料的分类、特点及选择；4.通过本实验培养出精细而准确的实验技能，并能够分辨正常颜色和染色后的颜色；5.了解并掌握镜检技术在细胞观察中的应用。
二、实验原理：抗酸染色法是利用对脱水后的细胞或组织制备的切片进行染色，其染色过程遵循酸性染料彩色原理，使细胞核和染色质染上颜料。
其中具有代表性的有嗜酸性颜料伊红和剔除剂法制备的石蕊碱和石蕊素，它们的红色染料，可使细胞核、细胞质及细胞间质染色，是一种直观、精细并广泛应用的组织染色方法。
三、实验材料：1.琼脂片；2.异丙醇、95%乙醇、70%乙醇、蒸馏水；3.深蓝色对氨基苯基丙酸、酸琥珀酸、对甲氧基苯丙酸三种酸性染料；4.柠檬酸水解液、蓝酸肉汤pH7.0、苏木精、酒精碘洗液、甲苯、间苯酚溶液；5.常规玻璃器皿、巴氏杯刀、显微镜。
四、实验步骤：1.用异丙醇将琼脂片脱水，紧接着，用95%乙醇进行脱水，然后再用70%乙醇进行脱水，每步处理时间均为10分钟，脱水后的琼脂片加蒸馏水进行洗涤。
2.将某种细胞涂片放在洗涤后的琼脂片上。
样品按次序加入柠檬酸水解液不超过2滴。
在某些细胞中，应加入稍多的柠檬酸水解液，使细胞膜脆性。
然后用蒸馏水冲洗琼脂片。
3.用不同的酸性染料粘稠溶液冲洗样品，操作时要均匀涂抹并确保干燥。
4.将石蕊素/石蕊碱染色标本放入甲苯中2×3分钟、2×1分钟再放入间苯酚溶液中1×1分钟，然后离开溶液用酒精碘洗涤。
再用100%酒精冲洗落紫液中的沉淀。
5.将干燥的染色标本滴一滴蓝酸肉汤pH7.0，然后用苏木精染色1－3分钟。
洗涤、脱水、透明化。
直到涂片样品透明无色。
6.用显微镜观察染色切片。
可能需要使用适当的镜头，在细胞和细胞核旁边的区域能找到更好的颜色区分。
用高倍镜或油浸镜仔细观察。
五、实验注意事项：1.异丙醇、乙醇有毒，应戴手套，加强通风。
抗酸染色法实验报告
抗酸染色法实验报告抗酸染色法实验报告引言：细胞与组织的染色是生物学和医学研究中常用的技术手段之一。
抗酸染色法是一种常见的细胞和组织染色方法，其原理是在酸性条件下，利用染色剂与细胞或组织中的特定成分发生化学反应，从而使其显色。
本实验旨在通过抗酸染色法观察细胞和组织的结构，以及研究其功能和特性。
实验材料与方法：实验所需材料包括：细胞或组织样本、酸性染色剂、显微镜、玻璃片、显微镜载玻片、显微镜盖玻片等。
实验步骤如下：1. 准备细胞或组织样本：选择合适的细胞或组织样本，如植物叶片、动物组织切片等。
将样本切割成适当大小，并保持其新鲜。
2. 固定样本：将样本浸泡在适当的固定液中，如福尔马林或乙醛溶液中，以保持其形态和结构。
3. 抗酸处理：将固定的样本经过脱水和透明化处理后，放入抗酸剂溶液中浸泡一段时间。
抗酸剂的选择应根据实验目的和样本特性来确定。
4. 染色处理：将抗酸处理后的样本放入酸性染色剂溶液中，浸泡一定时间，使其与样本中的特定成分发生反应。
5. 清洗与固定：将染色后的样本用去离子水或适当的缓冲液进行清洗，以去除多余的染色剂。
然后，用适当的固定剂固定样本。
6. 制片与观察：将固定的样本切割成薄片，并放置在显微镜载玻片上。
然后，用显微镜盖玻片覆盖在样本上，以便观察。
实验结果与讨论：通过抗酸染色法，我们成功地染色了细胞或组织样本，并观察到了其结构和特性。
染色后的样本在显微镜下呈现出明亮的颜色，使我们能够清晰地观察到细胞和组织的细节。
在染色过程中，染色剂与样本中的特定成分发生反应，从而使其显色。
不同的染色剂对不同的细胞和组织成分有选择性，因此可以通过不同的染色剂来观察不同的结构和功能。
例如，我们可以使用伊红染色剂来染色细胞核，使其呈现红色。
细胞核是细胞的控制中心，其中包含着遗传物质DNA。
通过观察细胞核的形态和数量，我们可以了解细胞的增殖能力和功能状态。
此外，我们还可以使用嗜酸性染色剂来染色细胞质中的酸性成分，如染色体和核糖体。
实验九-抗酸染色教程文件
实验九-抗酸染色教程文件一、实验目的：通过本实验，掌握抗酸染色技术的概念、方法、原理和操作步骤，巩固和提高学生的实验操作和技能，培养学生认真细致的实验态度，增强实验室安全意识。
二、实验原理：抗酸染色技术是现代生物学和医学科学的基础之一，是经典的细胞学染色技术之一。
抗酸染色技术是利用酸及其盐类的特殊作用，使染色剂能与细胞核染色质、特定细胞器和其他细胞成分结合，从而使其在显微镜下形成自然而美观的图像。
抗酸染色技术是病理学诊断中常用的技术之一，用于检测病理细胞变异和细胞形态学及分子生物学研究中。
三、实验材料及方法：1、实验所需试剂：1）透明丙酮（Xylene）；2）96%乙醇；3）50%酸性酒精（HCl in 95% ethanol）；4）1%枚举胶液（Mayer's hematoxylin）；5）1%酸性酒红溶液（0.05% acid fuchsin in distilled water）；8）85%甲醛；1）显微镜；2）蜡刀；3）染色架；4）玻片；5）移液器；6）玻璃棒。
3、实验步骤：1）石蜡切片的脱脂和再脱蜡：a.将石蜡切片放入透明丙酮中，浸泡10~15分钟；b.将切片转移到96%乙醇溶液中，浸泡2~3分钟；d.将切片放入50%酸性酒精中浸泡2~3分钟，用水漂洗3~4次，每次时间30~60秒；2）抗酸染色：b.用水漂洗3~4次，每次时间30~60秒，直至溶液清澈无色；g.将切片置于盛有1:1比例的绝对酒精和85%甲醛中，浸泡5~10分钟，直至细胞没有氧化痕迹，将切片转移到正确的显微镜载玻片上并拍照。
四、实验结果：经过抗酸染色后，在显微镜下，细胞核染色质和细胞质中的特定结构都能显现出来，从而可以形成美观而自然的图像。
通过比较观察和分析不同样本组织的抗酸染色图像，可以了解细胞结构和组分的形态学变化，进而研究细胞功能和病理生理。
五、注意事项：1、操作时应注意安全，化学试剂避免直接接触皮肤和吸入粉尘，切片时应戴手套；2、试剂的浓度和配制方式必须严格按照操作说明书执行，不可随意更改；3、操作中应注意卫生，保持实验室清洁；4、实验结束后应及时处理废弃物，如有需要可循环利用；5、实验室毒性、易燃、易爆等安全标识牌应贴在显眼的地方，以保证实验室安全。
抗酸染色实验报告
抗酸染色实验报告
实验目的：研究抗酸染色方法对细菌染色的效果，并分析其原理。
实验原理：
抗酸染色是一种特殊的染色方法，在染色过程中可以抵抗酸脱色剂的侵蚀，可以将细胞内的染色物质染上一种特定的颜色，而不会被酸脱色剂去除。
这种方法主要应用于细菌和酸性细胞壁的染色。
实验步骤：
1. 备好细菌培养物样本，使用棉签或细菌环将培养物涂抹在玻璃片上。
2. 将玻璃片固定在火焰上预热的载玻片架上。
3. 将预热的染色盘中加入大量的抗酸染色液(如抗酸红染色液)。
4. 将玻璃片悬浸在染色液中，静置5-10分钟。
5. 将玻璃片从染色液中取出，并用水轻轻冲洗。
6. 在玻璃片上滴加少量脱色剂，静置片刻。
7. 再次用水轻轻冲洗玻璃片。
8. 留干后，将玻璃片放在显微镜载片上，并加一滴显微镜油。
9. 用显微镜观察细菌的染色效果。
实验结果与分析：
通过观察显微镜下的细菌染色结果，可以发现染色后的细菌染色部分呈现出红色或其他指定的颜色，而未染色的部分则保持原始的无色状态。
这说明抗酸染色方法对细菌染色效果好，并能够稳定染色部分的颜色，不容易被脱色剂去除。
抗酸染色的原理是在染色过程中，染色物质与细菌细胞结构之间形成稳定的化学键，使得染色物质不易被酸脱色剂去除。
这种染色方法主要适用于带有酸性细胞壁的细菌，如革兰氏阳性菌。
实验结论：
抗酸染色方法是一种有效的细菌染色方法，能够在细菌细胞内染色，并且对染色部分有良好的稳定性。
这种方法的原理是染色物质与细菌细胞形成稳定的化学键，使得染色物质不易被脱色剂去除。
抗酸染色方法主要适用于带有酸性细胞壁的细菌。
简述抗酸染色法
简述抗酸染色法简述抗酸染色法在生命科学领域，抗酸染色法是一种非常重要的技术手段。
它的主要功能是通过染料分子的特异结合来分离和检测不同的细胞和细胞组分，许多疾病的诊断和治疗也能够从中受益。
下面将就其原理和应用进行分类讲解。
一、原理抗酸染色法的主要原理是染料分子与标靶分子结合，形成稳定的化合物。
这种结合是比较特异的，可以根据不同的物质来选择不同的染料。
在细胞学研究中，常用的染料有伊红、甲苯紫、格里姆纳染料等，其分子结构各异，适用的标靶也各有不同。
当某些分子或细胞成分需要与特定染料结合时，将表面加有相应特异抗体的细胞膜提取出来，与染料结合，产生稳定的化合物。
这样，不仅可以充分利用抗体和染料的特异结合，还能够将需要检测的细胞和分子有效地分离和检测。
二、应用在癌症诊断中，抗酸染色法也发挥了重要作用。
常见的肿瘤检查方法包括病理检查、切片检测和异染性诊断等，而用抗酸染色法可以更加准确地识别肿瘤细胞。
一些特定染色毒素能够选择性地结合于细胞膜表面部位，从而实现对肿瘤细胞的测量和分析。
利用抗酸染色法进行癌症检测，能够使医学工作者明确诊断病情，制定科学合理的治疗方案，提高治疗成功率和生存期。
此外，抗酸染色法在细胞识别、细胞培养、免疫组化以及细胞信号传导等领域也都广泛应用。
例如，利用细胞表面的受体结合融合蛋白可以在细胞膜表面进行实时特异性检测，进而研究相关的生理学和病理学问题，以及细胞信号传导过程中的调控机制等等。
抗酸染色法虽然有许多局限性，如标记分子的缺乏、特异性等问题，但是针对这些问题的研究也在不断推进，在多个实验和研究领域得到了广泛应用和认可。
总之，抗酸染色法在生命科学领域具有很高的实用价值，其适用于细胞分析、癌症诊断和治疗以及其他诸多生命科学研究等方面。
未来随着生命科学领域的发展，相信抗酸染色法的应用也将得到进一步的发展和完善。
抗酸染色的操作及临床应用
抗酸染色的操作及临床应用抗酸染色是一种在临床病理学中常用的技术，用于检测和诊断与酸性染料亲和的微生物，特别是结核分枝杆菌。
这种染色方法被广泛应用于结核病的确诊、治疗监测及相关疾病的鉴别诊断。
下面将详细介绍抗酸染色的操作及临床应用。
操作方法：1. 原料准备：准备好益氏染液、酸酒红溶液、高锰酸钾溶液、酸性酮液、甲苯、绝对醇和脱脂溶剂等试剂和溶液。
2. 标本制备：将待检标本如痰液、尿液、刮片等经过前处理（如离心、加热、电洗等）后涂片制备，并将涂片固定在90摄氏度的焙烧烘箱中固定片上3~5秒钟，然后用冷水洗净。
3. 染色操作：将固定的检测标本涂片用甲苯浸泡2~5分钟，将甲苯吸出后加入酒精脱脂2~5分钟，然后再用绝对醇脱脂2~5分钟，最后用脱脂溶剂脱脂30~120秒。
4. 抗酸染色：将脱脂后的标本涂片完全浸入益氏染液中，保持液面在标本上1~2毫米高，将益氏染液再加热到80摄氏度，静置5~10分钟，待酸性酮为蓝色。
5. 染色反应：用高锰酸钾溶液滴落在标本上，加热到细菌虫红颜色被去掉，再滴落高锰酸钾溶液热到细菌虫红显现为红色。
6. 清洗与固定：倾倒掉多余的染色剂和高锰酸钾溶液，用自来水彻底冲洗，将标本涂片风干或用吹风机吹干。
7. 反染：将涂片溶于酸酒红溶液中，温和地与酸酒红反应。
反应结束后，再次用自来水冲洗，风干，镜片上缀油。
临床应用：1. 结核菌检测：抗酸染色是诊断结核病的重要手段之一。
通过检测患者痰液、刮片等标本中的抗酸染色-阳性颗粒，可以快速、敏感、直观地进行结核分枝杆菌的检测和诊断。
2. 结核病确诊：抗酸染色技术作为结核病的初筛方法，可帮助医生进行早期诊断和治疗。
对于疑似结核病患者，通过抗酸染色检测可快速识别结核菌，指导早期治疗方案的制定。
3. 结核病治疗监测：抗酸染色技术可用于结核病治疗效果的评价和疗程的调整。
治疗过程中，定期检测患者的痰液标本，观察结核菌的存在和培养基的数量，以判断治疗效果并及时调整治疗策略。
实验九抗酸染色
20mm*15mm厚涂片 2）干燥：自然干燥 3）固定：火焰固定
四、实验方法：
1、细菌涂片标本的色
1）初染：用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红 2-3滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽 即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免 干涸，加热5-10分钟，待标本冷却后用水冲洗。
准备
细菌：卡介苗 染液：抗酸染液（2套/室） 其它：载玻片（1张/人）、结核分枝杆菌示
教片（1张/人） 痰标本 8盒
一、实验目的：
1.掌握抗酸染色的原理和方法
2掌握结核分支杆菌痰涂片的报告方 法。
二、实验原理：
分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，主要是分 枝菌酸，它包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌 一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促 使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合 后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。
齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与 石炭酸复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理 也不脱色。当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍 然为红色，而其他细菌及背景中的物质为兰色。
三、实验材料：
细菌：结核杆菌 染液：石炭酸复红液、3%盐酸酒精、碱性美
兰溶液 其它：接种环、酒精灯、载玻片等
四、实验方法：
2）脱色： 3%盐酸酒精脱色30’’~1’；用水冲洗。
3）复染：用碱性美兰溶液复染1’，用水冲洗后用吸 水纸吸干。
3、油镜观察
五、实验结果：
结核杆菌呈红色，常堆积成团，排列无 序，偶呈分枝状生长。 背景及非抗酸性细菌呈兰色。
六、注意事项：
1、无菌操作 2、涂片厚度要适中 3、固定 4、冲洗 5、染色时间 6、初染加热的温度，勿沸腾
抗酸染色的原理及应用
抗酸染色的原理及应用1. 原理抗酸染色是一种常用的染色技术，它利用某些物质对酸性条件下的染色反应具有抵抗能力的特性。
其原理可以简述如下：•抗酸染料的选择：抗酸染料是一类可以在酸性环境下保持稳定的染料。
一般来说，抗酸染料的分子结构中包含特殊的基团，可以与酸性物质发生特定的化学反应，形成稳定的染色复合物。
•pH调节：在抗酸染色过程中，通过调节环境的pH值，将其保持在酸性范围内，以促使抗酸染料发挥作用。
一般使用弱酸性或酸性的缓冲溶液，如乙酸酸性缓冲液、磷酸缓冲液等。
•反应条件：染色过程中，需要将待染物样品与抗酸染料接触一段时间，以便染料充分与样品中的目标物质发生反应，并形成稳定的染色复合物。
反应温度和反应时间都是影响染色效果的重要因素。
2. 应用抗酸染色技术在生物医学和化学领域有着广泛的应用。
下面将列举一些常见的应用场景：•细胞染色：抗酸染色在细胞学研究中起到了重要的作用。
例如，用抗酸性物质染色可以标记细胞核或细胞分泌物等，用于观察细胞器官的结构和功能。
•组织切片染色：在组织学研究中，抗酸染色可以用于特定组织结构和细胞类型的染色，从而帮助研究人员观察和研究组织的形态学和生物化学特性。
•蛋白质染色：抗酸染色技术可以用于蛋白质的染色和分离。
例如，使用抗酸性染料可以在凝胶电泳中染色蛋白质带，用于蛋白质定量和纯化。
•细菌分离和鉴定：抗酸染色技术可以用于细菌的分离和鉴定。
例如，格拉姆染色就是一种抗酸染色技术，可以用于快速鉴别细菌的形态特征。
•植物组织染色：抗酸染色技术在植物学研究中也有应用。
例如，用抗酸性染料染色可以帮助观察和研究植物细胞的壁结构和组成。
3. 优点和注意事项抗酸染色技术具有以下优点：•快速：抗酸染色技术的反应时间相对较短，可以在较短的时间内完成染色过程。
•稳定性好：抗酸染料在酸性条件下具有较好的稳定性，不易退色，染色结果较为稳定。
•灵敏度高：抗酸染色具有较高的灵敏度，可以检测到较低浓度的目标物质。
抗酸染色主要步骤
抗酸染色主要步骤如下：
1.施加热量来增加渗透，这会驱动石炭酸品红穿过类脂壁并进入细胞质。
2.应用初级染色后，所有细胞都呈红色。
3.脱色剂（酸-醇或20%H2SO4）：涂片在脱色前冷却，使蜡状细胞物质硬化。
在应用脱色剂时，抗酸细胞表现出抗脱色性。
因此，分枝杆菌会保留原色，但对于缺乏细胞蜡的非耐酸细菌而言，情况并非如此。
在脱色过程中很容易去除主要染色剂，观察到非耐酸细胞为无色。
4.复染（亚甲蓝或孔雀石绿）：非抗酸细菌吸收复染液并呈现蓝色或绿色，
而抗酸细胞则保留原染液的红色。
孢子染色技术用于检测携带孢子的细菌和孢子类型。
孢子不易被原染剂染色。
一旦孢子接受了孔雀石绿，就不能用自来水脱色。
这种方法是用蒸汽加热代替直接加热的改进方法。
以上信息仅供参考，建议咨询专业人士获取具体信息。
抗酸染色步骤及注意事项
抗酸染色步骤及注意事项制片：（1）涂片：左手持菌液试管，右手持接种环，用接种环从试管培养液中取一环菌，于载玻片中央涂成薄层（事先在背面做好标记圆圈）即可，或先滴一小滴无菌水于载玻片中央，用接种环从斜面上挑出少许，与载玻片上的水滴混合均匀，涂成一薄层。
拔或塞试管塞时，应将试管口通过火焰略加烧灼，最后将接种环在火焰上烧灼灭菌。
（2）干燥：涂片后在室温下自然干燥，也可在酒精灯上略加温，使之迅速干燥，但勿靠近火焰。
（3）固定：常用高温进行固定。
即手持载玻片一端，标本面朝上，在灯的火焰外侧快速来回移动3~4次，共约3~4秒。
要求玻片温度不超过60℃，以玻片背面触及手背皮肤不觉过烫为宜，放置待冷后染色。
染色：（1）初染：滴加石炭酸复红溶液2-3滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，加热5分钟，待标本冷却后用水冲洗。
（2）脱色：（3）复染：用碱性美兰溶液复染1分钟，水洗，用吸水纸吸干后用油镜观察: 1、油不要滴太多2、在调节焦距的时候要特别注意与载玻片之间的距离不要弄坏工具3、调节时应该从下往上调节4、在使用油镜之前，必须先经低、高倍镜观察，然后将需进一步放大的部分移到视野的中心。
5、用左眼观察目镜，并慢慢转动细调节器至物象清晰为止。
如果不出现物象或者目标不理想要重找，在加油区之外重找时应按：低倍→高倍→油镜程序。
在加油区内重找应按：低倍→油镜程序，不得经高倍镜，以免油沾污镜头。
6、油镜使用完毕，先用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头上和标本上的香柏油擦去，然后再用干擦镜纸擦干净。
结果判定:1.干燥后油镜观察300个视野（观察时间不少于4min），抗酸性细菌呈红色，其它细菌或细胞呈蓝色2. 报告方式2.1 未找到抗酸杆菌2.2 找到抗酸杆菌±：可疑，发现抗酸杆菌1-2条/300视野2.3 找到抗酸杆菌1+：发现抗酸杆菌3-9条/100视野2.4 找到抗酸杆菌2+：发现抗酸杆菌1-9条/10视野2.5 找到抗酸杆菌3+:发现抗酸杆菌1-9条/1视野2.6 找到抗酸杆菌4+：发现抗酸杆菌≥10条/1视野质量控制：每次用卡介苗做阳性对照大肠埃希菌ATCC25922做阴性对照注意事项：1.每一玻片只能涂一份标本，以防脱落混淆2. 脱色时间需根据涂片厚薄而定，厚片可适当延长，以无红色脱出为止3. 冬季室温过低时，染色时间要适当延长4. 有时同一个抗菌体上红色深浅也有不同，观察时应注意5. 每次试剂用完后，请迅速盖好，以免挥发，储存时应避免高、低温及阳光照射6. 在涂抹痰标本时，严禁对玻片加热7. 染色时勿使玻片上的染液干燥临床意义：分支杆菌属（结核分支杆菌、麻风分枝杆菌、非典型分支杆菌）、放线菌抗酸染色阳性，可初步鉴定细菌。
抗酸染色Kinyoun染色法
3 用抗酸染液将涂片浸泡 5~10min，不必加热；
4 弃去染液，冷却后用水洗载玻片，在加下一个溶液之前去除多余的水分； 5 加脱色液分色 15~20sec，手持载玻片的一端，是载玻片呈一定的角度，使分色液顺载玻 片的另一端流下，直至颜色不再改变；
6 用复染液复染 30sec；
7 用 95%乙醇脱水 2min、100%乙醇脱水 2min、二甲苯透明 2×5min； 8 封片剂封片，显微镜下观察。
结果
抗酸菌染成红色，非抗酸菌及细胞均染成淡蓝色。
注意事项
1 抗酸染色直接用于痰标本时，可以适当增加标本涂片的厚度，以提高检出率。染厚涂片时，
须掌握复染时间。如果背景过深，影响镜检。
2 诺卡菌可呈弱抗酸性，染色时间比抗酸杆菌稍长。取培养菌落涂片染色时，呈现两种现象， 视野中有些菌细胞阳性，另外一些则阴性；有时同一个菌体上，红色的深浅亦有不同，观察
时应予注意。
3 如果您第一次使用本试剂盒，建议做 1~2 个预实验。 温馨提示
为了您的自身安全，使用试剂前，请做好防护，如穿实验服，戴手套等。
储存温度
室温下避光储存 6 个月。 包装清单
货号
品名
包装
ST043A
抗酸染液
100mL
ST043B
脱色液
100mL
ST043C
复染液
100mL
说明书
1份
1
抗酸染色（Kinyoun 染色法）
抗酸染色（Acid-fas，主要是分枝菌酸，它包围在肽聚糖的外面，所以
分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌
酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。
实验流程
抗 酸 染 色
结果：抗酸杆菌红色，细胞核蓝色。
注意事项：
1、石碳酸品红液容易沉淀，使用时过滤。 2、脱蜡液宜新配。
3、液状石蜡―松节油代替二Байду номын сангаас苯，可保存菌体的类脂质 不受破坏，从而染色良好。 4、苏木素染色要浅染。
抗酸染色
抗酸杆菌是一种常见的病原微生 物，抗酸杆菌体内含脂类，常规水溶性 染液不易渗入菌物内，故一般染料不能 使其着色。
试剂配制 一、石碳酸品红染液 碱性品红无水乙醇饱和液 10ml 5%石碳酸水溶液 90ml
二、20%硫酸分化液 20ml 浓硫酸 80ml 蒸馏水 三、液状石蜡―松节油脱蜡液 液状石蜡 1份 1份 松节油
染色方法：
1. 切片经液状石蜡―松节油混合液脱蜡二次，每次15分钟（可加 温60℃）。 2. 用纸将周围余液抹干。 3. 流水稍洗。 4. 滴入石碳酸品红液，20―30分钟。 5. 水洗去剩余染色液。 6. 20%硫酸分化至适当为止，1―5分钟。 7. 流水冲洗。 8. 常规苏木素染核。 9. 流水冲洗回蓝。 10. 用风筒低温吹干。 11. 二甲苯透明，中性树胶封片。
抗酸染色步骤及注意事项
抗酸染色步骤及注意事项以抗酸染色步骤及注意事项为主题，我们来详细介绍一下抗酸染色的过程以及需要注意的事项。
抗酸染色是一种常见的组织染色方法，可以用于组织学研究中的细胞、细胞器和组织结构的观察和描述。
其主要原理是利用酸性染料和碱性染料的相互作用，使细胞组织呈现出不同的颜色和形态，从而达到研究的目的。
抗酸染色步骤：1. 组织取材和固定：首先需要从病理标本中取出需要染色的部分，然后进行固定处理，常用的固定剂有福尔马林、醋酸等。
2. 脱水和透明化：将固定的组织切片后，需要将其中的水分逐步去除，以便后续的染色操作。
处理方法包括脱水、透明化等。
3. 抗原修复处理：为了使组织中的蛋白质分子更加易于与染料结合，需要进行抗原修复处理。
常用的方法有热处理法、酶解法等。
4. 阻断非特异性结合：由于细胞组织中存在非特异性结合，需要进行阻断处理，以减少假阳性的出现。
常用的方法有牛血清蛋白、BSA等。
5. 抗体结合：将特异性抗体与需要染色的组织部分进行结合。
常用的抗体有一抗、二抗等。
6. 酶标记：利用酶对已经结合的抗体进行标记，以便后续的染色操作。
常用的酶有辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等。
7. 染色：将酶标记的抗体与染料反应，使组织呈现出不同的颜色和形态。
常用的染料有DAB、VIP等。
8. 除色和封片：将染色后的组织切片进行除色处理，以去除多余的染料。
最后将切片封装，以便观察。
抗酸染色注意事项：1. 操作前应仔细阅读染色试剂盒说明书，并按照说明书上的方法进行操作。
2. 操作时应穿戴实验室专用的防护服，佩戴手套、口罩等防护用品，以避免对人体造成伤害。
3. 操作时应注意卫生，避免污染试剂和样本，以免影响染色结果。
4. 操作时应注意时间和温度的控制，以避免操作过程中出现误差。
5. 操作时应注意控制抗原修复的时间和温度，以免损伤组织结构和抗原表达。
6. 操作时应注意标记抗体的浓度和时间的掌握，以避免过度标记或标记不足的情况出现。
7. 操作时应注意染色的时间和浓度的调节，以避免染色过度或染色不足的情况出现。
抗酸染色试题及答案解析
抗酸染色试题及答案解析一、选择题1. 抗酸染色主要用于检测哪种细菌？A. 大肠杆菌B. 沙门氏菌C. 结核分枝杆菌D. 金黄色葡萄球菌答案：C解析：抗酸染色是一种特殊的染色技术，主要用于检测抗酸性细菌，如结核分枝杆菌和麻风杆菌等。
结核分枝杆菌是抗酸染色的主要检测对象。
2. 抗酸染色的基本原理是什么？A. 利用细菌的细胞壁成分B. 利用细菌的细胞膜成分C. 利用细菌的核酸成分D. 利用细菌的蛋白质成分答案：A解析：抗酸染色的基本原理是利用细菌细胞壁中的脂多糖和肽聚糖等成分对染料的亲和力，使细菌在染色过程中不易被脱色，从而实现对细菌的检测。
3. 抗酸染色常用的染色剂是什么？A. 革兰氏染色剂B. 碱性染色剂C. 酸性染色剂D. 中性染色剂答案：C解析：抗酸染色常用的染色剂是酸性染色剂，如石碳酸复红。
这种染色剂能够与细菌细胞壁中的脂多糖和肽聚糖等成分结合，使其在染色过程中不易被脱色。
二、填空题1. 抗酸染色的主要步骤包括：____、____、____和____。
答案：初染、脱色、复染、对比染色解析：抗酸染色的主要步骤包括初染、脱色、复染和对比染色。
初染是将细菌染色，脱色是去除多余的染料，复染是加深细菌的颜色，对比染色是使背景颜色变浅，以便更清晰地观察细菌。
2. 抗酸染色中，脱色剂通常使用的是____。
答案：酸性酒精解析：抗酸染色中，脱色剂通常使用的是酸性酒精，如3%的盐酸酒精。
这种脱色剂能够有效地去除多余的染料，但不会破坏细菌细胞壁中的脂多糖和肽聚糖等成分。
三、简答题1. 抗酸染色在临床上有哪些应用？答案：抗酸染色在临床上主要用于检测结核分枝杆菌和麻风杆菌等抗酸性细菌。
这些细菌是一些重要的病原体，如结核病和麻风病。
通过抗酸染色，医生可以快速、准确地诊断这些疾病，从而及时采取治疗措施。
2. 抗酸染色的注意事项有哪些？答案：抗酸染色的注意事项包括：（1）染色剂和脱色剂的选择：应选择适当的染色剂和脱色剂，以确保染色效果和脱色效果。
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夹层杯抗酸染色制片法概要
一：标本的预处理：消化和离心
1.将标本至于夹层杯中加消化液消化至液体清亮（2~5分钟可灭活细菌）（若是其它
容器取痰的，可小心的在痰上加些许消化液，待痰不再粘附其上后转入夹层杯）（夹
层杯可装液体不超过杯身三分之二）（非痰类标本亦须加适量消化液消化）。
2.将本杯置于离心机内对称平衡放稳，以4500转/分钟转速离心5分钟，弃去液体（轻
快的倒掉），放在干片机内烘烤（干片机提前开启至60度）。
二：染色：初染和洗脱和复染
1.加A液在60度温度下染色5分钟。
2.B液脱色（尽量将红色脱净）。
3.C液复染一分钟。
（每次弃去染色液后需以缓慢小水流沿杯壁将杯中剩余液体洗清沥干）。
（加染液液量以可覆盖膜片为适量）
三：制片：取片和阅片
1.将染色后的片子烘干。
2.用取片针顶起杯底纳米膜片，用镊子夹出，轻轻印干水分，用中性胶倒封于玻片上，
弃去保护膜。
（水分将会影响胶水对膜片的粘附）
3.阅片。
（可利用“红十字”找寻视野）
四：注意事项
1.膜片上的细菌的保护：本制片法的原理为通过离心沉降并烘烤将目标菌粘附在膜片
上后进行染色，在操作过程中必须避免直接冲刷、液体剧烈振荡、大力印擦等而将
膜上已粘附的细菌冲走，这些失误会严重影响阳性率。
2.各标本间的交叉污染：标记混淆、杯中液体互溅、液体转移等将会使结果严重不可
靠。
3.脱色的程度：脱色不完全将导致膜上非抗酸菌或其它物质也呈现红色，脱色过久过
重会影响抗酸杆菌所着色，二者都将影响后续镜检。
4.B液：其重要成分为酒精盐酸，易挥发，用完务必盖好盖子。
5.操作时间段的把握：请有效利用机器与时间间隔，避免标本堆积。