抗酸染色操作步骤考核评分标准
细菌抗酸染色与镜检技术评分标准 - jpkchnadlcn
接种环拿法
菌膜厚簿、大小
无菌操作
1
2
2
2
3
5
干燥固定
（5分）
方法正确
5
染色
（20分）
石炭酸复红：染色液量、方法、时间
加温：方法、时间、水洗甩干
3%盐酸酒精：染色液量、方法、时间、水洗甩干
碱性美兰：染色液量、方法、时间、水洗甩干
5
55Biblioteka 5镜检（15分）
对光
油镜使用
油镜处理
结果正确
2
5
3
5
清场、洗手
（10分）
整理清场（试剂、器材归位、实验台面清理）
肥皂洗手消毒药水浸泡
5
5
结果及报告
（5分）
检测报告规范
5
综合评价
（15分）
操作认真、规范、准确
在规定时间内完成（每延时5min扣1分）
工作条理清楚、有条不紊
5
5
5
总分
（100分）
细菌抗酸染色与镜检技术评分标准
考核项目
评分标准
标准
分数
得分
备注
素质要求
（5分）
白大衣穿戴整洁
态度端正
准时进入赛场
带好参赛用品
遵守赛场规章制度
1
1
1
1
1
实验用品准备
（10分）
显微镜、香柏油、菌种、接种环、酒精灯、打火机、玻片、蜡笔、染液
每缺一样扣1分
实验过程（65分）
涂片
（15分）
做好标记
取生理盐水的方法及盐水量
抗酸染色操作及要点
抗酸染色操作及要点
抗酸染色是玻璃表面处理的一种彩色表面工艺，大多数情况下是用于玻璃幕墙，并提供了色彩持久、可视性好、抗候变性、易于清洗等优点。
抗酸染色工艺要点如下：
1.在抗酸染色前，需要将玻璃表面进行清洁，移除表面的污垢。
2.调节抗酸染色液的酸碱度，保持在中性条件下，使其中的有机颜料发挥最大效果。
3.将抗酸染色液施于玻璃表面，待涂料上膜后，在酸碱性背景条件下进行色彩改变。
4.使用湿润的布擦拭，以保持表面的色彩均匀性，或者进行精细修饰。
5.将表面的抗酸染色涂层用水冲洗干净后，将得到的色彩持久耐候的玻璃表面进行锯齿化处理，使之抗拒水分膜层。
抗酸染色操作规程
抗酸染色操作规程
1.目的
规范抗酸染色操作规程，确保染色结果清晰可靠。
2、原理
分枝杆菌细胞壁含脂质较多,其中主要成分为分枝菌酸,此物具有抗酸性,染色时与石炭酸复红结合牢固,能抵抗酸性乙醇的脱色作用,因此抗酸菌能保持复红的颜色,达到染色目的。
3、范围
用于抗酸性细菌(结核、麻风分枝杆菌)初步鉴定
4、质量控制
龟分枝杆菌ATCC93326做染色阳性,大肠埃希菌ATCC25922为染色阴性对照。
5、试剂
5.1石炭酸复红
碱性复红 10g 95,酒精 100ml 5,石炭酸 900ml (边加边研磨) 5.2盐酸脱色液(3,盐酸酒精)
浓盐酸 3ml 95,酒精 97ml
5.3吕氏美兰
美兰 0.3g 95,酒精 30ml 蒸馏水 70ml 10,KOH水溶液 0.1ml 复染液 6、工作程序
6.1制片:待检标本用无菌生理盐水涂片，经自然干燥后用火焰固定。
6.2初染:加石炭酸复红溶液，徐徐加热至有蒸汽出现，切不可沸腾。
反复染5分钟,清水冲洗。
6.3脱色:加盐酸脱色液，不时摇动玻片至无红色脱落为止，清水冲洗。
6.4复染:加美蓝复染，染0.5-1分钟，清水冲洗。
6.6待涂片自然干燥后，油镜镜检。
7、结果判断
结核杆菌呈红色，其它细菌呈蓝色
8、注意事项
染液注意密封，以免凝结产生沉淀影响使用效果。
体液标本均应离心后取下层沉淀液与染液混合，以提高检出率。
提高责任心，做到全片检查。
抗酸染色法实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除抗酸染色法实验报告篇一：抗酸染色法抗酸染色法目录1简介2抗酸染色的原理3抗酸染色一般步骤?1）初染?2）脱色?3）复染4抗酸染色的染液配制简介编辑抗酸染色法acid－faststainingmethod1882年由埃利希（F．ehrlich）首创并经F．齐尔（Ziehl）改进而创造出的细菌染色法。
其中最具代表性的为对结核菌的齐尔-尼尔森（Ziehl－neelsen）染色法和齐尔-加贝特（Ziehl－gabbet）染色法。
用石炭酸复红染色后，用盐酸乙醇分色，再用美蓝进行对比染色，即不再脱色而呈现石炭酸复红的红色。
抗酸染色的原理编辑分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。
但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。
齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。
当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。
抗酸染色一般步骤编辑1）初染用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红2-3滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，加热3-5分钟，待标本冷却后用水冲洗。
2）脱色3%盐酸酒精脱色30秒~1分钟；用水冲洗。
3）复染用碱性美兰溶液复染1分钟，水洗，用吸水纸吸干后用油镜观察。
抗酸染色的染液配制编辑1、石炭酸复红碱性复红酒精饱和溶液10mL5%石炭酸90mL2、3%盐酸酒精浓盐酸3mL95%酒精97mL3、吕氏美兰液美兰酒精饱和液30mL氢氧化钾（1:10000）100mL篇二：实验二十四抗酸染色-jpkchnadlcn课程名称：微生物学检验技术授课专业：医学检验学时：2学时实验十七结核杆菌检验(m.TuberculosisTest)一、实验目的⒈掌握结核杆菌的菌落特征，镜下形态、染色特性⒉掌握抗酸染色的原理、操作步骤，结果报告二、实验器材与试剂⒈菌种：bcg⒉试剂：抗酸染液⒊其他：三脚架、铁片、木夹子等三、实验内容㈠微生物学诊断⒈标本采取根据病灶器官取材,包括痰,尿,脑脊液,粪便等。
技能训练2 细菌标本片的制备和染色法
技能训练2 细菌标本片的制备和染色法一、目的要求：正确掌握细菌培养物涂片的制作和常用染色法二、设备材料病料、细菌培养物、接种环、玻片、酒精灯、染色缸、染色架、染色液等。
三、操作方法细菌标本片制作的基本步骤为：涂片或触片→干燥→固定→染色→镜检。
(一)细菌涂片的制备1．液体培养物及液体病料(1)涂片用接种环取一滴培养液或液体病料，于玻片的中央均匀地涂布成适当大小的薄层。
(2)干燥一般采用自然干燥，天气较冷时也可于酒精灯火焰上方30～40cm处适当加热干燥。
(3)固定分为火焰固定和化学固定两种。
火焰固定时，将干燥好的玻片涂面朝上，以其背面在酒精灯火焰上来回通过数次，略作加热，以不烫手背为度；化学固定时，可将干燥好的玻片浸入甲醇中2～3min后取出晾干，或在涂片上滴加数滴甲醇使其作用2～3min后自然挥发干燥。
此外，丙酮和酒精也可用作化学固定剂；作瑞特氏染色的涂片不需固定，因染色液中含有甲醇，有固定作用。
(4)染色根据不同的材料和菌种选择不同的染色法。
2．固体培养物用接种环取一滴生理盐水于玻片的中央→用接种环挑取一个菌落于生理盐水中混合→均匀地涂布成适当大小的薄层→干燥→固定→染色。
(二)细菌触片的制备将固体病料(病变组织)作无菌切开→用切面在玻片的中央接触一下或稍用力印压成一薄层→干燥→固定→染色。
(三)细菌的染色法1．单染色法又称简单染色法，即只应用一种染料进行染色的方法。
(1)美蓝染色法在已干燥、固定好的涂片或触片上滴加适量的美蓝染色液1—2min后，水洗，干燥(吸水纸吸干或自然干燥)，镜检。
(2)瑞特氏染色法在已干燥、固定好的涂片或触片上滴加瑞特氏染色液，为避免干燥，可适当多加一些，或视情况补充滴加，1—3min后再加与染液等量的中性蒸馏水或缓冲液，轻轻晃动玻片，使之与染色液混合均匀，再经3—5min后，直接用水冲洗，吸干或烘干后镜检。
也可在玻片上的涂抹处盖一适当大小的滤纸，然后再在滤纸上轻轻滴加瑞特氏染色液，至略浸过滤纸，视情况补充滴加，维持不干，3—5min后直接用水冲洗，吸干或烘干后镜检。
抗酸染色镜检的操作规程
抗酸染色镜检的操作规程1.目的:通过抗酸染色鉴别结核杆菌.2.原理:一般认为抗酸性菌体内含脂类物质较多,此物质具有抗酸的性质.染色时,它与石碳酸复红结合牢固,能抵抗酸性酒精的脱色作用,同时脂类又不易透过细胞膜,不能被脱色,因此抗酸菌能保持复红的颜色.相反,非抗酸性菌体内含脂类少,易被酸性酒精脱色,脱色时又易从细胞膜渗出而脱掉,最后被复染蓝色.3.试剂:3.1试剂来源:购买珠海贝索3.2试剂盒组成:R1:石碳酸复红溶液1χ100ml R2:酸性酒精溶液1χ100mlR3:亚甲基蓝溶液1χ100ml4.质量控制:室内质控包括痰标本收集,痰片染色和镜检结果复查.痰涂片应保存供上一级参比实验室质量控制检查.5.标本采集与处理:5.1病人留标本前用清水漱口,用力咳出来自支气管深部的脓样或粘液样痰,量不少于3ml避免留唾液或鼻咽部分泌物.5.2夜间痰为就诊前一天晚睡前咳出的痰液.5.3初诊病人应送3份痰标本(夜间痰、清晨痰和即时痰),痰液不合格者重送.5.4涂片:取脱脂过的干燥、清洁、无油污的新玻片，在玻片背面的左端1/3处以记号笔编号,用折断的竹签挑取痰标本的脓样,干酪样0.1ML,于玻片上均匀涂抹成2ⅹ2.5CM卵圆形痰膜,自然干燥后待检.6.染色方法:6.1用片夹夹住涂片火焰固定,加石碳酸复红溶液,徐徐加热至有蒸汽出现染5分钟,水洗.6.2加脱色剂,不时摇动玻片至无色脱落为止,水洗.6.3加复染液,染0.5-1分钟,水洗涂片后镜检.7.镜检:取染好的干燥涂片,用低倍镜、高倍镜览片,最后在涂片上滴1-2滴香柏油,用油镜仔细观察.8.结果的判断:结核杆菌呈红色,其它细菌呈蓝色.9.实验完后的处理:9.1先用擦镜纸将镜头上的油擦去,再用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头擦2-3次,最后用干净擦镜纸擦2-3次,向一个方向擦拭。
9.2废弃玻片放入5% 84消毒液中浸泡60分钟,消毒液要每天更换。
9.3痰盒和废弃标本等污染物应弃于有盖的污物桶内,消毒后焚烧。
革兰染色与抗酸染色操作规范
一、实验原理G＋菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上，呈紫色。
G－菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高，乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，沙黄或稀释石碳酸复红复染后呈红色。
二、实验器材【载玻片、试管架、红蓝铅笔、接种环、记号笔、酒精灯、打火机、生理盐水、吸水纸、冲洗瓶】、钟表、显微镜、香柏油、擦镜纸、染色盘、染色架、消毒洗手液等。
三、实验试剂革兰染液：草酸铵结晶紫染液、碘液、脱色液（95%乙醇）、蕃红复染液。
四、实验标本痰液五、操作步骤1.标记选择玻片并正确编号（标本号）2.涂片用灭菌接种环挑取菌落与载玻片上预先滴加的生理盐水涂布成1cm2或蚕豆大小的半透明菌膜。
3.干燥涂片制成后，在空气中使其迅速干燥，以免菌体皱缩变形（若需加快干燥速度，将涂布面朝上，置于火焰上方，不烫手的位置，慢慢烘干，切勿紧贴火焰）。
4.固定玻片干燥后火焰加热法固定，即玻片（菌膜面向上）中速从火焰上端通过3次进行固定，以玻片反面接触手背皮肤，热而不烫为宜。
5.初染加结晶紫染液染60s，细流水冲洗，并倒去玻片上积水。
6.媒染加碘液染60s，细流水冲洗。
7.脱色加脱色液，不时摇动10s~30s，至无紫色逸出为止，细流水冲洗。
8.复染加复染液，染30s~60s，细流水冲洗。
9.镜检待已染色的细菌标本片自然干燥或用吸水纸吸干后，再用显微镜进行观察，先用低倍镜观察，再滴加一滴香柏油用油镜观察。
注意：染色时间不同试剂有所不同。
六、结果观察1、紫色：G+2、红色：G-一、实验原理：分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。
但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。
抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。
结核杆菌涂片检查标准操作程序
SOP_15-16 结核杆菌涂片检查标准操作程序一、目的：统一项目操作规程，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。
二、适用范围：结核杆菌涂片检查三、操作人员：检验科授权工作人员四、操作步骤：1、原理抗酸染色的基本原理是抗酸菌具有耐受酸性介质脱色的生物性状。
此类细菌在石碳酸（苯酚）的协同作用下，被复红染色剂着色，能够耐受酸性乙醇脱色，显微镜观察时保持紫红色；而其它脱落细胞或标本中的非抗酸菌被酸性乙醇脱色后，可被复染剂亚甲蓝染为蓝色。
2、染色液的配制2.1碳酸复红染液：全省统一配送2.2 5%盐酸乙醇脱色液：35%浓盐酸5mL与95%乙醇混合2.3亚亚甲蓝染色液：全省统一配送3、载玻片的准备：用于AFB检查的载玻片要求：⑴一张载玻只能涂抹一份痰标本。
⑵每张载玻片只能使用一次，不得清洗后再次用于AFB涂片检查。
新的载玻片放入95%乙醇中浸泡2小时脱脂，用摄子夹出放干净纱布上阴干，放无尘容器（培养皿）中备用。
4、本的采集、运送及处理4.1初诊病人应送3份痰标本（夜间痰、晨痰和即时痰）。
如无夜间痰，在留晨痰后2-3小时再留取一份痰标本；或在送痰时，留取两份即时痰。
疗程中或复诊随访病人按期每次送检2份痰（晨痰和夜间痰）。
痰标本性质：干酪痰、血痰、粘液痰为合格标本；唾液或口水为不合格标本，除照常进行涂片检查外，应要求患者重新送检。
4.2收集标本的容器应采用WHO推荐的标准痰瓶，或采用直径4厘米、高2厘米的可密封塑料盒或蜡纸盒（我省统一采用蜡纸盒）。
★痰容器上就注明与检验单一致的病人姓名、编号（初诊病人门诊序号或随访病人登记号）、★检查项目和容器序号1、2、3（1为当日即时痰，2为夜间痰。
3为晨痰）。
5、涂片的制备5.1 编号：取经干燥、清洁、无油污、无划痕的新载玻片制备涂片，在玻片背面左端1/3处注明实验室序号(56001递增)及标本序号（按1递增）（如使用的载玻片一端无磨砂面，须用玻璃刻刀注明编号；如使用的载玻片一端有磨砂面，可用2B铅笔在磨砂面上直接书写）。
抗酸染色镜检结果分级报告标准
抗酸染色镜检结果分级报告标准
抗酸染色镜检是一种常用的诊断结核病的方法，针对该检测方法，制定一套分级报告标准，有助于准确评估患者的病情，为临床治疗提供科学依据。
具体标准如下：
一、阴性：未观察到任何酸染色菌
二、阳性：在视野内观察到1-9个酸染色菌
三、1+级：在视野内观察到10-99个酸染色菌
四、2+级：在视野内观察到100-999个酸染色菌
五、3+级：在视野内观察到1000个以上酸染色菌
以上为抗酸染色镜检结果分级报告标准，可以根据具体情况进行评估和报告。
需要注意的是，抗酸染色镜检结果不是诊断结核病的唯一依据，需要结合其他检查结果和临床表现进行综合分析。
- 1 -。
微生物检验实验室抗酸染色标准操作规程
微生物检验实验室抗酸染色标准操作规程1．目的规范抗酸染色标准操作规程。
2．原理抗酸菌具有耐受酸性介质脱色的生物状，此类细菌在石碳酸（苯酚）的协同作用下，被复红染色剂着色，能够耐受酸性酒精脱色，显微镜观察时保持紫色红色；而其他脱落细胞或标本中的非抗酸菌被酸性酒精脱色，可被复染剂亚甲蓝染为蓝色。
3．试剂3.1 Kinyoun溶液。
碱性品红40g 乙醇（95%）200ml 石碳酸80ml 蒸馏水1000ml3.2 Gabett溶液亚甲蓝10g 无水酒精300ml硫酸200ml 蒸馏水500ml4．质控每天用龟分支杆菌ATCC93326做阳性对照，大肠埃希菌ATCC25922做阴性对照。
5.操作步骤5.1 初染涂片上滴加石碳酸复红液，用火焰加热至产生蒸汽，约5分钟，水洗。
5.2 脱色第二液脱色约1分钟，轻轻摇动玻片，无红色脱色或略呈粉红色时为止，水洗。
5.4 复染第三液复染30秒，水洗。
自然干燥后镜检。
6.结果判断抗酸杆菌呈红色。
7.注意事项7.1 每张玻片只能涂一份标本，禁止将2份或2份以上的标本涂在同一张载玻片上。
7.2 为防止交叉感染，标本应先高压灭菌后再涂片染色。
7.3 在涂抹痰标本时，严禁对载玻片进行加热。
7.4 菌龄为18～24小时为佳。
8.临床意义只针对用于结核病、麻风病等的细菌检查，初步诊断。
9.安全防护措施9.1操作人员要戴口罩、手套和穿隔离衣。
9.2涂片制备痰标本要高压灭菌或者在标本中加入等量0.5%“84”消毒液（含有效氯2500mg/L）后涂片。
气管刷片送检的玻片，紫外线灯下照射30分钟进行染色镜检。
或者对于进行抗酸染色的痰标本（因使用的容器原因不能高压灭菌）。
9.3镜检后的玻片均浸泡在含有效氯1000mg/L的消毒液中，高压灭菌后处理。
9.4所有标本、污染物丢弃之前，都需经高压灭菌、焚烧或浸泡杀菌剂中。
抗酸染色质量控制
抗酸染色室内质量控制一、痰标本收集（一）容器：采用国家结核病参比实验室推荐的国际通用螺旋盖痰瓶，或可密封塑料盒收集痰标本，痰容器应标明病人姓名、日期、编号（初诊病人门诊序号或随访病人登记号）和容器序号1、2、3（1＝当日即时痰，2＝次日晨痰，3＝次日即时痰）。
（二）痰标本性质：脓痰、干酪痰、血痰、粘液痰为合格标本；唾液或口水为不合格标本，除照常进行涂片检查外，应要求患者重新送检。
（三）初诊病人应收集3份痰标本（当日即时痰、次日晨痰、次日即时痰），治疗中或复诊随访病人按期每次收集2份痰标本（当日即时痰、当日或次日晨痰）。
（四）对当日不能进行涂片检查的痰标本，须置于4℃冰箱保存，注意防止痰液干涸或污染二、抗酸染色液准备（一）珠海贝索生物技术有限公司生产的结核菌染色液（冷染法）（二）生产许可证号：粤食药监械生长期许20010407号（三）染色液试剂瓶须标明染色液名称、浓度和制备时间。
（四）染色液贮存温度：5℃—30℃存放，避光保存。
三、载玻片（一）新载玻片应经95%乙醇脱脂，检查无划痕后方可使用。
（二）一张载玻片只能涂抹1份痰标本。
（三）载玻片只允许一次性使用，不得清洗后重复使用。
（四）载玻片正面左侧1/3处用标记笔标记实验序号。
（五）载玻片正面右侧2/3中央处均匀涂抹成面积为1.0×2.0㎝卵圆形痰膜。
四、染色（一）肉眼观察染色后的痰膜应呈均匀淡蓝色，无红色斑块。
（二）染色后的涂片放置在报纸上，如果文字透过痰膜不能被看清，表明该涂片涂抹的太厚。
（三）染色后的痰膜脱落部分应小于整个涂抹面积的10%。
五、镜检要求（一）为防止抗酸杆菌的交叉污染，严禁油镜头直接接触涂片上的痰膜。
（二）仔细观察300视野，不少于10分钟。
（三）每个工作日，一名镜检人员的涂片阅读量不应超过25张。
（四）连续阅读10~12张涂片后，应休息20分钟左右。
（五）采用自查和互查方式，至少抽查复验当日10%涂片，并进行质控登记。
抗酸染色0.1之欧阳学创编
时间：2021.03.03
创作：欧阳学
1）初染
用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红2-3滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，加热3-5分钟，待标本冷却后用水冲洗。
2）脱色
3%盐酸酒精脱色30秒~1分钟；用水冲洗。
3）复染
用碱性美兰溶液复染1分钟，水洗，用吸水纸吸干后用油镜观察。
抗酸染色的染液配制
1、石炭酸复红
碱性复红酒精饱和溶液 10mL
5%石炭酸 90mL
2、3%盐酸酒精
浓盐 3mL
95%酒精 97mL
3、吕氏美兰液
美兰酒精饱和液 30mL
氢氧化钾（1:10000） 100mL抗酸染色的原理
分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。
齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。
时间：2021.03.03
创作：欧阳学
抗酸染色液使用说明书
抗酸染色液使用说明书货号：G1170规格：3×50ml/3×100ml/3×250ml保存：室温干燥保存，有效期12个月。
试剂盒组成：抗酸染色液A50ml/100ml/250ml抗酸染色液B50ml/100ml/250ml抗酸染色液C50ml/100ml/250ml产品说明：抗酸染色用于细菌标本涂片或菌落涂片的染色。
常用于对分枝杆菌属进行初步鉴别。
普通细菌染色比较容易着色，而分支杆菌细胞壁含脂质较多，染色比较困难，必须加热才能被Carbolfuchsin solution 着色。
分枝杆菌菌体着色后，能抵抗盐酸酒精等酸性脱色剂的脱色，而其他细菌和细胞等均被脱色。
当再用碱性美蓝复染后，分支杆菌仍为红色，其他细菌与背景呈蓝色。
操作步骤：1、做一适当厚度的涂片，干燥后火焰固定。
2、滴加抗酸染色液A于玻片上，覆盖住样本，在酒精灯上加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时移开，必要时可续加染色剂以免干涸。
加热3-5分钟。
3、移开火，静置5分钟，待标本冷却后以自来水冲洗。
4、用抗酸染色液B脱色（大约1分钟）至无红色染液脱出为止。
完全脱色可避免产生假阳性结果。
5、自来水缓慢冲洗后，滴加抗酸染色液C复染约30秒，水洗。
6、待干后油镜观察。
预期结果：抗酸菌被染成红色，为抗酸阳性；其它细菌染成蓝色，为抗酸阴性。
背景细胞及杂质也被染成蓝色。
注意事项：1.染色程度可通过改变染色时间或染色温度做适当调整。
2.每次试剂用完后，请迅速盖好，以免挥发。
3.本产品有一定的刺激性和腐蚀性，使用时请穿实验服并戴一次性手套操作。
0002改良抗酸染色(sop)
改良抗酸染色操作程序1 目的改良传统抗酸染色方法，以增加抗酸杆菌检出的阳性率。
2 原理由于抗酸杆菌含有分枝菌酸，可与石碳酸复红牢固结合。
因其不允许被石碳酸复红染上色的类脂质外溢，所以抗酸杆菌虽经盐酸酒精脱色，但仍能保持红色。
而非抗酸杆菌则被染为蓝色。
改良抗酸染色法在标本制备及染色方面的改进，极大地提高了细胞内外抗酸杆菌检出的阳性率。
尤其是细胞内抗酸杆菌的检出，有助于临床判定现症或潜伏感染。
3 仪器3.1 器材3.1.1 FMU-6型细胞涂片离心仪3.1.2 FMU-6型细胞涂片沉淀器3.1.3 显微镜。
3.1.4 载玻片3.2 试剂3.2.1 0.3 % TritonX-100萋纳石碳酸复红溶液碱性复红乙醇饱和溶液 10 ml5 % 石碳酸溶液 90 mlTritonX-100 0.3 ml3.2.2 脱色剂浓盐酸 20 ml95 % 乙醇 80 ml3.2.3 复染液（吕弗勒美篮液）美篮乙醇饱和溶液 30 ml10 % 氢氧化钾 0.1ml蒸馏水 100 ml3.2.4 0.3 % TritonX-100（曲拉通）溶液TtritonX-100 3 ml蒸馏水 1000 ml3.2.5 APES（3-氨丙基-3-乙氧基甲硅烷）工作溶液现用现配，用丙酮1:50稀释。
3.2.6 固定液（pH 6.6）丙酮 45ml甲醛 25ml磷酸氢二钠 20mg磷酸二氢钾 100mg蒸馏水 30ml3.2.7 0.1M 磷酸盐缓冲液（PH7.4）Na2HPO4·12H2O 26.46 gNaH2PO4·2H2O 2.664 gNaCl 40 gKCl 1.8 g蒸馏水 900 ml4 操作步骤4.1 载玻片处理将酸碱处理后的载玻片浸泡于APES工作溶液30秒，取出冲洗，晾干，备用。
4.2 标本收集4.2.1 将载玻片和滤纸插入FMU-6型细胞涂片沉淀器中，滤纸上的孔必须与FMU-6型细胞涂片沉淀器上的孔对准，并旋紧FMU-6型细胞涂片沉淀器。
痰抗酸杆菌的荧光染色法
阴性报告
报告抗酸杆菌数 抗酸杆菌阳性(1 ＋) 抗酸杆菌阳性(2 ＋) 抗酸杆菌阳性(3 ＋) 抗酸杆菌阳性(4 ＋) 标本片保存 标本片保存期
抗酸杆菌荧光染色检查质量控制
• 主要包括：标本收集、试剂、涂片、染色 操作、显微镜维护、镜检和结果登记及痰 片的保存。 • 1.标本收集：用密封有盖盒收集痰标本，容 器应标明病姓名、送检日期及门诊号。标 本性质：应为深咳痰液，痰性状类别：脓 样痰、干酪样痰、血性样痰、脓性粘液痰 和水样痰。
舜宇EX30显微镜荧光镜操作 简要程序
• 1. 接通电源之前，确认荧光器组的调光手 轮是断开（OFF）状态； • 2. 把外接电源变压器输出接口（直流6V） 插入LED荧光照明器组的电源插口，然后把 另一端直接插到供电插座上； • 3. 缓缓顺时针方向开启荧光器组件的调光 手轮，不必开到最大； • 4.将荧光滤光块箭头切换到指向 Flourescence标志
抗酸杆菌荧光染色检查操作程序
• （二）染色 • 6．沥去残余水； • 7．滴加0.5%高锰酸钾复染液，保持染色 1～4分钟（根据试剂说明书或经验）； • 流水自玻片上端轻洗，洗去复染液，沥去 残余水，待自然干燥。
抗酸杆菌荧光染色检查操作程序
• （三）镜检和报告 • 使用汞光源灯或LED光源的荧光显微镜， 用10×目镜，20×物镜观察，发现疑似抗 酸菌的杆状物，转用40×物镜确认。在黑 暗背景下，抗酸杆菌呈黄色绿荧光，杆状 略弯曲。按下列标准报告结果： • 1.抗酸杆菌阴性：连续观察50个视野，未发 现抗酸杆菌。
抗酸杆菌荧光染色检查质量控制
• 6.镜检：镜头清晰，无霉菌，视野清晰，物 镜20×寻找黑暗背景中的荧光镜象，发现 形似抗酸杆菌的时，用40×物镜确认，注 意抗酸杆菌荧光染色镜检不使用油镜。
实验九抗酸染色
3、油镜观察
五、实验结果：
1.结核杆菌呈红色，常堆积成团，排列无序，偶 呈分枝状生长。 2.背景及非抗酸性细菌呈兰色。
六、注意事项：
1、涂片要充分研磨，防止细菌成团
2、涂片大小、厚度要适中 3、固定温度合适 4、初染加热的温度，勿沸腾 5、染色时间 6、冲洗
三、实验材料：
细菌：结核杆菌
染液：石炭酸复红液、3%盐酸酒精、碱性美
兰溶液
其它：接种环、酒精灯、载玻片等
四、实验方法
1、细菌涂片的制备
1）涂片：20mm*15mm厚涂片，竹签挑取，涂2-3遍
2）干燥：自然干燥，或火焰
3）固定：火焰固定，必须
2、染 色
1）初染：滴加石炭 酸复红适量，在火焰高处徐徐加热， 切勿沸腾，出现蒸汽暂时离开火焰；若染液蒸 发减少，应再加染液，以免干涸，加热5min （可延长），待标本冷却后用水冲洗。 2）脱色： 3%盐酸酒精脱色30sec~1min至无红色液体 流下，再用水冲洗。 3）复染：用碱性美兰溶液复染1min，用水冲洗后 用吸 水纸吸干。
实验九 抗 酸 染 色
临床病原生物学教研室
一、实验目的：
1. 掌握抗酸染色的原理和方法
2. 掌握细胞壁内含有大量的脂质，包围在 肽聚糖的外面，一般水溶性染料不易进入，所以 分枝杆菌一般不易着色且一旦染色后不易脱色， 所以要经过加热和延长染色时间来促使其着色。 因分枝菌酸与染料结合后，很难被酸性脱色 剂脱色，故分枝杆菌又称抗酸杆菌。
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冲洗未先平放扣2分，冲洗未从一端冲洗扣2分
脱色
1.3%盐酸酒精脱色30秒--1分钟；2.用水冲洗（流水自玻片一端轻缓冲洗，沥去玻片上剩余的水）。
（20分）
20分
未按标准步骤完成每步扣10分。酒精脱色未完全（痰膜无可视红色为止）扣2分。
复染
用亚甲兰溶液，复染30秒--1分钟，水洗，待自然干燥后用油镜观察。
2.滴加石碳酸复红2-3滴，覆盖整个标本
3.在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，加热3-5分钟.
4.待标本冷却后用水冲洗，（流水自玻片一端轻缓冲洗，沥去玻片上剩余的水）
（40分）
40分
未按标准完成每步扣10分。石碳酸复红未覆盖整个玻片标本扣2分
加热出现沸腾扣2分
抗酸染色操作步骤考核评分标准
被考核人：得分：
步骤
操作程序
分值
评分方法
缺陷及扣分
细菌图片的
制备
1涂片：用竹签挑取可疑部分标本0.05ml，涂10-20mm的卵圆形痰膜。
2干燥：自然干燥或染色前加热固定。
3固定：火焰Leabharlann 定（30分）30分
每骤10分，缺一步扣10分。痰膜过宽或过窄扣2分
初染
1.用玻片夹夹持涂片标本.
（10分）
10分
完成不规范每步扣5分，扣完为止。有红色斑块，未达到痰膜肉眼观为亮蓝色，扣2分。
合计
考核时间：2014年7月日监考人：