抗酸染色操作规程
抗酸染色检查的原理和方法
抗酸染色检查的原理和方法
抗酸染色检查是一种用于检测酸杆菌的方法，特别用于检测结核杆菌。
它的原理是利用染色剂对细菌细胞壁中的酸性成分进行染色，通过显微镜观察染色后的细菌来进行检测。
具体方法包括：
1. 准备标本：收集待检的样本，如痰液、尿液等，可选择直接或间接涂片法。
2. 固定染色：将标本制成涂片，然后固定在加热后的玻璃片上，通常使用95%乙醇、甲醛等固定剂进行固定。
3. 染色处理：将固定后的标本涂片进行染色处理。
通常使用的抗酸染色法有神经酸染色法、济南中国红染色法和抗酸染色法等。
4. 洗涤：将染色后的标本涂片用清水洗涤，以去除多余染色剂。
5. 干燥：将洗涤后的标本涂片在空气中自然晾干。
6. 观察：将干燥的标本涂片放置在显微镜下进行观察，通过放大镜放大视野，并使用油浸镜头进行观察，寻找染色后细菌的存在。
通过观察染色后的细菌形态和染色情况，可以确定是否存在酸杆菌或结核杆菌等细菌。
这种方法可以有效地检测出结核病等疾病的感染。
抗酸染色——标准操作
抗酸染色一、原理本试剂盒采用WHO推荐的Ziehl-Neelsen法分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。
但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色。
齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。
当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。
二、试剂石碳酸复红染液、酸性酒精溶液、亚甲蓝溶液三、方法1.涂片：参见各标本操作程序涂片，涂片后在室温下自然干燥，也可在酒精灯上略加温，使之迅速干燥，但勿靠近火焰2.固定：常用高温进行固定。
即手持载玻片一端，标本面朝上，在灯的火焰外侧快速来回移动3~4次，共约3~4秒。
要求玻片温度不超过60℃，以玻片背面触及手背皮肤不觉过烫为宜，放置待冷后染色3.染色3.1 滴加石碳酸复红染液盖满玻片，染色10分钟或更久，无需加温3.2 流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余的水3.3 滴加酸性酒精溶液盖满玻片，脱色1-2分钟，如有必要，需流水冲去溶液后，再次脱色至痰膜无可视红色为止3.4 流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余的水3.5 滴加亚甲蓝溶液，染色30秒钟3.6 流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余的水，待玻片干燥后镜检3.7 一张染色合格的玻片，痰膜肉眼观察为亮蓝色，无红色斑块四、结果判定1.干燥后油镜观察300个视野（观察时间不少于4min），抗酸性细菌呈红色，其它细菌或细胞呈蓝色2. 报告方式2.1 未找到抗酸杆菌2.2 找到抗酸杆菌±：可疑，发现抗酸杆菌1-2条/300视野2.3 找到抗酸杆菌1+：发现抗酸杆菌3-9条/100视野2.4 找到抗酸杆菌2+：发现抗酸杆菌1-9条/10视野2.5 找到抗酸杆菌3+:发现抗酸杆菌1-9条/1视野2.6 找到抗酸杆菌4+：发现抗酸杆菌≥10条/1视野五、注意事项1.每一玻片只能涂一份标本，以防脱落混淆2. 脱色时间需根据涂片厚薄而定，厚片可适当延长，以无红色脱出为止3. 冬季室温过低时，染色时间要适当延长4. 有时同一个抗菌体上红色深浅也有不同，观察时应注意5. 每次试剂用完后，请迅速盖好，以免挥发，储存时应避免高、低温及阳光照射6. 在涂抹痰标本时，严禁对玻片加热7. 染色时勿使玻片上的染液干燥六、临床意义分支杆菌属（结核分支杆菌、麻风分枝杆菌、非典型分支杆菌）、放线菌抗酸染色阳性，可初步鉴定细菌。
抗酸染色操作规程
抗酸染色操作规程
1.目的
规范抗酸染色操作规程，确保染色结果清晰可靠。
2、原理
分枝杆菌细胞壁含脂质较多,其中主要成分为分枝菌酸,此物具有抗酸性,染色时与石炭酸复红结合牢固,能抵抗酸性乙醇的脱色作用,因此抗酸菌能保持复红的颜色,达到染色目的。
3、范围
用于抗酸性细菌(结核、麻风分枝杆菌)初步鉴定
4、质量控制
龟分枝杆菌ATCC93326做染色阳性,大肠埃希菌ATCC25922为染色阴性对照。
5、试剂
5.1石炭酸复红
碱性复红 10g 95,酒精 100ml 5,石炭酸 900ml (边加边研磨) 5.2盐酸脱色液(3,盐酸酒精)
浓盐酸 3ml 95,酒精 97ml
5.3吕氏美兰
美兰 0.3g 95,酒精 30ml 蒸馏水 70ml 10,KOH水溶液 0.1ml 复染液 6、工作程序
6.1制片:待检标本用无菌生理盐水涂片，经自然干燥后用火焰固定。
6.2初染:加石炭酸复红溶液，徐徐加热至有蒸汽出现，切不可沸腾。
反复染5分钟,清水冲洗。
6.3脱色:加盐酸脱色液，不时摇动玻片至无红色脱落为止，清水冲洗。
6.4复染:加美蓝复染，染0.5-1分钟，清水冲洗。
6.6待涂片自然干燥后，油镜镜检。
7、结果判断
结核杆菌呈红色，其它细菌呈蓝色
8、注意事项
染液注意密封，以免凝结产生沉淀影响使用效果。
体液标本均应离心后取下层沉淀液与染液混合，以提高检出率。
提高责任心，做到全片检查。
抗酸染色操作步骤考核评分标准
冲洗未先平放扣2分，冲洗未从一端冲洗扣2分
脱色
1.3%盐酸酒精脱色30秒--1分钟；2.用水冲洗（流水自玻片一端轻缓冲洗，沥去玻片上剩余的水）。
（20分）
20分
未按标准步骤完成每步扣10分。酒精脱色未完全（痰膜无可视红色为止）扣2分。
复染
用亚甲兰溶液，复染30秒--1分钟，水洗，待自然干燥后用油镜观察。
2.滴加石碳酸复红2-3滴，覆盖整个标本
3.在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，加热3-5分钟.
4.待标本冷却后用水冲洗，（流水自玻片一端轻缓冲洗，沥去玻片上剩余的水）
（40分）
40分
未按标准完成每步扣10分。石碳酸复红未覆盖整个玻片标本扣2分
加热出现沸腾扣2分
抗酸染色操作步骤考核评分标准
被考核人：得分：
步骤
操作程序
分值
评分方法
缺陷及扣分
细菌图片的
制备
1涂片：用竹签挑取可疑部分标本0.05ml，涂10-20mm的卵圆形痰膜。
2干燥：自然干燥或染色前加热固定。
3固定：火焰Leabharlann 定（30分）30分
每骤10分，缺一步扣10分。痰膜过宽或过窄扣2分
初染
1.用玻片夹夹持涂片标本.
（10分）
10分
完成不规范每步扣5分，扣完为止。有红色斑块，未达到痰膜肉眼观为亮蓝色，扣2分。
合计
考核时间：2014年7月日监考人：
微生物抗酸染色步骤
微生物抗酸染色步骤如下：
1. 准备试剂：选择合适的载玻片，用9%的冰醋酸溶液浸湿载玻片。
用无菌操作取瑞氏染液、美蓝染液、无菌生理盐水，分别滴加到染色槽中，确保每个槽中液体的高度占据染色槽的2/3。
2. 涂片：采取标本时，应使用无菌操作取少量标本放入无菌离心管中，加入少量的无菌生理盐水，振荡离心管使标本充分溶解。
用吸管吸取少量的溶解标本均匀涂布在载玻片上，注意应避免标本在载玻片上形成气泡。
3. 抗酸染色：用竹镊子将涂有标本的载玻片拿起来，先加入少量美蓝染液，盖上盖玻片，避免染液进入对下步观察产生干扰。
用同样方法加等量无菌生理盐水洗去染液后，再滴加少量瑞氏染液，迅速用滤纸吸去多余染液。
4. 镜检观察：染色后，待染色液稍干后，用显微镜观察染色情况。
如果是抗酸阳性杆菌，则会被染成蓝色或淡蓝色；而其他革兰阴性杆菌则会被染成红色。
微生物抗酸染色主要用于区分抗酸杆菌和其他革兰阴性杆菌，尤其是在结核病诊断和疫情监测中具有重要意义。
不同微生物的抗酸染色结果可能会因为菌种的差异而略有差异。
具体操作时应注意无菌操作和染液的配制方法，以及涂片、染色和观察的技巧。
以上内容仅供参考，建议到正规医疗机构进行咨询，获取更全面和准确的信息。
24小时尿液抗酸染色标准操作程序
24小时尿液抗酸染色标准操作程序1 目的有效发现抗酸性细菌。
2 原理结核杆菌、麻疯杆菌等抗酸性细菌，因其菌体表面有一层类脂或脂质的皮膜而不易着色，但一经着色后不易被酸性酒精脱色，仍固有最初色素的颜色（红色）。
3 试剂3.1 BASO结核菌染色液3.2 贮存条件：贮存于15~30℃，相对湿度不大于80%，无腐蚀性气体和通风良好的室内。
4 标本采集与接收24h尿标本由患者收集后全部送检，最好连续留取三次，按标本签收程序签收。
5 操作步骤5.1 标本分析5.1.1 收集24小时尿液加入明矾沉淀后取沉淀物离心并涂片，待干燥。
5.1.2 加Cabolfuchsin染色5分钟或更久，水洗。
5.1.3 加Acid Alcohol脱色2分钟。
水洗。
5.1.4 加Methylene Blue复染30秒。
5.1.5 干燥，镜检。
5.2 检验结果的录入和确认5.2.1 打开电脑，启动LIS程序，输入用户名及口令后，进入检验程序。
5.2.2 选择“检验录入”，进行检验结果的录入及修改。
通过申请序号进行结果的输入选择“住院号”，输入检验结果，并对患者以前检测结果进行历史回顾，观察变化趋势。
5.2.3 检验结果的确认：检验结果的确认应由主管技师(主治医师)或专业负责人进行确认，方法为单击“信息处理”菜单，核对检验结果后，按“审核”键进确认。
6 结果判定6.1 抗酸性菌：呈红色，6.2 其他细菌及细胞：呈蓝色7 质量控制7.1 试剂用完后，要迅速盖好，以免挥发。
7.2 抗酸染色直接用于痰标本时，可以适当增加标本涂片的厚度，以提高检出率。
7.3 试剂效期过后，不能使用。
7.4 试剂贮存时，尽量避免高、低温环境及阳光直射。
7.5 受试验条件及个体差异限制，本试验阴性不能说明未感染结核分枝杆菌。
8 临床意义8.1 结核分枝杆菌不产生内毒素和外毒素，大量生长繁殖，机体对菌体成分与其代谢产物引起免疫损伤及变态反应，导致一系列组织细胞学上变化。
抗酸染色液(Kinyoun冷染法)
抗酸染色液(Kinyoun 冷染法)简介：分枝杆菌的细胞壁内含有大量脂质包围在肽聚糖的外面, 所以分枝杆菌一般不易着色。
传统的染色方法要经过加热和延长染色时间来促使其着色。
分枝杆菌中的分枝菌酸与染料一旦结合后，就很难被酸性脱色液脱色，故名抗酸染色。
其中最具代表性是结核杆菌Ziehl －Neelsen 染色法，该法是WHO 推荐热染的方法。
Leagene 抗酸染色液(Kinyoun 冷染法)属于冷染色液，无需加热，相对较抗酸热染液安全。
其染色原理是在室温条件下，分枝菌酸与复红结合成复合物，经亚甲蓝复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。
该染色法较改良Kinyoun 冷染法要深，更适用于常规抗酸染色，Leagene 推荐该Kinyoun 冷染法作为实验室或临床上标准抗酸染色法。
组成：自备材料：1、 接种环2、 载玻片3、 蒸馏水4、 显微镜操作步骤(仅供参考)：1、 接种环挑取待检样本，涂布于载玻片上，自然干燥。
2、 滴加Kinyoun 复红染色液，染色。
3、 不必加热，蒸馏水冲洗。
4、 用Kinyoun 脱色液脱色至无红色为止。
5、 蒸馏水冲洗。
6、 用亚甲蓝染色液染色。
7、 蒸馏水冲洗。
编号 名称DM0035 3×50mlDM0035 3×100mlStorage试剂(A): Kinyoun 复红染色液 50ml 100ml RT 避光 试剂(B): Kinyoun 脱色液 50ml 100ml RT 试剂(C): 亚甲蓝染色液 50ml100ml RT 避光使用说明书1份8、轻轻吸干水分，自然干燥。
9、油镜镜检。
染色结果：抗酸菌红色非抗酸菌、细胞、背景蓝色注意事项：1、每次使用后盖紧试剂瓶，以防试剂挥发和污染。
2、上述试剂均对人体有刺激性，请注意适当防护。
3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。
相关：=编号名称CC0007 磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)DC0032 Masson三色染色液DG0005 糖原PAS染色液DM0007 瑞氏-姬姆萨复合染色液DM0016 增强革兰氏染色液PW0053 Western抗体洗脱液(碱性)TC0713 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)TC1213 总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP单试剂比色法)。
改良抗酸染色法
改良抗酸染色法
改良抗酸染色法（隐孢子虫）
试剂：石炭酸复红试剂（第一试剂）：碱式复红4g，98% 酒精溶液20ml，石炭酸8 ml，蒸馏水100 ml ; 10% 盐酸酒精溶液; 2% 孔雀绿原液：孔雀绿2g ，蒸馏水100ml ；1：10 孔雀绿试剂（第二试剂）：孔雀绿原液1ml ，蒸馏水10ml
步骤：涂2块硬币大小的粪液于载玻片上，待其自然晾干, 滴加甲纯固定5-10min，滴加第一试剂染色，置于酒精灯上烘烤到出现烟雾为止，等待30min，冲洗用10% 盐酸酒精溶液（10ml盐酸90ml 水）脱色1min （此步骤可反复），用第二试剂染色1 min ，自然晾干.即可观察..
抗酸染色镜检的操作规程
抗酸染色镜检的操作规程1.目的:通过抗酸染色鉴别结核杆菌.2.原理:一般认为抗酸性菌体内含脂类物质较多,此物质具有抗酸的性质.染色时,它与石碳酸复红结合牢固,能抵抗酸性酒精的脱色作用,同时脂类又不易透过细胞膜,不能被脱色,因此抗酸菌能保持复红的颜色.相反,非抗酸性菌体内含脂类少,易被酸性酒精脱色,脱色时又易从细胞膜渗出而脱掉,最后被复染蓝色.3.试剂:3.1试剂来源:购买珠海贝索3.2试剂盒组成:R1:石碳酸复红溶液1χ100ml R2:酸性酒精溶液1χ100mlR3:亚甲基蓝溶液1χ100ml4.质量控制:室内质控包括痰标本收集,痰片染色和镜检结果复查.痰涂片应保存供上一级参比实验室质量控制检查.5.标本采集与处理:5.1病人留标本前用清水漱口,用力咳出来自支气管深部的脓样或粘液样痰,量不少于3ml避免留唾液或鼻咽部分泌物.5.2夜间痰为就诊前一天晚睡前咳出的痰液.5.3初诊病人应送3份痰标本(夜间痰、清晨痰和即时痰),痰液不合格者重送.5.4涂片:取脱脂过的干燥、清洁、无油污的新玻片，在玻片背面的左端1/3处以记号笔编号,用折断的竹签挑取痰标本的脓样,干酪样0.1ML,于玻片上均匀涂抹成2ⅹ2.5CM卵圆形痰膜,自然干燥后待检.6.染色方法:6.1用片夹夹住涂片火焰固定,加石碳酸复红溶液,徐徐加热至有蒸汽出现染5分钟,水洗.6.2加脱色剂,不时摇动玻片至无色脱落为止,水洗.6.3加复染液,染0.5-1分钟,水洗涂片后镜检.7.镜检:取染好的干燥涂片,用低倍镜、高倍镜览片,最后在涂片上滴1-2滴香柏油,用油镜仔细观察.8.结果的判断:结核杆菌呈红色,其它细菌呈蓝色.9.实验完后的处理:9.1先用擦镜纸将镜头上的油擦去,再用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头擦2-3次,最后用干净擦镜纸擦2-3次,向一个方向擦拭。
9.2废弃玻片放入5% 84消毒液中浸泡60分钟,消毒液要每天更换。
9.3痰盒和废弃标本等污染物应弃于有盖的污物桶内,消毒后焚烧。
革兰染色与抗酸染色操作规范
一、实验原理G＋菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上，呈紫色。
G－菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高，乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，沙黄或稀释石碳酸复红复染后呈红色。
二、实验器材【载玻片、试管架、红蓝铅笔、接种环、记号笔、酒精灯、打火机、生理盐水、吸水纸、冲洗瓶】、钟表、显微镜、香柏油、擦镜纸、染色盘、染色架、消毒洗手液等。
三、实验试剂革兰染液：草酸铵结晶紫染液、碘液、脱色液（95%乙醇）、蕃红复染液。
四、实验标本痰液五、操作步骤1.标记选择玻片并正确编号（标本号）2.涂片用灭菌接种环挑取菌落与载玻片上预先滴加的生理盐水涂布成1cm2或蚕豆大小的半透明菌膜。
3.干燥涂片制成后，在空气中使其迅速干燥，以免菌体皱缩变形（若需加快干燥速度，将涂布面朝上，置于火焰上方，不烫手的位置，慢慢烘干，切勿紧贴火焰）。
4.固定玻片干燥后火焰加热法固定，即玻片（菌膜面向上）中速从火焰上端通过3次进行固定，以玻片反面接触手背皮肤，热而不烫为宜。
5.初染加结晶紫染液染60s，细流水冲洗，并倒去玻片上积水。
6.媒染加碘液染60s，细流水冲洗。
7.脱色加脱色液，不时摇动10s~30s，至无紫色逸出为止，细流水冲洗。
8.复染加复染液，染30s~60s，细流水冲洗。
9.镜检待已染色的细菌标本片自然干燥或用吸水纸吸干后，再用显微镜进行观察，先用低倍镜观察，再滴加一滴香柏油用油镜观察。
注意：染色时间不同试剂有所不同。
六、结果观察1、紫色：G+2、红色：G-一、实验原理：分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。
但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。
抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。
抗酸染色(冷染法)标准操作规程
抗酸染色（冷染法）标准操作规程01原理本试剂盒采用 WHO 推荐的 Ziehl-Neelsen 法分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。
但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色。
齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。
当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。
02试剂石碳酸复红染液、酸性酒精溶液、亚甲蓝溶液03方法1. 涂片：参见各标本操作程序涂片，涂片后在室温下自然干燥，也可在酒精灯上略加温，使之迅速干燥，但勿靠近火焰2. 固定：常用高温进行固定。
即手持载玻片一端，标本面朝上，在灯的火焰外侧快速来回移动 3 ~ 4 次，共约 3 ~ 4 秒。
要求玻片温度不超过 60℃，以玻片背面触及手背皮肤不觉过烫为宜，放置待冷后染色3. 染色3.1 滴加石碳酸复红染液盖满玻片，染色 10 分钟或更久，无需加温3.2 流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余的水3.3 滴加酸性酒精溶液盖满玻片，脱色 1 ~ 2 分钟，如有必要，需流水冲去溶液后，再次脱色至痰膜无可视红色为止3.4 流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余的水3.5 滴加亚甲蓝溶液，染色 30 秒钟3.6 流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余的水，待玻片干燥后镜检3.7 一张染色合格的玻片，痰膜肉眼观察为亮蓝色，无红色斑04结果判定1. 干燥后油镜观察 300 个视野（观察时间不少于 4 min），抗酸性细菌呈红色，其它细菌或细胞呈蓝色2. 报告方式2.1 未找到抗酸杆菌2.2 找到抗酸杆菌±：可疑，发现抗酸杆菌 1 ~ 2 条 / 300 视野2.3 找到抗酸杆菌 1+：发现抗酸杆菌 3 ~ 9 条 / 100 视野2.4 找到抗酸杆菌 2+：发现抗酸杆菌 1 ~ 9 条 / 10 视野2.5 找到抗酸杆菌 3+: 发现抗酸杆菌 1 ~ 9 条 / 1 视野2.6 找到抗酸杆菌 4+：发现抗酸杆菌≥ 10 条 / 1 视野05质量控制每次用卡介苗做阳性对照大肠埃希菌 ATCC25922 做阴性对照06注意事项1. 每一玻片只能涂一份标本，以防脱落混淆；2. 脱色时间需根据涂片厚薄而定，厚片可适当延长，以无红色脱出为止；3. 冬季室温过低时，染色时间要适当延长；4. 有时同一个抗菌体上红色深浅也有不同，观察时应注意；5. 每次试剂用完后，请迅速盖好，以免挥发，储存时应避免高、低温及阳光照射；6. 在涂抹痰标本时，严禁对玻片加热；7. 染色时勿使玻片上的染液干燥。
微生物检验实验室抗酸染色标准操作规程
微生物检验实验室抗酸染色标准操作规程1．目的规范抗酸染色标准操作规程。
2．原理抗酸菌具有耐受酸性介质脱色的生物状，此类细菌在石碳酸（苯酚）的协同作用下，被复红染色剂着色，能够耐受酸性酒精脱色，显微镜观察时保持紫色红色；而其他脱落细胞或标本中的非抗酸菌被酸性酒精脱色，可被复染剂亚甲蓝染为蓝色。
3．试剂3.1 Kinyoun溶液。
碱性品红40g 乙醇（95%）200ml 石碳酸80ml 蒸馏水1000ml3.2 Gabett溶液亚甲蓝10g 无水酒精300ml硫酸200ml 蒸馏水500ml4．质控每天用龟分支杆菌ATCC93326做阳性对照，大肠埃希菌ATCC25922做阴性对照。
5.操作步骤5.1 初染涂片上滴加石碳酸复红液，用火焰加热至产生蒸汽，约5分钟，水洗。
5.2 脱色第二液脱色约1分钟，轻轻摇动玻片，无红色脱色或略呈粉红色时为止，水洗。
5.4 复染第三液复染30秒，水洗。
自然干燥后镜检。
6.结果判断抗酸杆菌呈红色。
7.注意事项7.1 每张玻片只能涂一份标本，禁止将2份或2份以上的标本涂在同一张载玻片上。
7.2 为防止交叉感染，标本应先高压灭菌后再涂片染色。
7.3 在涂抹痰标本时，严禁对载玻片进行加热。
7.4 菌龄为18～24小时为佳。
8.临床意义只针对用于结核病、麻风病等的细菌检查，初步诊断。
9.安全防护措施9.1操作人员要戴口罩、手套和穿隔离衣。
9.2涂片制备痰标本要高压灭菌或者在标本中加入等量0.5%“84”消毒液（含有效氯2500mg/L）后涂片。
气管刷片送检的玻片，紫外线灯下照射30分钟进行染色镜检。
或者对于进行抗酸染色的痰标本（因使用的容器原因不能高压灭菌）。
9.3镜检后的玻片均浸泡在含有效氯1000mg/L的消毒液中，高压灭菌后处理。
9.4所有标本、污染物丢弃之前，都需经高压灭菌、焚烧或浸泡杀菌剂中。
抗酸染色操作
抗酸染色操作程序【检验原理】抗酸染色可将细菌分为两大类，即抗酸性细菌和非抗酸性细菌，因日常大多数病原菌为非抗酸性细菌，所以抗酸染色不作为临床上常规的细菌检测项目，只针对结核病等具有抗酸性细菌标本的染色。
【主要组成成分】1.石碳酸复红溶液2.脱色剂（3%盐酸酒精溶液）3.复染液（吕氏美兰溶液）【样本要求】1.直接用于痰标本时，可以适当增加标本涂片的厚度，以提高检出率；2.直接用细菌染色，要注意防护，以防生物感染。
【检验方法】1.涂片经火焰固定，加1液徐徐加热至有蒸汽出现，切不可沸腾。
染5分钟（若染色奴卡氏菌需要更长时间），水洗。
2.加第2液不时摇动玻片至无红色脱落为止，水洗；3.加3液，染0.5-1分钟，水洗。
4.干后油镜镜检。
【结果判断】分支杆菌在暗背景中呈红色，背景为蓝色。
镜检结果分级报告抗酸杆菌阴性（-）：连续观察300个不同视野，未发现抗酸杆菌抗酸杆菌阳性（报告抗酸杆菌菌数）：1~8条/300视野抗酸杆菌阳性（1+）：3~9条/100视野，连续观察300个视野抗酸杆菌阳性（2+）：1~9条/10视野，连续观察100个视野抗酸杆菌阳性（3+）：1~9条/每视野抗酸杆菌阳性（4+）：≥10条/每视野【注意事项】1、严格掌握脱色时间，要脱色充分，脱色时间过短易使红色的石炭酸复红染料残留显红色而造成假阳性。
2、在染片过程中，加1液后一定要酒精灯徐徐加热至有蒸汽出现，切不可沸腾，这样才能使细菌充分着色。
3、石碳酸对皮肤、粘膜有强烈的刺激性和腐蚀性，使用时要注意安全，如果不慎沾到皮肤上，立即用水或酒精冲洗。
4、涂片染色阳性只能说明抗酸杆菌的存在，不能区分是结核菌还是非结核分支杆菌。
细菌染色标本检查方法之抗酸染色法—萋-尼抗酸染色法
细菌染色标本检查方法之抗酸染色法—萋-尼抗酸染色法（1）实验材料①染色液。
石炭酸复红液、碱性美蓝溶液、3%盐酸酒精。
②菌种。
含结核分枝杆菌的痰标本。
③其他。
普通玻片、酒精灯、接种环及显微镜等。
（2）实验方法①涂片a、直接涂片和厚膜涂片。
用接种环挑取约0.01ml脓性或呈干酪样部分痰液，制成10mm*10mm 大小的均匀薄涂片，或取上述标本约0.1ml，制成20mm*15mm大小的厚膜涂片。
自然干燥，火焰固定后，行抗酸染色或金胺“0”荧光染色，镜检。
b、集菌涂片。
І、沉淀集菌法。
取痰液2—3ml，40g/lNaOH1—2倍量混匀。
经103.43Pa高压灭菌20—25min（或煮30min），3000r/min离心30min，弃上清液，取沉淀物涂片做抗酸染色或金胺“0”荧光染色镜检；П、漂浮集菌法。
取晨痰2—3ml放入100ml三角瓶内，加1—2倍量40g/lNaOH溶液，经103.43Pa高压灭菌20—25min（或煮30min）。
冷却后滴加汽油0.3ml，瓶口盖玻璃纸加塞，塞紧瓶口，置振荡器或手摇振荡10min，再加蒸馏水至满瓶口而又不外溢，静置10—15min，将已编号的洁净载玻片盖在瓶口上，静置15—20min，取下载玻片并迅速将载玻片翻转至浸膜向上，或用接种环取瓶口液面物涂于载玻片上，自然干燥，火焰固定后做抗酸染色或金胺“0”荧光染色，镜检。
②染色a、初染，在已固定的结核分枝杆菌痰标本涂片上放一小块滤纸片，之后滴加数滴石炭酸复红液后，将标本片放在火焰高处徐徐加温，当涂片上液体出现蒸汽时离开火焰（切不可煮沸），待玻片稍冷却后补充染液（以防干燥或玻片断裂），如此维持染色3—5min，待玻片冷却后用水冲洗，甩干。
b、脱色，在涂片上滴加数滴3%盐酸酒精，轻轻晃动玻片，直至无红色液体流下为止，一般作用1—3min，水洗，甩干。
c、复染，滴加数滴碱性美蓝液于涂片上，作用1min后，水洗，甩干。
用吸水纸印干标本片或自然干燥后油镜检查。
抗酸染色Kinyoun染色法
3 用抗酸染液将涂片浸泡 5~10min，不必加热；
4 弃去染液，冷却后用水洗载玻片，在加下一个溶液之前去除多余的水分； 5 加脱色液分色 15~20sec，手持载玻片的一端，是载玻片呈一定的角度，使分色液顺载玻 片的另一端流下，直至颜色不再改变；
6 用复染液复染 30sec；
7 用 95%乙醇脱水 2min、100%乙醇脱水 2min、二甲苯透明 2×5min； 8 封片剂封片，显微镜下观察。
结果
抗酸菌染成红色，非抗酸菌及细胞均染成淡蓝色。
注意事项
1 抗酸染色直接用于痰标本时，可以适当增加标本涂片的厚度，以提高检出率。染厚涂片时，
须掌握复染时间。如果背景过深，影响镜检。
2 诺卡菌可呈弱抗酸性，染色时间比抗酸杆菌稍长。取培养菌落涂片染色时，呈现两种现象， 视野中有些菌细胞阳性，另外一些则阴性；有时同一个菌体上，红色的深浅亦有不同，观察
时应予注意。
3 如果您第一次使用本试剂盒，建议做 1~2 个预实验。 温馨提示
为了您的自身安全，使用试剂前，请做好防护，如穿实验服，戴手套等。
储存温度
室温下避光储存 6 个月。 包装清单
货号
品名
包装
ST043A
抗酸染液
100mL
ST043B
脱色液
100mL
ST043C
复染液
100mL
说明书
1份
1
抗酸染色（Kinyoun 染色法）
抗酸染色（Acid-fas，主要是分枝菌酸，它包围在肽聚糖的外面，所以
分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌
酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。
实验流程
抗酸染色步骤及注意事项
抗酸染色步骤及注意事项以抗酸染色步骤及注意事项为主题，我们来详细介绍一下抗酸染色的过程以及需要注意的事项。
抗酸染色是一种常见的组织染色方法，可以用于组织学研究中的细胞、细胞器和组织结构的观察和描述。
其主要原理是利用酸性染料和碱性染料的相互作用，使细胞组织呈现出不同的颜色和形态，从而达到研究的目的。
抗酸染色步骤：1. 组织取材和固定：首先需要从病理标本中取出需要染色的部分，然后进行固定处理，常用的固定剂有福尔马林、醋酸等。
2. 脱水和透明化：将固定的组织切片后，需要将其中的水分逐步去除，以便后续的染色操作。
处理方法包括脱水、透明化等。
3. 抗原修复处理：为了使组织中的蛋白质分子更加易于与染料结合，需要进行抗原修复处理。
常用的方法有热处理法、酶解法等。
4. 阻断非特异性结合：由于细胞组织中存在非特异性结合，需要进行阻断处理，以减少假阳性的出现。
常用的方法有牛血清蛋白、BSA等。
5. 抗体结合：将特异性抗体与需要染色的组织部分进行结合。
常用的抗体有一抗、二抗等。
6. 酶标记：利用酶对已经结合的抗体进行标记，以便后续的染色操作。
常用的酶有辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等。
7. 染色：将酶标记的抗体与染料反应，使组织呈现出不同的颜色和形态。
常用的染料有DAB、VIP等。
8. 除色和封片：将染色后的组织切片进行除色处理，以去除多余的染料。
最后将切片封装，以便观察。
抗酸染色注意事项：1. 操作前应仔细阅读染色试剂盒说明书，并按照说明书上的方法进行操作。
2. 操作时应穿戴实验室专用的防护服，佩戴手套、口罩等防护用品，以避免对人体造成伤害。
3. 操作时应注意卫生，避免污染试剂和样本，以免影响染色结果。
4. 操作时应注意时间和温度的控制，以避免操作过程中出现误差。
5. 操作时应注意控制抗原修复的时间和温度，以免损伤组织结构和抗原表达。
6. 操作时应注意标记抗体的浓度和时间的掌握，以避免过度标记或标记不足的情况出现。
7. 操作时应注意染色的时间和浓度的调节，以避免染色过度或染色不足的情况出现。
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抗酸染色操作规程
1.目的
规范抗酸染色操作规程，确保染色结果清晰可靠。
2、原理
分枝杆菌细胞壁含脂质较多,其中主要成分为分枝菌酸,此物具有抗酸性,染色时与石炭酸复红结合牢固,能抵抗酸性乙醇的脱色作用,因此抗酸菌能保持复红的颜色,达到染色目的。
3、范围
用于抗酸性细菌(结核、麻风分枝杆菌)初步鉴定
4、质量控制
龟分枝杆菌ATCC93326做染色阳性,大肠埃希菌ATCC25922为染色阴性对照。
5、试剂
5.1石炭酸复红
碱性复红 10g 95,酒精 100ml 5,石炭酸 900ml (边加边研磨) 5.2盐酸脱色液(3,盐酸酒精)
浓盐酸 3ml 95,酒精 97ml
5.3吕氏美兰
美兰 0.3g 95,酒精 30ml 蒸馏水 70ml 10,KOH水溶液 0.1ml 复染液 6、工作程序
6.1制片:待检标本用无菌生理盐水涂片，经自然干燥后用火焰固定。
6.2初染:加石炭酸复红溶液，徐徐加热至有蒸汽出现，切不可沸腾。
反复染5分钟,清水冲洗。
6.3脱色:加盐酸脱色液，不时摇动玻片至无红色脱落为止，清水冲洗。
6.4复染:加美蓝复染，染0.5-1分钟，清水冲洗。
6.6待涂片自然干燥后，油镜镜检。
7、结果判断
结核杆菌呈红色，其它细菌呈蓝色
8、注意事项
染液注意密封，以免凝结产生沉淀影响使用效果。
体液标本均应离心后取下层沉淀液与染液混合，以提高检出率。
提高责任心，做到全片检查。