抗酸染色液使用说明
抗酸染色——标准操作
抗酸染色一、原理本试剂盒采用WHO推荐的Ziehl-Neelsen法分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。
但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色。
齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。
当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。
二、试剂石碳酸复红染液、酸性酒精溶液、亚甲蓝溶液三、方法1.涂片：参见各标本操作程序涂片，涂片后在室温下自然干燥，也可在酒精灯上略加温，使之迅速干燥，但勿靠近火焰2.固定：常用高温进行固定。
即手持载玻片一端，标本面朝上，在灯的火焰外侧快速来回移动3~4次，共约3~4秒。
要求玻片温度不超过60℃，以玻片背面触及手背皮肤不觉过烫为宜，放置待冷后染色3.染色3.1 滴加石碳酸复红染液盖满玻片，染色10分钟或更久，无需加温3.2 流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余的水3.3 滴加酸性酒精溶液盖满玻片，脱色1-2分钟，如有必要，需流水冲去溶液后，再次脱色至痰膜无可视红色为止3.4 流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余的水3.5 滴加亚甲蓝溶液，染色30秒钟3.6 流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余的水，待玻片干燥后镜检3.7 一张染色合格的玻片，痰膜肉眼观察为亮蓝色，无红色斑块四、结果判定1.干燥后油镜观察300个视野（观察时间不少于4min），抗酸性细菌呈红色，其它细菌或细胞呈蓝色2. 报告方式2.1 未找到抗酸杆菌2.2 找到抗酸杆菌±：可疑，发现抗酸杆菌1-2条/300视野2.3 找到抗酸杆菌1+：发现抗酸杆菌3-9条/100视野2.4 找到抗酸杆菌2+：发现抗酸杆菌1-9条/10视野2.5 找到抗酸杆菌3+:发现抗酸杆菌1-9条/1视野2.6 找到抗酸杆菌4+：发现抗酸杆菌≥10条/1视野五、注意事项1.每一玻片只能涂一份标本，以防脱落混淆2. 脱色时间需根据涂片厚薄而定，厚片可适当延长，以无红色脱出为止3. 冬季室温过低时，染色时间要适当延长4. 有时同一个抗菌体上红色深浅也有不同，观察时应注意5. 每次试剂用完后，请迅速盖好，以免挥发，储存时应避免高、低温及阳光照射6. 在涂抹痰标本时，严禁对玻片加热7. 染色时勿使玻片上的染液干燥六、临床意义分支杆菌属（结核分支杆菌、麻风分枝杆菌、非典型分支杆菌）、放线菌抗酸染色阳性，可初步鉴定细菌。
抗酸染色操作及要点
抗酸染色操作及要点
抗酸染色是玻璃表面处理的一种彩色表面工艺，大多数情况下是用于玻璃幕墙，并提供了色彩持久、可视性好、抗候变性、易于清洗等优点。
抗酸染色工艺要点如下：
1.在抗酸染色前，需要将玻璃表面进行清洁，移除表面的污垢。
2.调节抗酸染色液的酸碱度，保持在中性条件下，使其中的有机颜料发挥最大效果。
3.将抗酸染色液施于玻璃表面，待涂料上膜后，在酸碱性背景条件下进行色彩改变。
4.使用湿润的布擦拭，以保持表面的色彩均匀性，或者进行精细修饰。
5.将表面的抗酸染色涂层用水冲洗干净后，将得到的色彩持久耐候的玻璃表面进行锯齿化处理，使之抗拒水分膜层。
抗酸染色液使用说明
抗酸染色液使用说明抗酸染色液是一种常用于细胞和组织样本染色的试剂，可以用于观察细胞核和染色体的形态与分布。
它通过特殊的染色剂和酸性条件，将细胞核和染色体显色出来，使其能够被显微镜观察和分析。
以下是抗酸染色液的使用说明。
1.准备工作(1)检查抗酸染色液的保存条件和有效期，确保试剂的质量良好。
(2)清洁工作台，并准备好所需的实验器皿和试管。
(3)准备样本，如细胞悬液或固定的组织切片。
2.染色液配制(1)根据试剂的说明书，准备抗酸染色液的工作浓度。
通常情况下，抗酸染色液是浓缩的，需要根据实验的要求进行适当的稀释。
(2)将适量的抗酸染色液加入到一支干净的试管或玻璃瓶中。
3.样本处理(1)如果使用细胞悬液，可以直接将细胞悬液加入到试管中。
如果使用组织切片，需要先将组织切片放置在适量的生理盐水或缓冲液中，洗去固定液和脱水剂，并将其转移到试管中。
(2)确保样本充分润湿，避免气泡和样本堆积。
4.染色过程(1)将试管放置在恒温水浴中，设置适当的温度和时间。
一般来说，使用42°C的水浴，对细胞进行染色12-15分钟，对组织切片进行染色15-20分钟。
(2)在染色过程中，每隔一段时间（如2-3分钟）轻轻摇动试管，以确保样本均匀接触染色液。
5.染色液去除(1)在染色结束后，将试管从水浴中取出，并将液体倒掉。
(2)用生理盐水或缓冲液轻轻冲洗试管中的样本，去除多余的染色液。
(3)重复冲洗2-3次，确保样本的清洁。
6.样本固定(1)根据实验要求，将样本固定在载玻片上。
固定方法可以是使用适当的固定剂，如甲醛或乙醛溶液，将样本浸泡或喷洒在固定剂中，然后将其转移到载玻片上。
(2)对于组织切片，可以使用热解固定的方法，将载玻片和组织切片一起加热。
7.盖片和观察(1)在固定样本上滴加一滴适当的复盖剂。
(2)将一张玻璃盖片轻轻压在载玻片上，使其紧密贴合。
(3)将载玻片放置在显微镜上，通过目镜和物镜观察样本。
注意事项：-在染色过程中，保持试管的温度和时间的一致性，以保证染色效果的稳定性和准确性。
微生物抗酸染色步骤
微生物抗酸染色步骤如下：
1. 准备试剂：选择合适的载玻片，用9%的冰醋酸溶液浸湿载玻片。
用无菌操作取瑞氏染液、美蓝染液、无菌生理盐水，分别滴加到染色槽中，确保每个槽中液体的高度占据染色槽的2/3。
2. 涂片：采取标本时，应使用无菌操作取少量标本放入无菌离心管中，加入少量的无菌生理盐水，振荡离心管使标本充分溶解。
用吸管吸取少量的溶解标本均匀涂布在载玻片上，注意应避免标本在载玻片上形成气泡。
3. 抗酸染色：用竹镊子将涂有标本的载玻片拿起来，先加入少量美蓝染液，盖上盖玻片，避免染液进入对下步观察产生干扰。
用同样方法加等量无菌生理盐水洗去染液后，再滴加少量瑞氏染液，迅速用滤纸吸去多余染液。
4. 镜检观察：染色后，待染色液稍干后，用显微镜观察染色情况。
如果是抗酸阳性杆菌，则会被染成蓝色或淡蓝色；而其他革兰阴性杆菌则会被染成红色。
微生物抗酸染色主要用于区分抗酸杆菌和其他革兰阴性杆菌，尤其是在结核病诊断和疫情监测中具有重要意义。
不同微生物的抗酸染色结果可能会因为菌种的差异而略有差异。
具体操作时应注意无菌操作和染液的配制方法，以及涂片、染色和观察的技巧。
以上内容仅供参考，建议到正规医疗机构进行咨询，获取更全面和准确的信息。
24小时尿液抗酸染色标准操作程序
24小时尿液抗酸染色标准操作程序1 目的有效发现抗酸性细菌。
2 原理结核杆菌、麻疯杆菌等抗酸性细菌，因其菌体表面有一层类脂或脂质的皮膜而不易着色，但一经着色后不易被酸性酒精脱色，仍固有最初色素的颜色（红色）。
3 试剂3.1 BASO结核菌染色液3.2 贮存条件：贮存于15~30℃，相对湿度不大于80%，无腐蚀性气体和通风良好的室内。
4 标本采集与接收24h尿标本由患者收集后全部送检，最好连续留取三次，按标本签收程序签收。
5 操作步骤5.1 标本分析5.1.1 收集24小时尿液加入明矾沉淀后取沉淀物离心并涂片，待干燥。
5.1.2 加Cabolfuchsin染色5分钟或更久，水洗。
5.1.3 加Acid Alcohol脱色2分钟。
水洗。
5.1.4 加Methylene Blue复染30秒。
5.1.5 干燥，镜检。
5.2 检验结果的录入和确认5.2.1 打开电脑，启动LIS程序，输入用户名及口令后，进入检验程序。
5.2.2 选择“检验录入”，进行检验结果的录入及修改。
通过申请序号进行结果的输入选择“住院号”，输入检验结果，并对患者以前检测结果进行历史回顾，观察变化趋势。
5.2.3 检验结果的确认：检验结果的确认应由主管技师(主治医师)或专业负责人进行确认，方法为单击“信息处理”菜单，核对检验结果后，按“审核”键进确认。
6 结果判定6.1 抗酸性菌：呈红色，6.2 其他细菌及细胞：呈蓝色7 质量控制7.1 试剂用完后，要迅速盖好，以免挥发。
7.2 抗酸染色直接用于痰标本时，可以适当增加标本涂片的厚度，以提高检出率。
7.3 试剂效期过后，不能使用。
7.4 试剂贮存时，尽量避免高、低温环境及阳光直射。
7.5 受试验条件及个体差异限制，本试验阴性不能说明未感染结核分枝杆菌。
8 临床意义8.1 结核分枝杆菌不产生内毒素和外毒素，大量生长繁殖，机体对菌体成分与其代谢产物引起免疫损伤及变态反应，导致一系列组织细胞学上变化。
抗酸染色操作PPT
固定温度控制
固定时要求玻片温度不超过60℃，以玻片背面触及手背皮肤不觉过烫为宜。
固定后处理
放置待冷后染色，避免因温度过高影响后续染色效果。
执行染色步骤
涂片制备与固定
按照标本操作程序涂片，并在室温下自然 干燥或略加温。
试剂储存与使用注意事项
每次试剂用完后，请迅速盖好， 以免挥发，储存时应避免高、低 温及阳光照射。
储存试剂的方法
01
试剂储存环境
储存时应避免高、低温及阳光照射 。
02
03
试剂的保存方式
每次试剂用完后，请迅速盖好，以 免挥发。
试剂储存时间
储存时间不宜过长，应尽快使用完 毕。
感谢观看
03
固定后处理
放置待冷后染色，避免因过热影响后续染 色效果。
进行涂片操作
固定温度控制
手持载玻片一端，标本面朝上，在灯的火焰外侧快速来回移动3~4次，共约 3~4秒。要求玻片温度不超过60℃。
固定后冷却
放置待冷后染色，以玻片背面触及手背皮肤不觉过烫为宜。
避免靠近火焰
涂片后在室温下自然干燥，也可在酒精灯上略加温，但勿靠近火焰。
控制涂片干燥程度
固定方法
常用高温进行固定，手持载玻片一端 ，标本面朝上，在灯的火焰外侧快速 来回移动3~4次，共约3~4秒。
固定温度控制
要求玻片温度不超过60℃，以玻片 背面触及手背皮肤不觉过烫为宜。
固定后处理
放置待冷后染色，避免温度过高影响 染色效果。
固定和染色过程
掌握固定技巧
1 2 3
固定方法
每次用卡介苗做阳性对照，大肠埃希菌 ATCC25922做阴性对照。
抗酸染色法SOP
（一）试剂的配制1 ．石炭酸复红染液：（1 ）储存液①碱性复红液：碱性复红8g，加95% 乙醇至100ml ，充分振荡使复红溶解。
碱性复红乙醇储存液应避光保存，为保证染液的质量，建议储存液保存不超过6 个月。
②5% 石炭酸水溶液：40～50℃水浴加热石炭酸使之融解，取液态石炭酸5g 溶于90ml热蒸馏水中，待溶液冷却至室温时，补充蒸馏水至100ml 。
（2 ）石炭酸复红工作液：经定性滤纸过滤的碱性复红储存液10ml与5%石炭酸水溶液90ml 充分振荡、混合均匀后，用定性滤纸过滤。
碱性复红（或称为碱性品红，basic fuchsin，or pararosaniline chloride，分子式为C 19 H18NCl）用于AFB 染色时，必须使用染料最低含量超过88% 的生物染色剂，合格产品一般在试剂包装上注明相应含量。
如果标注的染料含量低于88% ，则在配制时需调整称取量。
例如，染料含量标注为75% 的产品，配制100ml 储存液时实际的称取量应是8/0.75=10.7g。
石炭酸（苯酚，phenol ，分子式为C 6 H6 O）:应使用熔点为40.5 ℃的分析纯试剂。
2 ．5%盐酸乙醇脱色液：35% 浓盐酸5ml 与95% 乙醇95ml混合。
3 ．亚甲蓝复染液：（1 ）储存液：亚甲蓝0.3g 溶于95% 乙醇50ml中，完全溶解后加蒸馏水至终体积100ml 。
（2 ）亚甲蓝复染液：以蒸馏水5 倍稀释0.3%亚甲蓝储存液，经充分振荡、混合均匀后，亚甲蓝的终浓度为0.06% ，使用定性滤纸过滤，即得亚甲蓝染液。
亚甲蓝（methylene blue chloride，or methylthionine chloride ，分子式为C 16 H18 ClN3S）：染色时必须使用染料含量超过82% 的生物染色剂。
4 ．萋－尼氏染色步骤：1. 涂片自然干燥后，放置在染色架上，玻片间距保持10mm 以上的距离；火焰固定（在5秒钟内将玻片置于火焰上烤4 次）。
抗酸染色液说明
抗酸染色液说明【产品名称】通用名称：抗酸染色液【包装规格】100ml*2/盒、250ml*2/盒、500ml*2/盒【预期用途】抗酸染色液用于分枝杆菌、诺卡菌等细菌抗酸染色，包括荧光染色。
【检验原理】结核菌、麻疯杆菌等抗酸性菌，因其菌体表面有一层类脂或脂质之皮膜而不易着色，但一经着色后，酸性酒精的作用亦是不容易把它脱色。
利用此特性并以增强的染色液予以染色，然后再以酸性酒精加以处理，使其脱色后再对比染色，此时抗酸性菌仍是固定着最初色素的颜色(红色)，也就易于鉴别。
【主要组成成份】试剂组成：抗酸染色液包括石碳酸复红染色液、亚甲基蓝染色液。
【贮存条件及有效期】有效期：未开封试剂有效期为24个月。
贮存条件：本试剂应贮存于相对湿度不大于80%，无腐蚀性气体和通风良好的5~30℃室温环境。
【样本要求】待检标本应为菌株或有菌株的标本。
【检验方法】涂片经固定水洗后或石蜡切片脱蜡水洗后：1、将石碳酸复红染色液滴加于切片上，然后在微火加热至有蒸汽出现，水洗；2、用0.5%盐酸酒精分化至无红色染料脱落，水洗；3、亚甲基蓝染色液作对比染色20～60秒，水洗；4、酒精脱水，二甲苯透明、中性胶封固、镜检。
【检验结果的解释】抗酸杆菌呈红色，其他组织呈浅蓝色。
【检验方法的局限性】有些细菌有染色嗜变性，不一定完全是染色原因，应根据菌体形态加以确定。
【注意事项】1.该该染色液仅用于体外诊断。
2.涂片厚薄要均匀，自然干燥后再加热固定。
3.试剂贮存时，尽量避免高温及光亮环境，以免影响品质和效果。
标示有效期过后，请不要使用。
4.本品应由专业人士使用及进行结果的判断。
5.所用标本应视为具有传染性物质。
抗酸染色液 冷染法
抗酸染色液冷染法一、引言抗酸染色液冷染法是一种常用的组织学染色技术，用于观察细胞和组织的结构和组成。
本文将介绍抗酸染色液冷染法的原理、步骤和应用。
二、原理抗酸染色液冷染法是一种无需加热的染色方法，其原理是利用染色液中的酸性成分与细胞或组织中的碱性成分发生化学反应，形成颜色的沉淀物。
抗酸染色液中的染料具有亲和力，能够选择性地与特定的细胞或组织成分结合，从而使其显色。
三、步骤1. 取得待染细胞或组织的标本。
2. 用生理盐水或磷酸盐缓冲液洗涤标本，去除多余的组织液和血液。
3. 用抗酸染色液将标本浸泡，一般需要数分钟至数十分钟的时间，具体时间根据染色物质的性质和染色结果而定。
4. 将标本用蒸馏水洗涤，去除多余的染色液。
5. 用酒精脱水，逐渐将标本转为透明状态。
6. 用透明剂浸泡标本，使其变得更加透明。
7. 将标本置于显微镜下观察，可以使用油浸镜头进行高倍观察。
四、应用抗酸染色液冷染法广泛应用于组织学和病理学的研究中，可用于观察细胞的形态、结构和功能。
具体应用包括：1. 组织切片染色：可以用于观察组织器官中不同类型的细胞和细胞组织的排列和结构。
2. 细胞染色：可以用于观察细胞内的细胞器、染色质和细胞膜等结构。
3. 病理学研究：可以用于观察疾病引起的组织和细胞变化，帮助诊断和治疗疾病。
五、优缺点抗酸染色液冷染法相比于其他染色方法具有以下优点：1. 无需加热：相比于热染色方法，冷染法更加简便和快速。
2. 显色效果好：抗酸染色液具有较好的亲和力，可以选择性地染色目标结构。
3. 适用范围广：可以应用于多种类型的细胞和组织，具有较高的适应性。
4. 结果稳定：抗酸染色液染色结果相对稳定，不易褪色。
然而，抗酸染色液冷染法也存在一些缺点：1. 需要经验：染色条件和时间需要经验积累，染色结果可能受到操作者技术水平的影响。
2. 不能应用于活体标本：冷染法需要对标本进行固定和处理，无法直接应用于活体标本的观察。
六、总结抗酸染色液冷染法是一种常用的组织学染色技术，具有简便、快速和选择性染色等优点。
抗酸染色镜检的操作规程
抗酸染色镜检的操作规程1.目的:通过抗酸染色鉴别结核杆菌.2.原理:一般认为抗酸性菌体内含脂类物质较多,此物质具有抗酸的性质.染色时,它与石碳酸复红结合牢固,能抵抗酸性酒精的脱色作用,同时脂类又不易透过细胞膜,不能被脱色,因此抗酸菌能保持复红的颜色.相反,非抗酸性菌体内含脂类少,易被酸性酒精脱色,脱色时又易从细胞膜渗出而脱掉,最后被复染蓝色.3.试剂:3.1试剂来源:购买珠海贝索3.2试剂盒组成:R1:石碳酸复红溶液1χ100ml R2:酸性酒精溶液1χ100mlR3:亚甲基蓝溶液1χ100ml4.质量控制:室内质控包括痰标本收集,痰片染色和镜检结果复查.痰涂片应保存供上一级参比实验室质量控制检查.5.标本采集与处理:5.1病人留标本前用清水漱口,用力咳出来自支气管深部的脓样或粘液样痰,量不少于3ml避免留唾液或鼻咽部分泌物.5.2夜间痰为就诊前一天晚睡前咳出的痰液.5.3初诊病人应送3份痰标本(夜间痰、清晨痰和即时痰),痰液不合格者重送.5.4涂片:取脱脂过的干燥、清洁、无油污的新玻片，在玻片背面的左端1/3处以记号笔编号,用折断的竹签挑取痰标本的脓样,干酪样0.1ML,于玻片上均匀涂抹成2ⅹ2.5CM卵圆形痰膜,自然干燥后待检.6.染色方法:6.1用片夹夹住涂片火焰固定,加石碳酸复红溶液,徐徐加热至有蒸汽出现染5分钟,水洗.6.2加脱色剂,不时摇动玻片至无色脱落为止,水洗.6.3加复染液,染0.5-1分钟,水洗涂片后镜检.7.镜检:取染好的干燥涂片,用低倍镜、高倍镜览片,最后在涂片上滴1-2滴香柏油,用油镜仔细观察.8.结果的判断:结核杆菌呈红色,其它细菌呈蓝色.9.实验完后的处理:9.1先用擦镜纸将镜头上的油擦去,再用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头擦2-3次,最后用干净擦镜纸擦2-3次,向一个方向擦拭。
9.2废弃玻片放入5% 84消毒液中浸泡60分钟,消毒液要每天更换。
9.3痰盒和废弃标本等污染物应弃于有盖的污物桶内,消毒后焚烧。
改良萋尼抗酸染色液使用说明
改良萋－尼抗酸染色液
Modified Ziehl-Neelsen Stain
产品编码产品名称规格
GC082917改良萋－尼抗酸染色液100ml，250ml
改良萋－尼抗酸染色液用途：
供抗酸性细菌的染色，包括弱抗酸菌的染色。
改良萋－尼抗酸染色液原理：
由于抗酸性细菌具有抗酸性，在被含石炭酸的复红液染色后结合牢固，不易被酸性脱色液脱色，最终染色为红色。
而非抗酸性细菌在被含石炭酸的复红液染色后结合不牢，容易被酸性脱色液脱色，经复染后最终显微镜下显示为蓝色或无色。
改良萋－尼抗酸染色液使用方法：
1.将标本直接制成涂片，自然干燥或火焰固定；
2.滴加初染液（A液）覆盖涂片染色5～8分钟，水洗，溘去多余的水；
3.滴加脱色液（B液）覆盖涂片，脱色，脱掉涂片上的红色（通常5~10秒），隐约残留的红色应忽略不计，脱色时间的长短因涂片的厚薄而不同，防止脱色过度。
水洗，溘去多余的水；
4.滴加对比复染液（C液）覆盖涂片染色，染色20～30秒，水洗，溘去多余的水；
5.晾干或轻轻烤干后后，显微镜下油镜检查，背景淡蓝色或无色。
适用仪器：
光学显微镜
样本要求：
选择能反映活动病程有临床价值的标本或培养物。
实验结果：
阳性为光学显微镜油镜（10×100）下见有红色杆状菌，反之为阴性。
抗酸染色的操作及临床应用
抗酸染色的操作及临床应用抗酸染色是一种在临床病理学中常用的技术，用于检测和诊断与酸性染料亲和的微生物，特别是结核分枝杆菌。
这种染色方法被广泛应用于结核病的确诊、治疗监测及相关疾病的鉴别诊断。
下面将详细介绍抗酸染色的操作及临床应用。
操作方法：1. 原料准备：准备好益氏染液、酸酒红溶液、高锰酸钾溶液、酸性酮液、甲苯、绝对醇和脱脂溶剂等试剂和溶液。
2. 标本制备：将待检标本如痰液、尿液、刮片等经过前处理（如离心、加热、电洗等）后涂片制备，并将涂片固定在90摄氏度的焙烧烘箱中固定片上3~5秒钟，然后用冷水洗净。
3. 染色操作：将固定的检测标本涂片用甲苯浸泡2~5分钟，将甲苯吸出后加入酒精脱脂2~5分钟，然后再用绝对醇脱脂2~5分钟，最后用脱脂溶剂脱脂30~120秒。
4. 抗酸染色：将脱脂后的标本涂片完全浸入益氏染液中，保持液面在标本上1~2毫米高，将益氏染液再加热到80摄氏度，静置5~10分钟，待酸性酮为蓝色。
5. 染色反应：用高锰酸钾溶液滴落在标本上，加热到细菌虫红颜色被去掉，再滴落高锰酸钾溶液热到细菌虫红显现为红色。
6. 清洗与固定：倾倒掉多余的染色剂和高锰酸钾溶液，用自来水彻底冲洗，将标本涂片风干或用吹风机吹干。
7. 反染：将涂片溶于酸酒红溶液中，温和地与酸酒红反应。
反应结束后，再次用自来水冲洗，风干，镜片上缀油。
临床应用：1. 结核菌检测：抗酸染色是诊断结核病的重要手段之一。
通过检测患者痰液、刮片等标本中的抗酸染色-阳性颗粒，可以快速、敏感、直观地进行结核分枝杆菌的检测和诊断。
2. 结核病确诊：抗酸染色技术作为结核病的初筛方法，可帮助医生进行早期诊断和治疗。
对于疑似结核病患者，通过抗酸染色检测可快速识别结核菌，指导早期治疗方案的制定。
3. 结核病治疗监测：抗酸染色技术可用于结核病治疗效果的评价和疗程的调整。
治疗过程中，定期检测患者的痰液标本，观察结核菌的存在和培养基的数量，以判断治疗效果并及时调整治疗策略。
微生物检验实验室抗酸染色标准操作规程
微生物检验实验室抗酸染色标准操作规程1．目的规范抗酸染色标准操作规程。
2．原理抗酸菌具有耐受酸性介质脱色的生物状，此类细菌在石碳酸（苯酚）的协同作用下，被复红染色剂着色，能够耐受酸性酒精脱色，显微镜观察时保持紫色红色；而其他脱落细胞或标本中的非抗酸菌被酸性酒精脱色，可被复染剂亚甲蓝染为蓝色。
3．试剂3.1 Kinyoun溶液。
碱性品红40g 乙醇（95%）200ml 石碳酸80ml 蒸馏水1000ml3.2 Gabett溶液亚甲蓝10g 无水酒精300ml硫酸200ml 蒸馏水500ml4．质控每天用龟分支杆菌ATCC93326做阳性对照，大肠埃希菌ATCC25922做阴性对照。
5.操作步骤5.1 初染涂片上滴加石碳酸复红液，用火焰加热至产生蒸汽，约5分钟，水洗。
5.2 脱色第二液脱色约1分钟，轻轻摇动玻片，无红色脱色或略呈粉红色时为止，水洗。
5.4 复染第三液复染30秒，水洗。
自然干燥后镜检。
6.结果判断抗酸杆菌呈红色。
7.注意事项7.1 每张玻片只能涂一份标本，禁止将2份或2份以上的标本涂在同一张载玻片上。
7.2 为防止交叉感染，标本应先高压灭菌后再涂片染色。
7.3 在涂抹痰标本时，严禁对载玻片进行加热。
7.4 菌龄为18～24小时为佳。
8.临床意义只针对用于结核病、麻风病等的细菌检查，初步诊断。
9.安全防护措施9.1操作人员要戴口罩、手套和穿隔离衣。
9.2涂片制备痰标本要高压灭菌或者在标本中加入等量0.5%“84”消毒液（含有效氯2500mg/L）后涂片。
气管刷片送检的玻片，紫外线灯下照射30分钟进行染色镜检。
或者对于进行抗酸染色的痰标本（因使用的容器原因不能高压灭菌）。
9.3镜检后的玻片均浸泡在含有效氯1000mg/L的消毒液中，高压灭菌后处理。
9.4所有标本、污染物丢弃之前，都需经高压灭菌、焚烧或浸泡杀菌剂中。
抗酸染色操作
抗酸染色操作程序【检验原理】抗酸染色可将细菌分为两大类，即抗酸性细菌和非抗酸性细菌，因日常大多数病原菌为非抗酸性细菌，所以抗酸染色不作为临床上常规的细菌检测项目，只针对结核病等具有抗酸性细菌标本的染色。
【主要组成成分】1.石碳酸复红溶液2.脱色剂（3%盐酸酒精溶液）3.复染液（吕氏美兰溶液）【样本要求】1.直接用于痰标本时，可以适当增加标本涂片的厚度，以提高检出率；2.直接用细菌染色，要注意防护，以防生物感染。
【检验方法】1.涂片经火焰固定，加1液徐徐加热至有蒸汽出现，切不可沸腾。
染5分钟（若染色奴卡氏菌需要更长时间），水洗。
2.加第2液不时摇动玻片至无红色脱落为止，水洗；3.加3液，染0.5-1分钟，水洗。
4.干后油镜镜检。
【结果判断】分支杆菌在暗背景中呈红色，背景为蓝色。
镜检结果分级报告抗酸杆菌阴性（-）：连续观察300个不同视野，未发现抗酸杆菌抗酸杆菌阳性（报告抗酸杆菌菌数）：1~8条/300视野抗酸杆菌阳性（1+）：3~9条/100视野，连续观察300个视野抗酸杆菌阳性（2+）：1~9条/10视野，连续观察100个视野抗酸杆菌阳性（3+）：1~9条/每视野抗酸杆菌阳性（4+）：≥10条/每视野【注意事项】1、严格掌握脱色时间，要脱色充分，脱色时间过短易使红色的石炭酸复红染料残留显红色而造成假阳性。
2、在染片过程中，加1液后一定要酒精灯徐徐加热至有蒸汽出现，切不可沸腾，这样才能使细菌充分着色。
3、石碳酸对皮肤、粘膜有强烈的刺激性和腐蚀性，使用时要注意安全，如果不慎沾到皮肤上，立即用水或酒精冲洗。
4、涂片染色阳性只能说明抗酸杆菌的存在，不能区分是结核菌还是非结核分支杆菌。
抗酸染色Kinyoun染色法
3 用抗酸染液将涂片浸泡 5~10min，不必加热；
4 弃去染液，冷却后用水洗载玻片，在加下一个溶液之前去除多余的水分； 5 加脱色液分色 15~20sec，手持载玻片的一端，是载玻片呈一定的角度，使分色液顺载玻 片的另一端流下，直至颜色不再改变；
6 用复染液复染 30sec；
7 用 95%乙醇脱水 2min、100%乙醇脱水 2min、二甲苯透明 2×5min； 8 封片剂封片，显微镜下观察。
结果
抗酸菌染成红色，非抗酸菌及细胞均染成淡蓝色。
注意事项
1 抗酸染色直接用于痰标本时，可以适当增加标本涂片的厚度，以提高检出率。染厚涂片时，
须掌握复染时间。如果背景过深，影响镜检。
2 诺卡菌可呈弱抗酸性，染色时间比抗酸杆菌稍长。取培养菌落涂片染色时，呈现两种现象， 视野中有些菌细胞阳性，另外一些则阴性；有时同一个菌体上，红色的深浅亦有不同，观察
时应予注意。
3 如果您第一次使用本试剂盒，建议做 1~2 个预实验。 温馨提示
为了您的自身安全，使用试剂前，请做好防护，如穿实验服，戴手套等。
储存温度
室温下避光储存 6 个月。 包装清单
货号
品名
包装
ST043A
抗酸染液
100mL
ST043B
脱色液
100mL
ST043C
复染液
100mL
说明书
1份
1
抗酸染色（Kinyoun 染色法）
抗酸染色（Acid-fas，主要是分枝菌酸，它包围在肽聚糖的外面，所以
分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌
酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。
实验流程
抗 酸 染 色
结果：抗酸杆菌红色，细胞核蓝色。
注意事项：
1、石碳酸品红液容易沉淀，使用时过滤。 2、脱蜡液宜新配。
3、液状石蜡―松节油代替二Байду номын сангаас苯，可保存菌体的类脂质 不受破坏，从而染色良好。 4、苏木素染色要浅染。
抗酸染色
抗酸杆菌是一种常见的病原微生 物，抗酸杆菌体内含脂类，常规水溶性 染液不易渗入菌物内，故一般染料不能 使其着色。
试剂配制 一、石碳酸品红染液 碱性品红无水乙醇饱和液 10ml 5%石碳酸水溶液 90ml
二、20%硫酸分化液 20ml 浓硫酸 80ml 蒸馏水 三、液状石蜡―松节油脱蜡液 液状石蜡 1份 1份 松节油
染色方法：
1. 切片经液状石蜡―松节油混合液脱蜡二次，每次15分钟（可加 温60℃）。 2. 用纸将周围余液抹干。 3. 流水稍洗。 4. 滴入石碳酸品红液，20―30分钟。 5. 水洗去剩余染色液。 6. 20%硫酸分化至适当为止，1―5分钟。 7. 流水冲洗。 8. 常规苏木素染核。 9. 流水冲洗回蓝。 10. 用风筒低温吹干。 11. 二甲苯透明，中性树胶封片。
抗酸染色液染色原理及作用
抗酸染色法acid－fast staining method 1882年由埃利希（F．Ehrlich）首创并经F．Ehrlich）
齐尔（Ziehl）改进而创造出的细菌染色法。
其中最具代表性的为对结核菌的齐尔-尼尔森（Ziehl－Neelsen）染色法和齐尔-加贝特（Ziehl－Gabbet）染色法。
用染色后，用盐酸乙醇
分色，再用进行对比染色，即不再脱色而呈现的红色。
抗酸染色的原理：
分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。
但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难
被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。
齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也
不脱色。
当再加染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。
抗酸染色的染液配制：
1、
碱性复红酒精饱和溶液 10mL
5%石炭酸 90mL
2、3%盐酸酒精
浓盐酸 3mL
95%酒精 97mL
3、
美兰酒精饱和液 30mL
氢氧化钾（1:10000） 100mL
染色结果：
抗酸菌被染成红色，为抗酸阳性；其它细菌染成蓝色，为抗酸阴性。
背景细胞及杂质也被
染成蓝色。
注意事项：
1.染色程度可通过改变染色时间或染色温度做适当调整。
2.每次试剂用完后，请迅速盖好，以免挥发。
3.对皮肤、粘膜有强列刺激性和腐蚀性，使用时请穿实验服并戴一次性操作。
抗酸染色液(Kinyoun冷染法)使用说明书
南京森贝伽生物科技有限公司 网址：/
第1页 仅供科研
版本号：161214
抗酸染色液(Kinyoun 冷染法)
【产品组成】
【保存条件】
室温,避光,12个月
【产品概述】
分枝杆菌的细胞壁内含有大量脂质包围在肽聚糖的外面,所以分枝杆菌一般丌易着色。
传统的染色方法要经过加热和延长染色时间来促使其着色。
分枝杆菌中的分枝菌酸不染料一旦结合后，就很难被酸性脱色液脱色，故名抗酸染色。
其中最具代表性是结核杆菌Ziehl －Neelsen 染色法，该法是WHO 推荐热染的方法。
抗酸染色液(Kinyoun 冷染法)属于冷染色液，无需加热，相对较抗酸热染液安全。
其染色原理是在室温条件下，分枝菌酸不复红结合成复合物，经亚甲蓝复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。
该染色法较改良Kinyoun 冷染法要深，更适用于常规抗酸染色，推荐该Kinyoun 冷染法作为实验室或临床上标准抗酸染色法。
【使用方法】
1、接种环挑取待检样本，涂布于载玻片上，自然干燥。
2、滴加Kinyoun 复红染色液，染色5～10min 。
3、不必加热，蒸馏水冲洗。
4、用Kinyoun 脱色液脱色至无红色为止。
5、蒸馏水冲洗。
6、用亚甲蓝染色液染色30～60s 。
7、蒸馏水冲洗。
8、轻轻吸干水分，自然干燥。
9、油镜镜检。
【染色结果】
【注意事项】
1、每次使用后盖紧试剂瓶，以防试剂挥发和污染。
2、上述试剂均对人体有刺激性，请注意适当防护。
3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
抗酸染色液使用说明书
抗酸染色液使用说明书货号：G1170规格：3×50ml/3×100ml/3×250ml保存：室温干燥保存，有效期12个月。
试剂盒组成：抗酸染色液A50ml/100ml/250ml抗酸染色液B50ml/100ml/250ml抗酸染色液C50ml/100ml/250ml产品说明：抗酸染色用于细菌标本涂片或菌落涂片的染色。
常用于对分枝杆菌属进行初步鉴别。
普通细菌染色比较容易着色，而分支杆菌细胞壁含脂质较多，染色比较困难，必须加热才能被Carbolfuchsin solution 着色。
分枝杆菌菌体着色后，能抵抗盐酸酒精等酸性脱色剂的脱色，而其他细菌和细胞等均被脱色。
当再用碱性美蓝复染后，分支杆菌仍为红色，其他细菌与背景呈蓝色。
操作步骤：1、做一适当厚度的涂片，干燥后火焰固定。
2、滴加抗酸染色液A于玻片上，覆盖住样本，在酒精灯上加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时移开，必要时可续加染色剂以免干涸。
加热3-5分钟。
3、移开火，静置5分钟，待标本冷却后以自来水冲洗。
4、用抗酸染色液B脱色（大约1分钟）至无红色染液脱出为止。
完全脱色可避免产生假阳性结果。
5、自来水缓慢冲洗后，滴加抗酸染色液C复染约30秒，水洗。
6、待干后油镜观察。
预期结果：抗酸菌被染成红色，为抗酸阳性；其它细菌染成蓝色，为抗酸阴性。
背景细胞及杂质也被染成蓝色。
注意事项：1.染色程度可通过改变染色时间或染色温度做适当调整。
2.每次试剂用完后，请迅速盖好，以免挥发。
3.本产品有一定的刺激性和腐蚀性，使用时请穿实验服并戴一次性手套操作。
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抗酸染色液使用说明
货号：G1170
规格：50ml×3/100ml×3/250ml×3
保存：室温干燥保存，有效期3年。
试剂盒组成：
抗酸染色液A50ml/100ml/250ml
抗酸染色液B50ml/100ml/250ml
抗酸染色液C50ml/100ml/250ml
产品说明：
抗酸染色用于细菌标本涂片或菌落涂片的染色。
常用于对分枝杆菌属进行初步鉴别。
普通细菌染色比较容易着色，而分支杆菌细胞壁含脂质较多，染色比较困难，必须加热才能被石炭酸复红着色。
分枝杆菌菌体着色后，能抵抗盐酸酒精等酸性脱色剂的脱色，而其他细菌和细胞等均被脱色。
当再用碱性美蓝复染后，分支杆菌仍为红色，其他细菌与背景呈蓝色。
操作步骤：
1、做一适当厚度的涂片，干燥后火焰固定。
2、滴加抗酸染色液A于玻片上，覆盖住样本，在酒精灯上加热，切勿沸腾，出现蒸汽
即暂时移开，必要时可续加染色剂以免干涸。
加热3-5分钟。
3、移开火，静置5分钟，待标本冷却后以自来水冲洗。
4、用抗酸染色液B脱色（大约1分钟）至无红色染液脱出为止。
完全脱色可避免产生
假阳性结果。
5、自来水缓慢冲洗后，滴加抗酸染色液C复染约30秒，水洗。
6、待干后油镜观察。
预期结果：
抗酸菌被染成红色，为抗酸阳性；其它细菌染成蓝色，为抗酸阴性。
背景细胞及杂质也被染成蓝色。
注意事项：
1.染色程度可通过改变染色时间或染色温度做适当调整。
2.每次试剂用完后，请迅速盖好，以免挥发。
3.石炭酸对皮肤、粘膜有强列刺激性和腐蚀性，使用时请穿实验服并戴一次性手套操
作。