双酚A人工抗原的光谱表征及免疫鉴定研究
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收稿 日期 ：２ ０ —５１ ，修 订 日期 ： ０ ７０ —０ ０ ７０ —０ ２ ０ －８２
外一 可见 分光光度计 （ 北京 普析通用仪器有 限责 任公 司） ｉ ，Ｂｏ －
Ｒａ ８ ｄ６ ０型酶标仪 （ 美国伯乐公司） 。 １２ 人工抗原的合成与鉴定 ．
１ ２ １ 人 工 抗 原 的合 成 ．．
将 １ ３ ０４ｇ双 酚 Ａ和 ０ ６ ０２ｇ无水 氯化铝 投人 到三 ． ７ ． ７ 口烧瓶 中 ， 称取 ０ ４ ０５ｇ氯 乙酸 溶于 ８ｎ Ｄ ． ７ ｌ ＭＦ中 ， Ｌ 缓慢 滴人三 口烧 瓶 ，低 温 下搅 拌 至 反应 趋 于缓 和 ，逐渐 升 高温
度 ， 应至不再生成气体 为止，冷却 ，过滤 ，称取 ０ ０ ７５ｇ 反 ． ５
建立其 简单快速 并适应现场检测 的免疫 分析方法 ， 须先合成 它 的人 工抗原并 进行鉴定 。 过对 双酚 Ａ 进 必 通
行结构修饰 ， 用碳二亚胺将 结构修饰了 的双酚 Ａ与牛血清蛋 白相偶联 ， 经透 析得 到纯 的双酚 Ａ人工抗 原并
冷冻干燥备用 。然后用紫外光谱 、红外光 谱和免疫方法对人工抗原进行 鉴定。结果表 明 ， 合成 的人工抗 原紫
合物 的人工抗原合成 与光谱鉴定 提供参考 。
１ 实验方法
１１ 材料与仪器 ．
双酚 Ａ（ ． ． 上海化 学试 剂公 司 ） ＣＰ， ，牛血 清蛋 白 （ Ｓ Ｂ Ａ，
上海 伯奥生物科技公 司） 一 基丁二酰 亚胺 （ ，Ｎ 羟 ＮＨＳ ，国药集
团试 剂 公 司 ） ，碳 二 亚 胺 盐 酸 盐 （ Ｄ ・ＨＣ ，Ｓ ｍａ公 司 ） ＥＣ １ ｉ ｇ ，
提 高，抑制睾丸 的生长及 受精卵 的发育 Ｌ 。目前 ，国 内外检 ５ ］
测 Ｂ Ａ的方法有紫外分光光度法 、 Ｐ 双波 长分光光度法 、 气相
色谱 （ Ｃ） 、气 相 色 谱一 Ｇ 法 质谱 （ Ｃ／ ） Ｇ ＭＳ 法、高 效液 相 色 谱
（ Ｌ 法 、高效液相色谱一 ＨＰ Ｃ） 紫外 法 （ Ｌ ／ ＨＰ Ｃ ＵＶ） 、液相 色谱一 质谱 （ Ｃ ＭＳ 法、反相 液相色谱 法 、极谱 法 、 光 法 、分子 Ｌ ／ ） 荧 印记及 Ｅ ＩＡ法等 １ 。仪器 方 法检 出限 可达到 ｇ・Ｌ ， ＬＳ ８ Ｊ ～ 但 样品前处理繁 琐 ，操作 耗 时 ，也不 适 应 现场 测 定。因此 ， 建 立简便 、 快速 、准确并适应现场测 定 的免 疫分 析方 法对检 测 双 酚 Ａ 残 留具 有 重 要 的 意 义 。王 兰 Ｌ］ 对 双 酚 Ａ 人 工 抗 】等 。 原合成进行 了研 究 ， 但鉴定方 法过于简 单 。本研究 用光谱 和 免疫方 法对合成 的双酚 Ａ人工抗 原进行综合鉴定 ， 期望为进
维普资讯
第２卷， ７ ８ 第 期
２００８ 年 ７月
光
谱
学
与
光Leabharlann 谱分析 Ｖｏ． ８ Ｎｏ ７ ｐ １ ８ — ５ ６ １２ ， ． ，ｐ ５ ３１ ８
Ｓ ｅ ｔｏ ｃ ｐ ｎ ｐ ｃｒ ｌ ｐ ｃ ｒ ｓ ｏ ｙ ａ ｄ Ｓ ｅ ｔａ ａ ｙ ｉ Ａｎ ｌ ｓｓ
羊抗 鼠 ＩＧ－ ｇ 辣根 过 氧 化物 酶 （ 汉博 士 德 生物 工 程有 限公 武 司） ，氯代乙酸 、无 水 氯 化铝 、Ｎ， ． 甲基 甲酰胺 （ ＭＦ 、 Ｎ二 Ｄ ） 邻苯 二胺 （ Ｄ） Ｔ ｅ－０ 双氧水 、 ＯＰ 、 ｗｅｎ２ 、 均为市售分析纯产 品。 ｐ ． Ｈ ７ ０磷 酸 缓 冲 溶 液 （ Ｂ ） Ｈ ． Ｐ Ｓ ，ｐ ９ ０碳 酸 盐 缓 冲 溶 液 （Ｂ） ｐ ． Ｃ Ｓ ， Ｈ５ ０磷酸柠檬酸缓 冲溶液 。 Ｎ ｃｌ ８ ｉｏｅ ３０红 外 光谱 仪 （ 国热 电公 司 ） ｔ 美 ，ＴＵ １ ０ 紫 －９ １
料进人体 内， 于牙科 的树脂 和牙齿密封剂 由 Ｂ Ａ 或 Ｂ Ａ 用 Ｐ Ｐ－ 双 甲基丙烯酸 酯组 成 ， 能从 牙体 缓慢 渗 人唾 液 而进 人体 内。
双酚 Ａ还能诱导人类乳腺癌 、前列腺癌 的发生 ｌ 。Ｂ Ａ也 ３ ］ Ｐ 可 以使雄鱼体 内 的卵黄 蛋 白原 ｖ ｅｏ ｅｉ（ ｉ ｌ ｇｎｎ ＶＴＧ） 度 显著 ｔｌ 浓
体。
关键词
双 酚 Ａ； 人工抗原 ；光谱 ；免疫 ； 鉴定 文献标识码 ： Ａ 文章编 号 ： ０ ００ ９ （０ ８ ０ —５ ３０ １ ０ —５３ ２０ ）７１ ８ —４
一
中图分类号 ： ５ ． ０６ ７ ３
步建立双酚 Ａ免疫分析方 法提供 基础 ， 也为其他小分子化
引 言
双 酚 Ａ（ｉ ｈ ｎ ｌ Ｂ Ａ） ｂｓ ｅｏ ｐ Ａ， Ｐ 是一种 酚类 环境雌激素ｒ ， ｌ ’ 又名 ２ ２双（一 ，－ ４羟基苯基 ） 丙烷 、二苯酚 基丙烷 。双酚 Ａ是重 要 的精细化工原料 ，是生 产聚碳 酸酯 、环氧 树脂 、聚砜 以及 改性酚醛树脂等 的重要 中间体 。 双酚 Ａ可通过 食品 包装容 器 和塑料 薄膜 渗人 食 品或饮
Ｊｌ ｕｙ，２ ０ ０８
双 酚 Ａ 人 工 抗 原 的 光 谱 表 征 及 免 疫 鉴 定 研 究
郑 劭 ，张 妮 ，赵 肃清
广 东 工业 大学 轻 工 化 工学 院 ，广 东 广 州 ５ ０ ０ １０６
摘
要
双 酚 Ａ（ｉ ｈ ｎ ｌ Ｂ Ａ） ｂｓ ｅｏ ｐ Ａ， Ｐ 是一种酚类环境雌激 素 ，即使极低剂 量残留对人类健康也有危 害。为 了
外光谱 图中具有 蛋 白质和双酚 Ａ 的特征 吸收峰 ；人工抗 原红外光谱图 中呈现 双酚 Ａ和牛血清蛋 白的红外 特 征 吸收峰 ； 过竞争 Ｅ Ｓ 通 Ｉ Ａ试验表明用合成 的人工抗 原免疫 的 Ｂ ｌ／ 小 鼠血 清中产生了双酚 Ａ 的抗体 三 Ｉ ａｂ ｃ
种方法综合 鉴定 结果表明双酚 Ａ人工抗 原合成成功 ，该人工抗原可 以进一步用 于制备抗 双酚 Ａ 的单克 隆抗
外一 可见 分光光度计 （ 北京 普析通用仪器有 限责 任公 司） ｉ ，Ｂｏ －
Ｒａ ８ ｄ６ ０型酶标仪 （ 美国伯乐公司） 。 １２ 人工抗原的合成与鉴定 ．
１ ２ １ 人 工 抗 原 的合 成 ．．
将 １ ３ ０４ｇ双 酚 Ａ和 ０ ６ ０２ｇ无水 氯化铝 投人 到三 ． ７ ． ７ 口烧瓶 中 ， 称取 ０ ４ ０５ｇ氯 乙酸 溶于 ８ｎ Ｄ ． ７ ｌ ＭＦ中 ， Ｌ 缓慢 滴人三 口烧 瓶 ，低 温 下搅 拌 至 反应 趋 于缓 和 ，逐渐 升 高温
度 ， 应至不再生成气体 为止，冷却 ，过滤 ，称取 ０ ０ ７５ｇ 反 ． ５
建立其 简单快速 并适应现场检测 的免疫 分析方法 ， 须先合成 它 的人 工抗原并 进行鉴定 。 过对 双酚 Ａ 进 必 通
行结构修饰 ， 用碳二亚胺将 结构修饰了 的双酚 Ａ与牛血清蛋 白相偶联 ， 经透 析得 到纯 的双酚 Ａ人工抗 原并
冷冻干燥备用 。然后用紫外光谱 、红外光 谱和免疫方法对人工抗原进行 鉴定。结果表 明 ， 合成 的人工抗 原紫
合物 的人工抗原合成 与光谱鉴定 提供参考 。
１ 实验方法
１１ 材料与仪器 ．
双酚 Ａ（ ． ． 上海化 学试 剂公 司 ） ＣＰ， ，牛血 清蛋 白 （ Ｓ Ｂ Ａ，
上海 伯奥生物科技公 司） 一 基丁二酰 亚胺 （ ，Ｎ 羟 ＮＨＳ ，国药集
团试 剂 公 司 ） ，碳 二 亚 胺 盐 酸 盐 （ Ｄ ・ＨＣ ，Ｓ ｍａ公 司 ） ＥＣ １ ｉ ｇ ，
提 高，抑制睾丸 的生长及 受精卵 的发育 Ｌ 。目前 ，国 内外检 ５ ］
测 Ｂ Ａ的方法有紫外分光光度法 、 Ｐ 双波 长分光光度法 、 气相
色谱 （ Ｃ） 、气 相 色 谱一 Ｇ 法 质谱 （ Ｃ／ ） Ｇ ＭＳ 法、高 效液 相 色 谱
（ Ｌ 法 、高效液相色谱一 ＨＰ Ｃ） 紫外 法 （ Ｌ ／ ＨＰ Ｃ ＵＶ） 、液相 色谱一 质谱 （ Ｃ ＭＳ 法、反相 液相色谱 法 、极谱 法 、 光 法 、分子 Ｌ ／ ） 荧 印记及 Ｅ ＩＡ法等 １ 。仪器 方 法检 出限 可达到 ｇ・Ｌ ， ＬＳ ８ Ｊ ～ 但 样品前处理繁 琐 ，操作 耗 时 ，也不 适 应 现场 测 定。因此 ， 建 立简便 、 快速 、准确并适应现场测 定 的免 疫分 析方 法对检 测 双 酚 Ａ 残 留具 有 重 要 的 意 义 。王 兰 Ｌ］ 对 双 酚 Ａ 人 工 抗 】等 。 原合成进行 了研 究 ， 但鉴定方 法过于简 单 。本研究 用光谱 和 免疫方 法对合成 的双酚 Ａ人工抗 原进行综合鉴定 ， 期望为进
维普资讯
第２卷， ７ ８ 第 期
２００８ 年 ７月
光
谱
学
与
光Leabharlann 谱分析 Ｖｏ． ８ Ｎｏ ７ ｐ １ ８ — ５ ６ １２ ， ． ，ｐ ５ ３１ ８
Ｓ ｅ ｔｏ ｃ ｐ ｎ ｐ ｃｒ ｌ ｐ ｃ ｒ ｓ ｏ ｙ ａ ｄ Ｓ ｅ ｔａ ａ ｙ ｉ Ａｎ ｌ ｓｓ
羊抗 鼠 ＩＧ－ ｇ 辣根 过 氧 化物 酶 （ 汉博 士 德 生物 工 程有 限公 武 司） ，氯代乙酸 、无 水 氯 化铝 、Ｎ， ． 甲基 甲酰胺 （ ＭＦ 、 Ｎ二 Ｄ ） 邻苯 二胺 （ Ｄ） Ｔ ｅ－０ 双氧水 、 ＯＰ 、 ｗｅｎ２ 、 均为市售分析纯产 品。 ｐ ． Ｈ ７ ０磷 酸 缓 冲 溶 液 （ Ｂ ） Ｈ ． Ｐ Ｓ ，ｐ ９ ０碳 酸 盐 缓 冲 溶 液 （Ｂ） ｐ ． Ｃ Ｓ ， Ｈ５ ０磷酸柠檬酸缓 冲溶液 。 Ｎ ｃｌ ８ ｉｏｅ ３０红 外 光谱 仪 （ 国热 电公 司 ） ｔ 美 ，ＴＵ １ ０ 紫 －９ １
料进人体 内， 于牙科 的树脂 和牙齿密封剂 由 Ｂ Ａ 或 Ｂ Ａ 用 Ｐ Ｐ－ 双 甲基丙烯酸 酯组 成 ， 能从 牙体 缓慢 渗 人唾 液 而进 人体 内。
双酚 Ａ还能诱导人类乳腺癌 、前列腺癌 的发生 ｌ 。Ｂ Ａ也 ３ ］ Ｐ 可 以使雄鱼体 内 的卵黄 蛋 白原 ｖ ｅｏ ｅｉ（ ｉ ｌ ｇｎｎ ＶＴＧ） 度 显著 ｔｌ 浓
体。
关键词
双 酚 Ａ； 人工抗原 ；光谱 ；免疫 ； 鉴定 文献标识码 ： Ａ 文章编 号 ： ０ ００ ９ （０ ８ ０ —５ ３０ １ ０ —５３ ２０ ）７１ ８ —４
一
中图分类号 ： ５ ． ０６ ７ ３
步建立双酚 Ａ免疫分析方 法提供 基础 ， 也为其他小分子化
引 言
双 酚 Ａ（ｉ ｈ ｎ ｌ Ｂ Ａ） ｂｓ ｅｏ ｐ Ａ， Ｐ 是一种 酚类 环境雌激素ｒ ， ｌ ’ 又名 ２ ２双（一 ，－ ４羟基苯基 ） 丙烷 、二苯酚 基丙烷 。双酚 Ａ是重 要 的精细化工原料 ，是生 产聚碳 酸酯 、环氧 树脂 、聚砜 以及 改性酚醛树脂等 的重要 中间体 。 双酚 Ａ可通过 食品 包装容 器 和塑料 薄膜 渗人 食 品或饮
Ｊｌ ｕｙ，２ ０ ０８
双 酚 Ａ 人 工 抗 原 的 光 谱 表 征 及 免 疫 鉴 定 研 究
郑 劭 ，张 妮 ，赵 肃清
广 东 工业 大学 轻 工 化 工学 院 ，广 东 广 州 ５ ０ ０ １０６
摘
要
双 酚 Ａ（ｉ ｈ ｎ ｌ Ｂ Ａ） ｂｓ ｅｏ ｐ Ａ， Ｐ 是一种酚类环境雌激 素 ，即使极低剂 量残留对人类健康也有危 害。为 了
外光谱 图中具有 蛋 白质和双酚 Ａ 的特征 吸收峰 ；人工抗 原红外光谱图 中呈现 双酚 Ａ和牛血清蛋 白的红外 特 征 吸收峰 ； 过竞争 Ｅ Ｓ 通 Ｉ Ａ试验表明用合成 的人工抗 原免疫 的 Ｂ ｌ／ 小 鼠血 清中产生了双酚 Ａ 的抗体 三 Ｉ ａｂ ｃ
种方法综合 鉴定 结果表明双酚 Ａ人工抗 原合成成功 ，该人工抗原可 以进一步用 于制备抗 双酚 Ａ 的单克 隆抗